一種抗腫瘤藥物的制備方法

一種抗腫瘤藥物的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種抗腫瘤藥物的制備方法，先將聚合物四唑衍生物和含甲基丙烯酸酯基團的交聯劑加入水或者緩沖液中得到濃度為0.5～10 mg/mL的載體溶液；然后將蛋白質藥物加入載體溶液中，得到混合液；再將混合液注射到有機溶劑中，得到懸浮液；然后進行紫外光照反應得到抗腫瘤藥物。本發明公開的制備方法具有很強的選擇性，載體與包載的藥物，尤其是蛋白質藥物和細胞不反應，能很好的保持藥物、蛋白質和細胞的功效，實現完全、可控的釋放，到達病灶處，納米凝膠緩釋藥物，達到切實有效的治療效果，不會造成現有技術中藥物浪費的問題。
【專利說明】
一種抗腫瘤藥物的制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種抗腫瘤藥物的制備方法。
【背景技術】
[0002] 在過去幾十年，基于抗體、細胞因子、酶以及轉錄因子的蛋白質藥物已被廣泛地用 于糖尿病、心血管疾病和惡性腫瘤等疾病的高效治療(Vermonden T，Censi R，Hennink WE. Chem. Rev. 2012, 112, 2853-2888; Walsh G. Nat. Biotech. 2000, 18, 831-833)。與具有較高毒副作用的化療藥物相比，蛋白質藥物通常具有較高的特異性，較好的治 療效果和較低的毒副作用，在臨床上展現出了優越的疾病治療功效。但這些臨床使用的蛋 白質藥物都是在細胞外起作用。雖然在細胞內起作用的蛋白質藥物很多，但還沒有一個進 入臨床使用，這主要是因為這些蛋白藥物的血漿半衰期短、體內降解快、細胞內吞效率低、 胞內運輸過程慢等原因所致(Lu Y, Sun W, Gu Z. J. Controlled Release 2014，194， 1-19)。納米凝膠通常指由親水性或兩親性高分子鏈通過物理或者化學交聯形成的三維網 狀結構的水凝膠微粒，具有高含水量、良好的生物相容性和多孔結構，納米凝膠可通過物理 交聯和化學交聯制備。物理交聯包括憎水作用、靜電作用、氫鍵作用等，物理凝膠制備通常 條件溫和，不會明顯損傷包載藥物的活性;但存在穩定性較差、釋放包裹的藥物較快的缺 點。化學交聯包括自由基聚合，邁克爾加成反應，酰胺化反應，酶催化反應，銅催化點擊化學 反應等。但這些化學交聯反應通常不具備專一性，這可能使藥物參與交聯反應，導致變性。 而且，盡管已有很多報道使用納米凝膠輸送藥物，但很少能夠實現治療藥物在體內的靶向 高效輸送。所以需要開發專一性強、高效快速、無需催化的交聯反應方法，用于制備具有靶 向性的生物可降解納米凝膠載體，從而得到性能良好的抗腫瘤藥物。

【發明內容】

[0003] 本發明的目的是提供一種抗腫瘤藥物的制備方法，由納米凝膠包載蛋白質藥物制 備得到，得到的藥物專一性強、高效快速。
[0004]為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是:一種抗腫瘤藥物的制備方法，包 括以下步驟： (1) 將聚合物四唑衍生物和含甲基丙烯酸酯基團的交聯劑加入水或者緩沖液中得到得 到載體溶液;所述聚合物四唑衍生物的濃度為〇. 5~10 mg/mL; (2) 將蛋白質藥物加入步驟(1)的載體溶液中，得到混合液； (3) 將步驟(2)的混合液注射到有機溶劑中，得到懸浮液;然后進行紫外光照反應得到 抗腫瘤藥物； 所述聚合物四唑衍生物具有式I結構：
式I; 其中η彡2; R為 H、NH2、NMe2、OMe、NO2、CI、Br、Me、CO 2Me 或者 PhNHBo c; P為透明質酸、透明質酸賴氨酸化合物、透明質酸胱胺化合物、葡聚糖、殼聚糖、膠原蛋 白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚酯； 所述含甲基丙烯酸酯基團的交聯劑具有式II結構：
式II; 其中m ^ 2; CL為透明質酸、透明質酸胱胺化合物、透明質酸賴氨酸化合物、殼聚糖、葡聚糖、膠原蛋 白、聚乙二醇、聚乙二醇-聚酯、丁二胺、己二胺、胱胺、胱氨酸或者賴氨酸。
[0005] 上述技術方案中，所述聚乙二醇為線性或者多臂聚乙二醇，表示為PEG-X-OH，x=2， 4,6或8;所述聚酯為聚丙交酯、聚（丙交酯-Co-乙交酯）、聚己內酯或者聚碳酸酯;所述聚酯 的聚合度為1~20;所述聚乙二醇的分子量為2~100 kg/mol。
[0006] 上述技術方案中，步驟（1)中，甲基丙烯酸酯基團與四唑基團的摩爾比為1:1;所述 緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸半鈉鹽緩沖溶液、三羥甲基氨基 甲烷緩沖溶液或者2-嗎啉乙磺酸緩沖溶液;所述有機溶劑包括丙酮、乙腈或者乙醇;所述聚 乙二醇為線性聚乙二醇或者多臂聚乙二醇;所述聚酯為聚丙交酯、聚（丙交酯-Co-乙交酯）、 聚己內酯或者聚碳酸酯。
[0007] 上述技術方案中，所述紫外光照反應的波長為302~390 nm，強度為0.8~100 mW/ cm2,時間為90~180s 〇
[0008] 上述技術方案中，步驟(3)紫外光照反應后，旋轉蒸發除去有機溶劑，然后用水透 析得到抗腫瘤藥物。
[0009] 本發明中，聚合物四唑衍生物以聚合物作為主鏈，四唑基團通過0或者NH隨機接在 聚合物主鏈末端或側鏈上;式I結構中，P表示聚合物，η多2是指四唑基團接在聚合物主鏈 末端或側鏈上的數量為復數個，比如本發明實施例一中，聚合物為透明質酸賴氨酸化合物， 其重復單元上接有多個四唑基團。
[0010]本發明中，含甲基丙烯酸酯基團的交聯劑可以為大分子也可以為小分子，m多2 是指交聯劑中甲基丙烯酸酯基團的數量為復數個;式II結構中，CL為小分子時，甲基丙烯酸 酯基團接在小分子兩端，如本發明實施例三的結構;CL為聚合物時，甲基丙烯酸酯基團通過 〇或者NH接在聚合物主鏈末端或側鏈上，如本發明實施例二的結構，聚合物為透明質酸胱胺 化合物，其重復單元上接有多個甲基丙烯酸酯基團。
[0011] 本發明中，聚合物四唑衍生物的制備方法為，先向四唑溶液中加入縮合劑與催化 劑，反應得到活化的四唑溶液;然后把聚合物水溶液滴加到活化的四唑溶液中，室溫反應得 到聚合物四唑衍生物;所述聚合物為透明質酸、透明質酸賴氨酸化合物、透明質酸胱胺化合 物、葡聚糖、殼聚糖、膠原蛋白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚酯。
[0012] 上述技術方案中，四唑溶液的溶劑優選為二甲基亞砜、二甲基亞砜與水的混合溶 液、二氯甲烷或氯仿;聚合物為含有氨基或羥基的水溶性聚合物，優選為透明質酸、透明質 酸賴氨酸化合物、透明質酸胱胺化合物、殼聚糖、葡聚糖、聚乙二醇或者聚乙二醇-寡聚酯； 其中所述聚乙二醇為線性或者多臂聚乙二醇；所述聚酯為聚丙交酯、聚（丙交酯-CO-乙交 酯）、聚己內酯或者聚碳酸酯。
[0013]上述技術方案中，水溶性聚合物中的羥基或者胺基與四唑的摩爾比優選為1:0.1 ~2;四唑與縮合劑、催化劑的摩爾比優選為1:2:0.1。
[0014] 比如：先向四唑小分子(Tet)的DMSO溶液中加入縮合劑二環己基碳二亞胺(DCC)、 4_二甲氨基吡啶(DMAP)，反應過夜得到羧基活化的四唑溶液;然后把含有氨基或羥基的聚 合物水溶液逐滴滴加到上述活化的四唑溶液中，再在室溫下攪拌反應18~28小時，得到所 述的聚合物四唑衍生物(P-Tet n);具體反應過程如下：
其中 1?=!1、(：1、8『、]^、順2、匪62、勵2或者016。
[0015] 本發明制備的抗腫瘤藥物，包括納米凝膠以及蛋白質藥物，載體與蛋白質藥物和 細胞不反應，能很好的保持藥物、蛋白質和細胞的功效，實現完全、可控的釋放，達到切實有 效的治療效果，不會造成現有技術中藥物浪費的問題。
[0016] 由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點： 1.本發明公開的抗腫瘤藥物的制備方法具有"點擊化學"的強專一性、快速高效和反 應條件溫和的特點，同時無需銅鹽等毒性催化劑;特別的，本發明通過設計前驅體原料以及 結合注射、紫外反應，得到的納米凝膠穩定性強，包載蛋白質后與藥物結合穩定，保證藥物 在體內循環不受干擾。
[0017] 2.本發明公開的抗腫瘤藥物的制備方法具有很強的選擇性，載體與包載的藥物， 尤其是蛋白質藥物和細胞不反應，能很好的保持藥物、蛋白質和細胞的功效，實現完全、可 控的釋放，到達病灶處，納米凝膠緩釋藥物，達到切實有效的治療效果，不會造成現有技術 中藥物浪費的問題。
【附圖說明】
[0018] 圖1是實施例一中透明質酸賴氨酸四唑衍生物的氫核磁譜圖； 圖2是實施例二中透明質酸胱胺甲基丙烯酸酯衍生物的氫核磁譜圖； 圖3是實施例三中胱氨酸甲基丙烯酸酯衍生物的氫核磁譜圖； 圖4是實施例四中納米凝膠體外控制釋放蛋白質藥物的行為，以及釋放出的蛋白質藥 物的生物活性表征圖； 圖5是實施例五中納米凝膠和載蛋白質藥物的納米凝膠的細胞實驗表征圖； 圖6是實施例六中載蛋白納米凝膠對小鼠皮下人乳腺癌移植瘤的治療表征圖； 圖7是實施例七中載蛋白納米凝膠對小鼠原位肺癌移植瘤的治療表征圖； 圖8是實施例七中載蛋白納米凝膠治療小鼠原位肺癌移植瘤的組織學分析圖。
【具體實施方式】
[0019] 下面結合附圖以及實施例對本發明作進一步描述： 實施例一透明質酸賴氨酸四唑衍生物(HA-Lys-Tet)的合成 在氮氣保護條件下，50 mL兩頸瓶中加入四唑(608 mg)，二甲亞砜10mL，DCC (120 mg) 攪拌24小時，HA-Lys-NH2(#n=35 K，0.4 g)溶于30 mL甲酰胺中，溶解后加入四唑溶液中， 攪拌10 min，加入DMAP (80 mg，），反應48小時，過濾，濾液用水和二甲亞砜混合溶劑透析后 換成純水透析，冷凍干燥后得產品HA-Lys-Tet(產率69 %) ;HA-LyS-Tet核磁表征見附圖1， 1H NMR (D2〇/DMS〇-d6): HA: δ 1.82， 2.70-3.68， and 4.23-4.38; Lys: δ 0.92， 1.06, 1.52, 2.97, 3.61 and 3.95; Tet: δ 7.91,7.92 and 6.79, 6.80〇
[0020] 四臂聚乙二醇四唑衍生物(PEG_Tet4)、殼聚糖四唑衍生物(Chit-Tet)可更換聚合 物制備得到，結構式如下：
[0021] 實施例二透明質酸胱胺甲基丙烯酸酯衍生物(HA-Cy-MA)的合成 HA-Cy-MA分兩步合成，首先胱胺的甲基丙烯酸衍生物(MA-Cy-NH2)由Boc-Cy-NH2和甲 基丙烯酰氯反應后脫Boc保護獲得，然后，在氮氣保護條件下，將MA-Cy-NH2 (14.5 mg，66 ymol)的溶液加入到HA (50 mg, 1.43 μπιο?)被EDC (75.9 mg, 0.396 mmol)和NHS (22.8 mg，0.198 mmol)活化的5 mL二次水中，置于40°C油浴中避光反應24小時，然后用 水透析，冷凍干燥，產率92 %;HA-Cy-MA核磁表征見附圖2/H NMR (D2O): HA: δ 2.00， 2.86-3.88, and 4.44-4.52; Cys: δ 2.70, 3.11-3.15 and 3.56; ΜΑ: δ 1.92, 5.45 and 5.69〇
[0022] 實施例三胱胺酸甲基丙烯酰胺衍生物(MA-Cys-MA)的合成 在冰水浴條件下，將胱氨酸（1.2 g，5.0 mmol)的Na0H(1.5 M，10 mL)溶液滴加到甲基 丙烯酰氯(2.0 mL，20.6 mmol)的DCM(10 mL)中，在冰水浴條件下反應4 h，反應期間用NaOH 溶液調控pH為9.0。反應結束后，用分液漏斗分出水層，再向其逐滴加入約3 mL HC1(2 M)， 過濾，真空干燥，得到白色粉末1.728，產率91%。1^-078-1^核磁表征見附圖3， 1!1匪1?(400 MHz，DMS〇-d6):MA (δ 5·72,5·39和1.85)，Cys (δ 12·92,8·24,4·53,3·18 和3.03)。
[0023] 實施例四光控"四唑-烯"點擊化學納米凝膠用于蛋白質藥物的包載和體外控制釋 放 以包載細胞色素C(CC)為例，將一定量的CC(理論載藥量為10%)加入到聚合物總濃度為 1.25 mg/mL的HA-OEG-Tet和HA-Cy-MA的PB(pH 7.4，10 mM)溶液中，然后將該溶液注射到丙 酮中，再用紫外（320-390 nm，50 mW/cm2)光照90秒。最后旋轉蒸發除去丙酮，用水透析12 h，得到包載CC的納米凝膠(CC-NGs)溶液。用類似的方法可以實現對治療蛋白果粒酶B(GrB) 的高效包裹，得到包載GrB的納米凝膠(GrB-NGs)。蛋白質CC的釋放實驗于37°C在兩種不同 的釋放介質中進行，即PB(pH 7.4，10 mM)和10 mM GSH的PB(pH 7.4，10 mM)溶液。取I mL 包載CC-NGs樣品于蛋白釋放袋(MffCO 350 K)中，并置于25 mL相應的PB釋放介質中。在每個 取樣時間點，取出5 mL釋放介質，并補充相應的新鮮介質。將各時間點取出的樣品凍干，復 溶，用紫外(CC紫外吸收波長是410 nm)測定。每組釋放試驗平行進行三次，最終顯示結果為 實驗所得平均值±標準方差。圖4是上述納米凝膠體外控制釋放蛋白質藥物的行為，以及釋 放出的蛋白質藥物的生物活性表征圖；蛋白質的體外釋放實驗表明在生理條件下(pH 7.4， 37°C)CC能很好地被包裹在HA-NGs中，經48 h后，釋放量約30%(圖4a)。相反，在含有10 mM GSH的還原條件下，10 h后從納米凝膠中釋放出了超過80%的CC。這說明CC-NGs在細胞質的 還原環境下能快速釋放出包裹的蛋白質藥物。
[0024]蛋白質的電子轉移活性的測試是通過檢測其對ABTS轉變為ABTS+的催化效率得到 的。首先釋放出的CC用PBS溶液稀釋至濃度為0.004 mg/mL。同時配置相同濃度的、未經任何 處理的CC，取相同量兩種溶液放入石英樣品池中，向兩種溶液中加入相同量的含有10 yL的 0.045 M的過氧化氫溶液和100 yL的I mg/mL的ABTS的I3BS溶液。倒置使之混合好并馬上用 UV分光光度計讀在410 nm處的吸收值，并以此為零點，每個15秒測一次。每個時間點對應的 紫外吸收值減去第一個點的吸收值從而得到吸收值的變化（Δ A)，以Δ A對時間作圖表示其 活性變化隨時間的變化。附圖4b為上述釋放出的蛋白活性檢測圖，結果顯示從納米凝膠里 釋放出來的CC仍然能較快地催化ABTS的氧化，催化速率和未經任何處理的CC的接近，證實 了從納米凝膠中釋放出的蛋白質仍能較好地保持活性。
[0025]實施例五空納米凝膠和包載有蛋白質藥物的納米凝膠的細胞實驗 用大分子交聯劑綜合利用反相納米沉淀法和光控"四唑-稀"交聯法制備透明質酸納米 凝膠，制備如下：將實施例一和實施例二制備的HA-Lys-Tet和HA-Cy-MA以摩爾比1:1溶于 的ro(pH 7.4，10 mM)中，制備得到濃度為1.25 mg/mL的聚合物溶液，然后混合溶液注射到 IOOmL丙酮中，用紫外光(波長320-390 nm，光強60 mW/cm2)福射3 min，旋蒸除去丙酮后用 PB透析，冷凍干燥得到納米凝膠。
[0026]測試空納米凝膠的細胞相容性。將成纖維細胞(L929)、乳腺癌細胞(MCF-7)、腦膠 質瘤細胞(U87)和肺癌細胞(A549)分別鋪在96孔細胞培養板上，每個孔大約5000個細胞，再 加入含有10 %小牛血清、1%谷氨酸鹽、抗生素青霉素（1〇〇 IU/mL)和鏈霉素（100 yg/mL)的 DMEM培養基，再置于37°C，5%二氧化碳條件下培養12 h。然后，加20 yL納米凝膠的ro(10 mM，pH 7.4)溶液(最終納米凝膠的濃度為0.2，0.4，0.6，0.8和1.0 mg/mL)到每孔中，再在37 °C，5%二氧化碳條件下培養48 h。隨后，向每孔加入3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四 氮唑溴鹽(MTT)的PBS溶液（15 yL，5 mg/mL)，并放入培養箱中繼續培養。4 h后，移除含有 MTT的培養液，再加入150 yL DMSO用于溶解活細胞與MTT生成的紫色結晶甲瓚，并用酶標儀 (Bio Tek)測定每個孔在492 nm處的紫外吸收。細胞相對存活率通過與只有空白細胞的對 照孔在492 nm處的吸收相比得到，每組實驗平均進行4次。圖5是上述納米凝膠和載蛋白質 藥物的納米凝膠的細胞實驗表征圖。
[0027]附圖5a為細胞存活率圖，可以看出，48小時后加入納米凝膠細胞的存活率均達到 90 %以上，說明透明質酸納米凝膠沒有毒性。
[0028] CC-NGs和GrB-NGs的細胞毒性也是通過MTT法測定。將包載蛋白藥物的納米凝膠加 入乳腺癌細胞(MCF-7,⑶44受體高表達），肺癌細胞(A549,⑶44受體高表達)和腦膠質瘤細 胞(U87，CD44受體低表達）中，并培育4 h。然后將載蛋白的納米凝膠的培養基吸走，再加入 新鮮培養基于37°C，5%二氧化碳條件下繼續培養92 h。培養結束后向每孔中加入10 yL MTT 的PBS溶液(5 mg/mL)并放入培養箱中，繼續培養4 h使MTT與活細胞充分作用。隨后移除含 有MTT的培養液，并加入150 yL DMSO用于溶解活細胞與MTT生成的紫色結晶甲瓚，并用酶標 儀(Bio Tek)測定每個孔在492 nm處的紫外吸收。細胞相對存活率計算方法如上。封閉實驗 是先用HA(5 mg/mL)與MCF-7細胞孵育4 h，然后再加入包載包載蛋白質的納米凝膠。結果表 明CC-NGs對MCF-7細胞有較高的抗腫瘤活性，其細胞的半抑制濃度（IC50)為0.52 μΜ(圖 5b)。相反，自由CC即便在濃度高達6.2 μΜ時仍無明顯的細胞毒性，這主要是因為CC內吞進 入細胞的能力很差。另外，CC-NGs對CD44受體低表達的U87細胞表現出明顯減小的凋亡活 性，而且CC-NGs對預先封閉⑶44受體的MCF-7細胞的抗腫瘤活性明顯降低，這些結果說明 CC-NGs是通過CD44受體介導內吞機理進入細胞。同時，GrB-NGs對CD44受體高表達的MCF-7 和Α549細胞都表現出了較高的體外抗腫瘤活性，其分別為3.0 ηΜ和8.1 ηΜ(圖5c)。
[0029] 實施例六載蛋白納米凝膠對小鼠皮下人乳腺癌移植瘤的治療 首先使用皮下注射MCF-7細胞（I X IO7)的PBS溶液(50 yL)到裸鼠的右后側建立了人 乳腺癌皮下腫瘤模型。當腫瘤的體積達到30 mm3后，裸鼠被隨機分成4組，每組5只。然后，通 過靜脈注射方法分別向每組荷瘤老鼠注射GrB-NGs (25 yg GrB equiv./kg)、GrB-NGs (100 yg GrB equiv./kg)、空納米凝膠和PBS緩沖溶液，每三天給藥一次，總共給藥四次。月中 瘤體積以及裸鼠體重每隔一天測量一次。腫瘤體積的計算公式:體積=y 2*a*b*c，a是腫瘤 最長邊，b是腫瘤最寬邊，c是腫瘤的高度。附圖8為皮下乳腺癌的治療，可以發現PBS組和空 納米凝膠組的腫瘤體積生長快速。而GrB-NGs在劑量為25 yg GrB equiv./kg和100 yg GrB equiv./kg時都能有效地抑制腫瘤的生長，且劑量越高對腫瘤生長的抑制效果越明顯。同 時，GrB-NGs組與I 3BS組相似，都沒有導致動物體重降低，說明GrB-NGs沒有明顯的毒副作用 (參見圖6)。
[0030] 實施例七載蛋白納米凝膠對小鼠原位人肺癌移植瘤的治療 首先通過注射帶Iuciferase的A549細胞（I X IO7)的I3BS溶液(50 yL)到裸鼠的肺部 建立了人肺癌原位腫瘤模型。當腫瘤細胞的熒光值達到20000 p/s/cm2/sr時，裸鼠被隨機 分成3組，每組6只。然后，每三天通過尾靜脈注射分別向每組荷瘤老鼠注射GrB-NGs(150 Hg GrB equiv. /kg GrB)、空白納米凝膠和I3BS，總共給藥四次。腫瘤出的熒光和裸鼠體重每三 天記錄一次，圖7是載蛋白納米凝膠對小鼠原位肺癌移植瘤的治療表征圖。附圖7a_c為肺癌 原位治療圖，PBS組和空納米凝膠組的腫瘤處熒光強度隨時間明顯增強，表明腫瘤在快速生 長。而GrB-NGs治療中的腫瘤熒光強度較弱，這說明GrB-NGs能有效地抑制裸鼠肺癌的生長。 同時，GrB-NGs組的小鼠體重變化并不顯著（圖7d)，這一方面表明GrB-NGs無明細的毒副作 用，另一方面也說明GrB-NGs能有效地抑制小鼠原位肺癌的生長，使小鼠生長狀況良好。相 反，PBS和空白納米凝膠對照組的小鼠體重均顯著降低，這是因為小鼠隨著原位肺癌的快速 生長，身體狀況急劇下降。小鼠的生存實驗也表明GrB-NGs治療組的小鼠在整個觀察期間 (40天），沒有死亡發生；而PBS和空白納米凝膠對照組的小鼠在治療觀察結束后，全部死亡 (圖iehH&E染色可以發現GrB-NGs對體內主要臟器(心臟、肝臟、腎等)沒有副作用（圖8)，這 進一步表明了GrB-NGs不會引起明顯的毒副作用。
【主權項】
1. 一種抗腫瘤藥物的制備方法，包括W下步驟： (1) 將聚合物四挫衍生物和含甲基丙締酸醋基團的交聯劑加入水或者緩沖液中得到載 體溶液;所述聚合物四挫衍生物的濃度為0.5~10 mg/mL (2) 將蛋白質藥物加入步驟(1)的載體溶液中，得到混合液； (3) 將步驟(2)的混合液注射到有機溶劑中，得到懸浮液;然后進行紫外光照反應得到 抗腫瘤藥物； 所述聚合物四挫衍生物具有式I結構：式I; 其中η > 2; R為山畑2、醒02、〇16、備2、(：1、化、]^、〇)2]^或者化畑8〇。； Ρ為透明質酸、透明質酸賴氨酸化合物、透明質酸脫胺化合物、葡聚糖、殼聚糖、膠原蛋 白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚醋； 所述含甲基丙締酸醋基團的交聯劑具有式II結構：式II; 其中m > 2; 化為透明質酸、透明質酸脫胺化合物、透明質酸賴氨酸化合物、殼聚糖、葡聚糖、膠原蛋 白、聚乙二醇、聚乙二醇-聚醋、下二胺、己二胺、脫胺、脫氨酸或者賴氨酸。2. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:步驟（1)中，甲基丙締酸醋 基團與四挫基團的摩爾比為1:1。3. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:所述緩沖液包括憐酸鹽緩 沖液、4-(2-?乙基)-1-贓嗦乙燒橫酸半鋼鹽緩沖溶液、Ξ徑甲基氨基甲燒緩沖溶液或者2- 嗎嘟乙橫酸緩沖溶液。4. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:所述有機溶劑包括丙酬、 乙臘或者乙醇。5. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:所述聚乙二醇為線性聚乙 二醇或者多臂聚乙二醇;所述聚醋為聚丙交醋、聚(丙交醋-C0-乙交醋）、聚己內醋或者聚碳 酸醋。6. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:聚合物四挫衍生物的制備 方法為，先向四挫溶液中加入縮合劑與催化劑，反應得到活化的四挫溶液;然后把聚合物水 溶液滴加到活化的四挫溶液中，室溫反應得到聚合物四挫衍生物;所述聚合物為透明質酸、 葡聚糖、殼聚糖、膠原蛋白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚醋。7. 根據權利要求6所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:所述四挫與縮合劑、催化 劑的摩爾比為1:2:0.1。8. 根據權利要求6所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:所述縮合劑為二環己基碳 二亞胺;所述催化劑為4-二甲氨基化晚。9. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于:所述紫外光照反應的波長 為302~390 nm，強度為0.8~100 mW/cm2,時間為90~180s。10. 根據權利要求1所述抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于：步驟（3)紫外光照反應 后，旋轉蒸發除去有機溶劑，然后用水透析得到抗腫瘤藥物。
【文檔編號】A61P35/00GK105963703SQ201610536411
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月8日
【發明人】鄧超, 陳景, 孟鳳華, 鐘志遠
【申請人】蘇州大學張家港工業技術研究院