一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方及其制備方法和應用

一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方及其制備方法和應用
【專利摘要】本發明公開了一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方及其制備方法和應用，屬于獸藥領域，該中草藥復方主要包括以下原料：所述中草藥復方由葉下珠、黃芪、白術、防風、斑種草、夏至草組成，所述葉下珠、黃芪、白術、防風、斑種草和夏至草的質量配比比例為3:1:1:1:1:1。本發明能有效提高動物免疫抗體效價，降低發病率，促進動物的生長發育，全面增強動物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化藥、抗生素的毒副作用與食品安全隱患，研發前景樂觀，臨床應用廣闊。
【專利說明】
一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方及其制備方法和應用
技術領域
[0001] 本發明屬于獸藥領域，具體的涉及一種中草藥復方及其制備方法和作為獸藥在防 治豬圓環病毒病中的應用。
【背景技術】
[0002] 目前我國養豬生產面臨著日趨嚴峻的疫病威脅，發病情況復雜多變，生產風險與 日倶增，控制成本顯著提高，經濟損失無法估量。其重要原因在于豬群中普遍存在免疫抑制 性疾病。豬的免疫系統是機體保護自身的防御性結構，不僅能抵御外來細菌、病毒和其他有 害物質的侵襲，還能清除體內衰老、突變、惡化或死亡的細胞，增進健康。豬免疫抑制性疾病 直接導致在疾病診治過程中使用大量藥物，造成病原微生物的耐藥性日新月異。同時動物 機體的特異性和非特異性免疫力下降，對各種疫苗無法免疫應答，或產生的抗體效價低下。 造成低致病力的病原體或弱毒疫苗也可能感染豬體發病，更為嚴重的是由免疫抑制所帶來 的混合感染，使疾病更為復雜，有時會造成新的綜合征，甚至達到難以控制的程度。給養豬 生產造成巨大的經濟損失，同時帶來公共衛生安全隱患。由于這些免疫抑制性疾病常以亞 臨床感染的形式出現，易被忽視，因此，必須加強對免疫抑制性疾病的重視，并做好防控工 作。
[0003] 豬群中最為普遍存在的免疫抑制性疾病即為豬圓環病毒2型感染。現已知PCV有兩 個血清型，PCV1為非致病性的病毒。PCV2為致病性的病毒，它是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征 (Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)的主要病原。本病最早發現于加 拿大（1991)，除PMWS外，PDNS(豬皮炎與腎病綜合征）、PNP(增生性壞死性肺炎）、PRDC(豬呼 吸道疾病綜合征）、繁殖障礙、先天性顫抖、腸炎等疾病亦與PCV2感染有重要關聯。
[0004] PVC2組織學上的顯著的病變是淋巴濾泡區減小或缺失，淋巴細胞耗竭，大量組織 細胞浸潤髓樣組織。PCV2既不在樹突狀細胞(DC)中復制，也不誘導DC的凋亡，DC吞噬PVC2 后，不對其進行抗原加工和遞呈，所以DC是PCV2的良好避難所。又因為DC可以在機體到處移 行，所以它成為PCV2散播到機體各處的良好載體。參與免疫調節的細胞因子表達數量的改 變導致抗原遞呈細胞表面抗原MHCI類分子和MHCII類分子表達下降，繼而使得PCV2感染后 淋巴細胞不能有效地激活和增殖，最終破壞免疫功能。PCV2可以感染T淋巴細胞和B淋巴細 胞，并可以復制，但卻引起T淋巴細胞亞群和B淋巴細胞亞群都明顯減少。原因可能是:其一， PCV2可以誘導淋巴細胞凋亡;其二，可能直接導致淋巴細胞的增殖減少。
[0005] 應用中藥調節機體免疫功能和防治傳染病在我國已有數千年的歷史，并以確切的 療效和較低的毒副殘留及抗藥性而廣受歡迎。我國擁有豐富的中草藥資源，應加速對其的 研究與開發，打造具有中國特色的品牌。對解決長期困擾畜牧業發展的抗生素殘留問題，發 展綠色畜牧業，滿足人們對食品安全的需求，增強我國畜產品在國際市場的競爭力，具有重 要的經濟意義和社會效益。
[0006] 玉屏風散，中醫方劑名。為補益劑，具有益氣固表止汗之功效。主治表虛自汗證，汗 出惡風，面色蒼白，舌淡苔薄白，脈浮虛。亦治虛人腠理不固，易感風邪。臨床常用于治療免 疫低下及微生物感染屬表虛不固而外感風邪者，以及易于傷風感冒而致病情反復者。
[0007] 葉下珠，本種藥用，全草有解毒、消炎、清熱止瀉、利尿之效，可治赤目腫痛、腸炎腹 瀉、痢疾、肝炎、小兒疳積、腎炎水腫、尿路感染等。
[0008] 現有的疫苗、抗生素、化藥等不足以明顯降低豬圓環病毒病的發病率，導致養殖產 業巨大的經濟損失。抗生素、激素、化學類合成藥物可以促進動物生長、減少疾病發生，但這 些藥物長期使用會使病原微生物產生耐藥性、產品藥物殘留及環境污染等，嚴重威脅人類 健康。同時影響到我國農副產品的出口。然而，本發明作者通過大量實驗發現葉下珠等中藥 聯用具有防治豬圓環病毒病和提高機體免疫功能的作用，現有技術中沒有公開過該中藥復 方具有防治豬圓環病毒病和提高機體免疫功能的作用，也沒有該中藥復方作為飼料添加劑 替代抗生素在畜禽養殖中的應用。

【發明內容】

[0009] 本發明的目的是提供一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方及其應用，同時本發明 還提供一種所述防治豬圓環病毒病的中草藥復方的制備方法，該中草藥復方能有效提高動 物免疫抗體效價，降低發病率，促進動物的生長發育，全面增強動物免疫功能和防御疾病的 能力，克服了疫苗、化藥、抗生素的毒副作用與食品安全隱患，研發前景樂觀，臨床應用廣 闊，以解決上述現有技術存在的問題。
[0010] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
[0011] 本發明中一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方，所述中草藥復方由葉下珠、黃芪、 白術、防風、斑種草、夏至草組成，所述葉下珠、黃芪、白術、防風、斑種草和夏至草的質量配 比比例為3:1:1:1:1: 1。
[0012] 優選地，所述中草藥復方為散劑。
[0013] 本發明中一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方的制備方法，所述中草藥復方為藥 液，其工藝步驟為:將葉下珠、黃芪、白術、防風、斑種草和夏至草按所述配比比例制成散劑 后，將其加10倍體積蒸餾水于容器內，浸泡lh后加熱回流lh，趁熱用紗布過濾得一次藥渣， 所述一次藥渣再加8倍體積水加熱回流lh后趁熱用紗布過濾得二次藥渣，所述二次藥渣加6 倍體積水加熱回流lh后趁熱用紗布過濾得三次藥渣，合并上述三次藥渣對應的三次濾液， 減壓濃縮成生藥濃度為lg/mL的藥液。
[0014] 本發明中一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方作為飼料添加劑的應用，具體步驟 為:將所述中草藥復方散劑以質量比1:100與豬基礎飼料混合均勻即可。
[0015] 本發明中一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方作為注射劑的應用，具體步驟為： 將所述中藥復方藥液對豬進行肌肉注射，每天一次，每次2ml，持續2周即可。
[0016] 相對于現有技術，本發明的有益效果為:本發明提出一種中草藥復方作為獸藥防 治豬圓環病毒病的應用，能有效提高動物免疫抗體效價，降低發病率，促進動物的生長發 育，全面增強動物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化藥、抗生素的毒副作用與食 品安全隱患，研發前景樂觀，臨床應用廣闊。
【具體實施方式】
[0017] 結合以下具體實例對本發明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發 明，并非用于限定本發明的范圍。
[0018] 實施例1
[0019] 本實例基礎飼糧由南京禾嘉吉升農牧發展有限公司提供，基礎飼糧組成及營養水 平見表1。取同仁堂藥店購得的中藥葉下珠:黃芪：白術:防風:斑種草:夏至草配比比例為3: 1:1:1:1:1制成散劑后，再按質量比1:100與基礎飼糧混合均勻，進行仔豬體內試驗。
[0020] 表1基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎）
[0021]
[0022] 40頭健康普通級"杜X大X長"三元雜交斷奶仔豬，50日齡，購自南京農業大學江 浦試驗豬場。適應環境后隨機分為4組，每組10頭，公母各半。空白組和PCV2組飼喂不添加中 藥復方的基礎日糧、預防組和藥物對照組飼喂添加1 %中藥復方的基礎日糧2周后，飼喂不 添加中藥復方的基礎日糧。于試驗的第三周第Id PCV2組和預防組以107TCID5Q/mL的PCV2AH 株攻毒，每頭頸部肌肉注射2.OmL，同時滴鼻2.OmL 1次，然后隔離飼養。試驗總周期為4周。
[0023] 分別于試驗的第Id和最后Id早上8:00空腹稱重，根據初重和末重計算平均日增 重。平均日增重=頭均凈增重/試驗天數。記錄仔豬的采食量，計算日均采食量，試驗結束后 計算料重比。料重比=日均采食量/平均日增重。結果發現，PCV2組的平均日增重為 434.22g，預防組的平均日增重為537.79g，兩者差異極顯著，空白組的平均日增重為 527.24g，藥物對照組的平均日增重為558.35 g(3PCV2組的日均采食量為835.72g，預防組的 日均采食量為960.71g，兩者差異極顯著，空白組的日均采食量為956.75g，藥物對照組的日 均采食量為1088. lOgJCV〗組的料重比為1.92,預防組的料重比為1.79,空白組的料重比為 1.81，藥物對照組的料重比1.95。實驗表明，該中藥復方可以大幅提升仔豬的日增重，對飼 料的適口性沒有任何影響，采食量的增加與仔豬消化能力的提高有關。同時料重比下降，說 明動物生長性能明顯改善，營養狀態良好。
[0024] 試驗最后Id仔豬清晨空腹前腔靜脈采血，酶聯免疫吸附法檢測血清中PCV2的抗體 水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。結果發現，PCV2組的PCV2抗體水平0D值為0.276，預防組 的PCV2抗體水平0D值為0.397，兩者差異極顯著，空白組的PCV2抗體水平0D值為0.064，藥物 對照組的PCV2抗體水平0D值為0.089 JCV2組的血清SOD含量為8.24ng/mL，預防組的SOD含 量為11.35ng/mL，兩者差異極顯著，空白組的SOD含量為9.82ng/mL，藥物對照組的SOD含量 為10.70ng/mL。實驗表明，該中藥復方可以大幅上調仔豬PCV2的抗體水平，特異性的中和、 消滅PCV2病原，從而增強機體免疫功能，預防疫病的發生。SOD水平可反應出機體細胞受自 由基攻擊的嚴重程度和機體清除自由基的能力，該中藥復方可以減少過氧化作用的發生， 通過抑制肌肉的脂質氧化，參與調控胴體品質和肉質風味。
[0025]試驗最后Id仔豬清晨空腹前腔靜脈采血，血液分析儀測定機體紅細胞(RBC)和血 紅蛋白（HGB)含量，全自動生化分析儀檢測血液尿素(UREA)水平。結果發現，PCV2組的RBC含 量為4.9110 12/L，預防組的RBC含量為5.961012/L，兩者差異極顯著，空白組的RBC含量為 5.2810 12/L，藥物對照組的RBC含量為5.701012/Ι^Ρ(：ν2組的血清HGB含量為94g/L，預防組的 HGB含量為114g/L，兩者差異極顯著，空白組的HGB含量為103g/L，藥物對照組的HGB含量為 lOgg/LlCV〗組的血清尿素水平為3.75mmol/L，預防組的尿素水平為2.86mmol/L，兩者差異 極顯著，空白組的尿素水平為3.16mmol/L，藥物對照組的尿素水平為2.94mmol/L。實驗表 明，該中藥方劑能顯著上調仔豬紅細胞數量，提高血紅蛋白含量，改善機體貧血狀態，增強 動物體質。同時降低機體的尿素水平，這意味著蛋白質沉積增加，氨基酸平衡理想，加快了 新陳代謝的速度，促進生長發育。
[0026] 實施例2
[0027] 取同仁堂藥店購得的中藥葉下珠:黃芪：白術:防風:斑種草:夏至草配比比例為3: 1:1:1:1:1制成散劑后，加10倍蒸餾水于圓底燒瓶中，浸泡lh后加熱回流lh，趁熱用紗布過 濾。藥渣再分別加8倍水和6倍水加熱回流lh。合并3次濾液，減壓濃縮生成藥濃度為lg/mL的 藥液，進行仔豬體內試驗。
[0028] 40頭健康普通級"杜X大X長"三元雜交斷奶仔豬，50日齡，購自南京農業大學江 浦試驗豬場。適應環境后隨機分為4組，每組10頭，公母各半。空白組和PCV2組不進行頸部肌 肉注射該中藥復方液、PCV2組和治療組以107TCID5Q/mL的PCV2AH株攻毒，每頭頸部肌肉注射 2.OmL，同時滴鼻2.0mL，l次，然后隔離飼養2周。于試驗的第三周第Id治療組和藥物對照組 肌肉注射該中藥復方液每天1次，每次2. OmL，持續2周。試驗總周期為4周。
[0029] 試驗最后Id仔豬清晨空腹前腔靜脈采血，實時熒光定量PT-PCR法檢測血清中PCV2 的抗原含量。結果發現，PCV2組的抗原含量為6.25(lg)AxL，治療組的抗原含量為4.97(lg)/ yL，兩者差異極顯著，空白組和藥物對照組的PCV2抗原均未檢測到。實驗表明，該中藥方劑 能顯著降低機體內的病毒含量，抑制病毒血癥的產生，具有明顯的抗PCV2病毒作用。
[0030] 試驗最后Id仔豬清晨空腹前腔靜脈采血，全自動生化分析儀檢測機體中IgG、IgM、 白蛋白（ALB)和球蛋白（GL0)的水平。結果發現PCV2組的IgG水平為1.47mg/mL，治療組的IgG 水平為1 · 86mg/mL，兩者差異極顯著，空白組的IgG水平為1 · 55mg/mL，藥物對照組的IgG水平 為1 · 71π^/πιΙ^Ρ(：ν2組的IgM水平為0 · 58mg/mL，治療組的IgM水平為0 · 97mg/mL，兩者差異極 顯著，空白組的IgM水平為0 · 66mg/mL，藥物對照組的IgM水平為0 · TTmg/mUPCV〗組的血清 ALB含量為30.2g/L，治療組的ALB含量為36.8g/L，兩者差異顯著，空白組的ALB含量為 34 · 6g/L，藥物對照組的ALB含量為35 · 28/11(^2組的血清GL0含量為29 · 2g/L，治療組的GL0 含量為39.6g/L，兩者差異極顯著，空白組的GL0含量為36.2g/L，藥物對照組的GL0含量為 38.lg/L。實驗表明，該中藥方劑能大幅上調仔豬血清中IgG的水平，從而提高防病抗病能 力。同時還能顯著提高IgM水平，影響體液免疫反應。白蛋白作為一種貯存蛋白質，可隨時修 補組織和提供能量。該中藥方劑能顯著上調ALB水平，增加機體肝臟代謝功能。同時還能顯 著提高GLO水平，增強機體免疫功能。
[0031 ]試驗最后Id仔豬清晨空腹前腔靜脈米血，酶聯免疫吸附法檢測血清中IL_4、IL-10、IL-2和IFN- γ的含量。結果發現，PCV2組的IL-4含量為108.07pg/mL，治療組的IL-4含量 為85.15pg/mL，兩者差異極顯著，空白組的E-4含量為81.39pg/mL，藥物對照組的E-4含量 為 82 · 66ρ8/πιΙ^Ρ(：ν2 組的 IL-10 含量為 162 · 34pg/mL，治療組的 IL-10 含量為 133 · 31pg/mL，兩 者差異極顯著，空白組的IL-10含量為125.20pg/mL，藥物對照組的IL-10含量為123.09pg/ πιΙ^Ρ(：ν2組的IL-2含量為281.00pg/mL，治療組的IL-2含量為317.39pg/mL，兩者差異極顯 著，空白組的IL-2含量為251.83pg/mL，藥物對照組的IL-2含量為266·56ρ 8/πιΙ^Ρ(：ν2組的 IFN- γ含量為193.16pg/mL，治療組的IFN- γ含量為242.56pg/mL，兩者差異極顯著，空白組 的IFN- γ含量為173 · 89pg/mL，藥物對照組的IFN- γ含量為180 · 52pg/mL。實驗表明，該中藥 方劑能顯著下調IL-4和IL-10水平，減弱靜止性ThO細胞向Th2方向分化，抑制Th2效應，從而 解除機體免疫耐受情況；同時該中藥方劑能顯著上調IL-2和IFN-γ水平，促進靜止性ThO細 胞向Thl方向分化，增強Thl效應，從而改善機體免疫抑制狀態。
[0032]盡管本發明是參照具體實施例來描述，但這種描述并不意味著對本發明構成限 制。參照本發明的描述，所公開的實施例的其他變化，對于本領域技術人員都是可以預料 的，這種的變化應屬于所屬權利要求所限定的范圍內。
【主權項】
1. 一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方，其特征在于，所述中草藥復方由葉下珠、黃 芪、白術、防風、斑種草、夏至草組成，所述葉下珠、黃芪、白術、防風、斑種草和夏至草的質量 配比比例為2. 根據權利要求1所述的一種防治豬圓環病毒病的中草藥復方，其特征在于，所述中草 藥復方為散劑。3. -種如權利要求1所述的防治豬圓環病毒病的中草藥復方的制備方法，其特征在于， 所述中草藥復方為藥液，其工藝步驟為:將葉下珠、黃芪、白術、防風、斑種草和夏至草按所 述配比比例制成散劑后，將其加10倍體積蒸餾水于容器內，浸泡lh后加熱回流lh，趁熱用紗 布過濾得一次藥渣，所述一次藥渣再加8倍體積水加熱回流lh后趁熱用紗布過濾得二次藥 渣，所述二次藥渣加6倍體積水加熱回流lh后趁熱用紗布過濾得三次藥渣，合并上述三次藥 渣對應的三次濾液，減壓濃縮成生藥濃度為lg/mL的藥液。4. 一種如權利要求2所述的防治豬圓環病毒病的中草藥復方作為飼料添加劑的應用， 其特征在于，具體步驟為:將所述中草藥復方散劑以質量比1:100與豬基礎飼料混合均勻即 可。5. -種如權利要求3所述的防治豬圓環病毒病的中草藥復方作為注射劑的應用，其特 征在于，具體步驟為:將所述中藥復方藥液對豬進行肌肉注射，每天一次，每次2ml，持續2周 即可。
【文檔編號】A61P31/20GK106038684SQ201610488456
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月28日
【發明人】胡屹屹, 茅愛華, 何孔旺, 溫立斌, 倪艷秀, 劉傳敏, 肖琦
【申請人】江蘇省農業科學院