用于控釋或緩釋給藥的微球的制作方法

用于控釋或緩釋給藥的微球的制作方法
【專利摘要】本發明涉及到一種新型的可以緩釋或控釋治療成分的微球制劑組合物及制備方法，主要用于分子量不超過10KD的蛋白或者肽。組合物包含至少一種治療成分、輔助劑(例如，pH敏感成分，即溶解度隨pH發生變化)、生物可降解聚合物。治療成分和輔助劑以粒徑小于10um的細粒形式存在，并被包封于構成微球骨架的生物可降解聚合物中。本發明還提供了制備上述微球組合物的制備方法，治療成分與輔助劑原位沉淀形成好的細微顆粒再后續制備成微球。微球制劑實現了治療成分的長期控釋以及超過95％的高包封率。
【專利說明】用于控釋或緩釋給藥的微球
[0001 ]相關文件與相關申請
[0002] 本申請主張中國專利申請CN201103974717的申請日，2011年12月5日為其優先權 日。上述申請的內容作為參考整合在本申請中。
[0003] 本發明的領域
[0004] 本發明涉及到一種肽藥物艾塞那肽的緩釋劑型的組成，以及這一劑型的制劑方 法。
[0005] 本發明的背景
[0006] 基于聚合物的肽或其他水溶性藥物的緩釋劑型的技術挑戰含有初始突釋、不完全 釋放、在初始或任何階段的滯后釋放、以及活性成分由于聚合物降解產生的酸性而降解。為 了使緩釋劑型能夠注射，載有藥物的聚合物往往被制備成直徑為數十微米的微球，使活性 物質包封于其中。這種場合，微球的包封效率和大小的控制對于治療實踐上可行的微球制 劑成為一個關鍵。盡管一些肽藥物的微球制劑已經上市，上述問題并沒有得到很好的解決。 這些問題在目前銷售中的艾塞那肽微球上便很明顯:療效為一周的艾塞那肽微球在注射后 第三周才開始釋放。本發明揭示了能夠解決上述微球制劑的問題的微球配方和方法，其特 別適用于肽如艾塞那肽。
[0007] 微球有著多種制備方法，如溶劑揮發法、共乳化法、噴霧干燥法、超聲波輔助霧化 法、以及微流控法。最常用的工藝包括將載有藥物的聚合物溶液在與之不互溶的連續相中 乳化形成胚胎微球后的溶劑揮發或萃取。當藥物是肽或其他水溶性成份時，多重乳化，即將 一個乳液在另一個連續相中進一步乳化便成為必要。
[0008] 單重乳化法只適用于脂溶性成份，其可以與作為緩釋控制的聚合物一同溶解在有 機溶劑中。所形成的共溶液進一步分散在親水連續相中，形成胚胎微球，再通過溶劑的揮發 或萃取固化。然而，多數場合，生物物質，如蛋白和肽，只溶解在水中，復乳化法成為必須。如 果后一步乳化的連續相是水溶液，包封于聚合物有機相液珠中的蛋白或肽溶液會泄漏到親 水連續相中，致使包封率降低。對于有著脆弱的構象的蛋白，有機相/水相界面可能是引起 蛋白變性和聚集的有害因素。
[0009] 為避免微包封過程中活性成份向連續相的泄漏，與聚合物溶液不互溶的非水相液 體，如硅油，被用作后一步乳化載藥聚合物溶液的連續相。由于多數蛋白和肽不溶于硅油， 包封率可得到實質性的提高。采用硅油或其他非水連續相的主要缺點在于其必須從微球表 面清除。可觀用量的、可與硅油互溶的有機溶劑便不得不用來清洗微球，造成環境問題。
[0010] 另外一個變通的方法是將蛋白或肽成份事先制備成固體顆粒，再進行微包封。這 一方法叫作"油包固體水包油"（S/0/W)法。本發明將使用S/0/W法，其中將蛋白或肽轉化為 固體顆粒的方法是新穎的。
[0011] 從注射的方便計，微球的直徑需在幾微米到200微米之間，多數情況下最好在20-200微米內。因此，被包封的蛋白或肽的初始顆粒應明顯地小于最終的微球。蛋白或肽顆粒 的合理的直徑應調控在幾個微米或更低。
[0012] 為了降低初始顆粒的尺度，一些研究者通過在肽水溶液中添加與水互溶的低極性 溶劑使之沉淀。然而，這些與水互溶溶劑揮發性較低，難以通過蒸發除去。這樣的場合，萃取 法成為除去這些溶劑的有效方法。
[0013] 本發明的總結
[0014] 本發明揭示了一種緩釋微球劑型的配方，其可在所設計的時段提供接近線性模式 的肽釋放。本發明還揭示了制備這一微球制劑的方法。這一微球制劑至少含有一種肽(或其 他活性成份如分子量小于IOK-可定義為小分子量的蛋白）和一種輔助成份(如其溶解度隨 PH變化的pH敏感成份），兩者均以微粒狀，以及至少一種可生物降解聚合物。該pH敏感成份 (輔助成份的一種）幫助緩沖（中和)聚合物降解產生的酸性并通過調控滲透壓在聚合物降 解過程及后降解過程中加速藥物的釋放。作為制備該微球組合(劑型）的方法之一，肽的細 微顆粒及直徑足夠小(零點幾到幾微米)的PH敏感成份首先要在其溶解的溶液中沉淀出來。 然后，將所形成的混懸液在水相連續相中分散(乳化），形成胚胎微球，再進一步固化。這一 工藝過程按一下步驟列出。
[0015] a)將治療成份(如艾塞那肽)溶于極性溶劑(稱為溶液1，如DMSO或DMF);
[0016] b)將輔助成份(如pH敏感成份)溶于水；
[0017] C)將步驟a)及步驟b)制備的溶液與極性較低的溶劑(稱為溶劑2,如溶解可降解聚 合物的二氯甲烷)以任意順序混合，使肽和PH敏感成份沉淀出來；
[0018] d)將步驟c)制備的混懸液分散于水相連續相，以形成胚胎微球；
[0019] e)去除聚合物中的有機溶劑(溶劑1和溶劑2)，固化胚胎微球。
[0020] 上述組合及工藝過程中所描述的肽或小分子量蛋白包含艾塞那肽、其他GLP-I受 體激動劑、胰島素、降f丐素、亮丙瑞林、曲普瑞林、奧曲肽、及以上的類似物。Ieuprore I in、 1：1^口1:〇代1;[11、0(31^601:丨(16、及類似的治療性肽。上述組合中的口!1敏感劑選自1%(0!02、]\%(1)3、 Zn(OH)2及Zn⑶3。上述組合中用于實現緩釋或控釋的聚合物可以是聚乳酸-聚羥基乙酸 (PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚環己內脂(PCL)、或CBZ-聚偽絲氨酸。聚合物應溶于可原位沉淀藥 物(如肽或蛋白）的溶劑2。
[0021] 這一微球(組合)設計及其制劑方法能夠大幅提高微包封(藥物擔載)效率，降低肽 或蛋白在長時間緩釋周期中的降解，改善藥物釋放模式的線性。
[0022]附圖的簡要說明
[0023]圖1:原位形成的艾塞納肽顆粒及載有艾塞納肽的微球的形態
[0024]圖2:艾塞納肽累計釋放曲線，釋放介質：PBS(pH=7.4) ,Mg(OH)2的含量：（0.0% ? ；6.06% Α；8.825·；11.43%·)
[0025] 圖3: C57小鼠經皮下注射艾塞納肽微球后血糖濃度，注射微球的艾塞那肽劑量分 別為：1 · 25ug/20g，2 · 5ug/20g，5ug/20g 和 10ug/20g ·
[0026] 圖4:皮下注射艾塞納肽微球（?)和空白微球（▲)后的SD大鼠體內中的血藥濃度 曲線
[0027]本發明的詳細描述
[0028] 組合物的設計
[0029] 本發明包括改進了的蛋白肽微球劑型，以及微包封工藝，其稱之為油包固-水包油 方法(S/0/W)，用以制備所說的微球劑型(組合物）。所指的組合物及其制備方法的改進包括 將肽(或沒有結構穩定性問題的蛋白）和/或PH敏感劑通過在溶解聚合物溶液(上文中提到 的溶液2)中沉淀形成細微顆粒。為了保證滿意的高包封率和釋放動力學，這些沉淀的顆粒 的直徑應該在IOmi以下，約Ιμπι最優。
[0030] 工作原理
[0031] 由于固化處理大為降低了肽(或蛋白）在疏水的聚合物基質中的溶解速率，其在S/ 0/W法的微包封過程中，僅有少量的水滲入，肽(或蛋白）滲漏到水相連續相的機會可被阻 滯。
[0032] 在體內（或體外)緩釋過程中，生物可降解聚合物(如PLGA)形成微球的基質可以吸 收體液(或水）導致注射后的微球緩慢溶脹。在有限的體液(或水)滲入到聚合物基質的階 段，PH敏感劑迅速溶解，產生有效的滲透壓，加速聚合物的溶脹，同時加速肽的釋放。當更多 的水(或體液)進入聚合物基質時，PH敏感試劑已經到達飽和溶解度，不再進一步增加滲透 壓。在緩釋速率通常會下降的后期階段，PH敏感劑的溶解度在由聚合物(如PLGA)降解產生 的酸環境中增加。
[0033] 為了確保微球(組合物)設計的工作機制有效，肽(或蛋白以及其他活性成分)顆粒 的尺寸必須足夠小。一般規律是內部顆粒(被微包封在另一顆粒，即微球，中的顆粒)的尺寸 應小于(包封它的)微球尺寸的5%。要達到如此小而的尺寸和相對均一的藥物內部顆粒，助 劑(諸如PH敏感的試劑），一個原位沉淀的步驟被包括在這個制備過程中（方法）敏感劑 可選自Mg(OH) 2, MgCO3, Zn(OH)2和ZnCO3,而肽(或蛋白或別的藥物)及輔助劑(諸如pH敏感試 劑）的原位沉淀則可通過將其在優良溶劑和不良溶劑的混合得以實現。具體操作過程包括 將藥物和助劑溶解在優良溶劑中，然后將所形成的溶液與其不良溶劑混和，促使沉淀形成。 不過，其不良溶劑應當是起控釋作用的生物降解聚合物的良溶劑。起到緩釋或控釋釋放的 聚合物包括聚乳酸-聚羥基乙酸(PLGA)，聚乳酸(PLA)，聚己內酯(PCL)，聚氯甲酸芐酯-偽絲 氨酸內酯(PCBZ-pSL).這種聚合物應當是容易溶解在溶劑2中，而藥物(蛋白或肽)容易在其 溶液中原位形成好的顆粒沉淀。
[0034] 制備過程
[0035]理解了工作原理，操作過程便簡直接。基本的步驟與本發明的總結里描述的相同。 為了提供讀者更容易理解，我們再次將制備步驟列出如下：
[0036] a)將治療成分(如艾塞納肽)溶于極性溶劑中（溶劑1，如:DMSO或DMF);
[0037] b)將助劑(如其溶解度隨pH值變化而變化的pH敏感劑)溶于水中；
[0038] c)將上述步驟a)和b)制備的溶液與弱極性溶劑(溶劑2,如溶解了生物可降解的聚 合物的溶劑二氯甲烷），以任意順序混和，以沉淀肽和PH敏感劑。
[0039] d)將上述步驟c)形成的混懸液分散到的水相連續相中，以形成胚胎微球；
[0040] e)通過除去聚合物相的有機溶劑(溶劑1和溶劑2)，固化上述步驟d形成的胚胎微 球。
[0041] 關于溶劑1(溶解了肽或蛋白的溶劑）與溶劑2以及輔助劑(諸如pH敏感試劑)水溶 液之間的混合順序，操作者可任意安排，1)將肽(或蛋白）溶液加到溶劑2中；2)將溶劑2加到 肽溶液中；3)將pH敏感劑水溶液加到溶劑2中；4)將溶劑2加到pH敏感劑水溶液中；或所有溶 液一起混和。該組合物中的pH敏感劑選自Mg (0H) 2、MgC03、Zn (0H) 2和ZnCO3。
[0042]微粒分散于聚合物溶液的體系一旦形成（S/0)其便可通過文獻報道諸如油包固_ 水包油法(S/0/W)、噴霧干燥法、或冷凍噴霧干燥法(在冷的液體中，如液氮中）制備成微球。
[0043] 溶解肽的極性溶劑揮發性很小的情況下，萃取法應成為去除所制備的微球中的溶 劑的方法選項。
[0044] 為使藥物顆粒和親水性助劑顆粒均勻地分布在油包固（S/0)混懸液中，可在該助 劑水溶液加入表面活性劑。表面活性劑包括但不限于:油酸鈉，硬脂酸鈉，十二烷基磺酸鈉， 聚乙烯醇，羧甲基纖維素鈉，卵磷脂，明膠，透明質酸，兩兩混合或它們的混合物。
[0045] 本發明用艾塞納肽(Exendin-4)作為一個例子來說明微球組合物和其制備方法。 艾塞納肽是美國西南吉拉毒蜴進食時唾液中分泌的含有39個氨基酸的肽。EXendin-4是胰 高血糖素樣肽-I(GLP-I)類似物，同源于哺乳動物GLP-I氨基序列的53%，是一個有效的 GLP-I受體激動劑。Exendin-4可以促進胰島素分泌，發揮葡萄糖濃度依賴性降糖作用，抑制 分泌胰高血糖素和抑制胰島細胞凋亡和延緩胃內容物排空和抑制胃腸道蠕動及其它別的 生理活性，適合用來治療2-型糖尿病。Exendin-4的這些生理活性是類似于GLP-I，但是GLP-1在體內被兩個肽降解酶IV(DPPIV)迅速降解。GLP-I半衰期僅僅1-2分鐘，可迅速被降解。但 是由于一定耐受性，Exendin-4不容易被DPPIV酶降解，體內的循環時間增加到60-90分鐘。 因此艾塞納肽被看作是下一代理想治療II型糖尿病的治療物質。
[0046] 由于所有的肽和蛋白（那些沒有結構穩定性的問題的蛋白）具有高度類似的分子 結構和物理化學性質，用來制備艾塞納肽的方法和劑型過程作為揭示制備這類肽或蛋白的 一個例子加以說明這個方法同樣適用于制備這些類似的蛋白或肽的劑型。因此艾塞納肽將 作為一個例子來幫助理解本發明，但不用于限定本發明的權利。
[0047] 另一個代表性的不限定權利的例子是，聚合物可以是聚乳酸或聚羥基乙酸，或它 們的混合物，其在弱極性的溶劑2中的濃度為5 % -25 % W/V，更優的濃度為7.5 % -2 % W/V。 實施例
[0048]這個實施例用的聚合物是聚乳酸-聚羥基乙酸(PLGA，乳酸:羥基乙酸=50:50，分 子量為14-16k，黏度:0.39)。
[0049] 改進的S/0/W微包封方法
[0050]艾塞納肽微球的制備采用了S/0/W原位乳化溶劑揮發法。艾塞納肽的DMSO溶液和 一定量的Mg(0H) 2加到2ml二氯甲烷含有IOOmg PLGA的溶液混和形成油包固（S/0)的乳液。 上述乳液轉移到水相（1 %的PVA溶液）中，形成水包油-油包固（S/0/W)乳液。同時以250轉/ 分鐘的速度攪拌，微球殘留的溶劑，在室溫，被萃取4個小時而除去。然后離心收集微球并用 二次蒸餾水洗滌微球三次。
[0051 ] 載藥量和包封率分析
[0052]取冷凍干燥的微球（10-15mg)溶于0.5ml的二氯甲烷，再渦旋振蕩后，將該混懸液 離心（5000轉/分，5分鐘），收集顆粒并干燥后，溶于0.5ml蒸餾水。取200μ1用于液相色譜 (HLPC)分析(安捷倫1000,安捷倫科技，美國），其中分離采用反相C-18柱，流動相為0.1 % (V/V)TFA作為緩沖溶液A，0.1%(V/V)TFA+80%(V/V)乙腈作為緩沖溶液B，梯度洗脫60-40%B洗脫40分鐘。艾塞納肽定量檢測的波長為 :280nm。藥物的載藥量=被包封的實際載藥 的量*100/微球重量。包封率=試驗測定載藥量*100/理.論上的載藥量。載藥量和包封率如 下表1，所有劑型的包封率均在90以上。
[0053] 表1隨不同Mg(OH)2含量，艾塞納肽微球的包封率和載藥量。誤差：土SD。
[0055] 微球的形態和顆粒粒徑分配
[0056] PLGA微球的粒徑和表面形態才用日本JSM-6700F(JE0L，日本)掃描電鏡(SEM)進行 觀察。測試樣品用雙面導電膠固定在金屬靶粧上，然后采用JFC-1600噴霧鍍膜器在低于5Pa 真空下，鍍上一層金膜(約60nm厚）。如圖1所示，艾塞那肽微粒的平均粒徑小于200nm，適于 采用微球進行微包封。圖1還顯示了原位SOW法結合SPG膜制備的艾塞那肽微球的SEM圖像。 所形成的艾塞納肽微球的粒徑約60μπι，分布在狹窄的范圍內。
[0057] 微球體外釋放試驗
[0058] 取20~30mg的微球置于試管，加入1ml PBS(pH = 7.4)。這個混合物放在37°C中 IOOrpm恒溫搖動。每隔一段時間，離心樣品取上清液100μΙ用于HPLC分析(安捷倫1100,安捷 倫科技，美國）。同時在試管內補充1〇〇μ1的新鮮PBS，使總的體積保持恒定。然后，這些混合 物進行激烈的震蕩重新混懸微球。混懸液重新放到37°C中IOOrpm恒溫振蕩。圖2顯示了不同 的Mg(OH) 2的含量，艾塞納肽累積釋放率，釋放介質：PBS(pH = 7.4)，氫氧化鎂的含量： (0.0% .4.06% 825·; 11.43%·)。沒有Mg(OH)2的處方，7天后，累積釋放不到 20%;然而含有11.43%的1%(0!〇2,27天后，累積釋放超過77%;8.82%的1%(0!〇2累積釋放 為66.33% Ig(OH)2加速了初期的釋放速率是我們所期望的，原因是水快速進入微球導致 Mg(OH)2溶解產生的滲透壓加速艾塞納肽的釋放速率。在釋放初期，藥物的釋放速率主要是 被擴散到微球內部的水控制。隨后，沒有Mg(OH) 2的微球，一個快速釋放期出現，然后60%的 釋放來自于第7天到第16天，然而微球的釋放總量不到30%。在這個釋放期里，PLGA材料開 始降解產生酸，并進一步加速PLGA的降解。在這個釋放期，藥物釋放速率通常是PLGA降解速 率決定。含有Mg (OH) 2的微球，Mg (OH) 2可以中和PLGA降解產生的酸，以至使得PLGA降解的速 率變慢同沒有Mg (0H) 2的微球相比較。最后所有微球的累積釋放30天全部完成。含有6.06 % 的Mg(OH)2的微球，在釋放期內，幾乎達到零級釋放動力學。
[0059] 在C57小鼠上藥效評價
[0060] 將按上面處方制備好的微球皮下注入C57小鼠體內進行藥效學評價。隨機分成6 組，一組給艾塞納肽溶液，另外4組分別給4個不同劑量的微球，最后剩下的一組給生理鹽 水。實驗前，所有動物進行空腹血糖檢測（空腹12小時），并測定其基礎血糖。結果正常后方 可開始正式實驗。糖負荷為測血糖前半小時腹腔注射，劑量為:20%葡萄糖水溶液，0.2ml/ 20g b. w.。然后再一次測定血糖的濃度。血糖相對于基礎血糖的變化值用來評價其藥效。血 糖的濃度變化測定是用葡萄糖氧化酶試劑盒測定小鼠尾靜脈血的血糖。所有動物于實驗前 一天下午5:00腹腔注射糖溶液，第二天上午9:00接受血糖測定。艾塞納肽溶液組(皮下注射 給藥），在每次糖負荷之前，劑量為〇. 〇25yg/20g;艾塞納肽微球組的四個劑量分別為:6.25μ g/20g、12 · 5yg/20g、25yg/20g、和 50yg/20g。生理鹽水組為 O · 2ml/20g 的生理鹽水。為 了評估 用這種方法制備的艾塞納肽微球的藥效學，我們選擇了含有6.06%的Mg(OH)2艾塞納肽微 球對C57小鼠皮下給藥。如圖3所示，在沒有給藥前，所有組的基礎血糖沒有顯著的差異，然 而每組糖負荷后，微球組，10天后，血糖降低的多比溶液組的多。微球中含有艾塞納肽劑量 為2.5yg和5yg的組，可以達到17天降糖效果。當劑量增加到10yg/20g時，調節血糖的水平可 以到達20天。
[00611 艾塞那肽在SD大鼠血漿濃度
[0062]艾塞那肽的藥動學用雄性SD大鼠評價。SD大鼠接受單針皮下注射艾塞那肽微球， 助懸液為2mg/ml/kg的CMC-Na和甘露醇；均勻分散的微球在2分鐘內注射完。血樣的采取采 用含有甘素鈉的真空采血管進行尾靜脈取血;采血時間點為:給藥前、給藥4小時后、和1、3、 5、7、10、13、16、20天。然后把血樣用500(^的離心力進行離心，收集血漿樣品，并把血漿樣品 儲存在-20 °C的冰箱，待分析其含艾塞那肽的濃度。用Exendin-4的ELISA試劑盒測定血液中 艾塞那肽的濃度(Ek-070-94,鳳凰制藥，美國）。艾塞那肽的標準曲線的根基試劑盒提供要 求建立用10%大鼠血漿進行稀釋，進行測定。如圖4顯示艾塞納肽微球經(含有6.06%的Mg (0H) 2，劑量為2mg/kg)皮下注射后在SD大鼠體內中的血藥濃度曲線。艾塞那肽的血漿濃度 迅速升高，在4小時內達到22.7ng/ml，隨后艾塞那肽的濃度保持22.7ng/ml 1以上，直到16 天。在第13天Cmax仍然達到57. lng/ml，是不少于平均的血衆濃度的3倍。
【主權項】
1. 一種處于微球形式的用以包封并控釋或緩釋一種或多種治療物質的組合物，其包含 至少一種治療成分、輔助劑以及包封所述一種或多種治療成分和所述輔助劑的生物可降解 聚合物。2. 權利要求1所述的處于微球形式的組合物，其中所述一種或多種治療成分為肽、分子 量不超過10K的蛋白或其他親水性成分。3. 權利要求1所述的處于微球形式的組合物，其中所述輔助劑為溶解度依pH的不同而 變化的pH敏感劑。4. 權利要求1所述的處于微球形式的組合物，其中所述生物可降解聚合物是可用于人 體的那些生物可降解聚合物。5. 權利要求1所述的處于微球形式的組合物，其中所述一種或多種治療成分和所述輔 助劑處于直徑小于ΙΟμπι、最好約Ιμπι的細粒的形式，同時所述生物可降解聚合物包封。6. 權利要求2所述的處于微球形式的組合物，其中所述肽選自艾塞那肽、艾塞那肽類似 的GLP-1受體激動劑、降鈣素、亮丙瑞林、曲普瑞林、奧曲肽以及以上的類似物。7. 權利要求3所述的處于微球形式的組合物，其中所述pH敏感劑選自Mg (0Η) 2、MgC03、Ζη (OH)2&ZnC〇3。8. 權利要求4所述的處于微球形式的組合物，其中所述生物可降解聚合物選自聚乳酸-聚羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚環己內脂(PCL)、或CBZ-聚偽絲氨酸。9. 一種用于制備權利要求1所述的處于微球形式的組合物的方法，其步驟含有： a) 將一種或多種治療成分(如艾塞那肽)溶解在極性溶劑(溶劑1)中； b) 將輔助劑(如pH敏感劑)溶于水中； c) 將步驟a)中制備的溶液和步驟b)中制備的溶液以任意順序與低極性溶劑(溶劑2,如 溶解了生物可降解聚合物的二氯甲烷)混合，以沉淀所述一種或多種治療成分和所述輔助 劑； d) 將步驟c)中制備的混懸液分散到水相連續相中，以形成胚胎微球； e) 從聚合物相中除去有機溶劑(溶劑1與溶劑2)，使步驟d)中形成的胚胎微球固化。10. 權利要求9所述的方法，其中所述一種或多種為肽、分子量不超過10K的蛋白或其他 親水性成分。11. 權利要求9所述的方法，其中所述輔助劑為溶解度依pH的不同而變化的pH敏感劑。12. 權利要求9所述的方法，其中所述生物可降解聚合物是可用于人體的那些生物可降 解聚合物。13. 權利要求9所述的方法，其中所述一種或多種治療成分和所述輔助劑的沉淀的尺寸 在直徑上小于l〇ym并且最好約Ιμπι。14. 權利要求9所述的方法，其中步驟c)的順序可以為以下任意一種：1)將步驟a)中制 備的溶液加入溶液2中；2)將溶液2加入步驟a)制備的溶液中；3)將步驟b)中制備的溶液加 入溶液2中；4)將溶液2加入步驟b)中制備的溶液中；或者將上述液體一起混合。15. 權利要求9所述的方法，其中所述極性溶劑（溶液1)為DMS0或DMF，并且低極性溶劑 為二氯甲烷或乙酸乙酯。16. 權利要求10所述的方法，其中所述肽選自艾塞那肽、艾塞那肽類似的GLP-1受體激 動劑、降鈣素、亮丙瑞林、曲普瑞林、奧曲肽、及以上的類似物。17. 權利要求11所述的方法，其中所述pH敏感劑選自Mg (OH) 2、MgC〇3、Zn (OH) 2及ZnC〇3。18. 權利要求12所述的方法，其中所述生物可降解聚合物選自聚乳酸-聚羥基乙酸 (PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚環己內脂(PCL)、或CBZ-聚偽絲氨酸。
【文檔編號】A61J3/00GK105979934SQ201280057268
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2012年12月5日
【發明人】金拓, 胡振華, 袁偉恩
【申請人】金拓