蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性有效提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法
【專利摘要】本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫藥用途。本發明提取物通過如下方法獲得：蒔蘿子經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100：2的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比為100：3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，用100：3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即得該提取物；或先用體積比為100：12的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比為100：17的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，用100：17的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即得該提取物。
【專利說明】
蒔蘿子乙釀膽堿酯酶抑制活性有效提取物及其組合物的醫 藥用途和制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其 組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病（AD)等方面的醫藥用途。
【背景技術】
[0002] 蒔蘿子為傘形科（Umbelliferae)植物蒔蘿（AweiA·發raKeoJeft? L.)的干燥成 熟果實。干燥果實多數裂成分果，呈扁平廣橢圓形，長3~4毫米，寬2~3毫米，厚約1毫 米。外表棕色，背面有3條不甚明顯的肋線，兩側肋線延伸作翅狀，少數未分離的雙懸果基 部有殘存果柄。氣微香。產江蘇、安徽等地。化學成分主要為葛縷酮、檸檬烯、蒔蘿油腦、佛 手柑內酯、傘形花內酯金合歡醚即7-羥基香豆精金合歡醇醚、蠟、γ-谷留醇等。有抗菌、 鎮咳、平喘、祛風、利尿利膽等作用。
[0003] 本發明通過大規模、系統地活性篩選，意外地發現維吾爾藥蒔蘿子提取物，具有顯 著地乙酰膽堿酯酶抑制活性，該活性提取物及其組合物有望應用于治療阿爾茨海默病（AD) 等方面的醫藥用途。
【發明內容】
[0004] 本發明所解決的技術問題是提供一種蒔蘿子提取物。
[0005] 本發明還提供了以蒔蘿子提取物為主要活性成分的組合物。
[0006] 本發明同時提供了蒔蘿子提取物及其組合物的制備和在制備乙酰膽堿酯酶抑制 活性藥物中的應用。
[0007] 本發明是通過如下技術方案實現的： 維吾爾藥蒔蘿子經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（Si02)柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚-丙酮，比例見表1 )，各石油醚-丙酮比例混 合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其乙酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發 現先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比)洗脫，繼用石油醚-丙酮混合 溶劑(石油醚-丙酮，100:3，體積比)洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3， 體積比)洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有乙酰 膽堿酯酶抑制活性的作用。最優為先用100 :2的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫10倍柱體積， 繼用100 :3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫20倍柱體積的洗脫液干燥后即為乙酰膽堿酯酶 抑制活性的提取物。乙酰膽堿酯酶抑制活性的提取物，可以通過以上方法得到富集，從而與 其他雜質類成分分離開。該蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層 譜色譜（TLC)分析表征如圖1，TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯： 丙酮（6:1:1)顯色方法：香草醛-硫酸顯色； 或維吾爾藥蒔蘿子經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（Si02)柱分離，上樣后的硅 膠柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚-丙酮，比例見表1 )，各石油醚-丙酮比例 混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其乙酰膽堿酯酶抑制活性，意外地 發現先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:17,體積比）洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該提取物。而其他比例的洗脫部位， 沒有乙酰膽堿酯酶抑制活性的作用。或最優為先用100 ;12的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫 25倍柱體積，繼用100 :17的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫35倍柱體積的洗脫液即為本發明 乙酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。乙酰膽堿酯酶抑制活性的提取物，可以通過以上方法得 到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文 獻報道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖2, TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：石油 醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0008] 具體，發現過程如下： 1、蒔蘿子經甲醇超聲提取物的制備 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 SN0096A，樣品0. 6927 g，留樣0. 0353g，上樣量0. 6574g，拌樣硅膠0. 7 g，空白硅膠5 g，石 油醚-丙酮系統洗脫。
[0009] 2、石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結果 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 SN0096A，樣品0. 6927 g，留樣0. 0353g，上樣量0. 6574g，拌樣硅膠0. 7 g，空白硅膠5 g， 玻璃柱內徑1. 5 cm，石油醚-丙酮系統洗脫(條件見表1)，柱體積12. 5 mL，每個梯度洗脫 100mL，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙酮梯度洗脫提取 物，TLC分析結果見圖3, TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮 =6:1:1，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0010] 表 1
3、抑制乙酰膽堿酯酶活性篩選方法和結果 1) 實驗條件 a、 材料：DMSO(二甲基亞砜）（科密歐公司）；KH2P04、K2HP0 4 ·3Η20(廣東汕頭市西隴化 工廠）；AchE酶（美國Sigma公司）；PNPG(美國Sigma公司） b、 實驗儀器：多功能酶標儀 Bio-Rad Model 680 型（Bio-Rad Laboratories Inc.) 2) 實驗方法和過程 樣品處理：將1 mg待測樣品溶于20 二甲基亞砜（DMSO)作為母液，取1 母液 加入249兒蒸餾水配成200々g.mL1的溶液。
[0011] 乙酰膽堿酯酶抑制活性測定方法： 在96孔酶標板上測定樣品的AchE抑制活性。具體操作如下：在96孔酶標板中依次加 入 20 μ L PB (100mM，pH 8. 0)，25 μ L AChE (0· 033 U/mL，pH 8. 0 PB 溶解稀釋），25 μ L 樣品溶液（40 μ g .mL_ 3。冰浴 5min 后，加 15 μ L ATCI(0. 6mM)及 15 μ L DTNB( 1. 5mM)。 37°C孵育60min后，用酶標儀在412 nm下測定其吸光度值。根據下式計算抑制率： 酶活性抑制率％ = [A空白-(A樣品-A背景）]/ A空白X 100 式中Aae :不加樣品反應后的吸收值； :加入樣品反應后的吸收值； :只加樣品的吸收值。
[0012] 1)實驗結果 表2
結果發現： 本發明較優方案為：維吾爾藥蒔蘿子經有機溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比)洗脫，繼用 石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:3,體積比)洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該乙酰膽堿酯酶抑制活性 提取物。該乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其TLC分析表征如圖1 ; 或維吾爾藥蒔蘿子經有機溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:17,體積比)洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物。該 乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其TLC分析表征如圖2。
[0013] 4、乙酰膽堿酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究 1)提取溶劑的種類研究 分別用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有機 溶劑提取，并測試提取物的乙酰膽堿酯酶抑制活性，實驗結果如下： 表3
研究結果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0014] 2)提取溶劑的用量研究 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/體積比)有機溶劑提取，并測試提取物的乙酰 膽堿酯酶抑制活性，結果如下： 表4
活性提取物的提取所用有機溶劑用量為藥材重量的2-50倍(重量/體積比)。
[0015] 3 )干燥方法的研究 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到的抑 制乙酰膽堿酯酶活性提取物進行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標，發現真空干燥法、 冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物進行 干燥，其中，最優為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0016] 表 5
優選地，蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物的制備方法為： 蒔蘿子經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油 醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比)洗脫2-50倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:3,體積比)洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件 最優為先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用 石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫20倍柱體積。其中，具體試驗 條件如下： 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用溶劑用量為藥材重量的2-50 倍(重量/體積比)。
[0017] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0018] 或蒔蘿子經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用 石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用石油 醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比)洗脫2-50倍柱體積，用石油醚-丙酮混 合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取 物。以上條件最優為先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫25 倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫35倍柱體積。 其中，具體試驗條件如下： 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用溶劑用量為藥材重量的2-50 倍(重量/體積比)。
[0019] 提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥 法等，最優為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0020] 5.蒔蘿子抑制乙酰膽堿酯酶活性提取物(用體積比為100:3或100 :17的石油 醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該提取物）的醫藥用途研究 按優化的蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物制備方法制備的活性提取物，經測試， 其乙酰膽堿酯酶抑制活性為ICM=23. 2 μ g/mL。
[0021] 由于乙酰膽堿酯酶抑制劑具有治療阿爾茨海默病等方面的醫藥用途。因此，我們 發現的蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物具有廣泛的醫藥用途。
[0022] 6、蒔蘿子抑制乙酰膽堿酯酶活性提取物的組合物及其制備方法研究 1)固體分散體 處方 蒔蘿子提取物 20 g Vc 1 g 聚乙烯吡咯烷酮 79 g 固體分散l〇〇g 制備方法： 稱取蒔蘿子提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的質量比分別放 入燒杯中，加入適量的無水乙醇和Vc，用磁力攪拌器攪拌至蒔蘿子提取物和載體完全溶解， 充分混合均勻后轉入旋蒸儀中除去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得蒔蘿子有效提取 物PVP包合物。
[0023] 2)環糊精包合物 處方： 蒔蘿子提取物 20 g Vc 1 g β -環糊精 79 g 包合物lOOg 制備方法： 將β-環糊精與1-5倍水研勻，加蒔蘿子有效提取物（水難溶性的應先溶于少量有 機溶劑中）繼續充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得環糊精包合物。
[0024] 3)分散片處方： 蒔蘿子提取物 1〇〇 十^烷基硫酸納 1 Vc 1 預膠化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交聯聚維酮 10 微晶纖維素 9 微分硅膠 0. 3 滑石粉 1 100片 制備方法： 1. 蒔蘿子有效提取物分散體的制備，精密稱取蒔蘿子提取物、Vc，加入處方量的十二烷 基硫酸鈉，用適量的濃度為70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C 的溫度下蒸干，粉碎，過100目篩； 2. 將第一步中的蒔蘿子有效提取物淀粉分散體與處方量的交聯聚維酮，預膠化淀粉， 用適量的濃度為70%乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置 15min后，60°C烘箱烘干45min，16目篩整粒，加入處方量的滑石粉和微分硅膠，混合均勻 后，壓片即得。
[0025] 7、蒔蘿子抑制乙酰膽堿酯酶活性提取物的檢測方法研究 我們發現，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標示蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性 提取物的特征。見圖1和圖2 具體條件均為：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，顯色方法：香 草醛-硫酸顯色。
[0026]
【附圖說明】： 圖1蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物的TLC色譜圖； 圖2蒔蘿子乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物的TLC色譜圖； 圖3蒔蘿子溶劑提取物的TLC色譜圖。
[0027]
【具體實施方式】： 以下實施例表示本發明的實用性，本發明不受此限制。
[0028] 實施例1 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積 比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗 脫液經回收有機溶劑，真空干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性為 IC50=79.0 yg/mL〇
[0029] 實施例2 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積 比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗 脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性為 IC50=83.0 yg/mL〇
[0030] 實施例3 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL石油醚超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積 比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗 脫液經回收有機溶劑，旋蒸干燥法，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性 為 IC50=77.0 yg/mL〇
[0031] 實施例4: 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL丙酮超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積 比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗 脫液經回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性為 IC50=76.0 yg/mL〇
[0032] 實施例5 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL氯仿超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積 比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗 脫液經回收有機溶劑，離心干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性為 IC50=74.0 yg/mL〇
[0033] 實施例6 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙酸乙酯超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積 比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗 脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性為 IC50=67.0 yg/mL〇
[0034] 實施例7 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15 min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:3,體積比)洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙 酰膽堿酯酶抑制活性為ICM=83. 0 μ g/mL。
[0035] 實施例8 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15 min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:3,體積比)洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙 酰膽堿酯酶抑制活性為IC M=62. 0 μ g/mL。
[0036] 實施例9 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙醇-水混合溶劑（乙醇：水=90 :10)超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積比)洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫20倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:3,體積比)洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙 酰膽堿酯酶抑制活性為IC M=70. 0 μ g/mL。
[0037] 實施例10 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體 積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫 的洗脫液經回收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性為 IC50=73.0 yg/mL〇
[0038] 實施例11 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體 積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫的 洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性 為 IC50=77.0 yg/mL〇
[0039] 實施例12 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL石油醚超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體 積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫的 洗脫液經回收有機溶劑，旋蒸干燥法，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活 性為 IC5Q=70. 0 yg/mL。
[0040] 實施例13 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL丙酮超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體 積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫的 洗脫液經回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性 為 IC50=73. 0 μ g/mL〇
[0041] 實施例14: 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL氯仿超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體 積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫的 洗脫液經回收有機溶劑，離心干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性 為 IC5Q=68. 0 μ g/mL。
[0042] 實施例15 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙酸乙酯超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體 積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫的 洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其乙酰膽堿酯酶抑制活性 為 IC5Q=58. 0 μ g/mL。
[0043] 實施例16 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15 min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:17,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其 乙酰膽堿酯酶抑制活性為IC 5Q=76. 0 μ g/mL。
[0044] 實施例17 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15 min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石 油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:17,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試，其 乙酰膽堿酯酶抑制活性為IC M=51. 0 μ g/mL。
[0045] 實施例18 : 取維吾爾藥蒔蘿子20 g，經100 mL乙醇-水混合溶劑（乙醇：水=90 :10)超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.5 cm內徑小柱)，先用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑 (石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫35倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙 酮，100:17,體積比)洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經測試， 其乙酰膽堿酯酶抑制活性為IC5Q=66. 0 μ g/mL。
[0046] 實施例19:固體分散體 稱取蒔蘿子提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的質量比分別放 入燒杯中，加入適量的無水乙醇和Vc，用磁力攪拌器攪拌至蒔蘿子提取物和載體完全溶解， 充分混合均勻后轉入旋蒸儀中除去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得蒔蘿子有效提取 物PVP包合物。
[0047] 實施例20 :環糊精包合物 將β-環糊精與1-5倍水研勻，加蒔蘿子有效提取物（水難溶性的應先溶于少量有 機溶劑中）繼續充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得環糊精包合物。
[0048] 實施例21 :分散片 1. 蒔蘿子有效提取物分散體的制備，精密稱取蒔蘿子提取物、Vc，加入處方量的十二烷 基硫酸鈉，用適量的濃度為70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C 的溫度下蒸干，粉碎，過100目篩； 2. 將第一步中的蒔蘿子有效提取物淀粉分散體與處方量的交聯聚維酮，預膠化淀粉， 用適量的濃度為70%乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置 15min后，60°C烘箱烘干45min，16目篩整粒，加入處方量的滑石粉和微分硅膠，混合均勻 后，壓片即得。
【主權項】
1. 一種蒔蘿子提取物，其特征為蒔蘿子經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100 :2的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比為 100 :3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，用100 :3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經 回收溶劑，干燥，即為該提取物； 或先用體積比為100 :12的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比為100 :17的石油 醚-丙酮混合溶劑洗脫，用100 :17的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干 燥，即為該提取物。2. 如權利要求1所述蒔蘿子提取物，其特征為，提取所用溶劑可以為甲醇、石油醚、水、 丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，最優為甲醇或95%乙醇。3. 如權利要求1所述蒔蘿子提取物，其特征為蒔蘿子經溶劑超聲提取，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:2,體積 比)洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比)洗脫，用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取 物；或先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比)洗脫，繼用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:17,體積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:17,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。4. 如權利要求1-3所述維的維吾爾藥蒔蘿子提取物，其特征為，洗脫液的用量為2-50 倍柱體積。5. 如權利要求1-3所述提取物的制備方法，其特征為：最優為先用100 :2的石油醚-丙 酮混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用100 :3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫20倍柱體積；或最 優為先用100 ; 12的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫25倍柱體積，繼用100 :17的石油醚-丙酮 混合溶劑洗脫35倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的維吾爾藥蒔蘿子 提取物和藥學上可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的蒔蘿子提取物或權 利要求6所述的藥物組合物。8. 如權利要求7所述的藥物制劑，其特征在于，所述的制劑為固體分散體、環糊精包合 物、分散片。9. 權利要求1-5任何一項所述提取物或權利要求6所述的組合物或權利要求7所述的 藥物制劑在制備乙酰膽堿酯酶抑制活性藥物中的應用。10. 如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的乙酰膽堿酯酶抑制活性，可用于治 療阿爾茨海默病（AD)等方面的醫藥用途。11. 如權利要求1-5任何一項所述的維吾爾藥蒔蘿子提取物，其特征在于，用TLC法檢 測，其色譜條件均為：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，顯色方法： 香草醛濃硫酸顯色。
【文檔編號】A61P25/28GK106031735SQ201510109413
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年3月12日
【發明人】王金輝, 田麗萍, 李國玉, 王航宇, 黃健, 羅麗, 孫富周
【申請人】石河子大學