苯丁酸氮芥的藥物組合物及其抗抑郁的醫藥用圖
【專利摘要】本發明公開了苯丁酸氮芥的藥物組合物及其抗抑郁的醫藥用途，本發明提供的苯丁酸氮芥的藥物組合物中含有苯丁酸氮芥和一種從太子參的干燥塊根中分離得到的結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，苯丁酸氮芥和該天然產物單獨作用時，具有一定的抗抑郁作用；二者聯合作用時，抗抑郁作用進一步提高，可以開發成抗抑郁的藥物。本發明與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
苯丁酸氮芥的藥物組合物及其抗抑郁的醫藥用途
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及苯丁酸氮芥的新用途，具體涉及一種苯丁酸氮芥 的藥物組合物及其抗抑郁的醫藥用途。
【背景技術】
[0002] 苯丁酸氮芥為氮芥衍生物，作用與環磷酰胺相似，對多種腫瘤有抑制作用，臨床用 于慢性淋巴細胞白血病、淋巴肉瘤、何金杰氏病、卵巢癌、乳腺癌、絨毛上皮瘤、多發性骨髓 瘤等。苯丁酸氮芥對切特綜合征(生殖器潰瘍、口瘡及眼色素層炎綜合征）、紅斑狼瘡、韋格 內肉芽腫病有較好療效;用于治療類風濕性關節炎并發的脈管炎和伴有寒冷凝集素的自身 免疫性溶血性貧血有良好效果；用于依賴皮質激素的腎病綜合征患者可得到完全的緩解， 與氫化潑尼松并用于頻發的腎病綜合征可顯著降低其復發率;對硬皮病可迅速阻止其發 展，使皮膚潰瘍痊愈，肺功能改善。
[0003] 迄今為止，尚未見苯丁酸氮芥及其藥物組合物與抗抑郁的相關性報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種苯丁酸氮芥的藥物組合物，該藥物組合物中含有苯丁 酸氮芥和一種從草本中分離得到的結構新穎的天然產物，苯丁酸氮芥和該天然產物可以協 同抗抑郁。
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0006] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0007
0
[0008] -種苯丁酸氮芥的藥物組合物，包括苯丁酸氮芥、如上所述的化合物（I)和藥學上 可以接受的載體。
[0009]如上所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將太子參的干燥塊根 粉碎，用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫10 個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到化合物(I)。
[0010] 進一步地，步驟(a)中用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0012] 如上所述的化合物(I)在制備抗抑郁的藥物中的應用。
[0013] 如上所述的苯丁酸氮芥的藥物組合物在制備抗抑郁的藥物中的應用。
[0014] 本發明的優點：
[0015] 本發明提供的苯丁酸氮芥的藥物組合物中含有苯丁酸氮芥和一種從太子參中分 離得到的結構新穎的天然產物，苯丁酸氮芥和該天然產物單獨作用時，具有一定的抗抑郁 作用；二者聯合作用時，抗抑郁作用進一步提高，可以開發成抗抑郁的藥物。本發明與現有 技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0016] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0017] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0018] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0019] 分離方法：（a)將太子參的干燥塊根（2kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取（15L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用70% 乙醇洗脫10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1 (10個柱體積）、30:1 (8個柱體 積）、15:1(10個柱體積)和5:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(10個柱體積）、4:1(8個柱體積） 和2:1(6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15 個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (365mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結構確證：白色粉末，HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z 333.1460,結合核磁特征可得 分子式為C2QH22〇3，不飽和度為10。核磁共振氫譜數據δ Η(ΡΡπι，CDC13，500MHz): H-2 (2 · 48，dd， J=13.9,6.6Hz)，H-3a(3.05，dd，J=18.3,6.7Hz)，H-3b(1.91，dd，J=18.3,2.1Hz)，H-7 (2.73，m)，H-8(1.93，dd，J = 9.1，4.2Hz)，H-9(2.47，d，J = 4.2Hz)，H-12(6.14，d，J = 10.2Hz)，H-13(6.71，dd，J=10.2,6.3Hz)，H-14(2.64，dd，J = 9.1，6.3Hz)，H-16a(4.85，s)， H-16b(4.87，s)，H-17(1.66，s)，H-18a(4.83，s)H-18b(4.37，s)，H-19(1.25，d，J=7.8Hz)， !1-20(2.33,8);核磁共振碳譜數據知（ ？?111，〇0(：13，1251抱）：209.8((：，1-〇,40.5(01，2-〇， 34.2(CH2,3-C)，167.6(C，4-C)，207.6(C，5-C)，66.7(C，6-C)，69.4(CH，7-C)，46.3(CH，8-C)，36.8(CH，9-C)，140.3(C，10-C)，146.3(C，n-C)，128.3(CH，12-C)，136.5(CH，13-C)， 49.7(CH，14-C)，144.6(C，15-C)，115.2(CH2，16-C)，19.4(CH3，17-C)，111.2(CH2，18-C)， 18.1(〇1 3，19-〇，18.7(〇13,20-〇。紅外波譜表明該化合物含有羰基（1740〇11-1與1672〇11- 1) 和烯烴（1624cm-l)基團；且其在244nm有紫外吸收，表明含有α，β-不飽和羰基單元。13C-NMR、 DEPT和HSQC譜中顯示有20個碳信號，包括三個甲基，三個亞甲基(兩個烯烴碳），七個次甲基 (兩個烯烴碳和一個連氧碳），以及七個季碳(兩個羰基碳、一個連氧碳和四個烯烴碳），以上 功能結構再結合不飽和數表明該化合物為四環結構。 1H-NMR譜結合HSQC譜顯示三個甲基質 子信號δΗ 1.66(3H，s)、l .25(3H，d，J = 7.8Hz)、2.33(3H，s)，一組亞甲基質子信號δΗ 3.05 (1!1，(1(1，1=18.3,6.7泡）與1.91(1!1，(1(1，1=18.3,2.1泡），兩組端烯烴質子信號51 14.85 (1!1，8)與4.87(1!1，8)、4.83(1!1，8)與4.37(1!1， 8)，一對烯烴質子信號5116.14(1!1，(1，了 = 10.2抱）與6.71(1!1，(1(1，1=10.2,6.3抱），一個含氧次甲基質子信號5112.73(1!1，111)，四個次 甲基質子信號δ Η 2.48(lH，dd，J=13.9,6.6Hz)、1.93(lH，dd，J = 9.1，4.2Hz)、2.47(lH，d，J =4 · 2Hz)、2 · 64 (1H，dd，J = 9 · 1，6 · 3Hz)。COSY譜中存在H-l 2/H-l 3/H-l4/H-8/H-7、H-8/H-9以及H2-3/H-2/H3-19相關信號，同時HMBC譜中顯示有H2-3與C-l、C-4和C-10，H-7與0 5、C-6、C-8 和 C-14，H-8 與 C-6、C-7、C-9 和 C-14，H-13 與 C-8、C-12、C-14 和 C-15，H2-16 與 C-14、 C-15 和 C-17，H2-18 與 C-9、C-11 和 C-12，H3-19 與 C-l、C-2 和 C-3，H3-20 與 C-5、C-6 和 C-7 相關信 號，通過上述NMR譜中的相關信息可以構建該化合物的連接方式，并且可以確定該化合物為 rhamnofolane 型二萜類化合物。HMBC 譜中 H-7 與 C-5、C-6、C-8 和 C-14，H3-20 與 C-5、C-6 和 C-7 的相關性以及C-6與C-7化學位移表明C-6和C-7形成環氧結構。此外，通過H-12與H-13化學 位移及偶合常數可知C-12和C-13之間為雙鍵。R0ESY譜中H-7和H-8與Me-20相關信號可知環 氧結構為α構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基 本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ΕΟ)試驗確定，理論值與實驗值基本一致。 化學結構式和碳原子編號如下：
[0021]
[0022]實施例2:抗抑郁作用 [0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動物
[0025]實驗動物SPF級昆明小鼠，雌雄各半，體重18~22g，購自廣州中醫藥大學實驗動物 中心。
[0026] 1.2藥物與試劑
[0027] 苯丁酸氮芥購自中國藥品生物制品檢定所，化合物（I)自制，制備方法見實施例1。 鹽酸氟西汀膠囊(百憂解）（禮來蘇州制藥有限公司產品，規格:20mg/片）；重酒石酸去甲腎 上腺素(NE);腎上腺素(E);鹽酸多巴胺(DA) ;5_羥色胺鹽酸鹽(5-HT);以上5種對照品均購 自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用）；乙腈(色譜純，澳洲移民局科技有限公司）；辛 烷磺酸鈉(B8,分析純，天津市大茂化學試劑廠）；高氯酸(分析純，廣州化學試劑廠）；磷酸二 氫鈉(分析純，廣州化學試劑廠）。
[0028] 1.3主要儀器
[0029] 懸尾實驗裝置自制，木棒上用紙板隔離成2個區，用膠布固定鼠尾;游泳實驗裝置 為矩形玻璃缸（19.4cmX20.4cm);鉆石牌機械秒表3個，上海皇固儀器有限公司；庫侖陣列 電化學高效液相色譜儀（美國ESA公司：Model5600A-16通道檢測器，Model 582solvent Delivery System，Mode 1542 自動進樣器，Coularray Win工作站）；Dionex-Tcc_100 型柱溫 箱(美國戴安公司）；Thermo D-37520型高速冷凍離心機(德國Heraeus公司）；Phs-25型pH計 (上海精密科學儀器有限公司）；GenPure超純水系統(德國TKA公司）；KQ-500型超聲波清洗 器(昆山市超聲儀器有限公司）；3K超濾管(PALL公司）；BP211D電子天平(德國Sartorious); 佳美SK-1快速混勾器(江蘇金壇市佳美儀器廠）。
[0030] 1.4小鼠懸尾實驗(TST)
[0031] 取小鼠50只，隨機分成5組，每組10只。分別為空白對照組(生理鹽水）、陽性對照組 (鹽酸氟西汀4mg/mL)及苯丁酸氮芥組(80mg/kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、苯丁酸氮芥與化 合物（I)組合物組【(40mg/kg)苯丁酸氮芥+(40mg/kg)化合物（I)】，自由飲水進食灌胃1次/ d，0.2mL/只，連續灌胃15d，第1、3、5、7天給藥lh后，將小鼠尾部距末端約2cm處用膠布黏住 固定，使其頭部向下懸掛呈倒懸狀，離箱底約5cm。中間以擋板隔離小鼠視線。總觀察6min， 前2min為適應時間，觀察后4min內小鼠的不動(小鼠在空中停止掙扎，或僅有細小的肢體運 動)時間。
[0032] 1 · 5小鼠強迫游泳實驗(FST)
[0033] 實驗前24h進行游泳訓練15min，禁食不禁水，實驗前12h禁食。第15天給藥lh后進 行游泳實驗。將小鼠單只放入水深l〇cm，水溫（27±3)°C的矩形容器內，總觀察6min，適應 2min后開始計算后4min內累計不動(漂浮不動狀態，僅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶爾劃動以 保持身體不至于沉下去)時間。
[0034] 2、實驗結果
[0035] 2.1對小鼠懸尾不動時間的影響
[0036]結果如表1所示。小鼠在懸尾模型中出現的不動狀態反映了其絕望行為，給藥組抗 抑郁活性從第3天開始體現，與空白對照組比，苯丁酸氮芥與化合物（I)組合物組顯著減少 小鼠懸尾不動時間（P〈〇. 01)，苯丁酸氮芥組、化合物（I)組小鼠懸尾不動時間降低（P< 0.05)〇
[0037] 表1對懸尾小鼠不動時間的影響（s，x土 s，n = 8) rnn^Ri
L0039J 2.2對小鼠強迫游泳不動時間的影響
[0040] 結果如表2所示。與空白對照組比較，苯丁酸氮芥與化合物（I)組合物組小鼠游泳 的不動時間均顯著縮短(p<0.01)，苯丁酸氮芥組、化合物（I)組小鼠游泳不動時間降低(P〈 0.05)〇
[0041] 表2對小鼠強迫游泳不動時間的影響(X土s，n = 10)
[0042]
LUU43J 以上結采表明，苯」酸氮介和化合物u)均具w明μ的杌抑郡作用，開乜兩者·合用 抗抑郁效果顯著增強，可以開發成抗抑郁的藥物。
[0044]上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種苯丁酸氮芥的藥物組合物，其特征在于:包括苯丁酸氮芥、如權利要求1所述的 化合物(I)和藥學上可以接受的載體。3. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將太 子參的干燥塊根粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用 70%乙醇洗脫10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個 柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據權利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用80%乙醇熱 回流提取，合并提取液。5. 根據權利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。6. 權利要求1所述的化合物（I)在制備抗抑郁的藥物中的應用。7. 權利要求2所述的苯丁酸氮芥的藥物組合物在制備抗抑郁的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P25/24GK105997981SQ201610411967
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月13日
【發明人】不公告發明人
【申請人】崔坤峰