花錨抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫藥應用
【專利摘要】本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種維吾爾藥花錨抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和其在制備預防及治療腦膠質瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤藥物中的應用。本發明的提取物通過如下方法得到：先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00，體積比）洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100：01-100:06，體積比）洗脫，二氯甲烷：甲醇100：01-100:06洗脫液干燥即得。
【專利說明】
花錨抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫藥應用
技術領域
[0001] 本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種維吾爾藥花錨抗腫瘤提取物及其組合物的 制備方法和其在制備預防及治療腦膠質瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝 癌等惡性腫瘤藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 本品為龍膽科花錨屬植物花錨的全草，學名Halenia corniculata(L. Wornazt5S 要分布于我國東北、華北及陜西等地。花錨為一年生草本，全株高約20-70cm，夏、秋季采 收，晾干。中醫學認為花錨具有清熱、促進傷口愈合等功效，臨床用于治療"協日"和"熱"過 盛所致疾病。
[0003] 花錨性寒，味甘、苦，具有清熱解毒，涼血止血，清熱利濕，平肝利膽等作用，可用于 脅痛，胃痛，肝炎，膽囊炎，頭痛頭暈，脈管炎，外傷出血等癥狀。現在藥理學研究證明花錨具 有促進肝細胞的再生，加速壞死組織的修復，調節體液免疫的作用。
[0004] 本發明通過系統地篩選研究，意外地發現花錨提取物具有顯著的抗腫瘤活性，即 花錨提取物對腦膠質瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤具有 很好的預防及治療作用，可以應用于癌癥的預防和治療。
[0005] 但是，對其抗腫瘤的有效成分一直不清楚，本發明通過系統地篩選研究，發現了花 錨的有效提取提取物，可以應用于腫瘤的預防和治療。
【發明內容】
[0006] 本發明所解決的技術問題是提供一種花錨提取物。
[0007] 本發明還提供了以花錨提取物為主要活性成分的組合物。
[0008] 本發明同時提供了花錨提取物及其組合物的制備和在制備抗腫瘤藥物中的應用。
[0009] 本發明是通過如下技術方案實現的：
[0010] 維吾爾藥花錨經去離子水超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（100 :0-100 :1〇〇)梯度洗脫（二氯甲烷：甲醇，具體比例見 表1)，各二氯甲烷：甲醇比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體 系測試其抗腫瘤活性，意外地發現先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:〇〇， 體積比）洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100 :01-100:06,體積比）洗 脫，二氯甲烷：甲醇100 :01-100:06洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。優選地，先用二 氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合 溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液干燥即得抗腫 瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該活性提 取物從未見文獻報道，其100:06洗脫液TLC分析表征如圖I，TLC分析條件：GF254硅膠板， 展開系統：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。
[0011] 具體，發現過程如下：
[0012] I、花錨經去離子水超聲提取物的制備
[0013] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL去離子水超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0239B 13. 3mg，留樣 0· 0348mg，剩余 13. 2652mg。
[0014] 2、二氯甲烷：甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果
[0015] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL去離子水超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0239B13. 3mg，留樣0· 0348mg，剩余13. 2652mg。上柱，甲醇溶解，共用甲醇17ml。上硅膠柱 色譜，拌樣硅膠500mg，空白硅膠5g，玻璃柱內徑1.6cm，二氯甲烷：甲醇系統梯度洗脫（二 氯甲烷：甲醇，體積比，見表1)，柱體積I Iml，每個梯度洗脫100mL，得到，各個濃度提取洗脫 液的洗脫物，回收溶劑，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2,圖3,色 譜條件：GF254硅膠板，展開系統：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1，二氯甲烷：乙酸乙酯：甲 醇=3:1: 1，顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。
[0016] 表 1
[0019] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結果
[0020] 1)實驗條件
[0021] a)細胞株信息
[0022] 大鼠腦膠質瘤細胞株C6購于中國典型培養物保藏中心細胞庫。
[0023] b)藥品及試劑
[0024] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640培 養液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0025] RPMI Medium 1640培養基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬 生物技術研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0026] c)儀器
[0027] CO2培養箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直層流潔凈工作臺（上海上凈凈化設備有限公司）
[0029] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0030] 低/高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）
[0031] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0032] 酶標儀（伯樂生命醫學產品有限公司）
[0033] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫療器械廠）
[0034] 鼓風干燥箱（上海躍進醫療器械廠）
[0035] PH 計（SART0RIUS，德國）
[0036] 2)實驗方法和過程
[0037] 大鼠腦膠質瘤C6細胞株以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。 各組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細胞匯合率 約為40%，加藥，濃度均為100yg/mL，每個組分3個復孔。每板細胞設立二個對照組（培 養基+細胞；含〇. 1% DMSO培養基+細胞），3個空白孔（只有培養基）。加入藥物24小 時后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑鹽化學名為3- (4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，繼續培養 4 小時。完全棄去上清液，加入100 μ I DMS0,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測定OD 值。
[0038]
[0039] 3)實驗結果
[0040] 表 2
[0044] 結果發現：維吾爾藥花錨經去離子水超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上 樣后的硅膠柱，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫，繼 用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100 :01-100:06,體積比）洗脫，二氯甲烷：甲 醇100 :01-100:06洗脫液經回收溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的提取物。 優選地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫，繼用二氯 甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫 液干燥即得。該活性提取物從未見文獻報道，其100:06洗脫液TLC分析表征如圖1。
[0045] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0046] 1)提取溶劑的種類研究
[0047] 分別用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等 溶劑提取，并測試提取物的對C6細胞的抗腫瘤活性，結果如下：
[0048]表 3
[0050] 研究結果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇 水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0051] 2)提取溶劑的用量研究
[0052] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機溶劑提取，并測試提取物 的抗腫瘤活性，結果如下：
[0053] 表 4
[0057] 提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0058] 3)干燥方法的研究
[0059] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到 的抗腫瘤活性提取物進行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標，發現真空干燥法、冷凍干 燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對C6細胞抗腫瘤活性提取物進行干燥，其 中，最優為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0060] 表 5
[0062] 因此，花錨抗腫瘤提取物的制備方法為：
[0063] 維吾爾藥花錨經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:〇〇,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用 二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100 :01-100:06,體積比）洗脫2-50倍柱體積， 二氯甲烷：甲醇100 :01-100:06洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件最 優為先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼 用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫15倍柱體積。
[0064] 優選地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫 2-50倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫2-50 倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液干燥。更優選地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑 (二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯 甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液干燥即得。
[0065] 其中，
[0066] 提取物提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合 溶劑、乙醇水混合溶劑，最優條件為甲醇水和乙醇水，提取物提取用有機溶劑用量為藥材重 量的2-50倍（重量/體積比）。
[0067] 1)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0068] 5.花錨抗腫瘤有效提取物（二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液得到的提取物）的抗 腫瘤活性研究
[0069] 利用各種腫瘤細胞，如腦膠質瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝 癌等惡性腫瘤細胞株，分別測試花錨抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC5。結果如下：
[0070] 表 6
[0073] 因此，我們發現，花錨抗腫瘤提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如腦膠質 瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤細胞株的預防及治療。
[0074] 6、花錨抗腫瘤有效提取物的組合物及其制備方法研究
[0075] 1)固體分散體
[0076] 處方
[0077]
[0078] 制備方法：
[0079] 稱取花錨提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質量比分 別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至花錨提取物和載體完全溶解，轉入旋蒸儀 中除去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得花錨提取物PVP包合物。
[0080] 2)環糊精包合物
[0081] 處方：
[0083] 制備方法：
[0084] 將β -環糊精與1-5倍水研勻，加花錨提取物（水難溶性的應先溶于少量有機溶 劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0085] 3)分散片處方：
[0086] 花錨提取物 100 十二烷基硫酸鈉 1 預膠化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交聯聚維酮 10 微晶纖維素 10 微分硅膠 （U
[0087] 制備方法：
[0088] 1.花錨提取物淀粉分散體的制備，精密稱取花錨提取物提取物，加入適量的十二 烷基硫酸鈉，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫度下蒸 干，粉碎，過100目篩；
[0089] 2.稱取處方量，花錨提取物淀粉分散體，交聯聚維酮，預膠化淀粉，用70%乙醇做 濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干45min， 16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0090] 7、花錨抗腫瘤有效提取物的檢測方法研究
[0091] 我們發現，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標示花錨抗腫瘤有效提取物的 特征。見圖1
[0092] 具體條件為：色譜條件：GF254硅膠板，展開系統：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1， 顯色方法：香草醛濃硫酸顯色
【附圖說明】：
[0093] 圖1花錨C6細胞抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0094] 圖2花錨得到的化學組分的TLC色譜圖；
[0095] 圖3花錨得到的化學組分的TLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0096] 以下實施例表示本發明的實用性，本發明不受此限制。
[0097] 實施例1 :
[0098] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL去離子水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06， 體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，真空干燥，即為 該提取物，收率0.53%。
[0099] 實施例2 :
[0100] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06， 體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，真空干燥，即為 該提取物，收率0.45%。
[0101] 實施例3:
[0102] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06， 體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為 該提取物，收率0.43%。
[0103] 實施例4:
[0104] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06， 體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，鼓風干燥，即為 該提取物，收率0.39%。
[0105] 實施例5 :
[0106] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06， 體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，離心干燥，即為 該提取物，收率0.41 %。
[0107] 實施例6:
[0108] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06， 體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為 該提取物，收率0.44%。
[0109] 實施例7 :
[0110] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑 (二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回 收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 46%。
[0111] 實施例8:
[0112] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑 (二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回 收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率0. 49%。
[0113] 實施例9:
[0114] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷： 甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫8倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混 合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:06,體積比）洗脫15倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫 液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 47%。
[0115] 實施例10 :
[0116] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL去離子水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5， 體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，真空干燥，即為 該提取物，收率0.51 %。
[0117] 實施例11 :
[0118] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5， 體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，真空干燥，即為 該提取物，收率0.32%。
[0119] 實施例12 :
[0120] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5， 體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為 該提取物，收率0.31 %。
[0121] 實施例13 :
[0122] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5， 體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，鼓風干燥，即為 該提取物，收率0.35%。
[0123] 實施例14:
[0124] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5， 體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，離心干燥，即為 該提取物，收率0.38%。
[0125] 實施例15 :
[0126] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇， 100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5， 體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為 該提取物，收率0.36%。
[0127] 實施例16 :
[0128] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100: 〇〇,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑 (二氯甲烷：甲醇，100:5,體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收 有機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率0. 47%。
[0129] 實施例17 :
[0130] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6cm內徑小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100: 〇〇,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑 (二氯甲烷：甲醇，100:5,體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液經回收 有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 44%。
[0131] 實施例18 :
[0132] 取維吾爾藥花錨20g，經100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內徑小柱），先用二氯甲烷： 甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:00,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用二氯甲烷：甲醇混 合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:5,體積比）洗脫40倍柱體積，二氯甲烷：甲醇100:06洗脫液 經回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 42%。
[0133] 實施例19 :固體分散體
[0134] 稱取花錨提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質量比分 別放入燒杯中，加入75%乙醇，磁力攪拌器攪拌至花錨提取物和載體完全溶解，轉入旋蒸儀 中去除溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得花錨提取物PVP包合物。
[0135] 實施例20 :環糊精包合物
[0136] 將β -環糊精與1-5倍水研勻，加花錨提取物（水難溶性的應先溶于少量有機溶 劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0137] 實施例21:分散片
[0138] 1.稱取干燥的花錨提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70%的乙醇充分溶 解，加入水溶性淀粉與花錨提取物（I: 1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉碎，過100目篩， 得花錨提取物分散體。
[0139] 2.精密稱取處方量，花錨提取物分散體，交聯聚維酮，可壓性淀粉，用70%乙醇做 濕潤劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權項】
1. 一種維吾爾藥花錨提取物，其特征為，維吾爾藥花錨經溶劑超聲提取，提取液濃 縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:00的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗 脫，繼用體積比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫，二氯甲烷-甲醇100 : 01-100:06洗脫液經回收溶劑，干燥即為該提取物。2. 如權利要求1所述的維吾爾藥花錨提取物，其特征為，先用體積比100:00的二氯甲 烷：甲醇混合溶劑洗脫，繼用體積比100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫，二氯甲烷-甲 醇100:06洗脫液經回收溶劑，干燥。3. 如權利要求1或2所述的維吾爾藥花錨提取物，其特征為，所述的提取用溶劑為甲 醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、甲醇、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑。4. 如權利要求1或3所述維吾爾藥花錨提取物，其特征為，先用體積比100:00的二氯 甲烷-甲醇混合溶劑洗脫2-50倍柱體積，繼用體積比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇 混合溶劑洗脫2-50倍柱體積，優選地，先用體積比100:00的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫 8倍柱體積，繼用體積比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫15倍柱體積。5. 如權利要求2或3所述的維吾爾藥花錨提取物，其特征為，先用體積比100:00的二 氯甲烷：甲醇混合溶劑2-50倍柱體積洗脫，繼用體積比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇 混合溶劑2-50倍柱體積洗脫。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的花錨提取物和藥 學上可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的花錨提取物 或權利要求6所述的藥物組合物。8. 權利要求1-5任何一項所述的花錨提取物或權利要求6所述的組合物或權利要求 7所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用。9. 如權利要求8所述的應用，其特征為，所述的腫瘤為腦膠質瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、 結腸癌、胰腺癌、Η頸癌或肝癌。10. 如權利要求1-5任何一項所述的一種維吾爾藥花錨提取物，其特征在于，用TLC法 檢測，其色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1顯色方法：香 草醛濃硫酸顯色。
【文檔編號】A61P35/00GK105982953SQ201510081744
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月15日
【發明人】王金輝, 黃健, 吳霽蓂
【申請人】沈陽藥科大學