冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用圖

冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用圖
【專利摘要】本發明涉及制藥技術，特別涉及冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途。本發明提供一種抗抑郁癥的藥物，其抗抑郁藥效成分為冬凌草甲素。其藥效劑量為每千克體重0.01?30mg冬凌草甲素；給藥后60分鐘內即可產生抗抑郁效果。這種藥物具有抗抑郁效果顯著、起效快、用藥量少、副作用小等優點。在哺乳動物小鼠懸尾實驗中，冬凌草甲素比常規抗抑郁藥物丙咪嗪的抗抑郁效果更加顯著，有望成為快速、高效、無毒副作用的抗抑郁新藥。
【專利說明】
冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途
技術領域
[0001]本發明涉及制藥技術，特別涉及冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]抑郁癥又稱抑郁障礙，以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征。臨床可見心境低落與其處境不相稱，情緒的消沉可以從悶悶不樂到悲痛欲絕，自卑抑郁，甚至悲觀厭世，可有自殺企圖或行為。部分病例有明顯的焦慮和運動性激越，嚴重者可出現幻覺、妄想等精神病癥狀。每次發作持續至少兩周以上，長達數年。多數病例有反復發作的傾向，每次發作大多數可以緩解，部分可有殘留癥狀或轉為慢性。
[0003]藥物治療是中度以上抑郁發作的主要治療措施。傳統的三環類、四環類抗抑郁藥和單胺氧化酶抑制劑由于不良反應較大，應用明顯減少。目前臨床上一線的抗抑郁藥主要包括選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取抑制劑等，但使用這類藥物起效慢，作用譜窄，停藥后易復發。目前，整個業界都在研發見效快、副作用小、更為有效的治療藥物。
[0004]冬凌草甲素是從傳統中藥冬凌草中提取分離出來的一種四環二萜類化合物，熔點248-250°C，微溶于水，溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。冬凌草甲素具有明顯的抗菌消炎作用，對金黃色葡萄球菌甲型鏈球菌等上呼吸道菌株有較強的殺菌作用，被廣泛用于治療慢性咽炎、扁桃體炎、口腔炎。體外實驗發現，冬凌草甲素具有抗腫瘤的功效，對人體食管癌100細胞株及人體BEL-7402肝癌細胞株均有明顯的細胞毒作用，對L1210、P388、艾氏腹水癌(ECA)、肝癌及S180腹水型等都有明顯抗腫瘤作用，使動物的平均存活期明顯延長，部分動物可長期存活。亞急性毒性實驗證明，冬凌草甲素對大鼠或犬的骨髓、肝、腎等功能均無明顯影響。
[0005]目前，應用冬凌草甲素作為藥效成分預防/治療抑郁癥還未見報道。

【發明內容】

[0006]基于發明人的偶然發現，本發明提供一種以冬凌草甲素作為藥效成分的抗抑郁藥，這種藥物具有抗抑郁效果顯著、起效快、用藥量少、副作用小等優點。
[0007]本發明請求保護的技術方案如下:
[0008]—種抗抑郁癥的藥物，其特征在于，其抗抑郁藥效成分為冬凌草甲素。
[0009]—種抗抑郁癥的藥物組合物，其特征在于，其抗抑郁藥效組分包括冬凌草甲素。
[0010]—種快速抗抑郁癥的藥物，其特征在于，其抗抑郁藥效成分為冬凌草甲素。
[0011 ]所述快速抗抑郁癥的藥物，其特征在于，其藥效劑量為每千克體重0.01_30mg冬凌草甲素;給藥后60分鐘內可產生抗抑郁效果。
[0012]任一所述的藥物，其特征在于，還包括與冬凌草甲素同時施用后對治療抑郁癥有積極作用的藥物成分和/或使冬凌草甲素穩定性提高的藥學上可接受的成分。
[0013]任一所述的藥物，其特征在于，還包括制藥學上可接受的輔助成分。
[0014]任一所述的藥物，其特征在于，其劑型為粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液、
懸浮液或注射液。
[0015]冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途，其特征在于，以冬凌草甲素為藥效成分制備抗抑郁癥藥物。
[0016]所述用途中，所述抗抑郁癥藥物的藥效劑量為每千克體重0.01_30mg冬凌草甲素；給藥后60分鐘內可產生抗抑郁效果。
[0017]一種治療/預防抑郁癥的方法，其特征在于，使受試者攝入冬凌草甲素，按每天每千克體重提供0.01_30mg冬凌草甲素。
[0018]本發明研究結果表明，在哺乳動物小鼠懸尾實驗中，冬凌草甲素具有快速抗抑郁癥的功效，且比常規抗抑郁藥物丙咪嗪更有效。
[0019]在小鼠動物模型懸尾實驗中發現，冬凌草甲素高劑量組小鼠(12mg/kg)在注射后60分鐘抑郁癥狀開始緩解，即活動量相對空白對照組越來越頻繁，明顯縮短不動時間。而丙咪嗪陽性對照組在注射后60分鐘內，活動量與生理鹽水對照組無差別，直至60分鐘之后，才開始有相對頻繁地活動。丙咪嗪陽性對照組和生理鹽水組的小鼠相比，注射60分鐘后不動時間沒有明顯縮短，注射90分鐘后開始明顯縮短懸尾不動時間。冬凌草甲素在劑量低于丙咪嗪的情況下，比丙咪嗪更早地顯示出抗抑郁效果。實施例1中列出了在注射60分鐘之后各組小鼠在所觀察6分鐘內，后4分鐘內的累計不動時間，結果如圖2所示。
[0020]在強迫游泳實驗中，冬凌草甲素高劑量組(12mg/kg)的不動時間與丙咪嗪陽性對照組(15mg/kg)的不動時間相當(如圖3所示)。和丙咪嗪相比，冬凌草甲素有效劑量更低，具有更強的抗抑郁作用，具有作為快速抗抑郁癥藥物的潛力。
[0021]本發明抗抑郁藥物的有效成分冬凌草甲素，其化學結構式如圖1所示，還具有抗腫瘤、抗菌、消炎等功效。因此，冬凌草甲素有望成為快速、高效、無毒副作用的抗抑郁新藥。
[0022]基于本發明的實驗數據，本發明請求保護以冬凌草甲素為藥效成分的抗抑郁癥藥物，即任何以冬凌草甲素為藥效成分且標識著其適應癥包含抑郁癥的藥物或快速抗抑郁癥的藥物，或以冬凌草甲素為藥效組分的藥物組合物都是本發明請求保護的專利抗抑郁癥藥物。本發明還請求保護冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途，任何以冬凌草甲素為藥效成分制備抗抑郁癥藥物、快速抗抑郁癥藥物、抗抑郁癥藥物組合物的以盈利為目的生產行為都屬于本發明請求保護的范圍。
[0023]本發明采用的藥物篩選實驗為:強迫游泳實驗和小鼠懸尾實驗，是常用的兩種動物行為絕望抑郁癥模型實驗，能較好地保證篩選結果的可靠性。
[0024]小鼠強迫游泳實驗已用于很多抗抑郁藥物的篩選。而且大多數有臨床治療作用的抗抑郁藥也被證實在強迫游泳實驗中能有效減少不動時間。所謂不動是指“動物在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態，僅露出鼻孔保持呼吸，僅有細小的肢體運動，以保持頭部浮在水面”。在試驗前給予擬篩選的藥物。由于動物在強迫狀態下游泳使動物不能逃出惡劣環境，導致動物行為絕望。此種模型方法簡便，可靠，已廣泛用于抗抑郁藥劑的篩選和評價。
[0025]小鼠懸尾實驗是小鼠在懸尾狀態下不再掙扎，呈現特有的安靜不動狀態，抗抑郁藥可明顯縮短不動狀態的持續時間。試驗時，將小鼠尾部固定、倒懸。勿使小鼠尾部扭曲折疊。計錄不動時間。不動指標為:“動物除呼吸外所有肢體均不動”。懸尾實驗對各種抗抑郁藥均很敏感，而且避免了游泳實驗中溫度和動物運動功能障礙的干擾，因而在用一些鼠種篩選抗抑郁藥物時，可以有效地驗證和補充強迫游泳實驗的結果。
[0026]本發明提供的冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途，所制備而得的抗抑郁癥藥物，可以基于制藥領域的技術人員的常識而加入不影響藥物藥效的輔助成分，如載體、賦形劑、矯味劑等。由于該藥物通過口服、注射、皮下包埋等方式均可見效，因此，劑型可以是多樣的，包括但不限于粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液、懸浮液、注射液或滴注液。
[0027]本發明提供的抗抑郁癥藥物還可以混合有其它與冬凌草甲素或其衍生物配合使用對治療抑郁癥有積極作用的藥物成分。
[0028]本領域技術人員可以加入使冬凌草甲素穩定性提高的穩定劑，只要不影響藥效的發揮，所得的抗抑郁癥藥物均在本發明要求保護的范圍內。
[0029]本發明所提供的抗抑郁癥藥物，所述抗抑郁癥包括預防和治療兩個階段。
[0030]所述抗抑郁癥藥物的用量為:每天每千克體重提供0.01_30mg冬凌草甲素。
[0031 ]所述抗抑郁癥藥物的給藥方式為口服、滴注或注射;給藥對象為哺乳動物，所述哺乳動物包括人。
[0032]由于經典抑郁動物模型中動物不動時間的縮短可能是由于藥物的中樞興奮性作用所引起，因此本發明還同時進行了小鼠開野實驗(Open field test)，以檢驗小鼠的自主活動性，避免中樞興奮藥的干擾。結果表明，與對照組相比，高濃度冬凌草甲素對小鼠自主活動無顯著影響，故可排除假陽性結果的可能性，證明冬凌草甲素確實具有顯著的抗抑郁作用。
[0033]本發明請求保護的藥物組合物，是指人工復配的以兩種及以上藥效組分混合在一起制得的藥物。例如這種組合物比如本發明采用的冬凌草甲素與
【申請人】之前申請并公布的蟲草素、香菇多糖、蝦青素等物質組合而成的抗抑郁癥藥物組合物。區別于包含某種藥效成分但是成分復雜的天然植物。
【附圖說明】
[0034]圖1.冬凌草甲素的化學結構式。
[0035]圖2.冬凌草甲素對小鼠懸尾實驗的影響，
[0036]縱坐標:懸尾實驗小鼠不動時間(s)，
[0037]橫坐標:從左到右依次為:I%DMSO對照組，冬凌草甲素低劑量組(7.5mg/kg)，冬凌草甲素高劑量組(12mg/kg)，生理鹽水對照組，丙咪嗪陽性對照組(15mg/kg)，
[0038]結果:⑶I雄性小鼠經不同劑量的冬凌草甲素腹腔注射60分鐘后，高劑量組(12mg/kg)在小鼠懸尾實驗中顯示出極顯著的抗抑郁效果(每組動物N= 24，*t檢驗P <0.05，<
0.0I)。圖3.冬凌草甲素對小鼠游泳實驗的影響，
[0039]縱坐標:強迫游泳實驗小鼠不動時間(s)，
[0040]橫坐標:從左到右依次為:I %DMS0對照組，冬凌草甲素低劑量組(7.5mg/kg)，冬凌草甲素高劑量組(12mg/kg)，生理鹽水對照組，丙咪嗪陽性對照組(15mg/kg)，
[0041]結果:CDl雄性小鼠經不同劑量的冬凌草甲素腹腔注射五天后，在小鼠強迫游泳實驗中顯示出極顯著抗抑郁效果。這個抗抑郁效果和傳統抗抑郁藥物丙咪嗪相比有更強的趨勢(每組動物 N=8-10，*t 檢驗 ρ<0.05，林 ρ<0.01)。
【具體實施方式】
[0042]以下通過具體實施例對本發明進行詳細說明，需要理解的是，下述實施例僅作為解釋和說明，不以任何形式限制本發明的范圍。
[0043]下述實施方式中，未特別說明的生物化學試劑均為本領域常規試劑，可以按照本領域常規方法配制而得或商購獲得，規格為實驗室純級即可。
[0044]實施例1.冬凌草甲素對動物抑郁模型懸尾實驗的影響
[0045]實驗動物:
[0046]CDl種小鼠，雄性，重量30-40克，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號:SCXK(京)2012-0001。動物分籠飼養，明暗周期12h/12h，室溫20?22°C，食水自由，飼料由中國科學院遺傳與發育生物學研究所實驗動物中心提供。
[0047]實驗藥品:
[0048]冬凌草甲素購自中國食品藥品檢定研究院，貨號111721-201403。
[0049]鹽酸丙咪嘆(Imipraminehydrochloride)為Sigma公司產品，貨號 17379，批號056K1380。
[0050]實驗器材:
[0051 ] 橫桿；膠布；Sumsung Intelli_200m數碼攝像機(韓國三星公司)；JUNSO多功能計時器。
[0052]實驗步驟:
[0053]雄性⑶I小鼠經適應性飼養一周，分成5組，每組24只。分別為
[0054]I %DMS0對照組(DMS0溶于生理鹽水)、
[0055]冬凌草甲素低劑量組(7.5mg/kg，溶于I %DMS0)、
[0056]冬凌草甲素高劑量組(12mg/kg，溶于1%DMS0)、
[0057]傳統抗抑郁藥物丙咪嗪陽性對照組(15mg/kg丙咪嗪，生理鹽水溶解)、
[0058]生理鹽水對照組。
[0059]上午10時按0.3ml/30g體重腹腔注射給藥，
[0060]注射60分鐘后，每組隨機選取12只小鼠進行懸尾實驗；
[0061 ]注射90分鐘后，對每組剩下的12只小鼠進行懸尾實驗；
[0062]小鼠懸尾實驗時，用膠布將小鼠尾在距尾尖2厘米處粘在一根水平橫桿上，使動物成倒掛狀態，其頭部離桌面約15厘米。觀察6分鐘，記錄后4分鐘內的累計不動時間。不動指標為:動物除呼吸外所有肢體均不動。
[0063]統計方法:
[0064]實驗結果用均值土SE表示，兩個樣本平均數比較用t檢驗。
[0065]冬凌草甲素高劑量組小鼠在注射后60分鐘抑郁癥狀開始緩解，即活動量相對空白對照組越來越頻繁，明顯縮短不動時間。而丙咪嗪陽性對照組在注射后60分鐘內，活動量與生理鹽水對照組無差別，直至60分鐘之后，才開始有相對頻繁地活動。
[0066]丙咪嗪陽性對照組和生理鹽水組的小鼠相比，注射60分鐘后不動時間沒有明顯縮短，注射90分鐘后開始明顯縮短懸尾不動時間。
[0067]注射60分鐘后觀察結果，如圖2所示，冬凌草甲素的高劑量組小鼠的不動時間與1%0150對照組相比由126.11±16.418降低為61.86±11.318(卩<0.01)，縮短了50.95%。低劑量組不動時間也顯示出降低趨勢。結果表明，高劑量的冬凌草甲素在很短的時間內即可起效，且效果極顯著，可以對抗小鼠因強迫懸尾造成的抑郁癥狀。
[0068]實施例2.冬凌草甲素對動物抑郁模型強迫游泳實驗的影響
[0069]實驗動物:
[0070]CDl種小鼠，雄性，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號:SCXK(京)2012-0001。實驗前一周將動物分籠飼養，明暗周期12h/12h，室溫20?22°C，食水自由，飼料由中國科學院遺傳與發育生物學研究所實驗動物中心提供。
[0071]實驗藥物:
[0072]冬凌草甲素購自中國食品藥品檢定研究院，貨號111721-201403。
[0073]陽性對照鹽酸丙咪嘆(Imipramine hydrochloride)為Sigma公司產品，貨號17379，批號056K1380。
[0074]實驗儀器:
[0075]玻璃圓筒(高40cm，直徑14cm);小鼠開闊箱(長和寬分別為50cm，高40cm，底部16等分)；溫度計;JUNSO多功能計時器。
[0076]實驗步驟:
[0077]藥物準備同懸尾實驗。
[0078]動物藥物注射:
[0079]⑶I小鼠，年齡7周，重量30-40克，適應環境一周后開始實驗。動物隨機分組，共有5組，每組8-10只動物。每天上午10點開始腹腔注射。注射量為0.3毫升/30克，每天腹腔注射一次，注射五天后開始強迫游泳實驗。
[0080]強迫游泳實驗:
[0081 ] 將各組⑶I鼠單個垂直地放入有機玻璃圓筒中(40cm高X 14cm直徑)，水深25cm，水溫21-23°C。各給藥組和對照組錄像6分鐘，比較各組小鼠在后4分鐘內的累計不動時間。不動時間判定:小鼠漂浮在水面，不努力爬出圓筒，僅做一些必須保持其頭部在水面的動作。
[0082]統計分析方法:
[0083]實驗結果用均值土SE表示，兩個樣本平均數比較用t檢驗。
[0084]結果如圖3所示，與1%DMS0對照組比較，冬凌草甲素高劑量組小鼠強迫游泳4分鐘內的不動時間顯著縮短，且具有一定的劑量依賴性，冬凌草甲素高劑量組小鼠的不動時間與 1%DMS0對照組相比，由89.50±11.96s降低為43.75±16.10s(p<0.01)，縮短了51.11%。和傳統抗抑郁藥丙咪嗪相比，高劑量(12mg/kg)的冬凌草甲素的抗抑郁作用更強。
[0085]實施例3.小鼠開野實驗
[0086]由于經典抑郁動物模型中的動物不動時間的縮短可能是由于藥物的中樞興奮性作用引起，所以我們進行了小鼠開野實驗來檢驗冬凌草甲素的中樞興奮性。
[0087]實驗結果顯示，小鼠I小時在開闊箱中運動的總距離在冬凌草甲素高劑量處理后(77.19+7.41111)與對照組(59.28±3.18111)相比，無明顯變化(厶110￥34>0.05小=8-10)，故可排除其引發躁狂狀態的可能性，因此，冬凌草甲素確實具有顯著的抗抑郁效果。
[0088]實施例4藥物組合物藥效實驗
[0089]重復實施例1-3的實驗，只是實驗藥物為冬凌草甲素與蟲草素、香菇多糖、蝦青素、靈芝酸A等在先公開的抗抑郁有效成分的1:1組合。
[0090]實驗結果顯示小鼠懸尾實驗、強迫游泳實驗、開野實驗結果與實施里1-3顯示相同的趨勢和顯著性。
【主權項】
1.一種抗抑郁癥的藥物，其特征在于，其抗抑郁藥效成分為冬凌草甲素。2.一種抗抑郁癥的藥物組合物，其特征在于，其抗抑郁藥效組分包括冬凌草甲素。3.一種快速抗抑郁癥的藥物，其特征在于，其抗抑郁藥效成分為冬凌草甲素。4.根據權利要求3所述的快速抗抑郁癥的藥物，其特征在于，其藥效劑量為每千克體重0.01-30mg冬凌草甲素;給藥后60分鐘內可產生抗抑郁效果。5.根據權利要求1?4任一所述的藥物，其特征在于，還包括與冬凌草甲素同時施用后對治療抑郁癥有積極作用的藥物成分和/或使冬凌草甲素穩定性提高的藥學上可接受的成分。6.根據權利要求1?4任一所述的藥物，其特征在于，還包括制藥學上可接受的輔助成7.根據權利要求1?4任一所述的藥物，其特征在于，其劑型為粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液、懸浮液或注射液。8.冬凌草甲素在制備抗抑郁癥藥物中的用途，其特征在于，以冬凌草甲素為藥效成分制備抗抑郁癥藥物。9.根據權利要求8所述的用途，所述抗抑郁癥藥物的藥效劑量為每千克體重0.01-30mg冬凌草甲素;給藥后60分鐘內可產生抗抑郁效果。10.一種治療/預防抑郁癥的方法，其特征在于，使受試者攝入冬凌草甲素，按每天每千克體重提供0.01-30mg冬凌草甲素。
【文檔編號】A61P25/24GK106038534SQ201610493245
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月28日
【發明人】杜若甫, 陳正華, 單麗萍
【申請人】北京冠瑞金生物科技有限公司