使用富血小板血漿進行組織的修復和復壯的制作方法
【專利摘要】本申請涉及用于改善皮膚狀況的美容方法。所述方法通常包括在進行微針操作之后向受試者施用富血小板血漿和培養的自體細胞。所述富血小板血漿和自體細胞能夠被局部施加于皮膚表面或被注射進入真皮或皮下組織。所述方法可以被用于改善狀況，如痤瘡疤痕、創傷性疤痕、色素沉著過多、細紋、皺紋、拉伸紋和毛發脫落。
【專利說明】使用富血小板血漿進行組織的修復和復壯 發明領域
[0001 ] 本申請設及用于給受試者施用富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)組合 物的方法。具體地，所述方法可W設及在進行微針操作之后向皮膚表面局部施用所述PRP組 合物，或者注射所述PRP組合物進入皮下或皮膚組織。所述PRP組合物通常會包括培養的自 體細胞，例如培養的自體成纖維細胞。可W使用該組合物治療狀況(condition),如瘦瘡瘤 痕、創傷性瘤痕、色素沉著過多、細紋、皺紋、拉伸紋(stretch mark)和毛發脫落。
[0002] 發明背景
[0003] 注射合成材料進入身體、并且特別是進入臉W實現美容的結果開始于十九世紀 末。例如，在第一次世界大戰之前的幾年中注射石蠟W糾正面部輪廓缺陷在短暫的一段時 間內得到認可。但是，并發癥W及長期結果不理想導致該做法被摸棄。可注射硅膠在20世紀 60年代早期變得可用，但是并發癥(如對硅膠的局部和全身性反應、注射物的遷移和局部組 織損害)限制了它的使用。
[0004] 由非生物材料的注射所獲得的不良結果促使了嘗試使用外源蛋白質(例如牛去端 膚膠原(atelocollagen))作為可注射填充劑材料W糾正皮膚缺陷和/或美容上改善皮膚的 外觀。但是，使用去端膚膠原被證明不是很令人滿意的，因為發生該材料的吸收時沒有被宿 主材料置換，并且患者對去端膚膠原的重復注射常產生免疫反應和耐藥性。由于牛去端膚 膠原的局限性，已經開發了源自胎盤或自體組織的人膠原產品和其它自體細胞組合物，但 是它們作為注射物使用也已經提供了不令人滿意的結果。
[0005] 在過去的15至20年中，應用于損傷的或衰老的皮膚W改善其外觀的操作是微針 刺(micro-needling)。微針裝置在皮膚中產生微小的傷口，其通過身體的自然愈合過程刺 激膠原的產生。但是，由微針刺所產生的膠原的量通常不如其它皮膚表面重建技術所看到 的多。臨床醫生也已經試圖在微針刺之后將各種類型的細胞施加于皮膚上。然而，因為細胞 不能被成功吸收，其結果欠佳。
[0006] 因此，人們希望有用于治療或美容上改善皮膚狀況的替代方法。
[0007] 發明概述
[0008] 本文描述了用于美容上改善皮膚狀況的方法，其包括在進行微針刺操作之后向所 述皮膚施用富血小板血漿組合物、自體細胞組合物或其組合。微針刺在所述皮膚表面產生 孔，其改善所述富血小板血漿或自體細胞組合物在所述皮膚表面下的吸收，從而提供增強 的組織再生。鑒于富血小板血漿是從受試者自己的血液制成的，沒有所述受試者對該組合 物產生免疫反應的風險。富血小板血漿的另一個好處是其具有隨著時間的推移形成組織而 不是如上述許多組合物所經歷的退化的能力。本文所述的方法和組合物也可W有助于改善 除皮膚狀況之外的狀況。
[0009] 在一般情況下，所述用于美容上改善皮膚狀況的方法包括：1)從受皮膚狀況影響 的受試者獲得血液樣品；2)從所述血液樣品制備富血小板血漿組合物;3)制備自體細胞組 合物;4)在受所述皮膚狀況影響的皮膚區域上進行微針刺操作，接著向受影響的區域局部 施用所述富含血小板組合物和所述自體細胞組合物。所述方法可用于治療皮膚狀況，如瘦 瘡瘤痕、創傷性瘤痕、色素沉著過多、細紋、皺紋、拉伸紋和毛發脫落。
[0010] 如下面進一步描述的，所述富血小板血漿組合物能夠作為自體細胞組合物的載 體。在運種情況下，可W產生各種類型自體細胞的懸浮液在局部施用于所述皮膚上之前并 與所述富血小板血漿進行組合。為所述自體細胞提供支架的細胞外基質材料還可W被添加 至所述富血小板血漿和自體細胞組合物中，或被分開施加于所述皮膚，或被分開注射進入 所述真皮或皮下組織。各種細胞生長因子也可W被添加至所述PRP或自體細胞組合物中，或 被W組合物的形式分開地施加于所述皮膚表面，或被分開地注射進入所述真皮或皮下組 織。
[0011] 當其不用作載體時，所述富血小板血漿組合物和自體細胞組合物能夠被W任何期 望的順序進行層加。例如，所述富血小板血漿可W首先施加，接著是所述自體細胞組合物， 或反之亦然。也可W根據需要重復組合物的層加。可W在任何層上施加組織封閉劑W幫助 將局部施加的PRP和/或自體細胞組合物保持在所述皮膚內。在其它情況下，所述富血小板 血漿、自體細胞組合物和/或細胞外基質材料被組合并注射進入所述皮膚或所述皮膚下，例 如進入所述表皮、真皮或皮下組織，W改善皮膚狀況。能夠單獨或與自體細胞和/或PRP-起 局部施加于所述皮膚表面的其它示例性組合物可W包含細胞生長因子、細胞外基質材料 (如人羊膜細胞外基質或豬膀脫細胞外基質）、條件培養基或其組合。同樣地，所述組合物能 夠被W任何期望的順序進行層積。運些相同的組合物也可W被注射進入所述真皮或皮下組 織。
[001引發明詳述
[0013]本文描述的是用于向受試者施用富血小板血漿(PRP)組合物W復壯(rejuvenation) 組織(例如皮膚組織）的各種方法。所述方法通常會包括在所述皮膚表面形成微穿孔W增強 其中PRP組合物的吸收。可W將自體細胞添加至所述PRP組合物中然后施用于所述受試者， 或者可W將所述細胞作為分開的組合物進行施用，例如在施用PRP組合物之前或之后W層 的形式進行施加。所述組合物的層加（layering)可W改善在微針刺之后它們進入所述皮膚 的吸收。除了 PRP施用之外，也可W用多個細胞組合物的層加施用或包含多個細胞類型的組 合物的施用改善皮膚外觀。例如，可W使用本文所述的方法和組合物改善皮膚松弛、膚色不 佳和面色暗淡。
[0014] 微針刺
[0015] 微穿孔通常由微針刺裝置形成。可W使用任何合適的微針刺裝置。例如，可W使用 其中針被設置在可旋轉的鼓上并在皮膚上手動滾過的裝置(皮膚滾動器，dermarollers)、射 頻微針刺裝置或自動微針刺裝置。示例性的自動微針刺裝置包括但不限于Dermapen淆 微針刺裝置（Dermapen ,Salt Lake City,UT)和Micropen? 微針刺裝置化cl ipse Aesthetics，LLC，Dallas，ΤΧ)。在該方法的一些變化中，采用自動化微針刺裝置可能是有益 的。自動化微針刺裝置能夠提供一致的針穿透深度并且便于在鼻、眼或口周圍的狹窄皮膚 區域上使用。在用自動化裝置進行微針刺之前，通常將潤滑劑施加于所述皮膚表面。示例性 的潤滑劑包括但不限于包含W下的一種或多種的組合物：1)透明質酸;2)脂肪細胞;3)脂肪 來源的間充質細胞;4)成纖維細胞;5)PRP;W及6)條件培養基。在一個變化中，所述潤滑劑 可W包含PRP。在其它變化中，所述潤滑劑可W包括脂肪細胞、脂肪來源的間充質細胞或其 組合。在又一些變化中，所述潤滑劑可W包括條件培養基W及還有W下的一種或多種：1)透 明質酸；2)成纖維細胞；W及3)干細胞。潤滑劑的施用可W幫助在所述皮膚中均勻分布針 孔。
[0016] 自動微針刺裝置通常會包括無菌的一次性部分和可重復使用的手柄。多個針典型 地被固定于一次性針部上，其被可拆卸地固定至可重復使用的手柄。針的尺寸可W變化，但 是典型地為32-口徑(gauge)。所述裝置也可W被配置成包括六至24根針之間。在一個變化 中，所述微針刺裝置包含十二根32-口徑的針。在其它變化中，所述微針刺裝置包括針深度 調整機構，其允許針深度在例如大約0.5mm至2.75mm之間進行調整。可W調整針深度W適合 受影響區域中皮膚的厚度。例如，當對較薄的皮膚(例如更白的皮膚或眼部周圍的皮膚)進 行微針刺操作時，針深度可W被設置為0.5mm。當對前額較厚的皮膚進行微針刺操作時，針 深度可W被設置為在2.5mm至2.75mm之間。可W與本文所述的方法和組合物一起采用用于 皮膚表面重建和/或加熱皮膚的其它治療或技術(例如激光、射頻微針刺或超聲）。
[0017] 富血小板血漿組合物
[0018] 如前所述，本文所述的方法包括在進行微針刺操作之后向受試者施用PRP組合物。 PRP是濃縮血漿中的血小板的自體制劑。PRP含有高濃度的各種生長因子，包括血小板衍生 生長因子（platelet-derived growth facto;r，PDGF)、轉化生長因子（transforming growth factor,TGF)、血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF)和膜島素樣生長因子（insulin-like growth factor, IGF-1)，運些生長因子從活化 時的血小板的α顆粒分泌。已知運些因子調控許多生物學過程(包括傷口愈合)并促進細胞 遷移、附著、增殖和分化，W及促進細胞外基質形成。
[0019] 能夠通過本領域已知的任何合適的技術制備所述PRP組合物。簡言之，首先從受試 者抽取全血。將血液離屯、W將血漿與堆積的紅細胞分離，然后進一步離屯、W將PRP與貧血小 板血漿(platelet-poor plasma)分離。然后可W收集所述PRP并如本文所述將其施用于所 述受試者。
[0020] 用于制備PRP的示例性的裝置包括GPS厳II血小板濃縮物分離試劑盒和 Plasmax? Plus血漿濃縮器配件（Biomet Biologies, Inc. ,Warsaw, Ind.)，W及Vo;rtech? 濃縮系統（Biomet Biologies, Inc. ,Warsaw, Ind. )eSelp.hyl衝系統（Aesthetic i^ictors LLC, Bethlehem, PA)和Eel ipse PRP?系統化cl ipse Aesthetics, Dal las ,TX)可有效用于 PRP的診所制備。PRP內的血小板濃度可W變化。例如，在一些變化中，PRP中的血小板濃度范 圍可W為全血中血小板濃度的大約3倍至10倍。 巧〇引]自體細胞組合物
[0022] 可W制備自體細胞組合物并添加至載體PRP組合物內，或在施用PRP之前或之后被 分開地施加。所述自體細胞組合物可W包含任何合適的細胞類型，包括但不限于脂肪細胞、 脂肪來源的間充質細胞、軟骨細胞、成纖維細胞、角質細胞、干細胞及其組合。在所述組合物 中包括干細胞(如脂肪干細胞、源自骨髓抽吸物的細胞或間充質干細胞(例如脂肪來源的間 充質細胞））可能是有益的。在實踐中，可W使用能夠在培養中被擴增的任何未分化的間充 質細胞。例如，可W通過在培養中擴增自體皮膚成纖維細胞制備所述細胞的組合物，然后將 它們加至PRP組合物用于組合施用，或在培養中擴增并在所述PRP組合物之前或之后進行施 加。
[0023] 為了制備自體皮膚成纖維細胞組合物，從2X5mm全厚度皮膚活檢標本開始皮膚成 纖維細胞的培養。在開始培養之前，用抗生素和抗真菌劑重復洗涂所述活檢標本。此后，去 除表皮和含脂肪細胞的皮下組織，使得所得到的培養物基本上不含非成纖維細胞，并且用 解剖刀或剪刀細細分割真皮標本。將所述標本的小塊用錯子單獨置于組織培養瓶的干燥表 面上并使其附著5至10分鐘，之后緩慢加入少量培養基，小屯、不要移動所附著的組織片。培 養24小時后，向培養瓶加入另外的培養基。當T-25培養瓶被用于開始所述培養時，培養基的 初始量為1.5-2.0ml。從所述活檢標本建立細胞系通常需要二至Ξ周之間的時間，此時可W 從初始培養容器取出細胞用于擴增。
[0024] 在培養初期過程中，期望組織片保持附著于培養容器底部。任何脫落的碎片應當 重新移植到新的容器中。根據本領域技術人員眾所周知的技術，可W通過將所述組織培養 物短暫暴露于抓TA-膜酶刺激成纖維細胞生長。運種暴露于膜酶因太短暫而不會使成纖維 細胞從它們所附著的培養容器壁脫落。在培養物建立并且接近匯合之后可W立即取出成纖 維細胞樣品用于冷凍儲存。冷凍儲存較早代數而不是較晚代數成纖維細胞是優選的，因為 正常人成纖維細胞的細胞培養物的傳代次數是有限的。
[0025] 成纖維細胞可W被冷凍于適于保存成纖維細胞的任何冷凍培養基中。可W使用由 70%生長培養基、20% (v/v)胎牛血清和10% (v/v)二甲亞諷(DMS0)組成的培養基，具有良 好效果。解凍細胞可W被用于開始繼代培養W獲得用于同一受試者的懸浮液而沒有獲得第 二標本的不便。
[0026] 適于來自活檢標本的皮膚成纖維細胞的增殖的任何組織培養技術可用于擴增所 述細胞。可W在R.I.化eshn巧，Ed.，ANIMAL CE1X CULTURE:A PRACTICAL APPR0ACH(IRL Press，0xford England,1986)和R.I.化eshney,Ed.'CULTURE OF ANIMAL CE化S:A MANUAL OF BASIC TECHNIQ肥S，Alan R丄iss&Co.，New化rk，1987)中發現本領域技術人員眾所周 知的技術。
[0027] 培養基可W是適用于原代成纖維細胞培養物的生長的任何培養基。在大多數情況 下，所述培養基補充有〇.5%-20%(v/v)的量的血清W促進成纖維細胞的生長。更高濃度的 血清促進成纖維細胞更快的生長。在一個變化中，血清是胎牛血清，其被添加至終濃度為培 養基的10%。例如，所述培養基可W包括補充有2mM谷氨酷胺、llOmg/L丙酬酸鋼、10% (v/v) 的胎牛血清和抗生素的高葡萄糖DMEM("完全培養基"）。
[0028] 可W通過膜酶消化將細胞傳代至新的培養瓶。單個培養瓶可Wl:3進行分傳用于 擴增。具有450cm2總培養面積的Ξ底T-150培養瓶是適合使用的。Ξ底T-150能夠接種大約6 X 1〇6個細胞并具有產生大約1.8 X 107個細胞的容量。當達到培養瓶的容量時(其典型地需 要5-7天的培養），生長培養基被替換成無血清完全培養基;此后細胞在無蛋白質的培養基 中培養，即保持在大約30°C-大約40°C之間至少6小時、優選大于12小時，最優選16-18小時 (優選37Γ)。細胞在無血清培養基中的培養基本上從細胞去除了來源于胎牛血清的蛋白 質，所述蛋白質如果存在的話會對受試者具有免疫原性并引起過敏反應。
[0029] 擴增之后，通過膜酶/邸TA將細胞從組織培養瓶中取出；通過離屯、和重懸進行充分 洗涂;并懸浮于載體材料例如PRP或等滲鹽水中。所述細胞不會在纖維蛋白凝塊中懸浮或在 纖維蛋白凝塊中培養。生長達到容量的六個Ξ底T-150培養瓶產生大約108個細胞，其足W 組成大約1.0ml的懸浮液。
[0030] 在一些變化中，細胞能夠在4°C進行運輸，只要它們在制成懸浮液的18小時內被使 用即可。細胞可w被懸浮于等體積的完全培養基中，但其中不存在酪紅抑指示劑，并且將 胎牛血清替換為受試者的血清，用于運種運輸(運輸培養基）。細胞可W被吸出并注射于所 述運輸培養基中。其中懸浮細胞的鹽水或運輸培養基的體積并不嚴格并且可W取決于W下 因素，如醫師期望使用的成纖維細胞的數量、要治療的缺陷的尺寸和數量、W及受試者期望 獲得治療結果的迫切性。
[0031] 備選地，不使用上述基于培養瓶的細胞擴增系統，而可W使用自動的封閉細胞擴 增系統（如Quantum衝細胞擴增系統（Terumo BCT，Inc .，Lakewood，C0))制備自體皮膚 成纖維細胞組合物W及其它自體細胞組合物(例如脂肪來源的間充質細胞組合物）。示例性 的自動的封閉細胞擴增系統可W采用中空纖維細胞生長生物反應器。運些Ξ維生物反應器 可W包含超過10,000個大約200微米長的單個中空纖維，其內表面可W產生超過二平方米 的總生長表面積(典型的大組織培養瓶可W具有在大約150至大約175平方厘米之間的生長 面積）。可W理解的是，可W通過改變所采用的中空纖維生物反應器的數量和/或長度來調 節總生長表面積。自動的封閉細胞擴增系統的大表面積通常被設計為在最小的體積里使得 貼壁細胞(例如骨髓細胞、脂肪細胞、間充質干細胞、羊水細胞、上皮細胞等）的擴增最大化。 此外，中空纖維生物反應器的確定和穩定的幾何形狀可W優化細胞培養環境的控制和管 理。該生物反應器的封閉環境通常在整個培養過程中保持完整，免去了與傳統的、基于培養 瓶的組織培養有關的開放性操作和實地工作。因此，運樣的自動的封閉細胞擴增系統通常 降低了操作者誤差和污染的風險。
[0032] 在其它變化中，可W采取混合方法(approach)。例如，可W在常規T-培養瓶中在含 有少量胎牛血清（例如2%至3%的胎牛血清）的培養基（如FGM?-2成纖維細胞生長培養基 化onza Group Ltd. ,Basel,Switzerland))中傳代一次或兩次建立原代成纖維細胞培養 物，然后使用自動的封閉系統(如Quantum?細胞擴增系統)使用無血清培養基(例如無 血清、化學上確定的培養基（如FGM-CD?(X〇nza Group Ltd. ,Basel,Switzerland)))進行擴 增。
[003引細胞外基質材料
[0034] 在本文所述方法的一些變化中，所述PRP組合物和自體細胞組合物可W被補充有 生物相容性細胞外基質化CM)材料。所述ECM材料可W作為支架在施用部位保持或支持自體 細胞。例如，所述ECM材料可W保持或支持如上所述培養并擴增的成纖維細胞。此外，所述 ECM材料可W促進內源性細胞遷移進入施用區域。所述ECM材料可W被注射或局部施加于被 皮膚狀況影響的區域，接著施用PRP和自體細胞。備選地，所述PRP組合物或自體細胞組合物 可W與所述ECM材料組合，然后進行施用，例如通過局部施用或通過注射。
[0035] ECM材料可W包含天然的、合成的或半合成的材料，只要其是生物相容性的即可。 示例性的ECM材料包括人羊膜細胞外基質和豬膀脫基質。其它ECM材料可W包括聚合物。合 適的聚合物可W包括但不限于明膠、透明質酸、脫乙酷殼多糖、聚乙醇酸、聚乳酸、聚丙締富 馬酸醋、聚乙二醇、W及共聚物及其組合。
[0036] 歷
[0037] 本文所述的方法可W被用于美容上改善皮膚狀況，并通常在施用PRP和自體細胞 組合物之前進行微針刺的步驟。但是，有或無自體細胞組合物的PRP也可W被用作微針刺裝 置的潤滑劑。如前所述，受影響區域的微針刺改善所述組合物進入所述區域的吸收，并增強 組織再生。在一般情況下，用于美容上改善皮膚狀況的方法包括W下步驟:1)從受皮膚狀況 影響的受試者獲得血液樣品；2)從所述血液樣品制備富血小板血漿組合物;3)制備自體細 胞組合物；W及4)在受所述皮膚狀況影響的皮膚區域上進行微針刺操作，接著向受影響的 區域局部施用所述富含血小板組合物和所述自體細胞組合物。在一些變化中，所述自體細 胞組合物包含成纖維細胞。在其它變化中，所述自體細胞組合物包含脂肪細胞。在又一些變 化中，所述自體細胞組合物包含干細胞，例如脂肪來源的間充質細胞。在一些情況下，在所 述自體細胞組合物中包括成纖維細胞和脂肪來源的間充質細胞可能是有用的。
[0038] 微針刺和施用PRP和自體細胞組合物可W每4至6周重復4至6次，但是，其它微針刺 和施用方案可W根據被治療的皮膚狀況和所述狀況的嚴重程度來實施。重復的微針刺和 PRP和自體細胞施用通常可W刺激先前所施用的細胞。在一些情況下，在先前已經施加 PRP 和細胞的組織處經超聲、射頻或激光裝置施加熱可能是有益的。例如，可W在稍后的日期施 加熱至先前被施用的細胞(在不同口診中）。可W通過運樣的方法改善的皮膚狀況包括但不 限于瘦瘡瘤痕、創傷性瘤痕、色素過度沉著、細紋、皺紋、拉伸紋和毛發脫落。
[0039] 當PRP組合物被用作載體時，培養的自體細胞可W被懸浮于PRP中，然后被局部施 加于期望區域，例如被皮膚狀況影響的區域。在一些變化中，局部施加培養的成纖維細胞已 經被懸浮于其中的PRP組合物可能是有益的。在另一個變化中，局部施加培養的脂肪細胞已 經被懸浮于其中的PRP組合物可能是有益的。備選地，局部施加培養的脂肪來源的間充質細 胞已經被懸浮于其中的PRP組合物可能是有益的。為自體細胞提供支架的細胞外基質材料 還可W被加至所述PRP組合物或自體細胞組合物，或被分開地施加于受影響的區域。
[0040] 當其沒有被用作載體時，所述PRP組合物和自體細胞組合物能夠被W任何期望的 順序進行層加。例如，所述富血小板血漿可W被首先施加，接著是所述自體細胞組合物，或 反之亦然。也可W根據需要重復組合物的層加。在一些變化中，在微針刺之前向皮膚施加一 層脂肪細胞或脂肪來源的間充質細胞。在其它變化中，所述脂肪細胞或脂肪來源的間充質 細胞與成纖維細胞組合，然后在微針刺之前層加于所述皮膚上。如上所述，可W通過施用 PRP和一種或多種細胞組合物獲得增強的組織再生和改善的皮膚外觀。
[0041] 可W在任何層上施用組織封閉劑W幫助將局部施加的PRP和/或自體細胞組合物保持在 所述皮膚內，并因此改善它們的吸收。例如，可W在一層或多層上局部施加 TISSEEL?, 纖維蛋白封閉劑（Baxter International Inc. ,Deerfield,IL)。在其它情況下，將所述 PRP、自體細胞組合物，和/或細胞外基質材料組合并注射進所述皮膚內或所述皮膚下，例如 進入所述表皮、真皮或皮下組織，W改善皮膚狀況。
[0042] 所述PRP組合物、自體細胞組合物、組織封閉劑、細胞生長因子和細胞外基質材料 可W被施用至期望美容改善的身體的任何區域。例如，所述組合物和材料可W被施用至面 部、頸部、手等的區域。施用通常會包括通過將所述組合物涂布到所述皮膚上的局部施用， 但也可W包括噴霧施用。
[0043] 在一些情況下，本文所述的組合物被用作填充劑，并被注射進入真皮或皮下組織。 在此組合物的體積可W幫助改善美容外觀或治療皮膚狀況。在微針刺和/或PRP的層加和/ 或自體細胞組合物的層加之外還可W進行一種或多種組合物的注射。示例性的用于注射的 組合物可W包括PRP、自體細胞組合物、條件培養基、包含例如人羊膜或豬膀脫的ECM材料、 細胞生長因子或其組合。所述自體細胞組合物可w包含本文所述的任何一種或多種細胞類 型，例如成纖維細胞、脂肪細胞和間充質細胞。在一些變化中，PRP和成纖維細胞、PRP和脂肪 細胞或PRP和脂肪來源的間充質細胞的注射可能是有用的。該方法的其它變化可W包括條 件培養基和成纖維細胞、條件培養基和脂肪細胞或條件培養基和脂肪來源的間充質細胞的 注射。
[0044]當治療皺紋或深瘦瘡瘤痕時，注射可能是有益的。在其中皮膚狀況是淺表面部細 紋的一個具體變化中，受影響的區域用醇進行準備并被拉伸得到拉緊的表面。然后用懸浮 于PRP組合物中的成纖維細胞填充注射器并配有用于注射的30-口徑的針。將針盡可能淺地 插入皮膚部位;斜角的取向并不嚴格。通過輕壓進行皮內注射直到見到輕微的變白。然后進 行多個系列注射。類似的操作可W用于毛發的復壯。
[004引在又一些變化中，用于改善美容外觀或改善皮膚狀況的方法設及多方式方法。在 此該方法可W考慮受試者對于組織體積的需要，對深和淺表組織的提升和調色、恢復真皮 和/或恢復表皮的需要。當需要組織體積時，該方法可W包括使用如本文所述的可注射填充 劑、細胞療法(例如用本文所述的一種或多種自體細胞組合物的層積)和/或施用細胞生長 因子。當需要改善皮膚松弛、膚色和/或面色暗淡時，該方法可W包括W下的任何一種或多 種:用如本文所述的自動裝置進行微針刺、細胞療法(例如用本文所述的一種或多種自體細 胞組合物進行層積）、施用細胞生長因子、射頻微針刺、深超聲加熱和分部分激光 (fractionated laser)。類似地，細紋和法令紋的外觀可W通過如本文所述的可注射填充 劑、用如本文所述的自動裝置進行微針刺、細胞療法(例如用本文所述的一種或多種自體細 胞組合物進行層積）、施用細胞生長因子、射頻微針刺和/或深超聲加熱得到改善。用于改善 拉伸紋的方法可W包括細胞療法（例如用本文所述的一種或多種自體細胞組合物進行層 積）、用如本文所述的自動裝置進行微針刺、施用細胞生長因子和/或射頻微針刺。在一些變 化中，色素沉著過多能夠使用如本文所述的自動微針刺裝置和施用細胞生長因子得到改 善。當需要改善瘦瘡瘤痕時，該方法可W包括W下的任何一種或多種：用它們的間充質干細 胞進行脂肪移植、皮下切除、細胞療法(例如用本文所述的一種或多種自體細胞組合物進行 層積）、用如本文所述的自動裝置進行微針刺、施用細胞生長因子、射頻微針刺和激光表面 重建。當要改善毛發脫落時，該方法可W包括用如本文所述的自動裝置進行微針刺、細胞療 法(例如用本文所述的一種或多種自體細胞組合物進行層積)和施用細胞生長因子。
【主權項】
1. 用于美容上改善皮膚狀況的方法，其包括： 從受皮膚狀況影響的受試者獲得血液樣品； 從所述血液樣品制備富血小板血漿組合物； 制備自體細胞組合物； 在受所述皮膚狀況影響的皮膚區域上進行微針操作，接著向受影響的區域局部施用所 述富含血小板組合物和所述自體細胞組合物。2. 權利要求1所述的方法，其中所述微針操作通過自動微針裝置進行，所述自動微針裝 置包含被固定于一次性針部上的多個針，以及被可拆卸地固定至所述一次性針部的可重復 使用的手柄。3. 權利要求2所述的方法，其中所述自動微針裝置還包含針深度調整機構。4. 權利要求3所述的方法，其中進行所述微針操作包括使用所述深度調整機構調整所 述多個針的深度。 5 ·權利要求4所述的方法，其中所述多個針的深度被調整為在0 · 5mm和2 · 75mm之間。6. 權利要求1所述的方法，其中所述富血小板血漿組合物和自體細胞組合物被混合在 一起并局部施加于受影響的區域。7. 權利要求1所述的方法，其中所述富血小板血漿組合物被施加于受影響的區域，接著 施用所述自體細胞組合物。8. 權利要求7所述的方法，其還包括重復局部施用所述富血小板血漿組合物。9. 權利要求1所述的方法，其中所述自體細胞組合物被施加于受影響的區域，接著局部 施用所述富血小板血漿組合物。10. 權利要求1所述的方法，其還包括在所述富血小板血漿組合物或所述自體細胞組合 物上局部施加組織封閉劑。11. 權利要求1所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含脂肪細胞、脂肪來源的間充 質細胞、軟骨細胞、成纖維細胞、角質細胞、干細胞或其組合。12. 權利要求1所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含成纖維細胞。13. 權利要求1所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含脂肪細胞。14. 權利要求1所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含脂肪來源的間充質細胞。15. 權利要求1所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含成纖維細胞，以及脂肪細胞 或脂肪來源的間充質細胞。16. 權利要求1所述的方法，其還包括向受影響的區域施加生物相容性細胞外基質材 料。17. 權利要求16所述的方法，其中所述生物相容性細胞外基質材料包含人羊膜組織基 質。18. 權利要求16所述的方法，其中所述生物相容性細胞外基質材料包含豬膀胱基質。19. 權利要求1所述的方法，其還包括在所述微針操作之前向所述皮膚區域施加潤滑 劑。20. 權利要求19所述的方法，其中所述潤滑劑包含富血小板血漿、脂肪細胞、脂肪來源 的間充質細胞或其組合。21. 權利要求1所述的方法，其中所述皮膚狀況選自包含痤瘡疤痕、創傷性疤痕、色素沉 著過多、細紋、皺紋、拉伸紋和毛發生長的組。22. 權利要求1所述的方法，其還包括注射自體細胞組合物進入所述受影響的區域。23. 權利要求22所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含脂肪細胞、脂肪來源的間充 質細胞、軟骨細胞、成纖維細胞、角質細胞、干細胞或其組合。24. 權利要求22所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含成纖維細胞。25. 權利要求22所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含脂肪細胞。26. 權利要求22所述的方法，其中所述自體細胞組合物包含脂肪來源的間充質細胞。
【文檔編號】A61K35/36GK106029102SQ201580000198
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2015年1月15日
【發明人】小威廉·K·博斯
【申請人】小威廉·K·博斯