一種娑羅子提取物磷脂復合物及其制備方法
【專利摘要】本發明提供一種娑羅子提取物磷脂復合物及其制備方法，由七葉皂苷含量為50～99％的娑羅子提取物與磷脂為原料，加入反應溶劑攪拌、加熱制備而得。娑羅子提取物與磷脂的質量比為1∶1～1∶6，磷脂可以是大豆磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂或其中兩種或三種磷脂的混合物。本發明的娑羅子提取物磷脂復合物制備工藝簡單，條件易控，生產成本低，產品得率高，適合工業化規模生產。該娑羅子提取物磷脂復合物可以作為藥物原料用于制備七葉皂苷口服制劑，以增加七葉皂苷的胃腸道吸收，提高生物利用度，改善療效。
【專利說明】
一種娑羅子提取物磷脂復合物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于中藥制造技術領域，具體涉及一種娑羅子提取物磷脂復合物及其制備 方法。
【背景技術】
[0002] 娑羅子（Aescul i Semen)是我國藥典收載的傳統中藥材，來源為七葉樹科 植物七葉樹 Aesculus chinensis Bge.、浙江七葉樹 Aesculus chinensis. Bge. var. Chekiangensis (Hu et Fang) Fang 或天師栗 Aesculus Wilsonii Rehd.的干燥成熟種子。 七葉樹在我國四川、甘肅、湖北、湖南、陜西、江西、江蘇、河南、安徽、浙江和云南等十余省份 均有分布，目前市場銷售使用的娑羅子絕大多數來源于野生的七葉樹資源。
[0003] 娑羅子的有效部位為七葉皂苷，這是從七葉樹種子中提取得到的多種三萜皂苷類 成分的混合物，其中主要有效成分為七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C、七葉皂苷D，七葉 皂苷A和七葉皂苷B為β構型，七葉皂苷C和七葉皂苷D為α構型，含量以β-七葉皂苷 為主，通常占總皂苷的40~80%，陜西省漢中地區所產娑羅子藥材的質量較優（β -七葉 皂苷含量高）。七葉皂苷具有明顯的抗炎、抗滲出、恢復毛細血管通透性、提高靜脈張力和 改善微循環等藥理作用，用于治療各種原因所致的軟組織腫脹、骨折水腫、下肢靜脈病、視 網膜水腫、痔瘡、精索靜脈曲張等疾病療效顯著，在骨科、外科、眼科、神經科和痔科等均有 使用。七葉皂苷制劑的適應癥包括：各種手術后腫脹和疼痛，骨折后腫脹，慢性靜脈功能不 全、靜脈曲張、深靜脈血栓形成、血栓性靜脈炎等下肢靜脈病，各種類型的痔瘡，視網膜靜脈 阻塞、中心漿液性視網膜脈絡膜病變和糖尿病視網膜病變等視網膜疾病，周圍面神經麻痹， 精索靜脈曲張，以及神經、淋巴或靜脈水腫引起的疾病。目前國內臨床治療使用的七葉皂苷 主流藥品是注射用七葉皂苷鈉，系將從娑羅子提取的七葉皂苷制成鈉鹽，靜脈給藥，療效確 切。七葉皂苷雖然藥效活性高，但溶血性亦高，血管刺激性也較大，靜脈注射治療時不良反 應發生率可高達30%以上，相關副反應事件屢見報道。患者使用注射用七葉皂苷鈉后可出 現程度不同的皮膚紅腫、靜脈變硬、彈性消失、局部疼痛，常見不良反應有：靜脈炎、靜脈血 管萎縮、手指青紫和皮下壞死、皮疹、全身性過敏反應、過敏性水皰型組織壞死、橫紋肌溶解 等。近年來，臨床和藥品管理部門對注射用七葉皂苷鈉的安全性給予了密切關注，影響了該 藥的治療應用。而七葉皂苷口服吸收差，生物利用度很低，不僅影響七葉皂苷口服制劑的療 效，而且增加了胃腸道局部副反應，并造成自然資源的浪費。
[0004] 磷脂復合物是一種新型載藥系統。藥物活性成分與磷脂形成復合物可改變母體藥 物的理化性質，提高脂溶性，改善藥物穿透生物膜的能力。磷脂是細胞膜的基本組成物質， 與細胞膜的親和力強，當藥物與卵磷脂形成磷脂復合物后，磷脂作為藥物載體能促進活性 成分更好地從親水環境轉移透過親脂環境的腸上皮細胞膜進入細胞后到達血液。磷脂還能 與具有刺激性和不良反應的相關基團作用，或將這些基團包裹，降低藥物刺激性，減少毒副 作用。特別是一些天然活性物質形成磷脂復合物后，可有效地提高活性成分在體內的吸收， 顯著地改善其生物利用度，并延長藥物作用時間，降低藥物不良反應。為了克服七葉皂苷口 服生物利用度低的缺點，本發明提供了一種以七葉皂苷為活性成分的娑羅子提取物磷脂 復合物及其制備方法，這種娑羅子提取物磷脂復合物可以作為藥物原料制成七葉皂苷口服 制劑。國內外尚未見有關娑羅子提取物或七葉皂苷制成磷脂復合物以及應用的相關報道。
【發明內容】
[0005] 為了克服七葉皂苷脂溶性差而導致其口服生物利用度低的缺點，本發明提供了一 種以七葉皂苷為活性成分的娑羅子提取物磷脂復合物，還提供了娑羅子提取物磷脂復合物 的制備方法。
[0006] 為了實現上述目的，本發明提供的娑羅子提取物磷脂復合物及其制備方法，其特 征在于：它是由下述比例的娑羅子提取物與磷脂為原料，加入反應溶劑中攪拌、加熱反應制 備而得：娑羅子提取物與磷脂的重量比為I : 1~1 : 6。娑羅子提取物與磷脂的重量比 優選為I : I. 1~1 : 3。
[0007] 所述的磷脂選自大豆磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂或其中兩種或三種磷脂的混 合物。磷脂優選為大豆磷脂。
[0008] 所述的娑羅子提取物，其特征是娑羅子提取物中含有七葉皂苷的重量百分含量為 50~95%，符合我國《藥品注冊管理辦法》對于中藥有效部位制劑的藥材提取物中有效部 位含量必須占到提取物50%以上的相關規定。娑羅子提取物中含有七葉皂苷的重量百分比 優選為70~95%。
[0009] 所述的有機溶劑選自：四氫呋喃，二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷，正丁醇，乙醇，無水 乙醇，甲醇，或含有上述溶劑的不同比例混合溶劑。
[0010] 本發明提供的娑羅子提取物磷脂復合物制備方法，其特征在于包括以下步驟：
[0011] (1)將娑羅子提取物與磷脂分別加入少量反應溶劑中制成混懸液A和混懸液B ;
[0012] (2)將混懸液A和混懸液B加入全量反應溶劑中攪拌、加熱反應；
[0013] (3)溫度控制在35-80°C，攪拌至澄明；
[0014] (4)減壓回收溶劑，真空干燥，即得娑羅子提取物磷脂復合物。
[0015] 上述全量反應溶劑的用量為娑羅子提取物在反應溶劑中的濃度為0.2~ 3g/100ml〇
[0016] 本發明的原理和應用前景是：七葉皂苷的脂溶性低，導致胃腸道吸收很差。研究 數據顯示，當七葉皂苷鈉片口服劑量（60mg)為七葉皂苷鈉靜脈注射劑量（20mg) 3倍時，口 服給藥后七葉皂苷A和七葉皂苷B組分的AUC。t(藥-時曲線下面積）不足靜脈滴注給藥 的1 % (吳丹：七葉皂苷的人體內定量分析方法及藥代動力學研究，吉林大學碩士學論文， 2007. 06)，表明七葉皂苷的口服生物利用度非常低。七葉皂苷結構中大量的氫鍵易與磷脂 基團反應形成磷脂復合物，增加藥物脂溶性，促進其通過腸上皮細胞膜進入體內循環。本發 明的娑羅子提取物磷脂復合物的制備工藝簡單，條件易控，生產成本低，產品得率高，生產 所用的有機溶劑可以回收循環使用，適合工業化規模生產。本發明提供的娑羅子提取物磷 脂復合物可作為藥物原料制成七葉皂苷口服制劑，改善七葉皂苷的胃腸道吸收，提高生物 利用度，同時可降低七葉皂苷的口服劑量，減少藥物刺激性，降低消化道副反應。
【附圖說明】
[0017] 附圖1是實施例四的HPLC分析對比圖譜，其中a為娑羅子提取物圖譜，b為磷脂 圖譜，c為娑羅子提取物磷脂復合物圖譜，d為娑羅子提取物和磷脂混合物圖譜。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合具體實施例，對本發明所述的技術方案做進一步說明。
[0019] 實施例一：
[0020] 稱取大豆磷脂16. Og加入無水乙醇60ml，攪拌成混懸狀；稱取娑羅子提取物（七 葉皂苷含量79. 3% )8. 0g，加入無水乙醇30ml，攪拌使混懸；將上述兩混懸液加入360ml無 水乙醇反應溶劑中，攪拌，水浴溫度保持50°C，攪拌2小時后溶液澄明，過濾，濾液減壓回收 溶劑，真空干燥48小時，得到淡棕色粉末狀娑羅子提取物磷脂復合物22. 9g，收率95. 42%。
[0021] 實施例二：
[0022] 稱取大豆磷脂12. Og加入四氫呋喃50ml，攪拌成混懸液；稱取娑羅子提取物（七 葉皂苷含量83. 5% ) 7. 0g，加入四氫呋喃30ml，攪拌使混懸；將上述兩混懸液加入520ml四 氫呋喃反應溶劑中，攪拌，水浴溫度55°C，攪拌100分鐘至溶液澄明，過濾，濾液減壓回收溶 劑，真空干燥48小時，得到淡棕色粉末狀娑羅子提取物磷脂復合物17. 9g，收率94. 2 %。
[0023] 實施例三：
[0024] 稱取大豆磷脂75. Og加入正丁醇300ml，攪拌成混懸液；稱取娑羅子提取物 50. 0g(七葉皂苷含量83. 5% )，加入正丁醇200ml，攪拌成混懸液；將上述兩混懸液加入 2500ml正丁醇反應溶劑中，攪拌，水浴溫度60°C，攪拌3小時至溶液澄明，過濾，濾液減壓回 收溶劑，真空干燥48小時，得到娑羅子提取物磷脂復合物120. 5g，收率96. 4%。
[0025] 實施例四：
[0026] 分別稱取a娑羅子提取物（七葉皂苷含量83. 5% )、b大豆磷脂、c實施例三制備 的娑羅子提取物磷脂復合物和d娑羅子提取物與大豆磷脂混合物四份樣品進行HPLC分析。 色譜條件 ：島津1(：-1(^，（：18柱，51^-1(^叩紫外檢測器，以乙腈-甲醇-磷酸（85%磷酸 5.51^水稀釋至100〇11^)(35:7:58)為流動相，流速1.〇1111711^11，檢測波長22〇11111，分析 圖譜見圖1。HPLC分析結果顯示，樣品c娑羅子提取物磷脂復合物的七葉皂苷A和七葉皂 苷B與娑羅子提取物在上述條件下的色譜行為一致，保留時間均為七葉皂苷A21. 78min ;七 葉皂苷B25. 07min。說明娑羅子提取物與大豆磷脂形成的是一種復合物，而不是新化合物。
[0027] 實施例五：
[0028] 藥物經口服給藥的主要吸收部位在小腸，研究藥物腸吸收參數是開發口服藥物的 重要環節。采用大鼠小腸在體單向灌流實驗，比較了娑羅子提取物和娑羅子提取物磷脂復 合物在十二指腸、空腸、回腸、結腸的吸收情況。
[0029] 供試液a娑羅子提取物水溶液；b娑羅子提取物磷脂復合物溶于水的混懸液；a和 b兩者的七葉皂苷濃度相當。
[0030] 實驗模型取禁食12h大鼠，烏拉坦（Ig · kg 4麻醉，沿腹中線打開腹腔，暴露待考 察腸段。用37°C生理鹽水沖洗腸段內容物，至干凈，插入玻璃管并結扎固定。取供試液以 0. 流速栗入腸段，使腸段內充滿供試液，后將流速調至0.2mL· min 1同時開始 計時，約0. 5h后，吸收達到穩定狀態。進口處用已知重量裝有供試液的小瓶進行灌流，每隔 15min在出口處用另一已知重量的小瓶收集一次，稱重量，計算灌入和收集的供試液重量。 于出口處收集流出的灌流液直到120min。實驗結束時，將所灌流的腸段剪下，測量其長度 和內徑。所取樣品置于I. 5mL離心管中，以3000r/min速度離心15min后，精密量取灌流液 2g至IOmL容量瓶中用K-R緩沖液稀釋至刻度，樣品HPLC法測定含量。
[0031] 灌流液重量的矯正采用重量法矯正因腸內水分吸收引起灌流液重量的變化。裝 供試液小瓶和裝接收液小瓶的空瓶重量分別為Ws。和Wr。，15min灌流結束后裝供試液小瓶 和接收液小瓶的重量分別為WsJP Wr i，則入腸液體的重量Win = Wsid-Ws1;出腸液體的重量 Wout = WrfWr。。Win與Wout的差異就是腸道吸收或分泌的水分的重量。
[0032] 小腸吸收部位實驗動物分為2組，每組5只大鼠，分別取供試液a和供試液b (七 葉皂苷濃度均為Img · ml 4各50mL，按'實驗模型'項下方法進行實驗，分別考察各供試液 在十二指腸、空腸、回腸、結腸組各區段吸收情況。按下式計算藥物不同腸段的吸收速率常 數Ka和表觀滲透系數Papp。
[0033]
[0034]
[0035] 式中Qin和Qout分別為腸道進出口灌流液的質量（mg) ;Cin和Cout分別為腸道 進出口灌流液的濃度（mg/mg) ;1和r分別為被灌流腸段的長度（cm)和橫截面半徑（cm) ;Q 為灌流速度（〇. 2ml/min) ;V為灌流腸段的容積。結果見表1和表2。 「00361 表1婆要子提取物在太鼠不同腸段的Ka和PaDD (元土 s, η = 5)
[0040] 比較七葉皂苷含量相當的娑羅子提取物和娑羅子提取物磷脂復合物在十二指腸、 空腸、回腸、結腸的吸收速率常數Ka和表觀滲透系數Papp，發現二者在整個腸段均有吸收， 各腸段Ka和Papp大小順序為結腸> 空腸 > 回腸 >十二指腸，且娑羅子提取物磷脂復合物 的Ka和Papp均顯著高于娑羅子提取物，說明娑羅子提取物制成磷脂復合物后吸收得到明 顯改善，能夠提高藥物的生物利用度。
【主權項】
1. 一種娑羅子提取物磷脂復合物，其特征在于：它是由下述比例的娑羅子提取物與磷 脂為原料，加入反應溶劑攪拌、加熱制備而得：娑羅子提取物與磷脂的質量比為1 : 1~ 1 : 6,所述的娑羅子提取物中含七葉皂苷的重量百分比為50~95%，所述的反應溶劑選 自：四氫呋喃，二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷，正丁醇，乙醇，無水乙醇，甲醇，或含有上述溶劑 的不同比例混合溶劑。2. 根據權利要求1所述的娑羅子提取物磷脂復合物，其特征在于：所述的磷脂是大豆 磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂或其中兩種或三種磷脂的混合物。3. 根據權利要求2所述的娑羅子提取物磷脂復合物，其特征在于：所述的磷脂是大豆 磷脂。4. 根據權利要求1所述的娑羅子提取物磷脂復合物，其特征在于：它是由下述比例的 娑羅子提取物與磷脂為原料，加入反應溶劑攪拌、加熱制備而得：娑羅子提取物與大豆磷脂 的質量比為1 : 1. 1~1 : 3。5. 根據權利要求1所述的娑羅子提取物磷脂復合物，其特征在于：所述的娑羅子提取 物中含七葉皂苷的重量百分比為70~95%。6. -種如權利要求1所述的娑羅子提取物磷脂復合物的制備方法，其特征在于，它包 括以下步驟： (1) 將娑羅子提取物與磷脂分別加入少量反應溶劑制成混懸液A和混懸液B ; (2) 將混懸液A和混懸液B加入全量反應溶劑中攪拌、加熱反應； (3) 反應溫度控制在35~80°C，攪拌至澄明； (4) 減壓回收溶劑，真空干燥，即得娑羅子提取物磷脂復合物。7. 根據權利要求6所述的娑羅子提取物磷脂復合物的制備方法，其特征在于：娑羅子 提取物在全量反應溶劑中的濃度為〇. 2~3g/100ml。
【文檔編號】A61K47/48GK105982926SQ201510063596
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月3日
【發明人】楊雪梅, 王俊卿
【申請人】南京星銀藥業集團有限公司, 深圳市星銀醫藥有限公司