人參皂苷c-k與拉莫三嗪的組合物在制備抗癲癇藥物中的應用

人參皂苷c-k與拉莫三嗪的組合物在制備抗癲癇藥物中的應用
【專利摘要】本發明涉及新藥物及用途，具體提供了人參皂苷C?K與拉莫三嗪的組合物在制備抗癲癇藥物中的應用。本發明經動物實驗證實，人參皂苷C?K與拉莫三嗪的組合物能顯著延長癲癇發作潛伏期，降低癲癇發作強度，縮短癲癇發作持續時間，降低發作后體重丟失。表明人參皂苷C?K與拉莫三嗪組合物能緩解或控制癲癇發作，抑制癲癇發生發展，并可通過減少拉莫三嗪的使用劑量、進而減輕拉莫三嗪導致的藥物不良反應。
【專利說明】
人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物在制備抗癲癇藥物中的 應用
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種新藥物組合物及其新用途領域，特別涉 及人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物在制備抗癲癇藥物中的新用途。
【背景技術】
[0002] 癲癇是一種腦部疾患，其特點是持續存在能產生癲癇發作的腦部持久性改變，并 出現相應的神經生物學、認知、心理學以及社會學等方面的后果。全球約有7000萬癲癇患 者，其中中低等收入國家占90%以上，且每年約240萬新診斷患者。據中國抗癲癇協會統計 顯示，我國約有1000萬癲癇患者，每年新增45萬多癲癇患者，其中農村地區約占三分之二， 治療缺口達70%。癲癇發作本身突然、不可預知，易造成認知損害和心理障礙，嚴重影響患 者的身心健康，給家庭和社會帶來沉重的經濟負擔。癲癇已成為妨礙人類健康和社會發展 的復雜性神經系統疾病。
[0003] 臨床上癲癇的治療包括藥物治療、手術治療、心理治療、飲食治療等，其中以藥物 治療為主。傳統的抗癲癇藥物如卡馬西平、苯妥英鈉、丙戊酸鈉、苯巴比妥等存在個體差異 大、治療范圍窄、不良反應嚴重、以及藥物相互作用等缺陷。拉莫三嗪是一種苯三嗪衍生物， 于1991年在歐洲首次上市，主要通過阻滯電壓門控鈉通道，減少鈉離子內流，增加神經元的 穩定性而發揮抗癲癇作用。因其療效確切，對認知功能、睡眠、行為等方面無顯著影響，國內 外多份指南和共識推薦為治療頑固部分性癲癇發作、原發性全身性癲癇、失神性發作、青少 年肌陣攣性癲癇的首選藥物。隨著拉莫三嗪在臨床上的廣泛應用，其不良反應也逐漸報道， 如共濟失調、復視、頭暈、頭痛、惡心、皮疹、致畸等，尤以皮疹最為常見，發生率在10%，曾有 發生罕見致命性不良反應Stevens-Jonhson綜合征和中毒性表皮壞死松解癥的病例報道。 研究結果顯示，拉莫三嗪的藥物不良反應發生與用藥劑量有關。然而，減少給藥劑量的同時 也將降低拉莫三嗪的抗癲癇作用。因此，臨床上迫切需要尋求既能維持拉莫三嗪的抗癲癇 作用和療效、又能降低其藥物不良反應的有效途徑。
[0004] 人參皂苷C-K是一種四環三萜達瑪烷型人參皂苷。其化學名為:20(S)-0-f3-D-吡喃 葡萄糖基原人參二醇，分子式:C36H6108，分子量:621.88，脂溶性較強，水溶性低。該化合物 在天然植物中含量極少，是人參皂苷Rbl、Rb2和Rc在機體腸道的主要降解產物，目前主要利 用生物轉化法制備而成。研究發現人參皂苷C-K具有抗癌、抗炎、降糖、改善記憶、保肝等藥 理學活性。近年來人參皂苷C-K在神經系統疾病的研究備受科研人員關注。人參皂苷C-K可 抑制腦缺血再灌注引起的神經損傷。此外，人參皂苷C-K可抑制鈉離子通道開放，調控GABA/ NMDA受體活性增強GABA介導的神經抑制效應。鑒于人參皂苷C-K的神經保護、調控神經效應 以及其皮膚保護作用，推測人參皂苷C-K可能具有抗癲癇作用，可能減輕拉莫三嗪引起的不 良反應。然而，迄今國內外尚未見人參皂苷C-K抗癲癇的研究、以及人參皂苷C-K與拉莫三嗪 的組合物用于癲癇治療的研究報道。
[0005]
[0006] 人參皂苷C-K的化學結構式

【發明內容】

[0007] 本發明旨在克服現有技術的問題，提供了人參皂苷c-κ與拉莫三嗪的組合物在制 備抗癲癇藥物中的應用。人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物可直接作為抗癲癇藥物用。所述 人參皂苷C-κ是經常規的微生物轉化或酶轉化制備而成，純度要求達98%以上。所述抗癲癇 藥物中人參皂苷C-K占總藥量的1 一 99%。優選地，所述抗癲癇藥物中人參皂苷C-K與拉莫三 嗪的質量比（臨床用量mg/d)為（10-1800): (5-700)。所述抗癲癇藥物是緩解或控制癲癇 發作、抑制癲癇發生發展以及癲癇疾病相關并發癥的藥物，包括皮疹、共濟失調、焦慮、失 目民、抑郁、精神疾病等。所述癲癇發作是頑固性部分性癲癇、原發性全身性癲癇、失神性發 作、肌陣攣性癲癇等。所述慢性癲癇發生是熱性驚厥、腦外傷、腦血管疾病、感染、腦腫瘤、癲 癇持續性發作、神經退行性疾病等原因導致的癲癇，以及由神經元損傷后炎癥、膠質增生、 海馬神經再生等引起的癲癇發生。所述抗癲癇藥物可以是人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合 物，還可以是組合物與藥學賦形劑或載體組成的藥物，還可以是組合物與其他抗癲癇藥物 的組合物。所述其他抗癲癇藥物為苯妥英鈉、苯巴比妥、卡馬西平、奧卡西平、左乙拉西坦、 托吡酯、拉莫三嗪、加巴噴丁中的至少一種。其劑型可以是任何劑型，包括注射劑、溶液劑、 乳劑、口服液、混懸劑、栓劑、膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、凍干粉針劑、散劑、顆粒劑、沖劑、膠 囊劑、丸劑、片劑、貼劑或緩釋制劑。給藥方式可以是口服、注射、口鼻噴霧、腸腔或經皮給 藥。所述藥學上可接受的載體包括包括抗氧化劑、螯合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、潤 濕劑、分散劑、潤滑劑、腸溶材料、PH調節劑、矯味劑、色素等。
[0008] 本發明人參皂苷C-κ用于大鼠的劑量為1 一320mg/kg/次，一日2次。優選為80-320mg/kg次，一日2次。本發明拉莫三嗪用于大鼠的劑量為1 一40mg/kg/次，一日1次。優選為 5-40mg/kg次，一日1次。通過研究發現，人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物具有協同增強抗 癲癇的作用和療效，能減少拉莫三嗪的使用劑量、進而降低其藥物不良反應的發生，可用于 制備防治癲癇及其并發癥的藥物。
[0009] 本發明人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物治療癲癇發作以及癲癇疾病診治過程中 并發的皮疹、共濟失調、精神障礙、認知損害等。能協同增強抗癲癇的作用和療效，減少拉莫 三嗪的使用劑量，進而減輕其導致的藥物不良反應。
[0010] 總之，本發明利用癲癇動物模型首次證實人參皂苷C-K具有抗癲癇作用，同時首次 研究了人參皂苷C-K與拉莫三嗪組合物的抗癲癇作用，結果顯示該組合物能協同增強抗癲 癇作用和療效，減少拉莫三嗪的藥物用量，進而降低其導致的皮疹、共濟失調、復視等不良 反應的發生率。
【附圖說明】
[0011] 圖1.人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物抑制氯化鋰-匹羅卡品誘導的癲癇發作;B、 C、D、E分別為癲癇模型組，拉莫三嗪（20mg/kg)組，人參皂苷C-K(160mg/kg)組，拉莫三嗪 (20mg/kg)+人參皂苷C-K(160mg/kg)組，#表示與人參皂苷C-K或拉莫三嗪組比較，P〈 0.05 ;*，**，*** 表示與癲癇模型組比較，Ρ〈0· 05,0.01,0.0001;
[0012] 圖2.人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物抑制戊四氮誘導的癲癇發作;B、C、D、E分別 為癲癇模型組，拉莫三嗪（20mg/kg)組，人參阜苷C-K( 160mg/kg)組，拉莫三嗪（20mg/kg)+人 參皂苷C-K(160mg/kg)組，#，##表示與人參皂苷C-K或拉莫三嗪組比較，P〈0.05， 0.01 ;*，**，*** 表示與癲癇模型組比較，Ρ〈0· 05,0.01,0.0001;
[0013] 圖3.不同質量配比的組合物對戊四氮誘導的急性癲癇模型大鼠行為學的影響;Β、 (：、04、？、6分別為癲癇模型組，人參皂苷(：-1((32〇1^/1^)組，人參皂苷(：-1((32〇1^/1^)+拉莫 三嗪（10mg/kg)組，人參阜苷C_K( 160mg/kg)+拉莫三嗪（20mg/kg)組，人參阜苷C_K(80mg/ kg) +拉莫三嗪(40mg/kg)組，拉莫三嗪(40mg/kg)組;#，##，###表示與人參皂苷C-K或拉莫三 嗪組比較，Ρ〈〇· 05,0.01,0.001 ;*，#，*# 表示與癲癇模型組比較，Ρ〈0· 05,0.01,0.001。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物干預氯化鋰-匹羅卡品誘導的急性癲癇 模型
[0015] 1.實驗方法
[0016] 1.1劑量設計和分組
[0017]實驗分為正常對照組、癲癇模型組、拉莫三嗪組（20mg/kg)、人參皂苷C-K組 (160mg/kg)、人參阜苷C-K(160mg/kg)合用拉莫三嗪組(20mg/kg)組。（見表1).
[0018] 表1實驗分組和劑量設計
[0020] 1.2實驗步驟
[0021] SPF級健康雄性SD大鼠50只（體重180-220g)，隨機分為正常對照組(A組）、癲癇模 型組(B組）、拉莫三嗪組(C組）、人參皂苷C-K組(D組）、人參皂苷C-K+拉莫三嗪組(E組），每組 10只。每日實驗前將拉莫三嗪或人參皂苷C-K用0.5 %CMC-Na按劑量配制成相應濃度，現配 現用。每天給藥前稱量大鼠體重，按IOmVkg灌胃給藥，人參皂苷C-K 2次/日，拉莫三嗪1次/ 日，連續4天且每天給藥時間相同。A組給予相同體積生理鹽水，B組給予相同體積0.5%CMC-Na。第4天下午4:00左右腹腔注射氯化鋰溶液（127 1^/1^，1.?.)。第5天給藥后3〇1^11進行腹 腔注射溴甲基東莨菪堿溶液（111^/1^，1?.)以減輕匹羅卡品引起的外周不良反應。隨后 30min腹腔注射鹽酸匹羅卡品溶液（30mg/kg，i.p.)，使氯化鋰與匹羅卡品給藥間隔在18-20h之間。給予匹羅卡品后利用視頻監控系統密切觀察大鼠行為變化2h，按Ra Cine分級標準 評估癲癇發作強度，記錄癲癇發作潛伏期（自鹽酸匹羅卡品給藥完畢開始計時、直至首次出 現前肢陣攣為止）、發作強度（以發作級別最高為準）。（分級見表2)
[0022] 表2 Racine分級標準
[0024] 1.3檢測指標
[0025]按照表2的Racine分級標準評估大鼠行為學變化，記錄大鼠癲癇發作強度、發作潛 伏期。
[0026] 1.4統計方法
[0027]采用SPSS19.0進行統計分析，統計學意義的水平設定為P〈0.05。采用均數土標準 差(mean 土 SD)。用Leven ' s test方法檢驗正態性和方差齊性。如果符合正態性和方差齊性， 用單因素方差分析(One-way AN0VA)和post Hoc LSD進行統計分析;如果不符合正態性和 方差不齊，則用Kruskal -Wal I i s檢驗。如果Kruskal -Wal I i s檢驗有統計學意義(P〈0.05 )，則 用Dunnett's Test(非參數方法)進行比較分析。評價時考慮統計學差異和生物學意義。
[0028] 2.結果
[0029] 2.1人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物抑制氯化鋰-匹羅卡品誘導的癲癇大鼠發作
[0030]與模型組相比，人參皂苷C-K顯著延長癲癇發作潛伏期，降低發作級別（圖1)。此 外，與拉莫三嗪或人參皂苷C-K單獨用藥相比，人參皂苷C-K與拉莫三嗪合用能夠顯著延長 癲癇發作潛伏期，降低發作強度。表明人參皂苷C-K具有一定的抗癲癇作用，且能增強拉莫 三嗪的抗癲癇療效。
[0031 ]實施例2人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物干預戊四氮誘導的急性癲癇模型
[0032] 1.實驗方法
[0033] 1.1劑量設計和分組
[0034]實驗分為正常對照組、癲癇模型組、拉莫三嗪組（20mg/kg)、人參皂苷C-K組 (160mg/kg)、人參阜苷C-K(160mg/kg)合用拉莫三嗪組(20mg/kg)組。（見表3)。 「00351 妄·拍知客I丨是沿ff
[0037] 1.2實驗步驟
[0038] SPF級健康雄性SD大鼠50只（體重180-220g)，隨機分為正常對照組(A組）、癲癇模 型組(B組）、拉莫三嗪組(C組）、人參皂苷C-K組(D組）、人參皂苷C-K+拉莫三嗪組(E組），每組 10只。每日實驗前將拉莫三嗪或人參皂苷C-K用0.5 %CMC-Na按劑量配制成相應濃度，現配 現用。每天給藥前稱量大鼠體重，按IOmVkg灌胃給藥，人參皂苷C-K 2次/日，拉莫三嗪1次/ 日，連續4天且每天給藥時間相同。A組給予相同體積生理鹽水，B組給予相同體積0.5%CMC-Na。第5天上午給藥后Ih進行腹腔注射戊四氮溶液(60mg/kg，i.p.)隨后視頻監控系統密切 觀察大鼠行為變化30min，按Racine分級標準評估癲癇發作強度，記錄癲癇發作潛伏期（自 戊四氮給藥完畢開始計時、直至首次出現肌陣攣為止）、發作級別（以最高級別為準）、發作 持續時間。
[0039] 1.3檢測指標
[0040] 按照表2的Racine分級標準評估大鼠行為學變化，記錄大鼠癲癇發作強度、發作潛 伏期、發作持續時間。
[0041 ] 1.4統計方法
[0042]采用SPSS19.0進行統計分析，統計學意義的水平設定為P〈0.05。采用均數土標準 差(mean 土 SD)。用Leven ' s test方法檢驗正態性和方差齊性。如果符合正態性和方差齊性， 用單因素方差分析(One-way AN0VA)和post Hoc LSD進行統計分析;如果不符合正態性和 方差不齊，則用Kruskal -Wal I i s檢驗。如果Kruskal -Wal I i s檢驗有統計學意義(P〈0.05 )，則 用Dunnett's Test(非參數方法)進行比較分析。評價時考慮統計學差異和生物學意義。 [0043] 2.結果
[0044] 2.1人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物延長戊四氮誘導的癲癇大鼠發作
[0045]與癲癇模型組相比，人參皂苷C-K與拉莫三嗪合用顯著降低癲癇發作級別，延長癲 癇發作潛伏期，縮短發作持續時間（圖2)。與拉莫三嗪或人參皂苷c-κ單用相比，人參皂苷εκ 與拉莫三嗪合用后其抗癲癇作用更強。
[0046] 3.實驗小結
[0047]人參皂苷C-K延長癲癇發作潛伏期，人參皂苷C-K與拉莫三嗪合用的抗癲癇作用強 于拉莫三嗪或人參皂苷C-K單用。因此，人參皂苷C-K與拉莫三嗪組合物具有協同抗癲癇的 作用和療效，可通過減少拉莫三嗪的使用劑量、進而減輕拉莫三嗪用藥導致的藥物不良反 應。
[0048] 實施例3不同質量配比人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物干預戊四氮誘導的急性 癲癇模型
[0049] 1.實驗方法
[0050] 1.1劑量設計和分組
[0051] 實驗分為正常對照組、癲癇模型組、組合物干預組。（見表4)。
[0052] 表4分組給藥
[0054] 1.2實驗步驟
[0055] SPF級健康雄性SD大鼠70只（體重180-220g)，隨機分為正常對照組(Α組）、癲癇模 型組(B組）、組合物干預1、2、3、4、5組(C、D、E、F、G組），每組10只。每日實驗前將拉莫三嗪、人 參皂苷C-K和組合物用0.5 % CMC-Na按劑量配制成相應濃度，現配現用。每天給藥前稱量大 鼠體重，按lOml/kg灌胃給藥，2次/日，連續5天且每天給藥時間相同。A組給予相同體積生理 鹽水，B組給予相同體積0.5%CMC-Na。第5天上午給藥后lh(8:00-10:00)進行腹腔注射戊四 氮溶液(60mg/kg，i .p.)隨后視頻監控系統密切觀察大鼠行為變化30min，按Racine分級標 準評估癲癇發作強度，記錄癲癇發作潛伏期（自戊四氮給藥完畢開始計時、直至首次出現肌 陣攣為止）、發作級別（以最高級別為準）、發作持續時間。
[0056] 2.實驗結果
[0057] 1.不同配比人參皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物抑制戊四氮誘導的癲癇發作
[0058]與癲癇模型組相比較，人參皂苷C-K與拉莫三嗪組合物顯著降低癲癇發作級別，延 長發作潛伏期，縮短發作持續時間（圖3)。與人參皂苷C-K或拉莫三嗪單獨應用相比較，人參 皂苷C-K與拉莫三嗪的組合物質量配比為32:1-2:1時，其抗癲癇療效最強。
[0059] 3.實驗小結
[0060]人參皂苷C-K與拉莫三嗪組合物質量配比為(32:1) - (2:1)時，其抗癲癇作用和療 效最強，且更有利于維持正常體重，降低拉莫三嗪因用藥劑量過多引起的不良反應，為制備 新的抗癲癇藥物提供了充分的科學依據。
【主權項】
1. 一種抗癲癇藥物，其特征在于，所述所述抗癲癇藥物由人參皂苷c-κ與與拉莫三嗪組 成;所述抗癲癇藥物中人參皂苷c-κ占總藥量的1 一99 %。2. 如權利要求1所述的抗癲癇藥物，其特征在于，所述抗癲癇藥物中人參皂苷C-Κ與拉 莫三嗪的質量比為（10-1800): (5-700)。3. 人參皂苷C-Κ與拉莫三嗪的組合物在制備抗癲癇藥物中的應用，所述抗癲癇藥物中 人參皂苷C-Κ占總藥量的1 一99 %。4. 如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗癲癇藥物中人參皂苷C-Κ與拉莫三嗪 的質量比為（10-1800): (5-700)。5. 如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗癲癇藥物是緩解或控制癲癇發作、抑 制癲癇發生發展以及癲癇疾病相關并發癥的藥物。6. 如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗癲癇藥物中還含有其他抗癲癇藥物。7. 如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述其他抗癲癇藥物為苯妥英鈉、苯巴比妥、 卡馬西平、奧卡西平、左乙拉西坦、托吡酯、拉莫三嗪、加巴噴丁中的至少一種。8. 如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗癲癇藥物的劑型為注射劑、溶液劑、乳 劑、口服液、混懸劑、栓劑、膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、凍干粉針劑、散劑、顆粒劑、沖劑、膠囊 劑、丸劑、片劑、貼劑或緩釋制劑。
【文檔編號】A61P25/08GK105963311SQ201610548493
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月13日
【發明人】曾祥昌, 歐陽冬生, 胡凱, 陳露露, 周露萍, 羅偉, 王欣桐, 高青, 李曉輝, 周宏灝
【申請人】歐陽冬生, 胡凱