含2型和12f血清型的15價肺炎球菌結合物組合疫苗的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種15價肺炎球菌結合物組合疫苗，組合中特別含有2型和12F血清型，具有較廣的免疫覆蓋率，用于預防肺炎鏈球菌引起的感染性疾病。本發明所述組合疫苗中還包括1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型血清型。
【專利說明】
含2型和12F血清型的15價肺炎球菌結合物組合疫苗
技術領域：
[0001] 本發明設及一種15價肺炎球菌結合物組合疫苗，組合中特別含有2型和12F血清 型，具有較廣的免疫覆蓋率，用于預防肺炎鏈球菌引起的感染性疾病。
【背景技術】：
[0002] 肺炎鏈球菌是導致發展中國家和發達國家各年齡組人群社區獲得性肺炎 (community acquire pneumonia,CAP)最重要的病原菌，同時也是引起中耳炎、肺炎、腦膜 炎和菌血癥的主要病原菌。在世界范圍內，每年由于肺炎鏈球菌感染引起的死亡占總死亡 人數的9%，每年由肺炎鏈球菌引起的腦膜炎3萬多例，菌血癥63萬多例，中耳炎1400萬例， 肺炎2000萬例。
[0003] 預防肺炎球菌感染的免疫制劑分為多糖疫苗和結合疫苗兩種，目前上市使用的多 糖疫苗為"23價肺炎球菌多糖疫苗"，上市使用的結合疫苗為"10價肺炎球菌結合疫苗"和 "13價肺炎球菌結合疫苗"。肺炎球菌多糖疫苗可使用于2歲W上人群，主要用于65歲W上老 年人對疾病的免疫預防。肺炎球菌結合疫苗具有優于多糖疫苗的眾多優勢，基本適用于全 年齡人群，是目前肺炎球菌疫苗的一個研究方向。"10價肺炎球菌結合疫苗"含有肺炎血清 型1、4、5、68、7。、9￥、14、18(：、19。和23。/'13價肺炎球菌結合疫苗"含有肺炎血清型1、3、4、5、 6八、68、7。、9￥、14、18〔、194、19。和23。。已知的肺炎血清型已達到90種^上，一些侵襲力強、 多引起侵襲性疾病的型別也未包含在已上市的產品中，隨著"10價肺炎球菌結合疫苗"和 "13價肺炎球菌結合疫苗"在全球的使用，一些未包含在已有疫苗血清型中的高致病力的肺 炎球菌血清型增長明顯，需要考慮增加到原有的肺炎球菌結合物組合中。
[0004] 肺炎球菌2型和12F具有很強的致病性，健康攜帶少見，多從肺炎球菌侵襲性疾病 中分離出，是肺炎球菌引起細菌性腦膜炎的最主要血清型。我國在上世紀八十年代曾組織 18個省市自治區開展了肺炎鏈球菌血清型監測工作，共臨床分離出712株肺炎鏈球菌，其中 2型45株，12型17株，占6.3%和2.4%，位于分離株排名的第5位和第11位，值得注意的是在 712分離株中，有251株是侵襲性菌株，其中180株分離自腦脊液，在180株腦脊液分離株中，2 型35株，12型8株，分別占19.4%和4.4%，位于排名的第1位和第8位(下紹卿等.肺炎球菌血 清學分型的研究《生物制品學雜志》1988，1 (1): 18-22.)。現今，2型和12F血清型在國內也很 常見，如河南漂河2012年在患兒中分離到134株肺炎球菌，12F有14株，占10.4% (竇會娟等. 兒科患者感染肺炎鏈球菌的耐藥性及血清分型研究《中國消毒學雜志》2015,32(1) :76- 77)，四川自貢于2010年的一個肺炎球菌血清型研究中，也分離到2型和12F各2株(章成等. 四川省自貢市兒童與成人分離肺炎鏈球菌株的血清型分布及抗生素敏感性比較《實用醫院 臨床雜志》2012，9( 1): 82-85.)。國際上，2型和12F也是危害最嚴重的肺炎球菌血清型。在孟 加拉國，2型位居肺炎球菌引起兒童腦膜炎的第一位，而且基本都分離自腦膜炎(98%)，是 新近發現的兒童肺炎球菌腦膜炎的最大威脅（Saha SK,et al.Sheptococ州S pneumoniae serotype-2childhood meningitis in Bangladesh:a newly recognized pneumococcal infection threat.PLoS One.2012;7(3):e32134)。在危地馬拉，2型是兒童侵襲性肺炎球 菌病中致死率最高的，可引起大多數的腦膜炎，發生年齡小(平均3.5月齡），但現有肺炎結 合疫苗并未包含（G曰ensb曰uer JT,et 曰 1.Pediatric Invasive Pneumococcal Disease in Guatemala City: Importance of Serotype 2.Pediatr Infect Dis J.2016May；35(5): el39-43.)。在黎己嫩，2型位于分離肺炎球菌的首位，常具有大環內脂類抗生素抗性，又不 再現有肺炎球菌結合疫苗涵蓋范圍內，造成社區傳播的風險（Taha N，et al.Genotypes and serotype distribution of m曰crolide resistant invasive and non-inv曰sive Streptococcus pneumoniae isolates from Lebanon. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2〇l2Jan IG ; 11: 2.)。IW是肺炎球菌中最具侵襲力的一種（Sleeman KL, et 曰l.C曰psul曰r serotype-specific attack rates 曰nd duration of carriage of Streptococcus pneumoniae in a population of children.J Infect Dis.2006Sep 1; 194(5) :682-8),在美國、澳大利亞、加拿大都有過爆發（Rakov AV，et al.Population structure of hyperinvasive serotype 12F,clonal complex 218Streptococcus pneumoniae revealed by multi locus boxB sequence typing. Infect Genet Evol. 201 IDec; 11 (8): 1929-39.)，隨著肺炎結合疫苗在全球的使用，12F的病例大幅增長， 已成為侵襲性肺炎球菌病（IPD)最主要血清型。表1列舉了肺炎球菌結合疫苗使用后，12F在 一些國家的分離位置。
[0005] 表1.肺炎球菌結合疫苗使用后12F在IPD非疫苗血清型的情況
[0006]
[0007]
[000引2型和12F侵襲力強，常引起細菌性腦膜炎等侵襲性疾病，是危害最嚴重的肺炎球 菌血清型之一，在全球各大洲都常見，表2列舉了 2型和12F在全球各洲的分離排名 (Pneumococcal Regional Serotype Distribution for Pneumococcal AMC TPP. Codebook to assess whether a pneumococcal vaccine meets the Pneumococcal AMC Target Product Profile for regional vaccine serotype cover曰ge)，本發明包含 的1、2、3、4、5、6A、6B、7F、9V、12F、14、18C、19A、19F和23F血清型是亞洲地區排列前15位的血 清型，特別適合于亞洲地區。在近百個肺炎球菌血清型中，2型和12F不僅侵襲力超強，而且 高比例存在于各大洲，是本發明認為肺炎球菌結合疫苗組合中必須含有的兩個血清型。
[0009] 表2.肺炎球菌2型和12型在全球各洲的分布排名
[0010]
【發明內容】
：
[0011] 本發明提供了一種含有2型和12F型血清型的15價肺炎球菌結合物組合疫苗，用于 預防肺炎球菌2型，12F型W及其他型肺炎球菌的侵襲。
[0012] 所述組合疫苗中還包括1、3、4、5、64、68、7。、9￥、14、18〔、194、19。和23。型血清型。 [001引為此，本發明提供一種15價肺炎球菌結合物組合疫苗，包括1、2、3、4、5、6A、6B、7F、 9V、12F、14、18C、19A、19F和23F血清型，用于預防嬰幼兒、青少年和成人的相應血清型肺炎 球菌感染。
[0014] 本發明所述的組合疫苗，是由上述15種肺炎球菌結合物組合制備而成。
[0015] 所述15種肺炎球菌結合物是相應肺炎球菌血清型芙膜多糖與生理上可接受的載 體蛋白質制備的多糖蛋白結合物。
[0016] 其中，所述肺炎球菌芙膜多糖為：1、2、3、4、5、6A、6B、7F、9V、12F、14、18C、19A、19F 和23F血清型。
[0017] 其中，所述生理上可接受的載體蛋白質選自：白喉類毒素(DT)及其交叉反應物質 (CRM)，CRM是一類與白喉抗毒素形成反應的物質，含有如〔1?1197、〔1?19、0^173、〔1?1228和 CRM45;包括破傷風類毒素(TT)、百日咳類毒素(PT)、霍亂毒素 B亞單位、不耐熱大腸桿菌腸 毒素化T)、耐熱大腸桿菌腸毒素（ST)、綠脈桿菌外毒素 A化PA);包括外膜蛋白復合物 (0MPC)、肺炎球菌溶血素(PLY)、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白A(PsaA)、流 感嗜血桿菌蛋白D。載體蛋白質優選DT、TT和CRM197，最優選DT。
[0018] 本發明15種肺炎球菌結合物的制備方法可W采用本行業專業人員都熟知常規方 法，如可利用芙膜多糖上的醒基、簇基或氨基等與載體蛋白質直接相連，也可通過橋聯劑與 載體蛋白質相連接，所述橋聯劑包括但不限定為下二酷二阱（SDH)、己二酷二阱(ADH)、3- (2-化晚二琉基)丙酸N-徑基班巧酷亞胺醋(SPDP)等。
[0019] 本發明15種肺炎球菌結合物的重量比例為1:1-1:2之間，其中所述重量W芙膜多 糖的重量計算。例如，在本發明的15價肺炎球菌結合物組合疫苗中，單位劑量中，各型芙膜 多糖的含量可W為O.l-lOyg;優選含量為0.5-扣g;最優選含量為1-化g。本發明最優選多糖 含量組合為1、2、3、4、5、6A、7F、9V、12F、14、18C、19A、19F 和 23F 各化邑，她是化 g。
[0020] 本發明15價肺炎球菌結合物組合疫苗中，還可包括疫苗制劑所需要的必要輔料， 如:可包含佐劑和/或緩沖液，所述的佐劑選自侶佐劑，如氨氧化侶、憐酸侶、硫酸侶等。水包 油或細菌細胞壁成份，如MF59、SAE、RAS等。或者皂角類佐劑，如Quil A、QS-21。或者細菌脂 多糖或合成類脂A佐劑。細胞因子，如白細胞介素、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、共 刺激分子B7-UB7-2等。或者毒素亞單位類佐劑，如霍亂毒素及亞單位、百日咳毒素、大腸桿 菌不耐熱腸毒素化T)等。所述的緩沖液選自憐酸緩沖液或化is緩沖液，也可W是生理氯化 鋼溶液。緩沖液濃度可W是0.01 -0.05M，優選0.01 -0.02M，最優選0.01M。
[0021 ]也可包含穩定劑和/或分散劑，穩定劑選自氨基酸，氨基酸可W是組氨酸，優選k 組氨酸，使用濃度1-lOOmM，優選2-50mM，更優選3-lOmM，最優選5mM。組氨酸可W組氨酸緩沖 液的形式出現。分散劑選自多聚山梨醇醋，優選Tween 80,使用濃度0.01-1%，更優選0.01- 0.1%，最優選0.02-0.05%。
[0022] 本發明的15價肺炎球菌結合物組合疫苗可W制成供臨床用的各種制劑形式，所述 的制劑選自液體劑型、凍干劑型，優選液體劑型。
[0023] 本發明的15價肺炎球菌結合物組合疫苗，其接種途徑包括肌肉注射、皮下注射、皮 內注射途徑。
[0024] 本發明的15價肺炎球菌結合物組合疫苗，在免疫小鼠和大鼠后，都能產生針對各 血清型多糖的特異性IgG抗體，產生的15種血清型特異性抗體滴度較高，陽轉率基本都能達 到100%，而且具有協同增效作用，2型和12F與其他13個血清型也未出現免疫干擾情況。
[0025] W下通過實驗數據進一步說明本發明的有益效果：
[0026] 15價肺炎球菌結合物組合小鼠免疫力實驗
[0027] 實驗的15價肺炎球菌結合物組合有巧巾，一種含有憐酸侶佐劑，一種不含任何佐 劑，每毫升組合中含1、2、3、4、5、64、7。、9￥、12。、14、18〔、194、19。和23。多糖各化邑，含68多糖 祉g。實驗采用NIH小鼠，皮下免疫2針，間隔1月，劑量為0.1ml/次。免疫后14天采血，分離血 清，測定15種特異性IgG抗體效價。W陰性對照平均值加2倍SD作為cutoff值判定血清抗體 滴度，抗體滴度取對數后分析處理；W抗體4倍W上增長評定陽轉率，結果見表3。分析比較 了含佐劑和不含佐劑組合誘導抗體滴度間的情況，未發現明顯差異。
[0028] 表3.15價肺炎球菌結合物組合在小鼠中的免疫原性
[0029]
[0030]
[0031] 15價肺炎球菌結合物組合大鼠免疫力實驗
[0032] 實驗的15價肺炎球菌結合物組合含有憐酸侶佐劑，每毫升中含1、2、3、4、5、6A、7F、 9￥、12。、14、18〔、194、19。和23。多糖各化旨，含她多糖祉旨。采用50大鼠，免疫程序為3針，每針 間隔1月，0.125ml/次，采集免前和最后1針免后2周的血樣，分離并測定特異性IgG血清抗體 滴度，取對數后進行分析，結果見表4。
[0033] 表4.15價肺炎球菌結合疫苗在大鼠中的免疫原性
[0034]
【具體實施方式】：
[0035] 下面結合實施例對本發明做進一步的描述，本發明的保護范圍不局限于W下所 述：
[0036] 實施例1:15價肺炎球菌結合物組合處方
[0037] 每0.5ml劑量含各型多糖共32yg(多糖總量），其中她型化g，l、2、3、4、5、6A、7F、9V、 12尸、14、18〔、194、19。、23。各化旨。各型多糖與白喉類毒素結合后吸附于憐酸侶佐劑(侶含量 0.125mg)，溶劑為生理氯化鋼溶液。
[0038] 實施例2:15價肺炎球菌結合物組合不同針次免疫小鼠后的抗體情況
[0039] 采用NIH小鼠，皮下免疫3針，每針間隔2周，劑量為0.1ml。每針免疫后14天采血，分 離血清，測定特異性血清效價。W陰性對照平均值加2倍SD作為cutoff值判定血清抗體滴 度，取對數后進行數據分析，W抗體4倍W上增長評定陽轉率。結果可見，本發明結合物組合 可在小鼠中誘導高滴度特異性抗體，1針免疫就可達到理想的抗體滴度和陽轉率，對于已有 很高抗體滴度的小鼠，再次免疫后的抗體滴度也不再升高。
[0040] 表5.15價肺炎球菌結合物組合在小鼠免疫應答狀況
[0041]
[0042] 實施例3:15價肺炎球菌結合物組合豚鼠主動過敏實驗
[0043] 分2ml、0.5ml兩個免疫劑量組，健康白色豚鼠腹腔注射15價肺炎球菌結合組合，隔 日一次，連續3次進行致敏;末次致敏后第12天，由靜脈單次注射2倍致敏劑量的15價肺炎球 菌結合物組合進行激發，2ml劑量組對豚鼠過敏反應為陽性(++3只、+++2只、++++1只），主要 癥狀為不安寧、豎毛、發抖、搔鼻、噴曖、咳嗽、呼吸急促、排尿、流淚、呼吸困難、步態不穩、疫 李、死亡，反應在給藥后約1分鐘出現，死亡出現在給藥后約5分鐘，存活鼠反應在給藥后半 小時內消失，反應率為100%，死亡率為16.7%;另取2只未致敏健康豚鼠單次靜脈注射給予 相同激發劑量的15價肺炎球菌結合物組合，未見異常反應;0.5ml劑量組無過敏反應發生。 兩個劑量組豚鼠在致敏期間均未見明顯異常反應，體重也均隨試驗時間延長而增長，其首 次致敏、末次致敏和激發時的平均體重均與相應時間的0.9%化C1注射液陰性對照組相似 (P〉0.05)。牛血清白蛋白陽性對照組豚鼠在致敏期間也未見異常反應，但激發后也均出現 明顯的過敏反應癥狀，主要表現為不安寧、豎毛、發抖、搔鼻、噴曖、咳嗽、呼吸急促、排尿、流 淚、呼吸困難、步態不穩、跳躍、疫李、甚至死亡，死亡時間在給藥后5分鐘左右，有過敏反應 的存活豚鼠在給藥后30分鐘內逐漸恢復正常，其反應出現率為100%，死亡率為66.7%，過 敏反應為陽性(++2只、++++4只）。
[0044] 實施例4:15價肺炎球菌結合物組合溶血實驗
[0045] 15價肺炎球菌結合物組合0.1~0.5ml各管在3小時內均未出現溶血和凝集，與 0.9%NaCl注射液陰性對照管相同。蒸饋水陽性對照管各時間點觀察均出現完全溶血。
[0046] 實施例5:15價肺炎球菌結合物組合肌肉刺激實驗
[0047] 兔左右腿股四頭肌單次注射15價肺炎球菌結合物組合1ml/點和侶佐劑對照1ml/ 點劑量，停藥48小時大體觀可見15價肺炎球菌結合物組合給藥組1號兔雙側股四頭肌可見 0.5 X 1.0cm W上病灶，觸摸較硬，色澤暗紅、渾濁感;4號兔雙側股四頭肌可見0.5 X 1.0cm W 上病灶，觸摸較硬，色澤發白或局部暗紅、渾濁感;其所有股四頭肌反應級之和為8,小于10。 佐劑對照組2號兔雙側股四頭肌注射局部可見范圍在0.5 X 1. OcmW下病灶，觸摸較硬，色澤 發白、局部暗紅;7號兔左側股四頭肌可見0.5 XI.OcmW下病灶，觸摸較硬，色澤發白、渾濁 感，右側股四頭肌未見異常；其所有股四頭肌反應級之和為3,小于10。組織學檢查可見，停 藥48小時兩組試驗兔主要出現W注射局部間質受試物沉積和周圍單核細胞為主的炎性浸 潤病變，肌纖維病變均不明顯；給藥組在病變范圍和間質充血、出血、水腫病變程度較佐劑 對照組嚴重，但二組試驗兔股四頭肌病變范圍局限，均未出現明顯大范圍的變性、壞死和間 質炎性浸潤、充血、出血、水腫等嚴重刺激性病變;恢復期結束檢查二組試驗兔股四頭肌注 射局部小灶性病變，W受試物沉積、單核細胞為主的炎性浸潤伴纖維結締組織增生為主，同 時可見嗜酸性粒細胞增生，病變范圍局限，肌纖維病變不明顯。二期檢查的0.9%化C1注射 液對照組兔股四頭肌均未見明顯病理變化。
[0048] 在本試驗劑量條件下，根據肌肉刺激反應分級標準判斷，15價肺炎球菌結合物組 合對兔股四頭肌刺激試驗符合規定。15價肺炎球菌結合物組合單次肌肉注射后出現注射局 部間質受試物沉積和周圍單核細胞為主的炎性浸潤病變，與佐劑對照反應相似，可能與佐 劑不容易吸收有關。
[0049] 實施例6:15價肺炎球菌結合物組合急性毒性實驗
[0050] 健康ICR小鼠單次肌肉注射給予15價肺炎球菌結合物組合1ml劑量，給藥后整個試 驗觀察期間小鼠未出現明顯異常反應，也未引起動物死亡，給藥后小鼠體重均隨試驗時間 延長而增加。試驗結束動物經剖檢，大體觀檢查可見實驗組和佐劑對照組所有小鼠給藥局 部出現觸摸較硬的白色或±黃色結節，組織學檢查發現小鼠給藥局部肌纖維間質出現異物 肉芽腫樣結節，但對肌纖維實質并無明顯影響;正常對照組小鼠給藥局部未見類似現象。本 試驗所有小鼠經剖檢，各臟器未見異常變化。小鼠單次肌肉注射給予15價肺炎球菌結合物 組合1ml劑量，給藥局部肌纖維間質出現與佐劑對照組相似的異物肉芽腫樣結節，但對肌纖 維實質無明顯影響，小鼠未出現其他明顯異常反應，也未引起動物死亡，急性中毒祀器官未 明顯顯不〇
[0051 ]實施例7:15價肺炎球菌結合物組合長期毒性實驗
[0052] SD大鼠連續5次(每次間隔1月，W28天計)分別肌肉注射給予15價肺炎球菌結合物 組合0.125ml、0.5ml/(鼠.次)劑量、侶佐劑對照0.5ml/(鼠.次），在整個試驗期間大鼠未出 現明顯的毒副反應，也未引起動物死亡。對雌雄大鼠的攝食和體重增長無明顯影響，基本與 正常對照組【0.9%化C1注射液0.5ml/(鼠.次）】大鼠相似。給藥中期(第3次給藥后兩周）、停 藥檢查(第5次給藥后兩周）、恢復期結束(停藥檢查后四周)檢查結果顯示:對大鼠血液生化 學、血液學指標和大鼠臟器重量及系數均無明顯影響。大體觀和組織病理學檢查發現:給予 15價肺炎球菌結合物組合0.125ml、0.5ml/(鼠.次)劑量和佐劑對照組所有大鼠給藥部位均 出現由供試品沉積引起的異物肉芽腫樣結節和淋己結反應性增生變化，其中0.5ml/(鼠. 次）劑量組最為明顯，0.125ml/(鼠.次)劑量組與佐劑對照組程度相似，同一試驗組比較給 藥中期和停藥檢查給藥部位變化相似，恢復期結束檢查呈減輕趨勢，但對給藥部位肌纖維 實質無明顯影響；正常對照組大鼠給藥部位未出現類似變化，對其他組織臟器未見明顯因 供試品引起的病理形態學和組織學改變。
[0053]給藥前、給藥中期、停藥檢查、恢復期結束對大鼠進行免疫原性檢查，結果顯示:大 鼠給予15價肺炎球菌結合物組合0.125ml、0.5ml/(鼠.次)劑量，給藥中期、停藥檢查、恢復 期結束檢查均可檢測到不同水平的"1、2、3、4、5、6A、她、7。、9￥、12。、14、18(：、194、19。、23尸型 肺炎球菌"特異性抗體，兩劑量組間的抗藥物抗體滴度平均值基本無明顯差異;兩劑量組大 鼠給藥后的抗藥特異性抗體滴度平均值均高于給藥前和佐劑對照組、正常對照組(P<〇.01 或0.05)。在本試驗劑量條件下，SD大鼠連續5次(每次間隔1月，W28天計)肌肉注射15價肺 炎球菌結合物組合，大鼠給藥后的抗藥特異性抗體滴度有明顯升高；大鼠給藥部位出現對 肌纖維實質無明顯影響的異物肉芽腫樣結節、淋己結反應性增生變化，恢復期結束檢查給 藥部位變化呈減輕趨勢。中毒劑量和中毒祀器官未明顯顯示。
【主權項】
1. 一種含有2型和12F型血清型的15價肺炎球菌結合物組合疫苗，所述疫苗是由以下15 種肺炎球菌結合物組合制備而成，所述15種肺炎球菌結合物為1、2、3、4、5、6A、6B、7F、9V、 12F、14、18C、19A、19F和23F血清型肺炎球菌莢膜多糖與生理上可接受的載體蛋白質制備而 成，15種肺炎球菌結合物的重量比例為1:1-1:2之間。2. 根據權利要求1所述的組合疫苗，其特征在于，其中，所述生理上可接受的載體蛋白 質選自：白喉類毒素(DT)及其交叉反應物質(CRM)，破傷風類毒素(TT)、百日咳類毒素(PT)、 霍亂毒素 B亞單位、不耐熱大腸桿菌腸毒素(LT)、耐熱大腸桿菌腸毒素(ST)、綠膿桿菌外毒 素 A(EPA);外膜蛋白復合物(OMPC)、肺炎球菌溶血素(PLY)、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺 炎球菌粘附蛋白A(PsaA)、流感嗜血桿菌蛋白D。3. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，單位劑量的組合疫苗中，各型莢 膜多糖的含量為〇.l-l〇yg。4. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，單位劑量的組合疫苗中，各型莢 膜多糖的含量為〇.5-5yg。5. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，單位劑量的組合疫苗中，各型莢 膜多糖的含量為l-4yg。6. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，單位劑量的組合疫苗中，各型莢 膜多糖含量組合為1、2、3、4、5、6A、7F、9V、12F、14、18C、19A、19F 和 23F 各 2yg，6B 是 4yg。7. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，還包括疫苗制劑所需要的必要 輔料。8. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，還包括疫苗制劑所需要的必要 輔料。選自佐劑，緩沖液，穩定劑，分散劑。9. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中，所述的佐劑選自鋁佐劑，如氫氧 化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁，水包油或細菌細胞壁成份，如MF59、SAE、RAS，或者皂角類佐劑，如 Qui 1 A、QS-21，或者細菌脂多糖或合成類脂A佐劑，細胞因子，如白細胞介素、干擾素、集落 刺激因子、腫瘤壞死因子、共刺激分子B7-UB7-2,或者毒素亞單位類佐劑，如霍亂毒素及亞 單位、百日咳毒素、大腸桿菌不耐熱腸毒素(LT)。 所述的緩沖液選自磷酸緩沖液，Tri s緩沖液，生理氯化鈉溶液。 所述穩定劑選自組氨酸，優選L-組氨酸， 所述分散劑選自多聚山梨醇酯，優選Tween80。10. 根據權利要求2所述的組合疫苗，其特征在于，其中結合物中1、2、3、4、5、6A、7F、9V、 12F、14、18C、19A、19F和23F多糖含量2μg/ml，6B多糖含量4μg/ml，另含有100μg/ml的白喉類 毒素，含有〇. 25mg/ml的鋁離子，含有0.85 %的氯化鈉。
【文檔編號】A61K39/09GK105999254SQ201610480425
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月27日
【發明人】杜琳, 蔣仁生
【申請人】北京智飛綠竹生物制藥有限公司