基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織及其制備方法

基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種基于脫細胞基質?細胞?三維纖維網絡的仿生組織及其制備方法，基于脫細胞基質?細胞?三維纖維網絡的仿生組織至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞；所述復合脫細胞基質水凝膠為以生物相容性良好的三維纖維網絡材料為骨架的水凝膠；所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網絡結構材料。本發明的基于脫細胞基質?細胞?三維纖維網絡的仿生組織可以根據組織器官結構進行模擬，在組織工程中具有很好的應用前景，可廣泛應用生物醫學領域中。
【專利說明】
基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織及其制備方法
技術領域
[0001]本發明屬復合脫細胞基質水凝膠制備技術領域，涉及一種基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織及其制備方法。
【背景技術】
[0002]水凝膠(Hydrogel)是以水為分散介質的凝膠，一種高分子網絡體系，性質柔軟，在性質上類似于細胞外基質，因其可隨意改變形狀、強度可調控且內部疏松多孔的特性越來越多地被應用于生物組織工程中。
[0003]凡是水溶性或親水性的高分子，通過一定的化學交聯或物理交聯，都可以形成水凝膠。這些高分子按其來源可分為天然和合成兩大類。天然的親水性高分子包括多糖類(淀粉、纖維素、海藻酸、透明質酸、殼聚糖等)和多肽類(膠原、聚L-賴氨酸、聚L-谷胺酸等)。合成的親水高分子包括醇、丙烯酸及其衍生物類(聚丙烯酸，聚甲基丙烯酸，聚丙烯酰胺，聚N-聚代丙烯酰胺等)。天然水凝膠具有良好的生物相容性和生物降解性，廣泛受到人們的關注。
[0004]天然高分子水凝膠網絡鍵合的不同，可分為物理凝膠和化學凝膠。物理凝膠是通過物理作用力如靜電作用、氫鍵、鏈的纏繞等形成的，這種凝膠是非永久性的，通過加熱凝膠可轉變為溶液，所以也被稱為假凝膠或熱可逆凝膠。例如明膠通過降低溫度即可形成凝膠，而膠原通過升高溫度形成凝膠，絲素蛋白溶液在高壓條件下能形成水凝膠。化學凝膠是由化學鍵交聯形成的三維網絡聚合物，是永久性的，又稱為真凝膠。例如先在透明質酸羧基上引入呋喃基團，利用兩端修飾馬來酰亞胺的PEG與呋喃環化學交聯成膠。但是這些物質都是單一組分，無法完全模擬由多種組分混合構成的天然組織，提供的生物學功能也十分有限。脫細胞基質(ECM)是將完整的組織或器官去除細胞及一些抗原成分剩余得到的，保留了細胞外基質的天然骨架，含有膠原纖維、糖蛋白、血管內皮生長因子等，良好的生物相容性和生物降解性，是理想的水凝膠原材料。然而，水凝膠之間為各向同性材料而不能承受大的載荷，機械性能較差，因此制約了應用范圍。
[0005]增強水凝膠才能發揮其最大益處。為了提高水凝膠的力學性能，許多研究工作者做出了改進，專利公開號104487103 A公開了一種纖維增強水凝膠復合材料的方法即在水凝膠主體中加入纖維分散體的方式。專利公開號105085791 A公開了一種疏水微球增韌增強物理交聯雙網絡水凝膠的制備方法。但都更傾向于改變凝膠主體的結構來達到增強力學性能的效果，改變了凝膠的原有屬性，如透明度降低，內部結構發生改變。同時影響水凝膠內部存在的迀移成分如藥物、血管內皮生長因子等，從而使整個凝膠的功能失效。

【發明內容】

[0006]本發明所要解決的技術問題是提供一種基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織及其制備方法，以解決現有技術中結構強度不足以及內部有效添加成分的迀移速度過快的技術問題。本發明采用生物相容性良好的三維纖維網絡材料為骨架制備復合脫細胞基質水凝膠，可以達到增強的效果。同時，提出基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，形成三明治結構，然后根據組織器官結構進行模擬，在組織工程中具有很好的應用前景。
[0007]本發明中，術語“水凝膠前驅體”指可用于形成水凝膠之前的一種存在形式。
[0008]本發明的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，所述基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞;所述復合脫細胞基質水凝膠為以生物相容性良好的三維纖維網絡材料為骨架的水凝膠;所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網絡結構材料。植入生物體后，不會產生炎癥、排異反應等。所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料是指植入生物體內，不產生炎癥及排斥反應等，且具有良好的生物降解性。
[0009]作為優選的技術方案:
[0010]如上所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料為天然的或合成的生物相容性良好的三維纖維網絡材料;所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料中的纖維直徑為500nm?3μπι，孔徑范圍為1.0μπι-9μπι，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻;所述脫細胞基質水凝膠的主要成分為水，孔隙率為50%-90%，孔徑范圍為10μπι-450μπι;所述脫細胞基質水凝膠的脫細胞基質為取自尿道、輸尿管、膀胱、血管、小腸、消化道、陰道或輸卵管的脫細胞基質;所述生物相容性良好的纖維為絲素蛋白纖維、聚乙交酯丙交酯纖維或聚己內酯纖維。
[0011]如上所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，所述至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞為以下情形之一:
[0012]復合脫細胞基質水凝膠與上皮細胞結合情形:
[0013]復合脫細胞基質水凝膠上種植上皮細胞；
[0014]復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植上皮細胞；
[0015]復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，上皮細胞種植在水凝膠上表面；
[0016]復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋兩層水凝膠，上皮細胞種植在兩層水凝膠之間；
[0017]或者，進一步地，還包括以下情形之一:
[0018]復合脫細胞基質水凝膠與平滑肌細胞結合情形:
[0019]復合脫細胞基質水凝膠下表面種植平滑肌細胞；
[0020]復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植平滑肌細胞；
[0021]復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋水凝膠，平滑肌細胞種植在水凝膠下表面；
[0022]復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋兩層水凝膠，平滑肌細胞種植在兩層水凝膠之間；
[0023]所述復合脫細胞基質水凝膠為脫細胞基質水凝膠與所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料整體或局部復合;所述整體復合是指脫細胞基質水凝膠內整體包含生物相容性良好的三維纖維網絡材料;所述局部復合是指生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面和下表面及其淺表層與脫細胞基質水凝膠復合；
[0024]所述水凝膠為脫細胞基質制備而成的水凝膠，具體為膀胱脫細胞基質水凝膠、血管脫細胞基質水凝膠、尿道脫細胞基質水凝膠或小腸粘膜脫細胞基質水凝膠；
[0025]如上所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，所述復合脫細胞基質水凝膠中還含有迀移成分，所述迀移成分分散包裹在所述水凝膠中。
[0026]如上所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，所述迀移成分是指迀移成分分散在脫細胞基質水凝膠中，但不產生任何化學反應;所述迀移成分為血管內皮生長因子、胰島素、阿司匹林、酮洛芬、舒體安通或非那雄胺中的一種或幾種。
[0027]如上所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，所述脫細胞基質水凝膠的存放溫度在4°C?40°C。
[0028]本發明還提供了基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，所述制備方法為浸泡法、涂覆法或噴涂法。
[0029]如上所述的制備方法，首先制備脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，然后浸泡、涂覆或噴涂，再在37 °C下靜置數分鐘即形成復合脫細胞基質水凝膠;通常靜置3?30min即可。
[0030]所述浸泡為:
[0031]在凝膠未形成之前，將生物相容性良好的三維纖維網絡材料浸泡于所述脫細胞基質前驅體溶液；
[0032]所述涂覆為:
[0033]在凝膠未形成之前，將所述脫細胞基質水凝膠前驅體溶液涂覆在生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面、下表面或上、下表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;或進一步將生物相容性良好的三維纖維網絡材料貼合于所涂覆的脫細胞基質水凝膠前驅體溶液層，形成多層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構；
[0034]所述噴涂為:
[0035]在凝膠未形成之前，將所述脫細胞基質水凝膠前驅體溶液噴涂在生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面、下表面或上、下表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;或進一步將生物相容性良好的三維纖維網絡材料貼合于所噴涂的脫細胞基質水凝膠前驅體溶液層，形成多層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構。
[0036]脫細胞基質制成脫細胞基質水凝膠前驅體溶液的制備；
[0037]將制好的脫細胞基質材料進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約1/10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，其中再加入大約I/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0.lmol/L，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液。
[0038]如上所述的制備方法，所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料的制備為靜電紡絲法或二維編織法D
[0039]如上所述的制備方法，脫細胞基質水凝膠前驅體溶液的制備過程中還加入迀移成分。
[0040]本發明的作用機理為:
[0041]水凝膠是分子鏈發生交聯而形成的分子尺度的三維網絡，迀移成分從其中緩釋主要與迀移成分在凝膠中的擴散速度有關。該擴散速度第一方面和水凝膠結構有關，即水凝膠的三維網絡密度、網絡孔徑大小及分布、交聯強度、電荷分布和強度;第二方面和藥物結構和含量有關，如藥物尺寸、載藥量、藥物分子量、負載部位、藥物電荷分布和強度;第三方面和環境響應條件有關，即外界溫度、pH值、電場、磁場、光等。
[0042]三維纖維網絡材料是纖維相互貫穿交錯形成的三維網絡狀體型材料，屬于微納米尺度的三維網絡結構，力學性能優異，可用于增強水凝膠并獲得具有各向同性機械行為特征的復合材料結構，同時三維纖維網絡中的纖維直徑為500nm?3μπι，孔徑范圍為1.0μπι-9μm，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻。
[0043]鑒于上述，本發明提供了一種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，即將脫細胞基質水凝膠與生物相容性良好的三維纖維網絡材料通過噴涂法、浸泡法、涂覆法進行物理復合。水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%-90%，孔徑范圍為10μπι-450μπι，因此其孔徑大于三維纖維網絡的孔徑。兩者復合后，水凝膠中的大孔結構會被三維纖維網絡結構全部或部分填充。一方面，三維纖維網絡在水凝膠中起到三維骨架的作用，從而增強了水凝膠的力學性能。另一方面，三維纖維網絡會填充水凝膠中原由水占據的部分空隙，也會在水凝膠的構筑聚合物中混合部分纖維。由于三維纖維網絡的密度大于水，藥物在復合水凝膠中的擴散速度慢于在無三維纖維網絡水凝膠中的擴散速度，因此會延緩水凝膠中藥物向材料外部的緩釋。另外，當水凝膠構筑聚合物中混合部分纖維時，由于三維纖維網絡聚合物中未負載藥物，因此負載于水凝膠中的藥物擴散速度也會被延緩。上述兩個原因會導致復合水凝膠中的藥物緩釋時間更加持久。通過選擇具有不同孔徑、纖維直徑、孔隙率的三維纖維網絡材料，或通過改變三維纖維網絡聚合物與水凝膠構筑聚合物的復合方式、復合密度，可調節復合水凝膠的強度和藥物擴散行為。
[0044]由于三維纖維網絡與水凝膠網絡分屬于不同尺度的三維網絡，三維纖維網絡與水凝膠的復合并不會改變水凝膠的主體三維網絡結構，如交聯密度、水凝膠材料與藥物的相互作用以及水凝膠的環境響應性。
[0045]脫細胞基質主要來源于人或哺乳動物的組織或器官，主要取自尿道、輸尿管、膀胱、血管、小腸、消化道、陰道或輸卵管等組織，是將完整的組織或器官去除細胞及抗原成分所得到的完整的細胞外基質，由膠原、多糖、糖蛋白和血管內皮生長因子組成，有良好的生物相容性和生物降解性。因此，以生物相容性良好的三維纖維網絡材料為骨架的脫細胞基質水凝膠復合體系具有良好的生物相容性，能應用于生物組織工程，能用于組織修復，且滿足不同部位不規則形狀的修復需要。
[0046]組織器官都有共性，是粘膜(又稱上皮)和平滑肌組成的官腔結構，不同組織需要的細胞主要分為兩大類，上皮(粘膜)細胞和平滑肌細胞，至于神經和血管組織，其含量相對于上皮和平滑肌少得多，因此我們只需引入因子，再植入體內后依靠周圍組織長入即可。因此，將脫細胞基質/細胞/三維纖維網絡材料制備成三明治結構，然后根據組織器官進行模擬，對三明治結構進行布局與排列，形成基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，在組織工程中具有很好的應用前景。
[0047]有益效果
[0048](I)本發明中脫細胞基質水凝膠克服傳統的天然水凝膠組分單一、生物功能單一的缺點。
[0049](2)本發明的三維纖維網絡與凝膠的直接復合，不會改變凝膠本身結構就能達到增強水凝膠的目的。
[0050](3)相對于水凝膠內部疏松多孔的結構，三維纖維網絡結構致密，對于水凝膠中藥物、活性因子的包裹致密，能起到緩釋的效果，降低藥物的釋放速度，從而提高其利用率。[0051 ] (4)本發明制備工藝簡單易行，制備的復合脫細胞基質水凝膠具有良好的三維空間結構、力學性能良好，良好的生物相容性，可廣泛應用生物醫學領域中。
[0052](5)基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織可根據組織結構靈活多變，很好地模擬組織器官結構，在組織工程中具有很好的應用前景。
【附圖說明】
[0053]圖1為復合水凝膠的掃描電子顯微鏡圖；
[0054]圖2為實施例1制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0055]圖3為實施例2制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0056]圖4為實施例3制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0057]圖5為實施例4制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0058]圖6為實施例5制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0059]圖7為實施例6制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0060]圖8為實施例7制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；[0061 ]圖9為實施例8制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0062]圖10為實施例9制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0063]圖11為實施例10制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0064]圖12為實施例11制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0065]圖13為實施例12制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0066]圖14為實施例13制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖；
[0067]圖15為實施例14制備所得脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的示意圖。
[0068]圖中:I是上皮細胞，2是水凝膠，3是復合脫細胞基質水凝膠，4為平滑肌細胞；
[0069]3-1為生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面及其淺表層與脫細胞基質水凝膠復合；
[0070]3-2為局部復合的復合脫細胞基質水凝膠的生物相容性良好的三維纖維網絡材料。
【具體實施方式】
[0071]下面結合【具體實施方式】，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
[0072]本發明的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，為至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞，所述復合脫細胞基質水凝膠，為以生物相容性良好的三維纖維網絡材料為骨架的水凝膠，即脫細胞基質水凝膠內包含生物相容性良好的三維纖維網絡材料;所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網絡結構材料，植入生物體后，不會產生炎癥、排異反應等。圖1為復合水凝膠的掃描電子顯微鏡圖，從圖中可以看出，水凝膠作為疏松層，與三維纖維網絡結構作為致密層緊密連接，并且相互貫通。所述生物相容性良好的三維纖維網絡為天然的或合成的生物相容性良好的三維纖維網絡;所述生物相容性良好的三維纖維網絡中的纖維直徑為500nm?3μπι，孔徑范圍為I.0μπι-9μπι(所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料的纖維孔徑不超過20μπι)，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻；所述脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%-90%，孔徑范圍為10μηι-450μηι。
[0073]所述至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞為以下情形之一:
[0074]復合脫細胞基質水凝膠與上皮細胞結合情形:
[0075]復合脫細胞基質水凝膠上種植上皮細胞；
[0076]復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植上皮細胞；
[0077]復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，上皮細胞種植在水凝膠上表面；
[0078]復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋兩層水凝膠，上皮細胞種植在兩層水凝膠之間；
[0079]或者，進一步地，還包括以下情形之一:
[0080]復合脫細胞基質水凝膠與平滑肌細胞結合情形:
[0081 ]復合脫細胞基質水凝膠下表面種植平滑肌細胞；
[0082]復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植平滑肌細胞；
[0083]復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋水凝膠，平滑肌細胞種植在水凝膠下表面；
[0084]復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋兩層水凝膠，平滑肌細胞種植在兩層水凝膠之間；
[0085]所述生物相容性良好的纖維為絲素蛋白纖維、聚乙交酯丙交酯纖維或聚己內酯纖維等；
[0086]所述脫細胞基質水凝膠的脫細胞基質為取自神經、脊髓、肌腱、肌肉、膀胱粘膜、小腸粘膜、心臟、肝臟、腎臟或軟骨組織的脫細胞基質。
[0087]所述復合脫細胞基質水凝膠中還含有迀移成分，所述迀移成分分散包裹在所述脫細胞基質水凝膠中。
[0088]所述迀移成分是指迀移成分分散在脫細胞基質水凝膠中，但不產生任何化學反應;所述迀移成分為血管內皮生長因子、胰島素、阿司匹林、酮洛芬、舒體安通或非那雄胺中的一種或幾種。
[0089]所述復合脫細胞基質水凝膠的存放溫度在4°C?40°C。
[0090]實施例1
[0091]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自尿道的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入胰島素，其中胰島素與脫細胞基質的質量比為0.05:100，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液。在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液涂覆在通過三維編織法制備的纖維直徑為3μπι，孔徑范圍為8-9μπι，孔隙率為90%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上表面，形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構，然后再在37°C下靜置30min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠表面涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為膀胱脫細胞基質前驅體溶液，在37°C下靜置5min繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖2所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為90%，孔徑范圍為400-450μπι，存放溫度為40°C。
[0092]實施例2
[0093]一種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自輸尿管的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入阿司匹林，其中阿司匹林與脫細胞基質的質量比為1:20，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液。在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液噴涂在通過三維編織法制備的纖維直徑為3μπι，孔徑范圍為8-9μπι，孔隙率為90%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上表面，形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置3min，形成復合脫細胞基質水凝膠;在復合脫細胞基質水凝膠表面種植上皮細胞，再在種植上皮細胞的復合脫細胞基質水凝膠表面噴涂一層水凝膠前驅體溶液，具體為血管脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，再在37 °C下靜置9min，繼續凝膠，形成復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植上皮細胞的脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖3所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70%，孔徑范圍為15-60μπι，存放溫度為8°C。
[0094]實施例3
[0095]一種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自膀胱的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入酮洛芬，其中酮洛芬與脫細胞基質的質量比為1:10，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液涂覆在通過三維編織法制備的纖維直徑為1.8μπι，孔徑范圍為3-5μπι，孔隙率為80%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上表面，形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置9min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠表面涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為尿道脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37 °C下靜置5min繼續凝膠，使復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，把上皮細胞種植在水凝膠上表面，然后在種植上皮細胞的復合脫細胞基質水凝膠表面涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為尿道脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，再在37 °C下靜置9min，繼續凝膠，形成復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋兩層水凝膠，上皮細胞種植在兩層水凝膠之間的脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖4所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為78%，孔徑范圍為150-200μπι，存放溫度為10°C。
[0096]實施例4
[0097]一種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自血管的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入血管內皮生長因子，其中血管內皮生長因子與脫細胞基質的質量比為0.025:100，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為500nm，孔徑范圍為1_2μπι，孔隙率為65 %，且將微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網絡材料裁剪成直徑為14mm的圓片，浸泡于上述2mL脫細胞基質前驅體溶液中，形成絲素蛋白纖維網絡材料孔隙中含有脫細胞基質水凝膠構筑聚合物，脫細胞基質水凝膠孔隙中也含有三維纖維網絡材料的相互包含結構;再在37°C下靜置3min，形成復合脫細胞基質水凝膠;然后在復合脫細胞基質上表面種植上皮細胞，形成復合脫細胞基質水凝膠上表面種植上皮細胞的脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖5所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%，孔徑范圍為10-50μπι，存放溫度為4Γ。
[0098]實施例5
[0099]一種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自消化道的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入舒體安通，其中舒體安通與脫細胞基質的質量比為1:18，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將靜電紡絲法制備的微孔分布均勻生物相容性良好的聚己內酯纖維網絡材料浸泡于上述2mL脫細胞基質前驅體溶液中，形成聚己內酯纖維網絡材料孔隙中含有脫細胞基質水凝膠構筑聚合物，脫細胞基質水凝膠孔隙中也含有三維纖維網絡材料的相互包含結構;纖維直徑為1.8μπι，孔徑范圍為6.5-7.Ομπι，孔隙率為79 % ;再在37 °C下靜置15min，形成復合脫細胞基質水凝膠;然后在復合脫細胞基質水凝膠材料表面種植上皮細胞，再噴涂一層水凝膠前驅體溶液，具體為小腸粘膜脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置15min繼續凝膠，形成復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植上皮細胞的脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖6所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為80%，孔徑范圍為150-250μπι，存放溫度為20 V。
[0100]實施例6
[0101]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自陰道的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入非那雄胺，其中非那雄胺與脫細胞基質的質量比為1:5，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將通過三維編織法制備的纖維直徑為2.5μπι，孔徑范圍為5-6μπι，孔隙率為85%，且微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網絡材料浸泡于上述2mL脫細胞基質前驅體溶液中，形成絲素蛋白纖維網絡材料孔隙中含有脫細胞基質水凝膠構筑聚合物，脫細胞基質水凝膠孔隙中也含有三維纖維網絡材料的相互包含結構；再在37°C下靜置18min，形成復合脫細胞基質水凝膠;在復合脫細胞基質水凝膠的上、下表面分別種植上皮細胞和平滑肌細胞，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖7所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70%，孔徑范圍為250-300μm，存放溫度為30°C。
[0102]實施例7
[0103]一種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自輸卵管的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入胰島素和血管內皮生長因子的混合物，其中胰島素和血管內皮生長因子的質量比為2:5，胰島素和血管內皮生長因子與脫細胞基質的質量比為0.1:100，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液噴涂在通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為1.9μπι，孔徑范圍為6.9-8.5μπι，孔隙率為78 %，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上、下表面，形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置25min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠上、下表面分別涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為血管脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置15min繼續凝膠，然后在將上皮細胞種植在水凝膠上表面，平滑肌細胞種植在水凝膠下表面，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖8所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為66%，孔徑范圍為300-360μπι，存放溫度為25 °C。
[0104]實施例8
[0105]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自尿道的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入阿司匹林和酮洛芬的混合物，其中阿司匹林和酮洛芬的質量為3:2，阿司匹林和酮洛芬與脫細胞基質的質量比為1:9，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將脫細胞基質前驅體溶液涂覆在通過三維編織法制備的纖維直徑為1.6μπι，孔徑范圍為5.5-6.6μπι，孔隙率為81%，且微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網絡材料的上、下表面;形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37 °C下靜置20min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠上、下表面分別種植上皮細胞和平滑肌細胞，然后在上皮細胞和平滑肌細胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為小腸粘膜脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37 °C下靜置24min繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖9所示；復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70 %，孔徑范圍為300-350μπι，存放溫度為30 V。
[0106]實施例9
[0107]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自輸尿管的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.01mol/L，再加入酮洛芬和舒體安通的混合物，其中酮洛芬和舒體安通的質量比為3:4，酮洛芬和舒體安通與脫細胞基質的質量比為2:7，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液噴涂在通過三維編織法制備的纖維直徑為2.5μπι，孔徑范圍為7-7.8μπι，孔隙率為70%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上、下表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置18min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠上、下表面分別涂覆一層膀胱脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置15min繼續凝膠，然后在將上皮細胞種植在水凝膠上表面，平滑肌細胞種植在水凝膠下表面，然后在上皮細胞和平滑肌細胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為血管脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37 °C下靜置15min繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖10所示;脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為65 %，孔徑范圍為320-400μπι，存放溫度為35 °C。
[0108]實施例10
[0109]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自小腸的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入阿司匹林、酮洛芬和舒體安通的混合物，其中阿司匹林、酮洛芬和舒體安通的質量比為2:1:3，阿司匹林、酮洛芬和舒體安通與脫細胞基質的質量比為1:10，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將通過三維編織法制備的纖維直徑為900nm，孔徑范圍為1-3μπι，孔隙率為65%，且微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網絡材料浸泡于上述脫細胞基質前驅體溶液，形成絲素蛋白纖維網絡材料孔隙中含有脫細胞基質水凝膠構筑聚合物，脫細胞基質水凝膠孔隙中也含有三維纖維網絡材料的相互包含結構;再在復合脫細胞基質水凝膠材料上、下表面分別種植上皮細胞和平滑肌細胞，然后在上皮細胞和平滑肌細胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為尿道脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖11所示；復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70%，孔徑范圍為380-430μπι，存放溫度為5°C。
[0110]實施例11
[0111]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自血管的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入胰島素和血管內皮生長因子的混合物，其中胰島素和血管內皮生長因子的質量比為2:5，胰島素和血管內皮生長因子與脫細胞基質的質量比為0.1:100，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液噴涂在通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為1.9μπι，孔徑范圍為6.9-8.5μπι，孔隙率為78 %，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上、下表面，形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置25min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠上、下表面分別涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為膀胱脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置15min繼續凝膠，然后在將上皮細胞種植在水凝膠上表面，平滑肌細胞種植在水凝膠下表面，然后在平滑肌細胞表面涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為尿道脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37 °C下靜置ISmin繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖12所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為66 %，孔徑范圍為300-360μπι，存放溫度為25°C。
[0112]實施例12
[0113]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自消化道的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為
0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為
0.0lmol/L，再加入胰島素和血管內皮生長因子的混合物，其中胰島素和血管內皮生長因子的質量比為2:5，胰島素和血管內皮生長因子與脫細胞基質的質量比為0.1:100，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液涂覆在通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為1.9μπι，孔徑范圍為6.9-8.5μπι，孔隙率為78 %，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上、下表面，形成一層三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置28min，形復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠上表面涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為血管脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37 °C下靜置15min繼續凝膠，然后在將上皮細胞種植在水凝膠上表面，在復合脫細胞基質水凝膠下表面種植平滑肌細胞，再在平滑肌細胞表面噴涂一層水凝膠前驅體溶液，具體為膀胱脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37 °C下靜置1min繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖13所示;脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為66 %，孔徑范圍為300-360μπι，存放溫度為25°C。
[0114]實施例13
[0115]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自陰道的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末；在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為
0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為
0.01mol/L，再加入酮洛芬和舒體安通的混合物，其中酮洛芬和舒體安通的質量比為3:4，酮洛芬和舒體安通與脫細胞基質的質量比為2:7，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將上述脫細胞基質前驅體溶液噴涂在通過三維編織法制備的纖維直徑為2.5μπι，孔徑范圍為7-7.8μπι，孔隙率為70%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網絡材料的上表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;再在37°C下靜置18min，形成復合脫細胞基質水凝膠;再在復合脫細胞基質水凝膠上表面噴涂一層尿道脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置15min繼續凝膠，然后在將上皮細胞種植在水凝膠上表面，在復合脫細胞基質水凝膠下表面種植平滑肌細胞，再在上皮細胞和平滑肌細胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅體溶液，具體為膀胱脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置Smin繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖13所示;脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為65 %，孔徑范圍為320-400μπι，存放溫度為35 °C。
[0116]實施例14
[0117]—種脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織的制備方法，首先是復合脫細胞基質水凝膠的制備，制備好取自輸卵管的脫細胞基質材料，進行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細胞基質粉末約48h，形成脫細胞基質預凝膠溶液，加入大約I /10脫細胞基質預凝膠溶液體積的NaOH溶液，其中NaOH溶液的濃度為
0.0lmol/L，再加入大約1/9脫細胞基質預凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為
0.01mol/L，再加入血管內皮生長因子，其中血管內皮生長因子與脫細胞基質的質量比為
0.025:100，形成脫細胞基質凝膠前驅體溶液，在凝膠未形成之前，將通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為500nm，孔徑范圍為1_2μπι，孔隙率為65 %，且將微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網絡材料裁剪成直徑為14mm的圓片，浸泡于上述2mL脫細胞基質前驅體溶液中，形成絲素蛋白纖維網絡材料孔隙中含有脫細胞基質水凝膠構筑聚合物，脫細胞基質水凝膠孔隙中也含有三維纖維網絡材料的相互包含結構;再在37°C下靜置3min，形成復合脫細胞基質水凝膠;在復合脫細胞基質水凝膠上、下表面分別種植上皮細胞平滑肌細胞，在平滑肌細胞表面噴涂一層水凝膠前驅體溶液，具體為小腸粘膜脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，在37°C下靜置9min繼續凝膠，形成脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，如圖15所示;復合脫細胞基質水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%，孔徑范圍為10-50μπι，存放溫度為4°C。
【主權項】
1.基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，其特征是:所述基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞;所述復合脫細胞基質水凝膠為以生物相容性良好的三維纖維網絡材料為骨架的水凝膠;所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網絡結構材料。2.根據權利要求1所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，其特征在于，所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料為天然的或合成的生物相容性良好的三維纖維網絡材料;所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料中的纖維直徑為500nm?3μπι，孔徑范圍為?Μ?-9μπι，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻;所述復合脫細胞基質水凝膠的主要成分為水，孔隙率為50 %-90%,孔徑范圍為10μπι-450μπι;所述復合脫細胞基質水凝膠的脫細胞基質為取自尿道、輸尿管、膀胱、血管、小腸、消化道、陰道或輸卵管的脫細胞基質;所述生物相容性良好的纖維為絲素蛋白纖維、聚乙交酯丙交酯纖維或聚己內酯纖維。3.根據權利要求1所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，其特征在于，所述至少包含復合脫細胞基質水凝膠和上皮細胞為以下情形之一: 復合脫細胞基質水凝膠與上皮細胞結合情形: 復合脫細胞基質水凝膠上種植上皮細胞； 復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植上皮細胞； 復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋水凝膠，上皮細胞種植在水凝膠上表面； 復合脫細胞基質水凝膠上表面覆蓋兩層水凝膠，上皮細胞種植在兩層水凝膠之間； 或者，進一步地，還包括以下情形之一: 復合脫細胞基質水凝膠與平滑肌細胞結合情形: 復合脫細胞基質水凝膠下表面種植平滑肌細胞； 復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋水凝膠，且在復合脫細胞基質水凝膠與水凝膠之間種植平滑肌細胞； 復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋水凝膠，平滑肌細胞種植在水凝膠下表面；復合脫細胞基質水凝膠下表面覆蓋兩層水凝膠，平滑肌細胞種植在兩層水凝膠之間；所述復合脫細胞基質水凝膠為脫細胞基質水凝膠與所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料整體或局部復合;所述整體復合是指脫細胞基質水凝膠內整體包含生物相容性良好的三維纖維網絡材料;所述局部復合是指生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面和/或下表面及其淺表層與脫細胞基質水凝膠復合； 所述水凝膠為脫細胞基質制備而成的水凝膠。4.根據權利要求1所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，其特征在于，所述復合脫細胞基質水凝膠中還含有迀移成分，所述迀移成分分散包裹在所述脫細胞基質水凝膠中。5.根據權利要求4所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，其特征在于，所述迀移成分是指迀移成分分散在復合脫細胞基質水凝膠中，但不產生任何化學反應；所述迀移成分為血管內皮生長因子、胰島素、阿司匹林、酮洛芬、舒體安通或非那雄胺中的一種或幾種。6.根據權利要求1所述的基于脫細胞基質-細胞-三維纖維網絡的仿生組織，其特征在于，所述復合脫細胞基質水凝膠的存放溫度在4°C?40°C。7.一種如權利要求1、2、3或6中任一仿生組織的制備方法，其特征是:所述制備方法為浸泡法、涂覆法或噴涂法。8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法，首先制備脫細胞基質水凝膠前驅體溶液，然后浸泡、涂覆或噴涂，再在37°C下靜置3?30min即形成復合脫細胞基質水凝膠； 所述浸泡為: 在凝膠未形成之前，將生物相容性良好的三維纖維網絡材料浸泡于所述脫細胞基質前驅體溶液； 所述涂覆為: 在凝膠未形成之前，將所述脫細胞基質水凝膠前驅體溶液涂覆在生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面、下表面或上、下表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;或進一步將生物相容性良好的三維纖維網絡材料貼合于所涂覆的脫細胞基質水凝膠前驅體溶液層，形成多層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構； 所述噴涂為: 在凝膠未形成之前，將所述脫細胞基質水凝膠前驅體溶液噴涂在生物相容性良好的三維纖維網絡材料的上表面、下表面或上、下表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構;或進一步將生物相容性良好的三維纖維網絡材料貼合于所噴涂的脫細胞基質水凝膠前驅體溶液層，形成多層生物相容性良好的三維纖維網絡結構與脫細胞基質水凝膠前驅體溶液構成的層疊結構。9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述生物相容性良好的三維纖維網絡材料的制備方法為靜電紡絲法或三維編織法。10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，脫細胞基質水凝膠前驅體溶液的制備過程中還加入迀移成分。
【文檔編號】A61L27/22GK105944143SQ201610395757
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月6日
【發明人】張耀鵬, 蔣丹, 宋魯杰, 邵惠麗, 黃建文, 傅強, 胡學超
【申請人】東華大學