草本水楊梅在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用【專利摘要】本發明涉及一種草本水楊梅在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用，屬于中藥領域。草本水楊梅及其提取物作為活性組分在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的用途，其中所述草本水楊梅及其提取物包含所述草本水楊梅原植物、及其溶劑提取物，其中所述溶劑提取物為水、乙醇、甲醇提取物。本發明的有益效果是：解決了高尿酸血癥、痛風等相關疾病的血尿酸異常升高的問題，并間接的解決、緩解了高尿酸血癥、痛風等疾病所導致的關節疼痛、腫脹變形及高血壓、糖尿病、心血管疾病、腎臟疾病、代謝綜合征等疾病的相關癥狀。【專利說明】草本水楊梅在制備黃嘌昤氧化酶抑制劑中的應用
技術領域：
[0001]本發明涉及中藥領域，特別涉及中藥源黃嘌呤氧化酶抑制劑。【
背景技術：
】[0002]體內尿酸水平持續偏高達過飽和會使尿酸鈉晶體沉積在關節及周圍組織中，造成一種嘌呤類代謝性疾病--痛風。高尿酸血癥是痛風的重要標志，大約有5%~12%的高尿酸血癥最終會發展成痛風，80%~90%的痛風患者伴隨有高尿酸血癥。此外，高尿酸血癥還與高血壓、糖尿病、心血管疾病、腎臟疾病、代謝綜合征等疾病的發生密切相關。痛風的發病率地區間差異較大，尼日利亞其發病率只有0.03%，而臺灣的土著居民中其發病率高達15.2%。流行病學調查顯示，由于人們生活水平的提高，飲食的日益改善尤其是啤酒、動物內臟等高嘌呤性食物的攝入過多，導致痛風的發病率呈日漸上升的趨勢。[0003]傳統的抗痛風藥物主要包括促尿酸排泄藥(如丙磺舒、苯溴馬隆等)和尿酸生成抑制劑(如別嘌呤醇等)兩大類，而尿酸生成抑制劑主要為黃嘌呤氧化酶抑制劑。黃嘌呤氧化酶(XanthineOxidase，簡稱X0D)是一種復合黃素蛋白酶，是人體內產生尿酸過程中的一種極其重要的酶，它能夠催化體內的黃嘌呤和次黃嘌呤生成尿酸和過氧化物自由基，因此通過抑制其活性可達到防止或減少尿酸產生的作用。近年來，黃嘌呤氧化酶抑制劑作為一種極有效的抗痛風藥物而受到國內外學者的廣泛關注，由于傳統的黃嘌呤氧化酶抑制劑別嘌呤醇的副作用如藥物超敏反應綜合征、史蒂文生氏-強生癥候群等，從天然藥物中發掘黃嘌呤氧化酶抑制劑將成為研究熱點。現有的文獻記載了對17種中藥的黃嘌呤氧化酶抑制劑的篩選，以及花生四烯酸可以作為黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102133214)，節桿菌可以生產黃嘌呤氧化酶抑制劑（CN101402922)，中藥組方提取物作為黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102205083)，通過烘干、粉碎、超聲提取、過濾、濃縮、干燥得到蔬菜提取物也可以用作黃嘌呤氧化酶抑制劑（CN102106516)，以及以海參為原料制備黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102138938，CN102580063)。[0004]我們在對長白山地區的近百種藥用植物活性篩選過程中，發現了幾種具有較強黃嘌呤氧化酶抑制活性的植物，其中就包括草本水楊梅。[0005]草本水楊梅（GeumaleppicumJacq.)別名追風七、老五葉、海棠菜，為薔薇科(Rosaceae)水楊梅屬(Geum)植物，主要分布于我國東北、華北、西北等地區，長白山海拔400~1500m山區分布尤為豐富。民間以其全草或根入藥，具有清熱解毒、消腫止痛、利尿功效，臨床主要用于治療腸炎、腰腿疼痛、跌打損傷、小兒驚風、疥瘡、癰腫等癥。【
發明內容】[0006]本發明提供一種草本水楊梅在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用，以解決高尿酸血癥、痛風等相關疾病的血尿酸異常升高的問題。[0007]本發明采取的技術方案是:草本水楊梅及其提取物作為活性組分在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的用途，其中所述草本水楊梅及其提取物包含所述草本水楊梅原植物、及其溶劑提取物，其中所述溶劑提取物為水、乙醇、甲醇提取物。[0008]本發明還提供草本水楊梅及其提取物的另一種應用，該應用為治療高尿酸血癥、痛風等相關疾病提供一種新的食品、食品添加劑、保健食品、藥品。[0009]所述的草本水楊梅及其提取物用于制備治療尚尿酸血癥、痛風相關疾病的食品、食品添加劑、保健食品、藥品的應用，通過下述方法制備：[0010]1.取草本水楊梅，干燥，粉碎，附加藥學可以接受的輔料，制成片劑、膠囊劑、散劑、丸劑等藥學上可以接受的劑型。[0011]2.取草本水楊梅，以水、乙醇或甲醇等溶劑提取，濃縮至干，得到草本水楊梅提取物，以該提取物為原料，附加藥學可以接受的輔料，制成片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、軟膠囊等藥學上可以接受的劑型。[0012]3.取草本水楊梅，以水、乙醇或甲醇等溶劑提取，濃縮至干，得到草本水楊梅提取物，以該提取物為原料制成液體飲料、固體飲料、壓片糖果等食品、保健食品可以接受的形式。[0013]本發明的有益效果是:解決了高尿酸血癥、痛風等相關疾病的血尿酸異常升高的問題，并間接的解決、緩解了高尿酸血癥、痛風等疾病所導致的關節疼痛、腫脹變形及高血壓、糖尿病、心血管疾病、腎臟疾病、代謝綜合征等疾病的相關癥狀。【附圖說明】[0014]圖1是GAC對黃嘌呤氧化酶動力學考察Linewaver-Burk雙倒數曲線圖；[0015]圖2是GAT對黃嘌呤氧化酶動力學考察Linewaver-Burk雙倒數曲線圖；[0016]圖3是GAOL對黃嘌呤氧化酶動力學考察Linewaver-Burk雙倒數曲線圖。【具體實施方式】[0017]實施例1:草本水楊梅制備降尿酸產品的應用[0018]1·草本水楊梅降尿酸膠囊(Geumaleppicumcapsule，GAC):收取草本水楊梅，陰干，粉碎，制成硬膠囊制劑。[0019]2.草本水楊梅降尿酸片(Geumaleppicumtablet，GAT):收取草本水楊梅，陰干，粉碎，以10倍量75%乙醇超聲提取三次，每次30分鐘，過濾，合并濾液，蒸干，粉碎，加淀粉適量，壓片。[0020]3.草本水楊梅降尿酸口服液(Geumaleppicumoralliquid,GAOL):取草本水楊梅，1〇倍量水煎煮40分鐘，過濾，濾液濃縮得流浸膏，加輔料，制成口服液。[0021]實施例2:草本水楊梅降尿酸產品活性研究[0022]1材料[0023]1.1藥材與試劑[0024]草本水楊梅Rudbeckialaciniata采自長白山脈臨江地區。黃噪呤（xanthine，XA)、黃嘌呤氧化酶(xanthineoxidase，X0D)，購自美國Sigma公司；別嘌醇，購自上海阿拉丁試劑公司；其他試劑均為國產分析純。[0025]1.2儀器[0026]ThermoMultiskanG0型全波長酶標儀（賽默飛世爾科技）；ABS320-4N型分析天平（上海島韓實業有限公司）；KQ-250B型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-52AA旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠）；DZF6020真空干燥器(上海一恒科學儀器有限公司）。[0027]2方法[0028]對文獻[李英，陳君，李萍.金銀花中酚酸類和黃酮類成分的黃嘌呤氧化酶抑制活性.中國藥科大學學報，2011，42(5):407]中的黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選方法進行了改良。[0029]2.1溶液配制[0030]磷酸鹽緩沖液配制(0.2mol·:A液(0.2mol·L-1磷酸二氫鉀）：取磷酸二氫鉀(1?2?04，麗136.09)1.3618，加雙蒸水使溶解并定容至1001111。財夜(0.2111〇1.1/1磷酸氫二鈉）：取磷酸氫二鈉(Na2HP〇4·2H20，MW177.99)1.78g，加雙蒸水溶解并定容至100ml。使用時分別取等量A液和B液混合即可得到pH為7.5的磷酸鹽緩沖溶液，現用現配。[0031]底物配制:取黃嘌呤適量，精密稱定，加磷酸鹽緩沖溶液配成1.5mmol·I/1的黃嘌呤底物溶液。底物溶液需新鮮配制，現用現配。[0032]酶液配制:精密稱取黃嘌呤氧化酶lmg，加磷酸鹽緩沖溶液配成0.05U·ml/1的黃嘌呤氧化酶溶液。[0033]2.2草本水楊梅降尿酸產品的樣品溶液的配制[0034]草本水楊梅降尿酸產品見"實施例1"。取相應產品，膠囊取內容物、片劑研為細粉、口服液直接吸取，分別加磷酸鹽緩沖溶液配成相應濃度的樣品溶液。[0035]2.3產品對黃嘌呤氧化酶活性的影響[0036]按表1順序分別將相應溶液加入96孔板中加入完畢后震蕩2min，于37°C條件下反應lOmin，用酶標儀測定290nm處的吸光度值，每個樣品均作3次重復，取平均值。同時測定相應濃度樣品自身的吸光度以扣除干擾，并測無樣品時酶與底物反應的吸光度作為空白對照。按照公式計算抑制率。[0037][0038]式中：Αι為反應體系中加入樣品后的吸光度值，A2為樣品溶液自身的吸光度值，Ao為空白對照的吸光度值。[0039]本實驗以別嘌醇為陽性對照，將高活性(抑制率大于60%)的樣品稀釋成6個濃度，進行梯度復篩。根據抑制劑的濃度及其平均抑制率，經非線性回歸方法計算得各樣品的IC50〇[0040]表1草本水楊梅降尿酸產品對黃嘌呤氧化酶抑制作用反應體系(yL)[0041][0042]2.4產品對黃嘌呤氧化酶抑制類型的判斷分別吸取不同濃度的產品溶液，再加入不同濃度的底物黃嘌呤(濃度分別為0.012、0.024、0.036、0.048、0.060臟〇1*1/1)，在251€條件下反應30min，測定反應速度，通過Linewaver-Burk雙倒數作圖法判斷各產品的抑制作用類型。[0043]3結果與分析[0044]3.1產品對黃嘌呤氧化酶的抑制作用[0045]各產品在2mg·ml/1濃度時對黃嘌呤氧化酶的抑制率均大于60%，繼續稀釋成6個濃度，進行梯度復篩，結果表明呈明顯的量-效關系。根據抑制劑濃度及其平均抑制率，經SPSS計算得樣品RLC、RLT、RL0L的IC5Q分別為：0.93mg·mL-\0.09mg·mL-\0.22mg·mL-、別嘌呤醇的IC5Q為:3.8μΜ。[0046]3.2各產品對黃嘌呤氧化酶的動力學特征[0047]根據Linewaver-Burk雙倒數作圖法，得到圖1-圖3,從圖1-圖3可以得到草本水楊梅各產品均為非競爭性抑制劑(三條線交叉于X軸），說明以上產品與黃嘌呤氧化酶活性中心以外的必須基團結合，這種結合不會影響酶與底物的結合，而底物與酶的結合，也不會影響與抑制劑的結合。但酶-底物-抑制劑復合物(ESI)不能進一步變成產物，此種抑制方式，只要抑制劑存在，ESI就不能解脫出來，即底物濃度增加不能降低抑制劑對酶的抑制程度。[0048]實施例3:草本水楊梅降尿酸食品的制備[0049]1.草本水楊梅袋泡茶:收取新鮮草本水楊梅，陰干，粉碎、過40目篩，24目篩篩選，紫外線燈殺菌，機械裝袋，包裝，噴印日期，塑封，入庫。[0050]2.草本水楊梅飲料:取草本水楊梅，10倍量超聲處理20分鐘，過濾，濾液加苯甲酸、苯甲酸鈉等防腐劑，加香味劑調味，滅菌，灌裝，噴印日期，包裝入庫。【主權項】1.草本水楊梅在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用。2.草本水楊梅提取物在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用。3.根據權利要求2所述的草本水楊梅提取物在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用，所述草本水楊梅提取物為草本水楊梅水提取物、草本水楊梅乙醇提取物或草本水楊梅甲醇提取物。4.如權利要求1所述的草本水楊梅在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用，所述的制備黃嘌呤氧化酶抑制劑的產品包括食品、食品添加劑、保健食品、藥品。5.如權利要求2所述的草本水楊梅提取物在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用，所述的制備黃嘌呤氧化酶抑制劑的產品包括食品、食品添加劑、保健食品、藥品。【文檔編號】A23L33/10GK106038742SQ201610620029【公開日】2016年10月26日【申請日】2016年8月1日【發明人】李海軍,劉菲,涂正坤,翟乃翠,高永梅【申請人】吉林大學