一種治療多囊卵巢綜合征的藥物及其制法與用圖

一種治療多囊卵巢綜合征的藥物及其制法與用圖
【專利摘要】本發明涉及中藥領域，具體涉及一種治療多囊卵巢綜合征的藥物及其制法與用途。該藥物是由以下重量份的原料制成的：美薔薇果1～2重量份，黃蘆木1～2重量份。該藥物制備成片劑、丸劑、散劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液。制法為：干燥的美薔薇果、黃蘆木，第一次加11倍量水浸泡1小時，煎煮1小時，第二次加4倍量水煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻，裝入硬膠囊。藥物質量檢測方法的色譜條件為：采用HypersilDs色譜柱；流動相：比例為30：70的乙腈?水；檢測波長：200nm；柱溫：20℃；流速：1.0mL·min?1；進樣量：10μL。
【專利說明】
一種治療多囊卵巢綜合征的藥物及其制法與用途
技術領域
[0001] 本發明涉及中藥領域，具體涉及一種美薔薇果與黃蘆木的活性藥物及其制備方 法。
【背景技術】
[0002] 多囊卵巢綜合征(P⑶S)是一種多起因、多態性的女性生殖內分泌系統疾病，是青 春期和育齡期女性臨床多發、常見、疑難病之一。PCOS在育齡期女性中的發病率高達6%~ 10%。有研究表明，有75%的無排卵性不孕、26%~37%的閉經、87%~90%的月經稀發都可能與 PCOS有關。針對PCOS的治療，如何提高排卵率、妊娠率及妊娠是迫切需要解決的問題，也是 治療本病的難點之處，近年來，中醫藥治療PCOS從整體出發，采用辨病與辨證相結合的方法 進行診療，取得了非常不錯的臨床效果。
[0003] 1病因病機研究 PCOS臨床以雄性激素過多和持續無排卵為主要特征，表現為月經稀發甚至閉經、不孕、 多毛、肥胖、痤瘡、黑棘皮癥等，是導致育齡期婦女不孕、月經紊亂最常見的病因，是因臟腑 功能失調、氣血失和、濕濁痰瘀等病理產物壅塞胞宮和肌膚所形成的一系列復雜癥候群。現 代醫學認為其病因涉及到遺傳、內分泌、免疫、代謝等多個方面，以高雄激素血癥與高胰島 素血癥為主要特征，二者在PCOS發病中的確切作用，目前尚不清楚。查閱中醫古代文獻，發 現中醫古籍中并無"多囊卵巢綜合征"的有關病名，根據其臨床表現特征不僅有生殖障礙， 而且有代謝異常即：肥胖、閉經、多毛、不孕等，根據歷代醫家的有關論述，本病歸屬于中醫 "閉經""不孕""癥瘕"的范疇，散見于調經、求嗣、種子等篇章中，與其有關的病名也就比較 多樣化，如:肥人閉經、肥人不孕、月事不來、月水不利、月水不通、經崩、無子、絕子、斷緒、全 不產等。依據中醫學理論分析PCOS的病因病機發現，腎氣虧虛是多囊卵巢綜合征的基本病 機，彭培初、尤昭玲、夏桂城等專家認為本病是因先天腎水虧虛，天癸不足，復因痰瘀凝聚所 致，無論是腎陰虛還是腎陽虛，都將發生因虛致瘀的病理改變，致沖任氣血瘀滯，阻礙卵子 排出，或腎陰癸水不足，卵子發育不能成熟，痰濕蘊阻，卵巢呈多囊樣變化而至不孕;楊悅亞 等也認為，腎虛不足，孕育乏力，致使卵泡發育遲滯，氣虛推動不足，致使卵泡難以通過卵巢 而至閉鎖，故致不孕。肝為風木之臟，易橫逆克土，則脾胃受制，運化失司，痰濕壅塞胞脈胞 宮，則不能攝精成孕；壅于肌膚則肥胖、多毛。《傅青主女科》言："女人善懷多郁，肝經一 病……艱于生育。"《婦人規?子嗣類》云："情懷不暢，則沖任不充，則胎孕不受。"故可認為 肝氣郁結是PCOS患者最主要的病因。脾為后天之本，脾氣健運，血循常道，血旺而經調。若脾 氣虧虛，氣血生化乏源，或脾陽不振，運化失職，聚濕生痰，氣機不暢，沖任不通，生化功能不 足，痰濕脂膜下注，蘊滯胞宮，則見經少、閉經、不孕等，或痰濕脂膜積聚，蘊結體內，浸漬四 肢、肌肉，則形體肥胖、多毛。是故PCOS以脾腎虛弱為本，痰濕為標，脾虛痰濕是PCOS的發病 關鍵。瘀血內阻則是該病的常見誘因，《千金要方》指出"瘀血內停，惡血內漏"為無子的原 因之一；《醫林改錯》言："元氣既虛，必不能達于血管，血管無氣，必停留而為瘀。瘀血阻滯， 沖任欠通，血海不能如期溢滿，月經后期而來;瘀阻沖任，血不得下，則見月經停閉；瘀血內 阻，血不歸經而妄行，可見崩漏;瘀阻胞宮胞脈則致不孕。
[0004] 綜上所述，PCOS多因腎虛、痰濕阻滯、肝經濕熱等而導致氣滯血瘀，水濕內停，化生 濕濁，日久化痰化瘀，痰濕瘀互結，壅塞胞宮、沖任，沖任失資，臟 腑功能和血海蓄溢失常而出現多種臨床癥狀，其病因病機總以肝郁、脾虛、腎虛為本， 以血瘀、痰濕、濕熱為標，臨床表現以虛實夾雜證為多見。
[0005] 2治則治法研究 以腎虛、痰濕、血瘀、陰虧、陽虛、氣虛等病機為主，多采用補腎、化痰、利濕、祛瘀、益氣、 補血、溫陽等治療法則，腎虛血瘀型治以滋腎活血、調理沖任，脾虛痰濕型治以燥濕化痰、理 氣調經，痰瘀互結很多學者認為PCOS主要同腎、肝、脾功能失調有關，秦竹等通過文獻研究 發現，中醫近年來治療PCOS 型治以補腎養血、疏肝解郁。中醫治療重在補、調、通，但PCOS病因復雜病機改變多樣， 臨床表現亦多樣，常多癥并見，故臨床上應在把握主證的同時注意兼證，需辨證論治與辨病 論治相結合，同時遵循女性特有的生理周期治療，在治療過程中，還要特別注意精神因素的 影響，以長期調理為主，欲速則不達。關于PCOS的中醫治法研究，臨床醫家通過臨床觀察 PCOS的癥狀表現，運用中醫整體觀念辨證治療PC0S，總結出各種行之有效的治療方法。病證 結合論治一直是中醫診病的主流模式，針對PCOS不同病機，臨床醫家更是總結出補腎化痰 法、補腎活血法、清肝補腎法、清熱利濕法、健脾養血通利法等不同的治療方法。鐘曉玲等采 用溫腎養血、祛瘀通利法治療腎陽不足、濕阻下焦型PCOS患者30例，治療3個周期，總有效率 為86.67%，高于對照組克羅米芬治療的76.67%。劉瑩等分別采用補腎調肝法和補腎化痰法 治療腎虛肝郁型和腎虛痰濕型患者62例，結果補腎調肝法愈顯率為60.46%，有效率為 88.37%;補腎化痰法愈顯率為52.64%，有效率為84.21%。談勇等根據多年運用中藥調整月經 周期節律的經驗，提出中藥調周法治療PC0S，用藥遵循經后期滋陰，經前期補陽的辨證原 貝1J，遣方用藥制成滋陰方、補陽方，并根據月經周期中生理活動規律，簡化用藥分期，序貫運 用滋陰方和補陽方治療PCOS月經失調性主證，療效滿意。中藥周期療法是指按照補腎-活血 化瘀-補腎-活血調經，順序周期性選方用藥，仿照月經周期進行治療。郝蘭枝采用人工周期 療法，用補腎固沖，佐以化瘀調經之法，自擬中藥內服方，分為4個階段加減治療PCOS中高雄 激素血癥患者，結果痊愈30例，有效10例，無效6例;恢復排卵率為56.52%，妊娠率達41.67%， 總有效率86.96%。符彩霞中藥人工周期療法治療多囊卵巢綜合征不孕的患者60例，結果治 愈41例，有效12例，無效7例，有效率88.33%。除此之外，中醫治療PCOS還有針灸治療、中藥加 針刺聯合治療以及足部反射區按摩治療等療法，在臨床中均取得較好的療效。
[0006] 3方藥應用研究 通過方藥應用治療PCOS在臨床上比較常用，主要包括復方加減治療、經方治療、中成藥 治療、名中醫臨證經驗。李巧芬等將PCOS辨證分為4型：脾虛痰濕型，治以健脾益氣、祛痰通 經，方用蒼附導痰丸合佛手散加減;腎陽虛衰型，治以溫腎燥濕化痰，方用歸腎丸加減;氣滯 痰阻型，治以疏肝理氣、行氣化痰，方用逍遙散加減;痰瘀互結型，治以活血化瘀、燥濕化痰， 方用桂枝茯苓丸合當歸芍藥散加減。桑霞運用經方龍膽瀉肝湯加減治療肝經郁火型PCOS 療，3個月為1個療程，共治療1~2個療程，觀察治療前后臨床癥狀、月經周期及血清FSH、LH、 E2、T水平變化，結果血清LH、T、LH/FSH均較治療前下調沖、25例，臨床觀察療效顯著。須義 貞等給予60例多囊卵巢綜合征患者益腎化痰方治 降（P〈0.01);3個月累計恢復行經51例，臨床療效良好。謝京紅等運用中藥制劑多囊 飲(菟絲子、白芍、淫羊藿、柴胡等)治療PCOS腎虛肝郁證患者30例，連續治療6個月有效率為 86.7%，妊娠率為62.5%，月經改善有效率為83.3%，治療前后差異均具有統計學意義（P〈 0.05)。劉蕓等通過臨床觀察發現，丹梔逍遙丸可提高PCOS伴IR無排卵型不孕患者排卵率及 妊娠率，并可顯著改善中醫證候，較單用西藥具有明顯優勢。陳何紅等總結秦月好教授治療 PCOS經驗，根據生理周期對不同證型的患者分別選用五才三仙湯、龍膽瀉肝湯加味、丹梔逍 遙散加味、膈下逐瘀湯加味、蒼附導痰湯加味、三子三黃調經湯、逐瘀蕩胞調經湯加味、桃紅 四物湯加味等方藥給予治療，并建立人工藥物周期，臨床療效顯著。
[0007] 4現代研究 隨著醫學的發展，很多學者針對方藥治療PCOS作用機理做了進一步探究。陶莉莉等通 過研究發現，加減龍膽瀉肝湯可明顯改善肝經郁火型PCOS患者高雄激素血癥癥狀和內分泌 情況，能夠有效改善PCOS的臨床表現，還一定程度上能夠糾正肝經郁火型PCOS患者的胰島 素抵抗情況，對于可能在肝經郁火型PCOS發生發展中起樞紐作用的卵泡膜細胞色素 P450C17酶活性，加減龍膽瀉肝湯也具有雙重調節作用，它能通過降低P450C17酶的活性改 善高雄激素血癥，從而起到治療PCOS的作用。禹安琪也發現疏肝瀉火中藥可明顯改善肝經 郁火癥狀，降低游離睪酮、雄烯二酮，從而治療高雄激素血癥，能改善機體外周組織對胰島 素敏感性，改善胰島素抵抗情況，降低升高的血清Iept in水平，并通過改善下丘腦一垂體一 卵巢軸的功能，降低患者LH/FSH、LH，從而改善卵巢排卵功能障礙，調整月經周期，使部分不 孕患者受孕。徐蓮薇等、文炯等研究表明補腎活血、化瘀藥方治療PCOS可通過升高血清SHBG 和降低血清FAI，降低雄激素水平、改善脂質代謝、改善胰島素水平，并取得了較好的療效。 周璐璐研究發現健脾祛濕藥可以有效治療脾虛濕盛型多囊卵巢綜合征，并可以改善血清中 的激素水平，使患者的臨床癥狀和體征得到很好的改善。翟軍等發現健脾補腎方聯合二甲 雙胍可明顯降低肥胖型多囊卵巢綜合征患者LH、T水平，提高胰島素的敏感性，降低血脂水 平，減少二甲雙胍副作用，提高患者依從性，尤其是對血脂的改善明顯優于單用二甲雙胍 組。林敏研究認為運用化痰祛濕的中藥，能減少痰濕體質患者體內脂肪積聚，改變脂質代 謝，降低血液黏稠度，改善血中載脂蛋白含量，從而達到化痰祛濕、活氣血、散郁結的目的， 痰濕得以化，瘀血得以行，氣血經脈通暢，沖任二脈調達，則身輕體健，月事能得以時下。駱 世存研究也表明中醫方藥可以降低1^1')，從而可用于治療高雄激素血癥，調整1^/^5扯匕 例，調理肝腎，調整月經周期，使陰陽平衡而使部分不孕患者受孕。
[0008] 5 小結 綜上所述，長久以來PCOS的病因及治療都處于探索研究階段，值得肯定的是，在中醫治 則指導下的中醫藥諸方的應用在臨床中能夠明顯調節PCOS諸證，不過由于針對中醫藥療法 的相關機理及作用環節研究還處于初級階段，在機理闡述方面缺乏統一解釋。隨著醫學的 發展，探索中醫藥治療PCOS最佳方案以及驗證其相關機理將是未來研究中醫治療PCOS的趨 向。
[0009] 本發明藥物是經發明人多年來精心研制，主要用于治療多囊卵巢綜合征。經研究 表明，本發明藥物對多囊卵巢綜合征具有較好的治療效果。
[0010] 在本發明藥物中原料藥的基源如下： 美薔薇果為薔薇科薔薇屬植物美薔薇kDa TfeAc/. ei Zfih的果實。
[0011] 黃蘆木為小檗科小檗屬植物黃蘆木iferAeris a皿/re/jsis 7?t/j〇r.的根和莖、枝。

【發明內容】

[0012] 本發明的目的是提供一種美薔薇果與黃蘆木的藥物。
[0013] 本發明的另一目的是提供該藥物的制備方法。
[0014] 本發明還提供了該藥物的質量檢測方法。
[0015] 本發明還提供了該藥物的制藥用途。
[0016] 本發明的目的是由以下方式實現的： 一種藥物是由以下重量份的原料制成的:美薔薇果1~2重量份，黃蘆木1~2重量份。
[0017] 該藥物優選是由以下重量份的原料制成的：美薔薇果1重量份，黃蘆木2重量份。
[0018] 該藥物優選是由以下重量份的原料制成的：美薔薇果2重量份，黃蘆木1重量份。
[0019] 該藥物優選是由以下重量份的原料制成的：美薔薇果1重量份，黃蘆木1重量份。
[0020] 所述的藥物中可以制備成片劑、丸劑、散劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液。
[0021] 所述的藥物采用如下方法制備:取美薔薇果、黃蘆木，混合，加入3~15倍量的水浸 泡0.5~2小時，煎煮0.5~2小時，煎煮2~4次，每次0.5~2小時，提取液合并，濾過，濾液濃 縮，干燥，粉碎成細粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
[0022] 所述的藥物優選采用如下方法制備:取干燥的美薔薇果、黃蘆木，第一次加11倍量 水浸泡1小時，煎煮1小時，第二次加4倍量水煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥， 粉碎成細粉，過篩，混勻，裝入硬膠囊，即得。
[0023] 所述的藥物采用如下方法檢測:采用高效液相色譜法進行薔薇酸的含量測定： (1) 色譜條件:采用Hypersi IDs色譜柱;流動相：比例為20~40:60~80的乙腈-水;檢測 波長：190~210nm;柱溫：15~25°C ;流速:0 · 5~1 · 5mL · min-1;進樣量：5~20yL; (2) 對照品溶液制備:精密稱取干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，加甲醇溶解制成對照 品溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發明藥物，加甲醇，加熱回流，提取液回流溶劑并濃 縮至干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌，正 丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4 )測定：分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各5~20yL，注入高效液相色譜 儀，進行檢測。
[0024] 所述的藥物優選采用如下方法檢測：采用高效液相色譜法進行薔薇酸的含量測 定： (1) 色譜條件：采用Hypersi IDs色譜柱；流動相：比例為30 :70的乙腈-水；檢測波長： 200歷;柱溫：20°(：;流速：1.〇1111^1^11- 1;進樣量：1(^^ (2) 對照品溶液制備:精密稱取80°C干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，加甲醇溶解制成 每ImL含0.2mg的對照品溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發明藥物10g，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回 流溶劑并濃縮至干，殘渣加水IOmL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正 丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并 轉移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4)測定:分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各10yL，注入高效液相色譜儀，進 行檢測。
[0025] 所述的藥物可用于制備治療多囊卵巢綜合征、卵巢囊腫的藥物或保健品。
[0026] 實驗一:本發明藥物對多囊卵巢綜合征模型大鼠的影響 本實驗研究采用孕激素和HCG聯合造模法制備多囊卵巢綜合征大鼠模型，比較用藥前 后血清激素水平變化，以期為中醫中藥治療PCOS提供實驗數據及效驗方藥。
[0027] 1實驗材料 1.1實驗動物 24d齡未成年SD雌性大鼠，體重30~40g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。
[0028] 1.2藥品與試劑 本發明藥物:按照本發明說明書【具體實施方式】中的實施例1來制備； 對比藥物甲：按照本發明說明書【具體實施方式】中的實施例2來制備； 對比藥物乙:按照本發明說明書【具體實施方式】中的實施例3來制備； 二甲雙胍:用蒸餾水溶解，按人鼠體重比換算后，以〇.〇18g/d劑量給藥。
[0029] 試劑盒:北京北方偉業發展有限公司，批號:RT110371。
[0030] 2實驗方法 2.1實驗分組 將60只大鼠隨機分為本發明藥物治療組、對比藥物甲組、對比藥物乙組、二甲雙胍對照 組、模型對照組和陰性對照組，共6組，每組10只大鼠。
[0031] 2.2實驗方法 0.5mg 18-甲基炔諾酮日1次皮下注射，在27d齡時，加用HCG 1.5IU日2次皮下注射，共 注射21d。
[0032] 造模成功后，（1)本發明藥物組:給予本發明藥物1.8g/d; (2)對比藥物甲組：給予 對比藥物甲1.8g/d; (3)對比藥物乙組:給予對比藥物乙1.8g/d; (4)二甲雙胍組:給予二甲 雙胍0.018g/d。每日1次灌胃，連續給藥15d。
[0033] 3實驗結果 各組動物血清中FSH、LH、T濃度檢測結果，見表1-1。陰性對照組與模型對照組的血清 FSH、LH和T的含量均有顯著差異(P〈0.05)，提示造模成功。
[0034]治療后，本發明藥物組和陰性對照組中血清FSH、LH及T的含量無顯著性差異(P> 0.05)，提示本發明藥物治療可以影響PCOS患者的FSH、LH及T的水平，使其接近正常，而對比 藥物甲組和對比藥物乙組的效果則不佳。
[0035] 表1-1各組動物血清中FSH、LH、T的濃度(議土S)
注:與模型對照組比較，#P〈〇. 05，##P〈0.01;與陰性對照組比較，lirPX). 05。
[0036] 4 討論 多囊卵巢綜合征臨床表現呈多態性的內分泌綜合征，以雄激素過多和持續無排卵為臨 床主要特征，是導致生育期婦女月經紊亂最常見的原因之一。其公認的病理生理特點是:雄 激素生成過多，高LH伴有正常或低水平的FSH，高胰島素血癥-胰島素抵抗。多囊卵巢綜合征 大鼠模型的LH及T明顯較陰性對照組升高，而FSH稍低，是因為多囊卵巢綜合征患者的垂體 對GnRH敏感性增加，分泌過量LH及卵巢中作為雄激素形成酶的細胞色素（cytochromep-450cl7)的功能失調，導致卵巢間質、卵泡膜細胞產生過量雄激素。卵巢內高雄激素抑制卵 泡成熟，引起發育中的卵泡閉鎖，不能形成優勢卵泡，以致雌激素的正常分泌模式中斷，但 很多小卵泡仍然分泌雌激素。持續分泌的雌酮和卵巢小卵泡分泌的一定水平的雌二醇作用 于下丘腦及垂體，對LH的分泌呈正反饋，使LH分泌幅度及頻率增加，LH呈持續高水平，而FSH 水平相對降低。
[0037] 5 結論 本發明藥物可干擾多囊卵巢綜合征患者的激素水平，從而達到治愈該病的目的。特別 是，本發明藥物的作用效果明顯優于對比藥物甲與對比藥物乙，說明本發明藥物中兩種藥 味之間的配伍精良，缺一不可，兩種藥味之間的組合產生了明顯的協同增效作用，產生了一 加一大于二的技術效果。
[0038]實驗二:本發明藥物治療40例多囊卵巢綜合征的效果觀察 以往西醫多囊卵巢綜合征(PCOS)的治療主要采用口服促排卵藥物的方式，但隨著用藥 時間的延長，患者出現難妊娠、易流產的現象。近年來，臨床上開展了手術治療、腹腔鏡電凝 打孔術等方式，效果值得肯定，但對女性造成的創傷也非常大。研究人員應用本發明藥物對 PCOS患者進行治療，取得了良好的效果。現報道如下。
[0039] 1.資料與方法 1.1臨床資料 2015年3月至2016年2月期間于我院就診的多囊卵巢綜合征患者75例，均符合《婦產科 學》中有關多囊卵巢綜合征的診斷標準。主癥：月經異常，出現月經稀發或閉經不孕;實驗室 檢查:促黃體生成素(LH)/促卵泡生成素(FSH) >3和(或）睪酮(T) >2.2nmol/L和(或)雄烯 二酮(A) >9. Onmol/Lj超檢查:一側或雙側卵巢增大，多囊性改變。
[0040] 剔除標準:①其他內分泌疾病引起的雄性激素升高;②其他因素導致的不孕癥;③ 精神異常或認知功能障礙的患者;④近3個月服用過影響內分泌的藥物或避孕藥者;⑤合并 嚴重心、腎、肝等器質性病變。
[0041 ] 年齡23~36歲，病程1~8年。其中月經失調61例，不孕者58例，肥胖者31例。
[0042] 根據治療方法不同，分為觀察組和對照組，對照組35例，觀察組40例。2組患者年 齡、病程相比差異無統計學意義(P>〇.05)，具有可比性。
[0043] 1.2治療方法 對照組采用常規西醫治療安體舒通片40mg，2次/d，連續給藥20d。二甲雙胍片0.5g，3 次/d，至正常排卵時停藥。克羅米芬膠囊50mg/d，連用5d。維生素 C 200mg，3次/d，連用20d。
[0044]觀察組在對照組的基礎上加用本發明藥物(參照本發明說明書【具體實施方式】中的 實施例4制備），每次2粒，每日2次，分早晚2次服用。自月經周期第7日起，連續服用3d，停藥 Id。療程3個月經周期。
[0045] 1.3觀察指標 治療前后觀察2組患者臨床癥狀變化，實驗室檢查卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、 睪酮(T)水平變化。
[0046] B超檢查卵巢與子宮血流變： RI=(收縮期峰值血流速度一舒張末期血流速度)/收縮期峰值血流速度； PI=(收縮期峰值血流速度一心動周期中最低血流速度)/最大血流速度的時間平均值。 [0047] 1.4療效評定標準 參照衛生部《中藥新藥臨床研究指導原則》中多囊卵巢綜合征的標準： 痊愈:停藥后連續3個月月經恢復正常周期，經期、血量均正常，恢復正常排卵，BBT雙相 或妊娠，中醫證候療效指數多90%; 顯效:治療后月經接近正常周期(40d以內），血量基本正常，經期8~IOcU90%>中醫證 候療效指數多66.67%; 有效：治療3個月內月經來潮1次，血量、經期較治療前不同程度改善，66.67%>中醫證 候療效指數彡33.33%; 無效:連續治療3個月，月經周期未見改善，中醫證候療效指數<33.33%。
[0048] 1.5統計學方法 采用SPSS 15.0統計軟件對數據進行統計學分析，計數資料和計量資料分別采用X2檢 驗、t檢驗。以P<0.05為差異具有統計學意義。
[0049] 2 結果 2.1 2組患者療效比較 觀察組治療總有效率為92.5%，對照組總有效率為71.4%，差異具有統計學 意義以2=5.784，卩<0.01)，見表2-1。
[0050] 表2-1 2組多囊卵巢綜合征患者的治療效果對比（例）
2 · 2 2組思有淚)了廟促排卵、恢炅排卵、壯販情況比牧 觀察組卵泡成熟率、恢復排卵、妊娠率均顯著優于對照組(x2=9.099，6.857，12.538，P <〇.〇1)，見表 2-2。
[0051] 表2-2 2組多囊卵巢綜合征患者治療后促排卵、妊娠情況比較[例(％)] 2.3治療前后激素水平變化
與治療前相比，LH、T以及LH/FSH較治療前均有所降低。治療后，組間各激素水平相比差 異有統計學意義(t=5 · 324，6 · 254，3 · 413，13 · 580，P<0 · 05)，見表2-3。
[0052]表2-3 2組多囊卵巢綜合征患者治療前后激素水平的變化
3討論與結論 傳統醫學中并無"多囊卵巢綜合征"之說，其隸屬"閉經""月經后期""不孕"等范疇。中 醫認為，"經水出諸腎"，即腎乃藏精之處，是女性月經來潮的重要條件。腎氣不足，虛寒滯血 乃本病之本，氣血痰濁為兼夾病機。腎虛不能蒸騰下焦津液，脾虛不能運化水濕，津液水濕 聚而成痰，腎虛痰濕夾雜，互損陰陽。則誘發"腎-天癸-沖任-胞宮"生殖軸功能紊亂，即 PCOSo
[0053]卵細胞的生長發育受FSH、LH等激素調控。FSH作用于卵巢，促使原始卵泡的發育成 熟。當卵泡液內FSH濃度不足時，有絲分裂受阻，卵泡無法繼續發育。有研究指出，FSH水平在 優勢卵泡的選擇中至關重要。LH異常是PCOS患者實驗室檢查的特征性變化，也是生殖功 能障礙的根本原因。體內過高的LH會促進卵泡膜細胞、間質細胞產生大量雄激素，并轉化 為雌酮。雌酮可擾亂月經周期中LH峰的形成，影響卵泡的成熟和排出。本研究顯示，觀察組 治療后的LH/FSH比值顯著降低，T激素水平下降，有助于成熟卵泡的發育和增加子宮內 膜的生長。提示，本發明藥物可溫補腎陽，增加孕激素分泌，強化黃體功能，規律月經來潮， 為胚胎種植營造良好的環境。腎陰得養，腎陽得化，益精血以固沖任之本，故生殖之精充沛。 數據顯示，觀察組治療總有效率為92.5%，而單純西藥僅71.4%。此外，觀察組恢復排卵情況、 妊娠率顯著優于對照組，也就是說，本發明藥物對PCOS患者排卵、妊娠均有益。
[0054]實驗三:本發明藥物治療卵巢囊腫的實驗研究 卵巢囊腫(OvarianCyst，0C)是現代婦科常見的良性腫瘤之一，約占卵巢腫瘤的75%。它 是指卵巢內部生成囊性腫物，可分為非腫瘤性和腫瘤性兩類，等同于中醫"癥瘕""積聚""腸 覃"等病的范疇，多發于20~50歲的中青年婦女，發病率占育齡婦女的15%。研究人員運用中 醫學理論探討OC的基本病機及治療原則，認為該病多因婦女在經期或產后忽視調理，因七 情內傷或六淫之邪內侵，臟腑功能失調，致使濕濁痰飲內生，瘀血阻滯胞脈，蓄積日久而形 成囊腫。其病機核心為肝郁脾虛、痰瘀互結。治療宜健脾疏肝、利濕化痰、活血散結。
[0055] 本發明藥物對多囊卵巢綜合征有非常好的治療效果，研究人員預測，本發明藥物 對卵巢囊腫也應該具有一定的治療效果，于是便開展了嘗試行實驗研究，觀察本發明藥物 對OC模型大鼠血液內白介素-6(IL-6)、雌二醇(E2)、孕酮(P)的含量影響。
[0056] 1 材料 1.1試驗動物 SPF級健康成年雌性wi star大鼠75只，二月齡，體重（200 ± 10)g，試驗動物由黑龍江中 醫藥大學實驗動物中心提供。
[0057] 1.2藥物及制備 本發明藥物:參照本發明說明書【具體實施方式】中的實施例1制備。分別濃縮成每毫升含 生藥I、2g的兩種藥液，作為低劑量組和高劑量組。置冰箱內4°C保存。
[0058] 陽性對照藥:桂枝茯苓丸（山西楊文水制藥有限公司，國藥準字Z14020791)，每丸 重6g。
[0059] 1.3主要試劑 10%水合氯醛、10%芥子油、石蠟油、注射用生理鹽水、醫用碘伏。手術器械一套(手術刀、 大直剪、大彎剪、組織鑷、眼科鑷、止血鉗、縫合用針線、無菌棉球、醫用手套、一次性注射器 等)。
[0060] 1.4主要器材 全自動化學發光儀，ADVIAXP(德國西門子公司）;性激素試劑盒(南京建成生物有限公 司）;Rat，IL-6ELISA，ERC003(欣博盛生物科技有限公司）;冰凍切片機，Finesse325(英國三 頓生物科技有限公司）;分析天平，BS110S(北京賽多利斯天平有限公司）；白鼠全套籠架(蘇 州寒山金屬制品廠）。
[0061] 2 方法 2.1試驗分組 動物隨機分為5組，每組15只。分別為正常組、模型組、桂枝茯苓丸組、本發明藥物低劑 量組、本發明藥物高劑量組。
[0062] 2.2造模方法 參照Wesselmann(王淑貞.實用婦產科學[M].北京:人民衛生出版社，2000:707)致備大 鼠"卵巢囊腫"模型，采用10%水合氯醛腹腔(〇.35/100g)注射麻醉后，使大鼠呈仰臥位，固定 于解剖臺上，下腹正中剃去鼠毛并常規消毒，于下腹正中作1.5cm長且垂直方向的切口，切 口下端上方〇.5cm處為恥骨聯合，在此處分離組織和包繞的脂肪團，經膀胱后側找到輸卵 管，順著輸卵管壺腹部找出左側卵巢，按O.lmLIO%的芥子油(95%的芥子油用石蠟油稀釋)注 入卵巢，用軟蠟將注射針眼封住，防止藥液外溢。分層縫合手術切口，最后消毒切口，將白鼠 放回籠中。一般注射芥子油2h后會造成臟器的急性充血水腫，出現炎癥反應形成囊腫。在注 射2h后摘取大鼠左側卵巢，經10%甲醛固定48h、酒精梯度脫水后，進行15μπι的冰凍切片制 作，進行HE染色。在低倍鏡下觀察兩組卵巢的形態，可看到注射芥子油后大鼠的卵巢明顯的 充血、水腫。以卵巢囊腫> IOmm為造模成功。
[0063] 2.3給藥方法 造模成功各組隨機分配完成即開始給藥。本發明藥物高劑量組、本發明藥物低劑量組 分別灌服本發明藥物水煎液，分別相當于含生藥50g · kg+1 · Cf1和25g · kg< · Cf1;桂枝茯苓 丸組灌服等容積的桂枝茯苓丸混懸液;正常組和模型組灌以等容積的生理鹽水。各組均按 0.25mL · 10g-1 · d-1灌胃。1次/d，連續6周。
[0064] 2.4取材方法 分組完成后，即將大鼠斷尾取血，放入標記清楚的EP管中。灌胃6周后采用同樣方法取 血。來測定每組處理前后大鼠血液中IL-6和性激素(雌二醇、孕酮）的含量。
[0065] 2.5統計學處理 所測得數據采用統計軟件SPSS13.0進行分析，計量資料采用（sx±)進行統計描述。經 方差齊性檢驗后，各組之間進行方差F分析。組間比較用t檢驗，P〈0.05表示差異具有統計學 意義。
[0066] 3 結果 與正常對照組比較，模型組中的IL-6和性激素(雌二醇、孕酮）的含量明顯升高，見表3- 1〇
[0067] 表3-1治療前各組大鼠血清中IL-6、雌二醇、孕酮的含量
經本發明藥物和桂枝茯苓丸治療后，觀察到IL-6、雌二醇、孕酮在桂枝茯苓丸組中的大 鼠血液中的含量均有所降低(P〈〇. 05)，而IL-6、雌二醇、孕酮在本發明藥物高劑量組、本發 明藥物低劑量組中的大鼠血液中的含量均沒有明顯降低(P>〇. 05)，見表3-2。
[0068] 表3-2治療后各組大鼠血清中IL-6、雌二醇、孕酮的含量
4結論 本實驗研究顯示，本發明藥物不能降低IL-6的水平，不能抑制局部成纖維細胞增生、纖 維蛋白形成及膠原沉積，也不能減輕卵巢囊腫病灶炎性粘連及纖維化，對卵巢囊腫的生長 沒有抑制作用，所以，本發明藥物對卵巢囊腫無治療作用，不能使囊腫萎縮。
[0069] 實驗四：本發明藥物的質量檢測方法研究 1儀器與試藥 1.1儀器 高效液相色譜儀(Agilentl 10高效液相色譜儀及工作站，G131 IAquat栗，G1314紫外檢 測器）。
[0070] 1.2試藥 薔薇酸對照品（中國藥品生物制品檢定研究院）;本發明中藥組合物；中藥材(哈藥集團 人民同泰連鎖藥店提供）；甲醇(色譜醇，上海生化工助劑廠）;其他試劑為分析純。
[0071] 2方法與結果 2.1處方 美薔薇果500g，黃蘆木500g。
[0072] 2.2制備 取干燥的美薔薇果500g，黃蘆木500g，第一次加 IlOOOmL水浸泡1小時，煎煮1小時，第二 次加4000mL，煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0073] 2.3薔薇酸的含量測定 2.3.1 HPLC色譜條件 采用HypersilDs(4.0mmX125mm，5ym)色譜柱;流動相：比例為30:70的乙腈-水;檢測波 長:200nm;柱溫:20°C ;流速：1.0 mL · mirT1;進樣量：IOyL;在該色譜條件下，對照品及樣品色 譜峰良好，無美薔薇果陰性對照對測定無干擾。
[0074] 2.3.2對照品溶液的制備 精密稱取80 °C干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，加甲醇制成每ImL含0.2mg的溶液。
[0075] 2.3.3供試品溶液與陰性對照液的制備 精密稱取本發明藥物l〇g，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回流溶劑并濃縮至干，殘渣 加水IOmL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗 滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并轉移至IOmL容量瓶中，加 甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液即得;另按處方比例制備不含美薔薇果的陰性對照品，同法 制成陰性對照液。
[0076] 2.3.4標準曲線的繪制 精密稱取80°C干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，用甲醇制成10.4，20.8，41.6，83.2， 166. AygmI/1系列濃度的溶液，分別精密量取上述5種濃度溶液各I OyL，注入高效液相色譜儀 進行測定。
[0077] 以峰面積比值與濃度進行線性回歸，得回歸方程為：A=21.2763C-0.1391，r= 0.9999。表明薔薇酸在10.4~166. AygmI/1濃度范圍內呈良好的線性關系。
[0078] 2.3.5穩定性試驗 精密吸取供試品溶液l〇yL，分別于0，l，2,4,8h進樣，并計算薔薇酸含量。結果8h內RSD 為0.45%( n=5 )。表明樣品溶液在8h內穩定。
[0079] 2.3.6重復性試驗 按供試品溶液制備方法平行處理樣品5份，依法測定薔薇酸含量并計算。結果測得薔薇 酸平均含量為0.12mg · g-IRSD為1.3%。
[0080] 2.3.7精密度實驗 精密吸取薔薇酸對照品溶液，重復進樣5次，依法測定峰面積。結果RSD為0.23%(n=5)。 表明精密度較好。
[0081 ] 2.3.8回收率實驗 精密稱取已知薔薇酸含量的同一批號的樣品6份，按高、中、低濃度分別精密加入適量 的薔薇酸對照品溶液，按樣品測定項下操作，依法測定，計算回收率。結果平均回收率為 100.3%，RSDS〇.45%(n=5)。
[0082] 2.3.9樣品含量測定 分別量取對照品溶液和供試品溶液適量，用微孔濾膜濾過，各進樣IOyL，按上述色譜條 件測定3批樣品，平行測定5次。按外標法以峰面積計算供試品溶液薔薇酸的含量。本品含薔 薇酸應為標示含量的95%~105%，以每Ig樣品含薔薇酸計，不得少于0.1211^。3批樣品含量分 別為 100 · 8%(RSD=1 · 2%)，101 · 7%(RSD=1 · 3%)，99 · 2%(RSD=1 · 1%)。
[0083]
【具體實施方式】： 實施例1:本發明藥物 處方:美薔薇果50g，黃蘆木50g 制備方法：取干燥的美薔薇果50g、黃蘆木50g第一次加11OOmL水浸泡1小時，煎煮1小 時，第二次加400mL，煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，得本發明藥物。
[0084] 實施例2:對比藥物甲 處方:美薔薇果100g 制備方法:取干燥的美薔薇果100g，第一次加11OOmL水浸泡1小時，煎煮1小時，第二次 加400mL，煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，得對比藥物甲。
[0085] 實施例3:對比藥物乙 處方:黃蘆木100g 制備方法:取干燥的黃蘆木100g，第一次加11OOmL水浸泡1小時，煎煮1小時，第二次加 400mL，煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，得對比藥物乙。
[0086]實施例4:本發明藥物硬膠囊劑 藥物處方:美薔薇果500g，黃蘆木500g 制備方法:取干燥的美薔薇果500g，黃蘆木500g，第一次加 I 1000 mL水浸泡1小時，煎煮1 小時，第二次加4000mL，煎煮1小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細粉，加入輔 料，混勻，裝入硬膠囊，制成1 〇〇〇粒。。
[0087] 采用高效液相色譜法對薔薇酸進行含量測定： (1) 色譜條件：采用Hypersi IDs色譜柱；流動相：比例為30 :70的乙腈-水；檢測波長： 200歷;柱溫：20°(：;流速：1.〇1111^1^11- 1;進樣量：1(^^ (2) 對照品溶液制備：精密稱取80°C干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，加甲醇制成每 ImL含0.2mg的溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發明藥物10g，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回 流溶劑并濃縮至干，殘渣加水IOmL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正 丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并 轉移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4) 測定:分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各IOyU注入高效液相色譜儀，進 行檢測，檢測結果為薔薇酸的含量為〇.1823mg/g。
[0088] 此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包 含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當 將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員 可以理解的其他實施方式。
【主權項】
1. 一種治療多囊卵巢綜合征的藥物，其特征在于，該藥物是由以下重量份的原料制成 的:美薔薇果1~2重量份，黃蘆木1~2重量份。2. 如權利要求1所述藥物，其特征在于，該藥物是由以下重量份的原料制成的：美薔薇 果1重量份，黃蘆木2重量份。3. 如權利要求1所述藥物，其特征在于，該藥物是由以下重量份的原料制成的：美薔薇 果2重量份，黃蘆木1重量份。4. 如權利要求1藥物，其特征在于，該藥物是由以下重量份的原料制成的：美薔薇果1重 量份，黃蘆木1重量份。5. 如權利要求1~4中任意一項所述的藥物，其特征在于，該藥物制備成片劑、丸劑、散 劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液。6. 如權利要求5所述的藥物，其特征在于，該藥物采用如下方法制備:取美薔薇果、黃蘆 木，混合，加入3~15倍量的水浸泡0.5~2小時，煎煮0.5~2小時，煎煮2~4次，每次0.5~2 小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。7. 如權利要求6所述的藥物，其特征在于，該藥物采用如下方法制備:取干燥的美薔薇 果、黃蘆木，第一次加11倍量水浸泡1小時，煎煮1小時，第二次加4倍量水煎煮1小時，合并水 煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻，裝入硬膠囊，即得。8. -種藥物的質量檢測方法，該藥物是由以下重量份的原料制成的：美薔薇果1~2重 量份，黃蘆木1~2重量份，其特征在于，該藥物采用如下方法檢測：采用高效液相色譜法進 行薔薇酸的含量測定： (1) 色譜條件:采用Hypersi IDs色譜柱;流動相：比例為20~40:60~80的乙腈-水;檢測 波長：190~210nm;柱溫：15~25°C ;流速:0 · 5~1 · 5mL · min-1;進樣量：5~20yL; (2) 對照品溶液制備:精密稱取干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，加甲醇溶解制成對照 品溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發明藥物，加甲醇，加熱回流，提取液回流溶劑并濃 縮至干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌，正 丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4 )測定：分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各5~20yL，注入高效液相色譜 儀，進行檢測。9. 如權利要求8所述藥物的質量檢測方法，該藥物是由以下重量份的原料制成的：美薔 薇果1~2重量份，黃蘆木1~2重量份，其特征在于，該藥物采用如下方法檢測:采用高效液 相色譜法進行薔薇酸的含量測定： (1) 色譜條件：采用HypersilDs色譜柱；流動相：比例為30: 70的乙腈-水；檢測波長： 200歷;柱溫：20°(：;流速：1.〇1111^1^11- 1;進樣量：1(^^ (2) 對照品溶液制備:精密稱取80°C干燥至恒重的薔薇酸對照品適量，加甲醇溶解制成 每ImL含0.2mg的對照品溶液； (3) 供試品溶液的制備:精密稱取本發明藥物10g，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回 流溶劑并濃縮至干，殘渣加水IOmL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正 丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并 轉移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4)測定:分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各10yL，注入高效液相色譜儀，進 行檢測。10.如權利要求1~4中任意一項所述的藥物在制備治療卵巢囊腫的藥物或保健品中的 應用。
【文檔編號】A61K36/738GK105943658SQ201610476727
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月27日
【發明人】張多加
【申請人】黑龍江中醫藥大學附屬第醫院, 黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院