一種降低胃酸酸度的組合物的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種降低胃酸酸度的組合物，所述組合物含有下述9種游離或/和水解氨基酸：蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸和精氨酸；其中，所述9種氨基酸的質量分數之和不低于37％。經實驗證明，本發明的組合物可以降低胃酸的酸度，可用于治療因胃酸酸度過高引起的疾病。
【專利說明】
一種降低胃酸酸度的組合物
技術領域
[0001] 本發明涉及一種降低胃酸酸度的組合物，具體涉及藏藥帕查。
【背景技術】
[0002] 氨基酸不單單是蛋白質合成的原料，本身也具有相應活性，對人體營養物質代謝、 信號轉導、神經內分泌調節及免疫功能等都具有調控作用。例如：
[0003] 劉繼紅等（蜈蚣，全蝎，地龍氨基酸含量測定，鄭州大學學報醫學版，2005,40(3): 483)用氨基酸自動分析儀檢測出了全蝎、蜈蚣和地龍中17種氨基酸的含量。結果顯示三者 的氨基酸含量及分布可能與其藥理作用有關。
[0004] 李珊等（蠶蛹、蝎子、海腸中20種元素的ICP-AES測定和氨基酸含量測定[J].氨基 酸和生物資源，2006,28(3):23)，對蝎子、蠶蛹和海腸進行含量測定，結果表明牛磺酸對心 血管和中樞神經影響較大，缺乏牛磺酸則可引起多種疾病，為藥材的進一步研究藥用價值 提供了理論依據。
[0005] 安坤等(不同產區太子參氨基酸含量測定及多元統計分析[J].天然產物研究與開 發，2012,24(5):594-598)對不同產地太子參藥材的氨基酸組成和含量進行測定，利用氨基 酸為指標，對太子參的內在品質進行研究。
[0006] 湛孝東等(蠶蛹水解氨基酸對人肝癌細胞HepG2.2.15的體外抑制作用的研究[J]. 齊齊哈爾醫學院學報，2015,（4) :469-470)利用運用MTT比色法測定蠶蛹水解氨基酸對人正 常肝臟細胞株的毒性，發現蠶蛹水解氨基酸對人肝癌細胞有良好的作用，毒性小。
[0007] 帕查作為常用藏藥，首次在《月王藥診》中出現："蝗蟲、虎肉、豬血諸藥配伍治'龍' 性疔毒"。帕查為豬科動物豬Sus scrofa domestica Brisson的干燥血，是豬血按照藏醫理 論加工干燥而成，別名帕岔、帕巴、帕合等，藏醫理論認為其味甘，性涼、輕，斂毒及擴散性 "木布"，治木布病擴散，中毒肝病，健胃解痙。
[0008] 帕查除了主要是藏醫在使用外，也有其他少數民族(景頗族與阿昌族)使用的記載 (賈敏如，李星煒.中國民族藥志藥[J].北京：中國醫藥科技出版社，2005:59):用豬血治療 急性支氣管炎、肺炎等。
【發明內容】
[0009] 本發明提供了一種降低胃酸酸度的組合物，所述組合物含有下述9種游離或/和水 解氨基酸：
[0010] 蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸和精氨酸；
[0011] 其中，所述9種氨基酸的質量分數之和不低于37%。
[0012] 進一步地，所述蘇氨酸的質量分數不低于2%;纈氨酸的質量分數不低于6%;亮氨 酸的質量分數不低于9% ;苯丙氨酸的質量分數不低于5% ;賴氨酸的質量分數不低于6% ; 組氨酸的質量分數不低于5% ;精氨酸的質量分數不低于4%。
[0013] 進一步地，所述9種氨基酸的質量分數如下：
[0014] 蘇氨酸:2~3%;
[0015] 纈氨酸:6~8 %;
[0016] 蛋氨酸:0~1%;
[0017] 異亮氨酸:〇~1 %;
[0018] 亮氨酸:9~12%;
[0019] 苯丙氨酸:5~7%;
[0020] 賴氨酸:6~8 %;
[0021] 組氨酸：5~8 %;
[0022] 精氨酸:4~6 %。
[0023] 進一步地，所述組合物含有下述17種游離或/水解氨基酸：
[0024] 蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸、天 冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸；
[0025]其中，所述17種氨基酸的重量分數之和大于等于70%。
[0026] 進一步地，所述17種氨基酸的質量分數如下：
[0027] 蘇氨酸：2~3%;
[0028] 纈氨酸:6~8 %;
[0029] 蛋氨酸:0~1%;
[0030] 異亮氨酸:0~1%;
[0031] 亮氨酸：9~12%;
[0032] 苯丙氨酸:5~7%;
[0033] 賴氨酸:6~8%;
[0034] 組氨酸：5~8 %;
[0035] 精氨酸:4~6 %;
[0036] 天冬氨酸:7~10%;
[0037] 絲氨酸：2~4%;
[0038] 谷氨酸:6~9 %;
[0039] 甘氨酸:2~4%;
[0040] 丙氨酸:4~6 %;
[0041] 半胱氨酸:0~5 %;
[0042] 酪氨酸:〇~2 %;
[0043] 脯氨酸：1~4%。
[0044] 進一步地，所述游離或/和水解氨基酸來源于豬血。
[0045] 進一步地，所述豬血是藏藥帕查。
[0046] 本發明還提供了所述組合物在制備降低胃酸酸度類藥物中的用途。
[0047] 本發明還提供了豬血在制備降低胃酸酸度類藥物中的用途。
[0048] 本發明還提供了藏藥帕查在制備降低胃酸酸度類藥物中的用途。
[0049] 經實驗證明，本發明的組合物可以抑制降低胃酸的酸度，可用于治療因胃酸酸度 過高引起的疾病。
[0050] 在本發明中，"水解氨基酸"指的是將本發明組合物中蛋白質水解之后的得到的氨 基酸，與組合物本身含有的游離氨基酸相區別。
[0051]在本發明一種具體的實施方式中，測定所述水解氨基酸的含量按照下述方式進 行：
[0052]樣品中蛋白質經鹽酸水解成游離氨基酸后，經氨基酸分析儀的磺酸型陽離子交換 柱分離后，在135°C下加熱氨基酸與茚三酮混合反應，伯胺與茚三酮生成藍紫色化合物，仲 胺與茚三酮生成黃色化合物，分別在570nm和440nm波長下檢測兩種衍生產物，保留時間定 性，外標法定量。
[0053]顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0054] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【具體實施方式】
[0055] 實驗所用16批藥材，加工方法不同。經成都中醫藥大學藥學院蔣桂華教授鑒定為 豬科動物豬Sus scrofa domestica Brisson的干燥血。具體如下： 樣品編號采集時間 采集地點 加工方法 來源 I 2013,3.14 成都荷花池中藥材市場 一 - % 2013.6.22 成都荷花池中藥材市場 一 - 3 2013.4.26 四川崇州 烘千 豬 4 2013.4.26 四川崇州 陰干 豬 5 2013.5.25 河南商丘 陰干 豬 6 2013.6.09 四川甘孜州瀘定 陰干 豬 7 2013,6.10 四川甘孜州康定 陰干 豬
[0056] 8 2013.3.15 青海西寧 一 -- 9 2013.3.11 四川溫江 烘千 豬 10 2014.3.11 四川甘孜州藏醫院 加青稞酒風干藏豬 II 20丨3.12.12 四川阿壩州茂縣 陰干 藏豬 12 2013.12.12四川阿壩州茂縣 煮后烘干 藏豬 13 2014,1.15 四川甘孜州得榮 風千 藏豬 14 2013.4.26 四川崇州 煮后烘干 豬 15 2013.6.09 四川甘孜州瀘定 煮后烘干 豬 16 2013.12.12四川阿壩州茂縣 烘干 藏豬
[0057]注："一"表示加工方法、來源不詳
[0058] 除第1、2、8、10號為購買樣品外，其余11批藥材均按照不同的加工方法自制，烘干 及煮后烘干均是烘箱低溫干燥。
[0059] 實施例1藏藥帕查對胃蛋白酶活性的抑制試驗
[0060] 1、供試品的配制
[0061 ] 取帕查粉末，用純水溶解，帕查高、中、低給藥濃度分別為:0.1500g/mL，0.0750g/ mL，0·0375g/mL。
[0062] 2、陽性對照組藥物制備
[0063] 陽性對照組溶液的制備:取膠體果膠鉍lg，加水溶解，定容至50mL，膠體果膠鉍給 藥濃度為〇. 〇2g/mL。
[0064] 3、方法
[0065]本次試驗采用無水乙醇灌胃致小鼠胃潰瘍的方法，將ICR小鼠72只，體質量（20土 2)g，雌雄各半，適應性喂養三天后隨機分為6組，即空白組、帕查低劑量組、帕查中劑量組、 帕查高劑量組、膠體果膠鉍組、模型組，每組12只，雌雄各半。各組實驗動物根據以上分組給 藥，每天給藥1次，0.2mL/10g，連續給藥8d，空白組及模型組給予等體積蒸餾水。第7d給藥 后，在末次給藥前禁食不禁水12h，除空白組以外各組小鼠灌服無水乙醇0.1mL/10g，空白組 給予等體積蒸餾水，lh后脫頸椎法處死。
[0066]將處死的小鼠剖腹，結扎幽門、賁門后剪取胃臟，沿胃的大彎剪開胃腔，仔細觀察 胃黏膜損傷情況，把胃內容物全部傾倒置一次性PE管中，用3500r/min的轉速離心10min，將 上層胃液收集起來，把胃放入10%甲醛溶液中，固定30min，準備測定胃液的酸度。
[0067] 4、胃液總酸度的測定
[0068]取胃液0. lmL，用蒸餾水稀釋至lmL，用酸度計測其pH值，用pH值換算成胃液總酸 度。
[0069] 5、數據分析
[0070]數據用SPSS 19.0進行數據分析，所有實驗數據均以x±s表示，采用單因素方差分 析比較組間差異，采用P<〇.05時差異有統計學意義。
[0071] 6、結果
[0072] 結果如表1所示：
[0073]表1帕查對胃液酸度的降低作用
[0074]
[0075] 注：與空白對照組比較*P〈0 · 05，#P〈0 · 01;與模型組比較#P〈0 · 05，##P〈0 · 01
[0076] 以上結果表明，與空白對照組對比，模型組胃酸濃度升高；與模型組對比，帕查各 劑量組能顯著降低胃液酸度。
[0077]實施例2藏藥帕查的氨基酸含量分析及組合物 [0078] 1儀器設備及試劑
[0079]儀器:氨基酸自動分析儀：日立L-8900;分析天平(德國賽多利斯BP211D);移液器： 量程分別為10yL~100yL，20yL~100yL及200yL~1000yL;烘箱（精宏XMTD-8222，上海精宏 實驗設備有限公司）；DJW-2000高精全自動交流穩壓電源（上海全力電器有限公司）；抽濾 瓶，安培瓶，酒精噴燈等。
[0080] 試劑:氨基酸標準品（純度>98%，安捷倫科技有限公司，生產批號：5061-3331);檸 檬酸鋰（四水），鹽酸，氯化鋰，檸檬酸，氫氧化鋰，硼氫化鈉，無水乙酸鈉，茚三酮，無水乙醇， 硫代雙乙醇，聚氧乙烯月桂醚，辛酸，苯甲醇，乙二醇甲醚和冰乙酸均為優級純，氮氣為高純 氮(純度多99.999 % )。快速定量濾紙;0.45μπι水相濾膜和0.45μπι有機相濾膜。
[0081] 2 原理
[0082] 樣品中蛋白質經鹽酸水解成游離氨基酸后，經氨基酸分析儀的磺酸型陽離子交換 柱分離后，在135°C下加熱氨基酸與茚三酮混合反應，伯胺與茚三酮生成藍紫色化合物，仲 胺與茚三酮生成黃色化合物，分別在570nm和440nm波長下檢測兩種衍生產物，保留時間定 性，外標法定量。
[0083] 3混合氨基酸標準工作液配制
[0084]精密稱取各氨基酸對照品適量，用純水溶解，配制成混合溶液。混合標準溶液中的 17種氨基酸的濃度為1.25μη?01/mL，作為氨基酸混合母液。
[0085] 17種氨基酸混合母液用水稀釋到2nmol/20yL，進樣測定。氨基酸標準工作溶液現 配現用。
[0086] 4流動相配制
[0087] 4.1流動相B1 (pH 2.8)配制
[0088] 準確稱取檸檬酸鋰（四水)5.73g，氯化鋰1.24g，檸檬酸19.90g，溶于700mL純水中， 加入30.0 mL無水乙醇，5. OmL硫代雙乙醇，4. OmL聚氧乙稀月桂醚，再加入0. lmL辛酸，轉移至 1000mL容量瓶中，用純水定容，過0.45μπι水相濾膜備用。
[0089] 4.2流動相Β2(ρΗ 3.7)配制
[0090] 準確稱取檸檬酸鋰（四水)9.80g，氯化鋰6.36g，檸檬酸12.00g，溶于700mL水中，加 入30 . OmL無水乙醇，5 . OmL硫代雙乙醇，4. OmL聚氧乙稀月桂醚，再加入0 . lmL辛酸，轉移至 1000mL容量瓶中，用純水定容，過0.45μπι水相濾膜備用。
[0091] 4.3流動相83(?!13.6)配制
[0092] 準確稱取檸檬酸鋰（四水)8.79g，氯化鋰26.62g，檸檬酸11.27g，溶于700mL水中， 加入100mL無水乙醇，3 . OmL苯甲醇，4 . OmL聚氧乙稀月桂醚，再加入0 . lmL辛酸，轉移至 1000mL容量瓶中，用純水定容，過0.45μπι水相濾膜備用。
[0093] 4.4流動相Β4(ρΗ 4.1)配制
[0094] 準確稱取檸檬酸鋰（四水)9.80g，氯化鋰38.15g，檸檬酸3.30g，溶于700mL水中，加 入4.OmL聚氧乙烯月桂醚，再加入0. lmL辛酸，轉移至1000mL容量瓶中，用純水定容，過0.45μ m水相濾膜備用。
[0095] 4.5流動相B5配制
[0096]流動相B5為經0.45μπι水相濾膜過濾后的一級超純水。
[0097] 4.6流動相86配制
[0098] 準確稱取氫氧化鋰8.40g，溶于700mL水中，加入30.0 mL無水乙醇，4. OmL聚氧乙稀 月桂醚，再加入0 . lmL辛酸，轉移至lOOOmL容量瓶中，用超純水定容，過0.45μπι水相濾膜備 用。
[0099] 5柱后衍生化反應溶液配制
[0100] 5.1反應溶液1?1配制
[0101] 準確稱取茚三酮39. Og，溶于979mL乙二醇甲醚中，超聲溶解5min，過0.45μπι有機相 濾膜，加入硼氫化鈉81. Omg，氮氣鼓泡30min，放置過夜使用。
[0102] 5.2反應溶液R2配制
[0103] 準確稱取無水乙酸鈉204.0g，加入300mL水，123mL冰乙酸，401mL乙二醇甲醚，超聲 至溶解，轉移至l〇〇〇mL容量瓶中，用水定容，過0.45μπι有機相濾膜，氮氣鼓泡10min，備用。 [0104] 5.3反應溶液R3配制
[0105] 準確移取無水乙醇50mL于1000mL溶量瓶中，用純水定容至1000mL，搖勻后利用 0.45μπι有機相濾膜過濾，備用。
[0106] 6 方法
[0107] 6.1樣品制備
[0108]稱取20mg樣品，精密稱定，于安培瓶中，加入6mol/L鹽酸5mL，反復抽真空，置于安 瓿瓶中沖氮用酒精噴燈封口，放入恒溫至11 〇°C的烘箱中水解24h，取出，冷卻。過濾至10mL EP管中，吸取100yL樣品加109.5yL 6mol/L NaOH中和，過0.45μπι濾膜，衍生，上機待測。 [0109]衍生操作：用移液槍移取制備好的樣品溶液或標準溶液10yL于潔凈的內插管中， 加入配置好的衍生用緩沖液70此，再加入衍生試劑20yL，立即用漩渦混合儀混合10s，加蓋 密封于進樣瓶中，室溫下靜置lmin，轉移至事先預熱好的55°C烘箱中加熱10min，取出待測。 [0110] 6.2儀器分離體系運行條件
[0111] 流動相配制見1.4，流動相流速為0.35mL/min，流動相及溫度梯度條件如表1所示， 進樣體積為20yL。
[0112] 表2氨基酸分析儀分離梯度條件程序
[0113]
[0114] 6.3反應檢測體系運行條件
[0115] 反應液配制見5部分，反應柱溫度為135°C，反應液流速為0.30mL/min，反應液梯度 條件見表3。檢測器檢測波長570nm和440nm。
[0116] 表3氨基酸分析儀反應體系條件程序
[0117]
[0118] ~6.4繪制校正曲線
[0119] 啟動氨基酸自動分析儀，設定工作參數，待基線穩定后，分別吸取不同梯度濃度的 混合氨基酸標準工作溶液，注入氨基酸自動分析儀進行測定，分別得到17種氨基酸的峰面 積。分別以各氨基酸峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，建立校正曲線。通過保留時間識別各 氨基酸出峰順序。
[0120] 7樣品測定
[0121] 用氨基酸分析儀測定樣品溶液，分別得到樣品中各氨基酸色譜峰面積，代入校正 曲線計算含量。以超純水作為空白樣品，在相同測定條件下進行測定，計算空白樣品中各氨 基酸本底值。樣品測定值扣除空白樣品中各氨基酸本底值，即得各樣品中氨基酸凈含量。選 擇10批具有代表性藥材進行測定。
[0122] 8結果計算與表示
[0123] 按式（1)計算樣品中各游離氨基酸的含量。
[0124]
[0125] 式中：
[0126] ff!一一試樣中各氨基酸組分的含量，單位為毫克每100克(mg/100g)。
[0127] C--試樣溶液中由校正曲線計算出的氨基酸濃度，單位為納摩爾每毫升(nmol/ mL)〇Ck--空白試樣溶液中由校正曲線計算出的氨基酸濃度，單位為納摩爾每毫升(nmol/ mL) 〇
[0128] V一一試樣總體積，單位為毫升(mL)。
[0129] Μ一一氨基酸的摩爾質量，單位為克/摩爾(g/mol)。
[0130] m--試樣質量，單位為克(g)。
[0131] mi--試樣干物率，測定方法見GB 8303。
[0132] (1)各個樣品的測測定結果見表4。
[0133]表4帕查樣品氨基酸測定結果（％，n = 2)
[0134]
[0135] 注:*為人體必需氨基酸
[0136] 從表4中可以看出，帕查中含有天冬氨酸、絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、異亮 氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、谷氨酸、組氨酸、蘇氨酸、精氨酸、纈氨酸、 脯氨酸等17種氨基酸。不同來源和加工方法帕查中均含有上述17種氨基酸，含量較為穩定， 僅略有差異，總氨酸含量73.67 %~86.94%。結合實施例1的活性試驗結果，證明本發明組 合物可以降低胃酸的酸度
[0137] (2)不同加工方法對氨基酸含量影響見表5:
[0138] 表5不同加工方法對氨基酸含量影響:匕^%)
[0139]
[0140] 注產為必須氨基酸，與陰干法相比，*p <
0.0 5，**p < 0.01;與煮后烘干法相比#p < 0·05，##ρ<0·01
[0141] 可以看出，風干法在總氨基酸含量、必須氨基酸含量均高于其他幾種加工方法，這 與傳統藏醫理論相符。
【主權項】
1. 一種降低胃酸酸度的組合物，其特征在于:所述組合物含有下述9種游離或/和水解 氨基酸： 蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸和精氨酸； 其中，所述9種氨基酸的質量分數之和不低于37%。2. 根據權利要求1所述的組合物，其特征在于:所述蘇氨酸的質量分數不低于2%;纈氨 酸的質量分數不低于6% ;亮氨酸的質量分數不低于9% ;苯丙氨酸的質量分數不低于5% ; 賴氨酸的質量分數不低于6% ;組氨酸的質量分數不低于5% ;精氨酸的質量分數不低于 4%〇3. 根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于:所述9種氨基酸的質量分數如下： 蘇氨酸:2~3 %; 纈氨酸:6~8 %; 蛋氨酸:〇~1%; 異亮氨酸:〇~1%; 亮氨酸:9~12 %; 苯丙氨酸:5~7 % ; 賴氨酸:6~8 % ; 組氨酸:5~8 %; 精氨酸:4~6 %。4. 根據權利要求1-3任一項所述的藥物組合物，其特征在于:所述組合物含有下述17種 游離或/水解氨基酸： 蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸、天冬氨 酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸； 其中，所述17種氨基酸的重量分數之和大于等于70%。5. 根據權利要求4所述的藥物組合物，其特征在于:所述17種氨基酸的質量分數如下： 蘇氨酸:2~3 %; 纈氨酸:6~8 %; 蛋氨酸:〇~1%; 異亮氨酸:〇~1%; 亮氨酸:9~12 %; 苯丙氨酸:5~7 % ; 賴氨酸:6~8 % ; 組氨酸:5~8 %; 精氨酸:4~6 %; 天冬氨酸:7~10 %; 絲氨酸:2~4 %; 谷氨酸:6~9 %; 甘氨酸:2~4 %; 丙氨酸:4~6 %; 半胱氨酸:〇~5 %; 酪氨酸:〇~2 % ; 脯氨酸:1~4 %。6. 根據權要求1~5任一項所述的組合物，其特征在于:所述游離或/和水解氨基酸來源 于豬血。7. 根據權利要求6所述的組合物，其特征在于:所述豬血是藏藥帕查。8. 權利要求1~7任一項所述的組合物在制備降低胃酸酸度類藥物中的用途。9. 豬血在制備降低胃酸酸度類藥物中的用途。10. 藏藥帕查在制備降低胃酸酸度類藥物中的用途。
【文檔編號】A61K31/4172GK105998000SQ201610380538
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月1日
【發明人】蔣桂華, 連艷, 鄧晶晶, 蘭志瓊, 劉曉芬, 盧先明, 陳玲, 陳虹宇, 尹顯梅, 王瀟霖, 鄭瀟瀟, 黃鳳
【申請人】成都中醫藥大學