一種復方番石榴制劑及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種復方番石榴制劑及其制備方法，該制劑由以下番石榴葉，鬼箭羽，五指毛桃，桑葉，葛根，黃連，蒼術，澤瀉，山楂份和紅曲制成。本發明復方番石榴制劑健脾化痰，降糖消脂，泄濁清熱，不僅能顯著降血糖，而且還能改善胰島素抵抗，臨床觀察過程中，復方番石榴制劑組僅有3例患者有輕度的胃部不適感，未予特殊處理后自行緩解，其余患者均為發現不良反應。說明復方番石榴制劑是一種有效而安全的口服降糖藥物。本發明配方簡單，制備方法簡單，服用方便，適于工業化生產及長期服用。
【專利說明】一種復方番石榴制劑及其制備方法 【技術領域】
[0001 ]本發明涉及一種復方番石榴制劑及其制備方法。 【【背景技術】】
[0002] 如今人們生活水平、勞動強度、飲食結構發生了根本變化，超重肥胖2型糖尿病隨 之而不斷增加。研究表明，超重肥胖2型糖尿病的胰島素抵抗尤為明顯。臨床上口服的降糖 藥物最常見的就是磺脲類及非磺脲類胰島素促泌劑，其主要的藥理作用是刺激胰島辟田胞 分泌胰島素。然而這些藥物常見的副作用是低血糖和體重增加，長期使用此類藥物患者體 重增加明顯，使得胰島素抵抗更加顯著，久而久之胰島細胞功能逐漸衰退，從而不得不依 賴胰島素治療。一直以來，人們都在尋找既可以增加胰島素敏感又可以減少副作用的降糖 藥物。
[0003] 番石榴屬于桃金娘科番石榴屬植物，為民間中草藥，主要分布在云南、四川、貴州 和廣西等地，繁殖能力極強，果實產量大。番石榴果實富含多糖類、黃酮類、多酚類物質，還 含有蛋白質和有機三價鉻，具有降血糖、抗炎、抑菌、抗氧化等功效。研究證實，番石榴果實 的降糖功效與其所含的多糖類、有機三價鉻有很大的關系，而其抗氧化功效與所含的黃酮 類、多酚類物質也有很大的關系。但目前人們對番石榴的應用，目前主要有兩種方式:其一 為番石榴果產地的老百姓將其作為野果鮮食;其二為將番石榴果切片、曬干后，作為干果片 茶，通過開水沖泡，飲用茶水。但這兩種方式對番石榴中活性成分的吸收并不明顯。 【
【發明內容】
】
[0004] 本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種以番石榴葉為主的復方番石 榴制劑，與其他幾種中藥復配，顯著降血糖，改善胰島素抵抗，使用安全有效。
[0005] 本發明為解決上述技術問題，采用以下技術方案：
[0006] -種復方番石榴制劑，其特征在于由以下重量份組份制成： 番石榴葉 120~180份， 鬼箭羽50~丨00份， 五指毛桃：80~丨20份， 桑葉.50~100份，
[0007] 葛根 120~180份， 黃連 30~70份， 蒼術 50~100汾， 澤瀉 30~70份， 山楂 50~100份， 紅曲 50~10:0份。
[0008] 優選地，本發明復方番石榴制劑，由以下重量份組份制成： 番石榴葉 120~160份， 鬼箭羽50~80份， 五指毛桃 80~100份， 桑葉 50~80份，
[0009] 葛根 120~160份， 黃連 30~50份， 蒼術 50~80份， 澤瀉 30~50份， 山楂 50~80份， 紅曲 50~80份。
[0010] 優選地，本發明復方番石榴制劑，由以下重量份組份制成： 番石榴葉 140~180份， 鬼箭羽75~100份，
[0011] 五指毛桃 100~120份， 桑葉 75~100份， 葛根 140~180份， 黃連 50~70份， _2] 蒼術 75~100份， 澤瀉 50~70份， 山楂 75~100份， 紅曲 75~100份。
[0013]進一步優選地，本發明復方番石榴制劑，由以下重量份組份制成： 番石榴葉 140~160份， 鬼箭羽75~85份， 五指毛桃 90~丨10份， 桑葉 75~85份，
[0014] 葛根 140~160份， 黃連 40~60份， 蒼術 75~85份， 澤瀉 40~60份, 山楂 75~85份， 紅曲 75~85份。
[0015]優選地，本發明復方番石榴制劑，由以下重量份組份制成： 番石榴葉 150份， 鬼箭羽 75份， 五指毛桃 1K)份， 桑葉 75份，
[0016]葛根 150份， 黃連 50份， 蒼術 75份， 澤瀉 50份， 山楂 75份， 紅曲 75份。
[0017]番石榴葉具有生津止瀉，除煩，收斂止瀉，消炎止血功效。在長期醫療實踐和臨床 觀察基本上，番石榴葉單方制劑"消竭降糖膠囊"已收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑》 第十五冊，1998:182。中外民間醫藥多有采用番石榴葉治療糖尿病及腹瀉等疾病。現代藥理 研究表明具有明顯的降血糖，抗病毒及抗菌等活性。降糖作用主要與黃酮甙提高胰島素敏 感性及番石榴含的維生素 C及微量元素對胰島細胞保護、胰島素釋放的調節、糖代謝的調節 有關。
[0018] 鬼箭羽又叫衛矛、鬼箭，鬼箭羽為衛矛科植物衛矛的具翅狀物的枝條或翅狀附屬 物，鬼箭羽有破血通經、解毒消腫、殺蟲的功效，鬼箭羽有治療癥瘕結塊、心腹疼痛、閉經、痛 經的作用，鬼箭羽用藥禁忌是妊娠不可服鬼箭羽。
[0019] 五指毛桃為嶺南常用草藥，以桑科榕屬植物粗葉榕的根入藥，其性平，味甘、辛，有 健脾補肺、利濕舒筋之功，用于脾虛浮腫、食少無力、肺癆咳嗽、盜汗、風濕痹痛、產后無乳等 癥。五指毛桃能顯著提高環磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的碳粒廓清指數，胸腺、脾臟重量 指數及血清溶血素水平，提示五指毛桃對免疫功能具有調節作用，能提高機體的免疫功能。 此外，五指毛桃又是一食藥同源的植物，在廣東地區民間用來煲湯。近年來，五指毛桃這一 寶貴的植物資源引起了藥學工作者的高度重視，對其化學成分、藥理活性及其他方面的研 究不斷深入，并證實補骨脂素為五指毛桃的主要活性成分之一，具有抗菌、抗病毒、抗凝血、 抑制腫瘤、免疫調節等作用。
[0020] 桑葉是一款具有較強抗氧化功效的袋茶飲。富含稀有元素有機硒、鍺，是天然的強 抗氧化劑，可清除體內自由基，使蓄積在人體內的毒素和廢物被氧化，增加血液中的含氧 量，促進新陳代謝和微循環。對于高血脂、高血糖、脂肪肝、冠心病、高血壓，甲、乙型肝炎的 治療以及癌癥術后放化療病人的康復有非常好的輔助作用。桑葉能疏散風熱，解表清熱，養 陰生津;桑椹能滋陰養血，補虛潤燥;桑根白皮能瀉肺平喘，利水消腫;桑枝能通經活絡，除 痹止痛;而桑樹燒成的灰叫桑柴灰，也能用于治療目赤腫痛、青盲、身面水腫，坐臥不得、白 癜風、頭風白肩、大麻風等病證。
[0021] 葛根為豆科植物野葛的干燥根。有解表退熱，生津，透疹，升陽止瀉的功效。用于外 感發熱頭痛、高血壓頸項強痛、口渴、消渴、麻疹不透、熱痢、泄瀉。葛根黃酮具有防癌抗癌和 雌激素樣作用，可促進女性豐胸、養顏，尤其對中年婦女和絕經期婦女養顏保健作用明顯。 高血壓、高血脂、高血糖及偏頭痛等心腦血管病患者、更年期婦女、易上火人群(包括孕婦和 嬰兒）、常期飲酒者(減少酒精對肝臟影響）、女性滋容養顏，中老年人日常飲食調理等。葛根 粉性涼味甘辛，有解表退熱，生津、透疹、升陽止瀉等多種功能，可治外感發熱頭痛、高血壓 頸項強痛、口渴、消渴、麻疹不透、熱疹、泄瀉等多種疾病。一般的粉葛質韌，纖維性強。葛根 素有明顯的降低血糖的作用，葛根所含的黃酮類化合物有降血脂作用，能降低血清膽固醇， 降低油三酯，用于治療高血糖，高血脂病癥，有顯著療效。
[0022] 黃連為毛茛科植物黃連、三角葉黃連或云連的干燥根莖。有清熱燥濕，瀉火解毒的 功效。用于濕熱痞滿，嘔吐吞酸，瀉痢，黃疸，高熱神昏，心火亢盛，心煩不寐，血熱吐衄，目 赤，牙痛，消渴，癰腫疔瘡。
[0023] 蒼術又叫山精、赤術、馬薊、青術、仙術、茅術、南蒼術、穹窿術、和蒼術、東蒼術。有 燥濕健脾;祛風濕；明目的功效。主治濕盛困脾，倦怠嗜臥，脘痞腹脹，食欲不振，嘔吐，泄瀉， 痢疾，瘧疾，痰飲，水腫，時氣感冒，風寒濕痹，足痿，夜盲。
[0024] 澤瀉味甘，淡，性寒，入腎、膀胱經，利水滲濕;泄熱通淋。主小便不利;熱淋澀痛;水 腫脹滿;泄瀉;痰飲眩暈;遺精。用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛;高 血脂。
[0025] 山楂含有大量的維生素 C與微量元素，能夠擴張血管，降低血壓，降低血糖，能夠改 善和促進膽固醇排泄而降低血脂，預防高血脂的發生，山楂能夠開胃促進消化，山楂所含有 的脂肪酶也能夠促進脂肪的消化。山楂所含有的黃酮類與維生素 C、胡蘿卜素等物質能夠阻 斷并減少自由基的生成，可增強機體的免疫力，延緩衰老，防癌抗癌。山楂能夠活血化瘀，幫 助消除瘀血狀態，輔助治療跌打損傷。山楂對子宮有收縮作用，在孕婦臨產時有催生效果。
[0026]紅曲性甘，溫，入肝、脾、大腸經，活血化瘀;健脾消食。主飲食積滯;脘腹脹滿;赤白 下痢;產后惡露不盡;跌打損傷。
[0027] 近年來藥理學家發現，紅曲入藥，是一種出色的降血脂、降血壓天然藥物。在李時 珍主編的巨著《本草綱紅曲霉菌目》一書中即收載有若干個含有紅曲成分的治病良方。我國 中科院研究人員開發的以紅曲為原料的降脂新藥"樂脂平"，療效可與美國公司開發的他汀 類降脂藥物媲美，國外稱之為"中國他汀"。此外，紅曲霉衍生物還有很強抗氧化兼抗癌作 用。
[0028] 本發明中，番石榴葉性平，味干澀，入脾、胃、大腸、肝經，燥濕健脾，清熱解毒，故為 君藥;鬼箭羽味微苦澀，活血化瘀;五指毛桃益氣健脾，祛痰化濕;桑葉性味甘寒，清熱解毒， 《本草綱目》記載桑葉"汁煎代茗，能止消渴"；葛根、黃連，清熱生津，燥濕瀉濁;蒼術燥濕健 脾;澤瀉利水滲濕，泄熱，使痰濁之邪有出路；山楂、紅曲具有健脾消食、活血化瘀的功效。全 方共湊健脾化痰、降糖消脂、泄濁清熱之功。
[0029] 本發明復方番石榴制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
[0030] 將各組份混合加原料8-10倍水煎煮二次，第一次2小時，第二次1小時，合并兩次煎 液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.02以上(60°C)，加入防腐劑和甜味素，煮沸，冷卻后于冰箱 冷藏24h，取上清液過濾后分裝即可。
[0031] 當以克為單位時，冷藏后取上清液過濾后，制成1000ml，分裝成100ml/瓶。
[0032] 本發明中的甜味素優選為甜菊素。
[0033] 本發明中防腐劑和甜味素的添加量為0.04~0.06%。
[0034]本發明與現有技術相比，有以下優點：
[0035]本發明復方番石榴制劑健脾化痰，降糖消脂，泄濁清熱，不僅能顯著降血糖，而且 還能改善胰島素抵抗，臨床觀察過程中，復方番石榴制劑組僅有3例患者有輕度的胃部不適 感，未予特殊處理后自行緩解，其余患者均為發現不良反應。說明復方番石榴制劑是一種有 效而安全的口服降糖藥物。
[0036]本發明配方簡單，制備方法簡單，服用方便，適于工業化生產及長期服用。 【【附圖說明】】
[0037]圖1是正常對照組大鼠胰腺組織切片HE染色（X400)圖片；
[0038]圖2是模型組大鼠胰腺組織切片HE染色（X400)圖片；
[0039]圖3是低劑量組大鼠胰腺組織切片HE染色（X400)圖片；
[0040]圖4是高劑量組大鼠胰腺組織切片HE染色（X400)圖片；
[00411圖5是陽性藥物組大鼠胰腺組織切片HE染色（X 400)圖片。 【【具體實施方式】】
[0042]下面結合具體實施例對本發明進行詳細描述：
[0043] 實施例1:
[0044] 稱重以下組份： 番石榴葉 120g, 鬼箭羽50 g， 五指毛桃 80g， ^nj· 50 g，
[0045] 葛根 120g， 黃連：3:0 g， 壓術 50g， 30 g, 山楂 50g， 紅曲 50 g，
[0046] 將上述組份混合加原料8-10倍水煮二次，第一次2小時，第二次1小時，合并兩次煎 液，過濾，濾液濃縮至60°C相對密度不低于1.02，加入防腐劑和甜味素，煮沸，冷卻后于冰箱 冷藏24h，取上清液過濾后制成1000ml，分裝成100ml/瓶即可。
[0047] 實施例2:
[0048] 稱重以下組份： 番石榴葉 18:0g，： 鬼箭羽100 g， 五指毛桃 120g, 燊丨丨|· 100 g,
[0049] 葛根 18:0g， 黃連 70:g， 傷術 100g， 汴江j 70 g,
[0050] 山楂 lOOg， 紅曲顧g，
[0051 ]實施例2的制備方法同實施例1。
[0052] 實施例3:
[0053] 稱重以下組份： 番石榴葉 160g， 鬼箭羽_g， 五指毛桃 8%， 桑葉 80: g，
[0054] 葛根 14〇g， 黃連 5:0名， 迮術 SOg ff·'? 50 g， 山楂 80g， 紅曲 80 g
[0055] 實施例3的制備方法同實施例1。
[0056] 實施例4:
[0057] 稱重以下組份： 番石榴葉 140g 鬼箭羽75 g， 五指毛桃 110g， 桑葉 75g，
[0058] 葛根 150g， 黃連 40名， 蒼術 75g, 澤瀉 40 g，: 山楂 75g， 紅曲 7Sg,
[0059] 實施例4的制備方法同實施例1。
[0060] 實施例5:
[0061 ] 稱重以下組份： 番石榴葉 150g:， 鬼箭羽75 g，
[0062] 五指毛桃 100g 桑葉 75 g, 葛根 150:g， 黃連 5Gg，
[0063]蒼術 75g， 澤瀉 50_.g.，. 山楂 15%, 紅曲 75 g，
[0064]實施例5的制備方法同實施例1。
[0065] 一、本發明藥理實驗
[0066] 1 材料
[0067] 1.1動物SPF級雄性SD大鼠，4~5周齡，體重(70± 10)g，由廣東省實驗動物中心提 供，許可證號：SCXK (粵）2013-0002。
[0068] 1.2藥品與試劑實施例5復方番石榴制劑。鹽酸二甲雙胍片:貴州圣濟堂制藥有限 公司產品，產品批號= 20140424; STZ: Sigma公司產品，由廣州晶欣生物科技有限公司分裝并 提供(批號:2022)，臨用前以0.1mol/L、pH 4.3的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液新鮮配制。大鼠胰 島素（INS)ELISA試劑盒，武漢華美生物工程有限公司產品（批號:B19010611、C 02019887、 C30012942)。
[0069] 1.3主要儀器全自動生化檢測儀;拜安捷2血糖儀(型號：1455);血糖檢測試碟(葡 萄糖氧化酶法），拜耳醫藥保健有限公司(產品批號：1A6591AA);高速冷凍離心機，上海安亭 科學儀器廠生產（型號:GL-20G_n );Thermo Multiskan FC酶標儀、Thermo洗板機，均為美 國Thermo公司生產。
[0070] 2 方法
[0071] 2.1模型建立選取檢疫合格的SD大鼠84只，適應性飼養1周后，按體重隨機分為正 常組（10只）和造模組(74只），其中正常組喂養常規飼料;造模組參照《人類疾病動物模型》 并加以改進，喂養尚糖尚脂伺料（由廣東省醫學實驗動物中心生廣并提供）。喂養至第8周時 造模組禁食(不禁水）16h后，一次性腹腔注射1%STZ溶液30mg/kg。正常組腹腔注射等劑量 檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72h后兩組動物采血，檢測空腹血糖(FPG)，以FBG彡11. lmmol/L， 并持續出現多飲、多尿、體重減輕癥狀者為造模成功。模型不達標者，3天后仍按上述方法補 注1 % STZ溶液，30mg/kg腹腔注射，檢測FPG，仍未達標者淘汰出實驗。
[0072] 2.2分組給藥以正常組大鼠作為對照組，篩選造模組中模型成功大鼠按FPG隨機 分為模型組、二甲雙胍組(臨用前配制成20mg/10mL的懸混液，按SOOmg/kg"1給藥）、復方番石 榴制劑高、低劑量組（即生藥含量為3.15、1.575g/ml，相當于人臨床常用量的4、2倍劑量）， 正常組和模型組給予等體積蒸餾水，均按lmL/100g，l次/d給藥，連續灌胃給藥6周。期間除 正常組給予常規飼料外，模型組和各給藥治療組繼續喂養高糖高脂飼料。除未達標的動物 外，在造模后、給藥過程中以及取血操作中因麻醉意外等原因，各組動物均有死亡，最后納 入統計的各組動物數均為10只。各組動物每周稱重1次，根據體重調整給藥量。
[0073] 2.3標本制作
[0074] 2.3.1血樣標本制作：分別于高脂高熱量飼料喂養8周后、腹腔注射1 % STZ 72h后 及藥物治療6周后，三次采血。禁食(不禁水）16h，前2次采血為后眼眶靜脈叢取血，以真空采 血管儲存血液，2ml/只?次，最后一次采取腹主動脈采血方式，血液標本靜置一段時間，待 血清和血漿與血液有形成分分離后，4°C，3500r/min離心10分鐘分離血清、血漿，并將血清 分裝于的凍存管中，-70 °C凍存備用。
[0075] 2.3.2組織樣本的制備：藥物治療6周后，采血后，迅速解剖大鼠，摘取新鮮胰腺組 織標本，立即浸泡于4 %中性甲醛固定液中固定。
[0076] 2.4觀察指標及檢測方法
[0077] 2.4.1動物生長情況觀察:實驗期間觀察動物精神、活動、毛色、進食、飲水及尿量 變化，并每周記錄體重變化1次。
[0078] 2.4.2空腹血糖濃度(FPG)測定:采用拜安捷2血糖儀進行檢測。
[0079] 2.4.3空腹血胰島素濃度(FINS)測定:嚴格按照試劑盒說明書操作ELISA法檢測。
[0080] 2.4.4胰島素敏感指數（ISI):采用李光偉計算方法，以空腹血糖與空腹胰島素乘 積倒數的自然對數來表示，即ISI = Ln[ 1/(FPG X FINS)]。
[0081] 2.4.5胰島HE染色病理觀察：將浸泡于固定液中的胰腺組織經常規洗滌、脫水、石 蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化。
[0082] 2.5統計方法實驗數據以i ±S表示，用IBM SPSSS 19.0Statistics軟件分析。計 量資料組間比較用One-Way AN0VA方差分析。
[0083] 3結果
[0084] 3.1動物一般身體情況觀察
[0085]正常組和造模組大鼠在飼養期間均精神狀態良好，反應靈敏，行動自如，皮毛光澤 油亮，體重隨飼養時間的增加呈持續穩定上升趨勢。同時，造模組大鼠在高脂高熱量飼料喂 養8周期間，大便較多，時有稀軟便，尿量正常。造模組腹腔注射STZ 72h后，開始出現進食 量、飲水量均有明顯增加，特別是尿量增加非常明顯，尿騷味嚴重，身體持續進行性消瘦，并 出現皮毛干燥粗糙、豎毛、反應遲鈍、精神萎靡、活動減少，易激惹等表現。
[0086] 3.2體重變化情況
[0087] 3.2.1實驗性T2DM大鼠造模期間體重變化情況 [0088] 表1實驗性T2MD大鼠造模期間體重變化（? 土 S )
[0089]
[0090] 如表1所示：造模期間，正常組大鼠普通飼料喂養8周期間，體重由103.70±9.32g 平穩增加至542.94 ± 51.68g。造模組大鼠經高脂高熱量飼料喂養8周，體重由105.63 土 9.86g增加至551.53±52.638，期間體重均較正常組有所增加，但無統計學意義。造模7211 后，造模組大鼠體重下降至518.45±43.67g，顯著低于同時期正常組以及造模前的體重(P <0.05)。表明腹腔注射STZ造成實驗動物體重在短期內出現顯著下降。
[0091 ] 3.2.3復方番石榴制劑對T2MD大鼠給藥治療期間體重變化的影響
[0092] 表2:實施例5對T2MD大鼠給藥期間體重變化的影響（? 士§)
[0093]
[0094] 注:與同期正常組比較，*P〈0.05;與同期模型組比較，#P〈0.05。
[0095] 如表2所示：用藥治療6周期間，正常對照組大鼠體重由562.40±29.77g平穩增加 至639.20±23.518。模型組大鼠體重由379.80±21.318減重至339.00±28.518，明顯低于 正常對照組。復方番石榴高劑量治療組體重由401.50 ± 28.37g增至428.80 ± 18.64g;低劑 量組體重由380.10 ± 34.99g增至418.00 ± 44.89g;二甲雙胍治療組體重由391.80 ± 29.67g 增至432.70±44.68g，三個給藥治療組與模型組比較均有顯著性差異(P<0.05)。表明藥物 治療對實驗性T2MD大鼠體重均有一定的增加作用。
[0096] 治療后的第1周，模型組、復方番石榴高、低劑量組以及二甲雙胍組與正常組比較 體重均有顯著性差異(p<0.05)，而此四組之間比較無顯著性差異。治療2周后，模型組、復 方番石榴高、低劑量組以及二甲雙胍組與正常組比較體重有顯著性差異(P<〇.05);同時， 二甲雙胍組與模型組比較有顯著性差異(P<〇.05)。治療給藥的第3~6周期間，模型組、復 方番石榴高、低劑量組以及二甲雙胍組與正常組比較體重均有顯著性差異(P<〇.05);三個 給藥治療組與模型組相比較，體重均有明顯增加，差異有統計學意義(P<〇.05)，而各給藥 組間比較體重無顯著性差異。表明在給藥的6周期間，二甲雙胍對體重的增加起效較中藥給 藥組快，但隨著時間的推移，各給藥組對體重均有增重。
[0097] 3.3復方番石榴制劑對了201大鼠空腹血糖卬?6)的影響
[0098] 表3:實施例5對T2DM大鼠 FPG的影響:(i 土§)，(單位:mmol/L)
[0099]
[0101] 注：與同期正常組比較，*P〈〇. 05;與同期模型組比較，#P〈0.05;與本組治療前比 較，λΡ〈0·05。
[0102] 如表3所示:造模前各組FPG比較無顯著性差異，且與正常組比較均無顯著性差異。 治療前(造模后），與正常組比較，模型組、復方番石榴高、低劑量治療組、二甲雙胍組血糖明 顯升高，差異均有統計學意義(P<〇.05)，而給藥治療組之間比較差異無顯著性。治療后，復 方番石榴高劑量組和二甲雙胍之間比較差異無顯著性，且兩給藥組分別與其治療前比較差 異均有顯著性(P<〇.05)，但復方番石榴低劑量組與其治療前比較，空腹血糖差異無統計學 意義。四個給藥組分別與模型組比較差異均有顯著性(P<〇.05)。表明經藥物治療后，各組 均有一定程度的降低FPG療效，復方番石榴制劑降低作用呈一定的量效關系，高劑量降低 FPG的作用與二甲雙胍相當，但低劑量無明顯的降糖作用，但能維持血糖在治療前的水平， 與模型組比較有一定的降糖作用。
[0103] 3.4復方番石榴制劑對T2DM大鼠空腹血胰島素(FINS)水平變化的影響
[0104] 表4:實施例5對T2DM大鼠 FINS的影響土S),(單位:nIU/ml)
[0105]
[0106] 注：與同期正常組比較，*P〈0.05;與同期模型組比較，#P〈0.05;與本組治療前比 較， λΡ〈0·05。
[0107] 如表4所示:造模前，與正常組比較，各組間FINS差異無統計學意義。治療前（造模 后），模型組、復方番石榴高、低劑量治療組以及二甲雙胍治療組分別與造模前比較均有顯 著性差異(P<〇.05)，且組間比較差異無顯著性。治療后，復方番石榴高劑量組和二甲雙胍 組胰島素水平均有所降低，分別與其治療前比較差異均有顯著性(P<〇.05)，模型組與其6 周后比較也有顯著性差異(P<〇.05)，復方番石榴高劑量組和二甲雙胍組之間比較差異無 顯著性，三個給藥治療組分別與模型組比較差異均有顯著性(P<〇.05)，但復方番石榴低劑 量組治療前、后FINS差異無統計學意義，且復方番石榴高、低劑量組間差異有統計學意義(P <0.05)。表明造模后T2DM實驗動物模型已經出現了高胰島素血癥，經治療后，復方番石榴 制劑降低FINS作用存在一定的量效關系，且高劑量組與二甲雙胍組療效相當。
[0108] 3.5復方番石榴制劑對T2DM大鼠胰島素敏感指數(ISI)的影響
[0109] 表5:復方番石榴制劑對T2DM大鼠 ISI的影響（? 土S)
[0110]
[0111] 注：與同期正常組比較，*Ρ〈〇 . 05 ;與同期模型組比較，#Ρ〈0.05 ;與本組治療前比 較，λΡ〈0·05。
[0112]如表5所示:造模前各組ISI比較無顯著性差異。治療前(造模后），模型組、復方番 石榴高、低劑量組、二甲雙胍組各組與正常組比較均有顯著性差異(P<〇.05)，且組間比較 差異無顯著性。治療后，復方番石榴高劑量組和二甲雙胍組分別與其治療前比較差異均有 顯著性(P<0.05)，且兩組間比較差異無顯著性，分別與模型組比較差異均有顯著性(P< 0.05)。復方番石榴低劑量組治療前后ISI差異無統計學意義，但復方番石榴高、低劑量組間 ISI差異有統計學意義。表明高熱量飲食的基礎上注射STZ復制T2DM動物模型可引起實驗動 物IR的出現，經藥物治療后，對IR均有一定的改善作用，其中，復方番石榴制劑高劑量組以 及二甲雙胍對改善IR作用均較低劑量組顯著，表明復方番石榴制劑改善IR作用呈一定的量 效關系，此作用與改善FPG、FINS作用呈正相關。
[0113] 3.6復方番石榴制劑對T2DM胰島素抵抗大鼠胰島病理形態的影響
[0114] 將固定好的大鼠胰腺組織進行脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、切片、HE染色處理，然 后在PM-10AD Olympus VAN0X光學顯微照相鏡下觀察胰腺組織形態，并記錄。正常對照組 (如圖1所示）：胰島密度正常，邊緣光滑，胰島內細胞排列整齊，胞漿飽滿，細胞界限清楚。模 型組(如圖2所示）：切片胰島數目減少，胰島萎縮，形態不規則，細胞排列紊亂，部分胰島細 胞內脂質沉積，血管輕度增生。各治療組較模型組均有不同程度的改觀。低劑量組(如圖3所 示）：胰島數目較正常組減少，萎縮程度較其余各給藥組明顯，形狀輕度不規則，部分胰島A 細胞輕度增多，間質血管擴張及管壁增厚，并可見脂肪組織。高劑量組(如圖4所示）：胰島數 目約略少于正常組對照，較模型組增加，胰島形狀不規則，部分萎縮，胰島周圍體積較小的 細胞(A細胞)比例增加，中央淡染肥大的細胞(B細胞）比例減少。陽性藥物組(如圖5所示）： 胰島數目仍少許正常，形狀不規則，部分胰島萎縮，脂質沉積不明顯，間質血管擴張及管壁 增厚明顯，血管周圍較模型組及正常組更易見脂肪組織。
[0115] 二、本發明療效實驗
[0116] 1臨床資料
[0117] 1.1 一般資料
[0118] 病例選取時間為2014年6月至2015年11月，從廣州中醫藥大學附屬中山醫院選取 符合超重肥胖2型糖尿病標準的患者120例。
[0119] 1.2病例選擇標準
[0120] 根據1999年WHO 2型糖尿病診斷標準及中國成人超重和肥胖癥預防控制指南 (2006 )，入組病例符合條件如下：①經過2周的規范飲食控制及運動療法后，7. Ommol/L〈空 腹血糖〈13.9mmol/L，且糖化血紅蛋白蘭7.0 % ;或餐后2h血糖> 11. lmmo 1/L且糖化血紅蛋白 蘭7.0%。②體重指數(BMI)彡24.0kg/m2;或腰圍男性彡85cm、或女性彡80cm(參照中國肥胖 問題工作組建議的診斷標準）中任意一條;③入組前未經過規范的糖尿病西醫治療。④入組 前2周內，未使用任何藥物治療。⑤年齡30~70歲。⑥簽署知情同意書。
[0121] 1.3治療用藥及觀察指標
[0122] 治療組給予實施例5,每日100ml，分3次口服，以及二甲雙胍腸溶片(0.25g/片，貴 州圣濟堂制藥有限公司提供)〇.5g/次，每日3次;對照組患者給予二甲雙胍腸溶片（0.25g/ 片，貴州圣濟堂制藥有限公司提供)〇.5g/次，每日3次。兩組病例均服藥12周為1個療程，觀 察前后均檢測空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2BG)、糖化血紅蛋白（HbAlc)、BMI、腰圍、甘油 三酯(TG)、膽固醇(TC)、脂聯素、游離脂肪酸(FFA)、空腹胰島素等指標。患者在觀察期間禁 服其他治療糖尿病的中藥或西藥。
[0123] 2療效分析
[0124] 2.1中醫證候療效判斷標準:參照《中藥新藥臨床研究指導原則》。（鄭筱臾主編.中 藥新藥臨床研究指導原則.北京：中國醫藥科技出版社，2002)
[0125] 證候療效率以治療前后的積分差與治療前的積分相比的比值來評定療效：
[0126]
[0127] 臨床痊愈:臨床癥狀、體征消失或基本消失，證候積分減少多90%;
[0128] 顯效:臨床癥狀、體征明顯改善，證候積分減少多70% ;
[0129] 有效:臨床癥狀、體征均有好轉，證候積分多30% ;
[0130]無效:臨床癥狀、體征均無明顯改善，甚或加重，證候積分減少不足30%。
[0131] 治療后兩組中醫證候總療效比較見表6。
[0132] 表6:兩組治療后中醫證候總療效比較例（％ )
[0133]
[0134] 注:兩組治療后總有效率比較，P〈0.01。
[0135] 2.2治療前后兩組糖代謝情況比較見表7。
[0136] 表7:兩組治療前后血糖代謝情況比較(X士 S)
[0137]
[0138] 注：同組治療前后的比較，，〈0.05，組間治療后比較，#P〈0.05。
[0139] 如表7所示，在糖代謝方面，治療組和對照組組內比較，治療前后有顯著性差異;組 間比較，空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白差異有顯著性意義，表明治療組優于對照組。 [0140] 2.3治療前后兩組血脂代謝情況比較見表8。
[0141]表8:兩組治療前后血脂代謝情況比較(X±S)(mm〇l/L)
[0142]
[0143] 注:與本組治療前比較，*P〈0.05，組間治療后比較，#P〈0.05。
[0144] 治療組TG、TC、LDL_c治療后較治療前明顯下降，差異具有統計學意義，治療組與對 照組比較，其差異亦有統計學意義。結果表明，復方番石榴制劑能調節超重肥胖2型糖尿病 的血脂。
[0145] 2.4治療前后兩組BMI、WC比較見表9。
[0146] 表9:兩組治療前后WC、BMI比較(X 士 S)
[0147]
[0148] 注：同組治療前后的比較，，〈0.05，組間治療后比較，#P〈0.05。
[0149] 比較兩組治療前的BMI、WC，差異無統計學意義。治療組治療前后的BMI、WC顯著下 降，比較兩組治療后的BMI、WC，差異也有統計學意義。
[0150] 2.5兩組治療前后的空腹胰島素、胰島素分泌指數變化情況比較見表10。
[0151] 表10:兩組治療前后空腹胰島素、胰島素分泌指數變化情況士
[0152]
[0153」注：同組治療前后的比較，WP〈0.01，組間治療后比較，ffffP〈0.01。
[0154] 如表10所示，治療組治療后空腹胰島素水平、胰島素分泌指數均有一定的上升，兩 組組內比較，差異均有統計學意義;組間比較，治療后兩組空腹胰島素水平、胰島素分泌指 數差異有顯著性意義，表明治療組優于對照組。
[0155] 2.6兩組治療前后的游離脂肪酸、C-反應蛋白水平及脂聯素變化情況比較見表11。
[0156] 表11:兩組治療前后游離脂肪酸、C-反應蛋白水平及脂聯素變化情況(父±S>
[0157]
[0158] 注：同組治療前后的比較廣P〈0.01，組間治療后比較，##P〈0.01。
[0159] 如表11所示，治療組和對照組治療后游離脂肪酸均有一定的下降，兩組組內比較， 差異有統計學意義;組間比較，治療后兩組游離脂肪酸水平差異有顯著性意義，表明復方番 石榴制劑可降低游離脂肪酸。治療組與對照組的血清CRP均有下降，兩組治療前后比較，差 異有統計學意義，組間比較差異無明顯統計學意義(P>〇.05);治療組和對照組治療后脂聯 素均有一定的升高，兩組組內比較，差異有統計學意義；組間比較，治療后兩組脂聯素水平 差異有顯著性意義。
[0160] 3 討論
[0161] 本次觀察療效結果提示，復方番石榴制劑具有良好的降血糖作用，可明顯降低空 腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白，其聯合二甲雙胍片腸溶片降低空腹血糖及糖化血紅蛋 白的作用與單純二甲雙胍腸溶片比較有顯著差異(P〈〇.05)。
[0162] 本次臨床觀察過程中，復方番石榴制劑組僅有3例患者有輕度的胃部不適感，未予 特殊處理后自行緩解，其余患者均為發現不良反應。說明復方番石榴制劑是一種有效而安 全的口服降糖藥物。本發明制劑用法用量為：口服，一次50ml，一天2次。
【主權項】
1. 一種復方番石榴制劑，其特征在于由以下重量份組份制成： 番石榴葉 120~180份， 鬼箭羽50~100份， 五指毛桃 80~120份， 燊葉 50~丨00汾， 葛根 120~180份， 黃連 30~70份， 蒼術 50~100份， 澤瀉 30~70份， 山楂 50~100份:， 紅曲 50~丨00份。2. 根據權利要求1所述的一種復方番石榴制劑，其特征在于由以下重量份組份制成： 番石榴葉 120~16:0份， 鬼箭羽50:~80份， 五指毛桃 80~100份， 桑葉 50~80份， 葛根 120~160份， 黃連 30~50份， 蒼木 50~80份， 澤瀉 30~50份， 山楂 50~80份， 紅曲 50~80份。3. 根據權利要求1所述的一種復方番石榴制劑，其特征在于由以下重量份組份制成： 番石榴葉 140~180份， 鬼箭羽75~100份， 五指毛桃 100~120份， 爻葉 75~100份， 葛根 14:0~180份， 黃連 50~7:0份， 蒼術 75~100份， 澤瀉 50~7:0份， 山楂 75~100份， 紅曲 75~100份。4. 根據權利要求1所述的一種復方番石榴制劑，其特征在于由以下重量份組份制成： 番石榴葉 14.0~160份， 鬼箭羽75~85份， 五指毛桃 90~110份， 桑葉 73~85份， 葛根 140~160份， 黃連 40~60份， 蒼術 75~85份， 澤瀉 40~60汾， 山楂 75~85份， 紅曲 75~85份。5. 根據權利要求1所述的一種復方番石榴制劑，其特征在于由以下重量份組份制成： 番石榴葉 150份， 鬼箭羽 75份， 五指毛桃 110份， 桑葉 75份， 葛根 150份， 黃連 50份， 蒼術 75份， 澤瀉 50份， 山楂 75份， 紅曲 75份。6. -種權利要求1-5中任一項所述復方番石榴制劑的制備方法，其特征在于包括以下 步驟： 將各組份混合加原料8-10倍水煎煮二次，第一次2小時，第二次1小時，合并兩次煎液， 過濾，濾液濃縮至相對密度1.02以上(60°C)，加入防腐劑和甜味素，煮沸，冷卻后于冰箱冷 藏24h，取上清液過濾后分裝即可。7. 根據權利要求6所述的一種復方番石榴制劑的制備方法，其特征在于所述的甜味素 為甜菊素。
【文檔編號】A61P3/10GK106038869SQ201610629336
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月1日
【發明人】李樂愚, 梅全喜, 林澤宏, 曾聰彥
【申請人】中山市中醫院