中藥及其提取物用于制備治療慢性乙肝藥物的應用
【專利摘要】本發明涉及中藥及其提取物用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。具體涉及椿皮用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。同時涉及椿皮提取物用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。還涉及用于治療慢性病毒性乙型肝炎的復方方劑，該復方方劑中含有椿皮。椿皮及其提取物對乙型肝炎的療效優于拉米夫定，不僅對乙肝表面抗原(HBsAg)的具有良好的抑制作用，在e抗原(HBeAg)的抑制方面更顯現出更大地優勢，而研究表明HBeAg的持續陽性，是患者繼發肝硬化，肝癌的高危因素。
【專利說明】
中藥及其提取物用于制備治療慢性乙肝藥物的應用
技術領域
[0001] 本發明涉及椿皮作為藥物的新用途，具體涉及椿皮及其提取物用于制備治療慢性 病毒性乙型肝炎藥物的應用。
【背景技術】
[0002] 椿皮為苦木科植物臭椿(樗)的根皮或樹皮。主產于山東、遼寧、河南、安徽等地。臨 床用名有椿皮、樗根皮、樗白皮。【藥性】苦、澀，性寒。歸大腸、胃、肝經。【功效】清熱燥濕、收 斂止帶、止瀉、止血、殺蟲。
[0003] 《藥性論》記載本品味苦，微熱，無毒。能治赤痢，腸滑痔疾，瀉血不住。《本草綱目》 記載："椿皮色赤而香，樗皮色白而臭，多服微利人。蓋椿皮入血分而性澀，樗皮入氣分而性 利，不可不辨。其主治之功雖同，其澀利之效則異，正如茯苓、芍藥，赤、白頗殊也。凡血分受 病不足者，宜椿皮。氣分受病而郁者，多用樗皮，此心得之微也。"《本草分經》認為本品"苦， 寒。燥濕，勝熱。澀腸。入血分而澀血，兼去肺胃陳痰，治濕熱諸病，有斷下之功。"
[0004] 目前椿皮常用于治療以下疾病：
[0005] 1、赤白帶下本品能入大腸，苦可燥濕，寒以清熱，濕能收斂。既可清熱燥濕，又能收 斂止帶，為止帶之常用藥物。治療濕熱下注，帶脈失約而致赤白帶下者，常與黃柏等同用。如 樗樹根丸(《攝生眾妙方》）。
[0006] 2、久瀉久痢，濕熱瀉痢本品入大腸經能收澀止瀉，清熱燥濕。治久瀉久痢，常與柯 子、母丁香同用，如柯黎勒丸（《脾胃論》）；治濕熱瀉痢，常與地榆同用，如椿根散(《魯府禁 方》)。
[0007] 3、崩漏經多，便血痔血本品入肝經血分，善能收斂止血，因其性寒，尤宜用于血熱 崩漏、便血者。治崩漏、月經過多者，常與黃柏、黃芩、白芍、龜甲等同用，如固經丸（《醫學入 門》）。治便血痔血，可單用本品為丸服;或與側柏葉、升麻、白芍等同用，如椿皮丸(《丹溪心 法》)。
[0008] 此外，本品尚還有殺蟲功效，內服治蛔蟲腹痛;外洗治疥廯瘙癢。
[0009] 關于椿皮的現代藥理研究：
[0010] 1、化學成分:椿皮含苦楝素、鞣質、赭樸酚，根及樹干含苦木素。樹皮含臭椿苦酮、 臭椿苦內酯、乙酰臭椿苦內酯、苦木素、新苦木苦素等。
[0011] 2、藥理作用：⑴椿皮有抗菌作用，椿皮100%煎劑在體外對福氏痢疾桿菌、宋氏痢 疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌等均有抑制作用。對金黃色葡萄球菌中度敏感。
[0012] ⑵椿皮有抗癌作用，其有效成分是臭椿雙內酯及一種未定結構的化合物X，其單體 具有很強的抗癌活性，對子宮頸癌有一定作用。
[0013] ⑶椿皮煎劑(稀釋液)有殺滅陰道滴蟲的作用;椿皮所含臭椿苦酮有較強的抗阿米 巴原蟲作用;椿皮有驅蛔蟲作用。
[0014] ⑷椿皮所含鞣質具有收斂作用;椿皮有一定止血作用；干皮的制劑對潰瘍病有一 定的治療作用。
【發明內容】
[0015] 本發明目的之一是提供了椿皮用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。
[0016] 本發明目的之二是提供了椿皮提取物用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。
[0017] 所述的棒皮提取物為棒皮水提物。
[0018] 本發明目的之三是提供了一種用于治療慢性乙肝的復方方劑，該復方方劑中含有 椿皮。
[0019] 本發明的有益效果：
[0020] 椿皮對乙肝表面抗原(HBsAg)的具有良好的抑制作用，在e抗原(HBeAg)的抑制方 面更顯現出更大地優勢，而研究表明HBeAg的持續陽性，是患者繼發肝硬化，肝癌的高危因 素。
【附圖說明】
[0021] 圖1為拉米夫定和椿皮水提物不同濃度作用后HBV-DNA的定量測定結果比較；
[0022]圖2為拉米夫定作用后HBV-DNA定量PCR曲線圖；對應藥物濃度說明：·指示濃度為 10、·指示濃度為1、▲指示濃度為ΚΓ1、?指示濃度為ΚΓ2、*指示濃度為ΚΓ3、?指示細胞對 昭. ，
[0023]圖3為椿皮水提物作用后HBV-DNA定量PCR曲線圖，對應藥物濃度說明：·指示濃度 為6X 10-2、·指示濃度為6X 10-3、▲指示濃度為6X 10-4、?指示濃度為6X 10-5、*指示濃度 為6 X 10_6、?指示細胞對照；
[0024]圖4為拉米夫定作用后HBV-DNA定量PCR的瓊脂糖凝膠電泳鑒定；
[0025]圖5為椿皮水提物作用后HBV-DNA定量PCR的瓊脂糖凝膠電泳鑒定。
【具體實施方式】
[0026] ( - )臨床觀察
[0027] 發明人在長期的臨床醫療實踐中，通過處方的加減化裁及大量的藥物篩查和臨床 驗證發現，含有椿皮的復方制劑對慢性病毒性乙型肝炎具有良好的治療效果，尤其對于緩 解乙肝病毒復制，降低乙肝病毒DNA的滴度具有明顯療效。
[0028]自2012年至今臨床觀察慢性乙肝病毒復制患者32名，病毒DNA檢測2.18*102-3.2* 1〇8不等，年齡18-45歲，病程2-8年不等，服藥療程1-6月，治療方法為含椿皮的中藥湯劑，具 體方劑如下：
[0029] 椿皮18g，柴胡15g，防風18g，虎杖30g，藁本15g，五味子30g，郁金15g，劉寄奴20g， 紅藤25g，地榆15g，六神曲12g，甘草6g。
[0030] 治療前32例患者均有不同程度的病毒復制及病毒DNA滴度升高情況，治療后26例 患者出現病毒DNA降低，總有效率81.2%，6例患者病毒DNA滴度無明顯降低，其中2例患者出 現轉氨酶升高，服藥分別于服藥1周和2周后中止治療，其中1例患者谷丙轉氨酶升高至 81IU/L，另一例谷丙轉氨酶升高至320IU/L。
[0031] 典型病例：
[0032] 患者楊*玲，女，44歲，2012年12月就診，查乙肝病毒DNA定量3.23*107,服藥4月后 復查乙肝病毒DNA定量1.72*103,繼續服藥2月后復查乙肝病毒DNA定量轉陰。
[0033] 患者李*，男，18歲，2014年4月就診，查乙肝病毒DNA定量2.18*102,服藥2月后復查 乙肝病毒DNA定量轉陰。
[0034] 基于既往臨床藥物的多次加減化裁及大量中藥篩選的結果，發明人預估本方劑中 發揮主要治療作用的藥物為椿皮。
[0035] (二)體外實驗
[0036]發明人于2014年5月-12月進行了椿皮水提物抗HBV的效應進行了體外實驗，觀察 了椿皮水提物對HBsAg、HBeAg及HBV-DNA復制的抑制作用，并進行了定性及定量分析。
[0037] 該實驗以HepG2.2.15細胞為研究對象，HepG2.2.15是抗HBV新藥開發的一個良好 的體外研究工具，該細胞株是用2個頭尾相連的HBVDNA全基因的重組質粒轉染受體細胞 HepG2而成，可在體外無性繁殖，能夠長期穩定的向培養上清中分泌HBsAg，HBeAg和完整的 Dane顆粒，而且還能產生大量的復制中間體，是體外篩選抗HBV藥物的良好模型。
[0038]該研究中椿皮水提物制備方法:椿皮18g，清水400ml浸泡半小時后，大火煎煮5分 鐘后轉小火，煎煮15分鐘，最終獲得藥液置于烘箱，使其容積達300ml，取出至于密閉容器，4 °C冷藏備用。
[0039]實驗方法：
[0040] 一、藥物的細胞毒性測定
[0041 ] 1.將拉米夫定（10 % FBS+DMEM培養基)配成濃度為1 Og/L的溶液。
[0042] 2.將對數生長期細胞用胰酶消化后制備成單細胞懸液，計數后調整細胞濃度至2 X104cell/ml，加入到96孔板中（100μΙ每孔），同時設置陰性對照孔、空白對照孔、每孔設置 3個復孔。置于細胞培養箱中，37 °C、5 % C02培養過夜。
[0043] 3.取出培養板，吸棄上清后加入含有不同濃度藥物的10 %FBS+DMEM培養基，繼續 37°C、5 % C02培養72小時。
[0044]用10%FBS+DMEM培養基稀釋拉米夫定和椿皮水提物，藥物濃度如下。然后每孔加 100μΙ 稀釋藥液。拉米夫定(8/1):10、1、0.1、0.01、0.001(即10、1、10-1、10-2、10- 3)椿皮(8/1) 采取倍比稀釋:原液60、6、6 X 10-1、6 X 10-2、6 X 10-3
[0045] 4.藥物作用三天后，在96孔培養板各孔中加入10μ1 ΜΤΤ溶液（5mg/ml，即0.5% MTT)，繼續培養4小時后輕輕吸棄上清，每孔加入150μ1 DMS0，放置搖床上低速振蕩10min， 使結晶物充分溶解
[0046] 5 ·在酶聯免疫檢測儀測570nm處的0D值。
[0047] 6.根據公式計算出藥物對細胞的抑制率及存活率(見附表1、2)
[0048]
[0049]
[0050] 公式中：B = log<50%藥物濃度
[0051] 7.結果
[0052] 從表1、表2看，拉米夫定細胞毒性很小，即使最大濃度10g/L，細胞存活率依然高達 87 %。椿皮水提物有一定細胞毒性，其半數細胞毒濃度即TC5Q = 0.665 (g/L)。
[0053] 表1不同拉米夫定濃度對HepG2.2.15細胞增值的影響
[0054]
[0055] 表2不同濃度椿皮對HepG2.2.15細胞增殖的影響
[0056]
[0057] TC5〇 = 0.665(g/L)
[0058] 二、藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的抑制作用測定
[0059] 1.取HepG2.2.15細胞計數后調整細胞濃度至2 X 104cell/ml，加入到24孔細胞培 養板中（lml每孔），同時設置復孔、陰性對照孔、空白對照孔。置于細胞培養箱中，37°C、5 % C02培養過夜。
[0060] 2.取出24孔細胞培養板，吸出上清后依次加入不同濃度的藥物（藥物濃度根據細 胞毒性實驗的結果，分別取對HepG2.2.15細胞抑制率低于15%的濃度作為最大無毒濃度， 用培養基倍遞減稀釋），lml每孔，常規培養。椿皮水提物(g/L)采取倍比稀釋:6 X 1 0-1、6 X 10-2、6 X 10-3、6 X 10-4、6 X 10-5;拉米夫定藥物濃度選擇(g/L): 10、1、10-\ 10-2、10-3。
[0061] 3.分別于第3、6、9天更換新鮮含藥培養基，并將各孔上清收集至1.5ml的離心管中 于-20 °C凍存備用。
[0062] 4.用ELISA試劑盒檢測上述收集的上清中的HBsAg量，按照試劑盒中的說明書操 作，最后用酶標儀讀取波長450nm處的0D值。表面抗原檢測操作步驟如下：
[0063] (1)根據實驗，選擇一定量的反應板條。
[0064] (2)加入75μ1待測樣品和陰、陽性對照于反應孔中，空白對照1孔。
[0065] (3)用封片紙覆蓋反應板后，放置37°C孵育60分鐘。
[0066] (4)取出反應板，撕去封片，在已加入待測樣品和陰性、陽性對照的孔中各加入50μ 1酶結合物。
[0067] (5)在微孔振蕩器上震蕩10秒鐘，用封片紙覆蓋反應板后，放置37°C孵育30分鐘。
[0068] (6)取出反應板，撕去封片紙，洗滌反應板5次。手工洗板:棄去孔內液體，用洗滌液 注滿各孔，靜置1分鐘，甩干，重復5次后，在干凈的吸水紙上拍干。
[0069] (7)洗滌結束后立即在所有孔內加入顯色劑A、B各50μ1每孔，在微孔振蕩器上震蕩 10秒鐘。
[0070] (8)用封片紙覆蓋反應板后，37°C孵育30分鐘。
[0071] (9)在所有孔中加入50μ1終止液，震蕩反應5秒鐘，使之充分混勻。
[0072] (10)用酶標儀讀取波長450nm處各孔的0D值半數抑制藥物濃度（IC50)。
[0073] (11)根據測定數據計算藥物抗原抑制百分率和。
[0076] 頭脫結米：[0077] 1.藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的抑制作用測定[0078] 表3不同濃度拉米夫定對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的抑制效果
[0074]
[0075]
[0079]
[0081] IC5Q = 0.16(g/L)拉米夫定的半數抑制藥物濃度為0.16g/L
[0082] 表4不同濃度椿皮水提物對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的抑制效果
[0083]
[0084] IC5Q = 7.19Xl(T2(g/L)椿皮水提物的半數抑制藥物濃度為= 7.19Xl(T2g/L
[0085] 由上表可以發現拉米夫定和椿皮水提物濃度越大，對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg 的抑制效果越好。拉米夫定的最大抑制率為76.6%，而椿皮水提物最大抑制率為97%，且椿 皮水提物的抑制濃度明顯小于拉米夫定的濃度，在同一濃度級別下1 0-1時，拉米夫定的最大 抑制率為45.6%，而椿皮水提物最大抑制率為97%。
[0086] 三、藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg的抑制作用測定
[0087] 1.取HepG2.2.15細胞計數后調整細胞濃度至2 X 104cell/ml，加入到24孔細胞培 養板中（1ml每孔），同時設置復孔、陰性對照孔、空白對照孔。置于細胞培養箱中，37°C、5% C02培養過夜。
[0088] 2.取出24孔細胞培養板，吸出上清后依次加入不同濃度的藥物(藥物濃度根據細 胞毒性實驗的結果，分別取對HepG2.2.15細胞抑制率低于15 %的濃度作為最大無毒濃度， 用培養基倍遞減稀釋），lml每孔，常規培養。椿皮水提物(g/L)采取倍比稀釋dXHT^ex 10-2、6 X 10-3、6 X 10-4、6 X 10-5;拉米夫定藥物濃度選擇(g/L): 10、1、10-\ 10-2、10-3。
[0089] 3.分別于第3、6、9天更換新鮮含藥培養基，并將各孔上清收集至1.5ml的離心管中 于-20 °C凍存備用。
[0090] 4.用ELISA試劑盒檢測上述收集的上清中的HBeAg量，按照試劑盒中的說明書操 作，最后用酶標儀讀取波長450nm處的0D值。e抗原檢測操作步驟如下：
[0091] (1)根據實驗，選擇一定量的反應板條
[0092] (2)每孔加入50μ1待測樣品和陰、陽性對照于反應孔中，空白對照1孔。
[0093] (3)每孔加入50μ1酶結合物，充分混勻，封片紙覆蓋反應板后，置37°C孵育30分鐘。
[0094] (4)取出反應板，撕去封片紙，洗滌反應板5次。手工洗板:棄去孔內液體，用洗滌液 注滿各孔，靜置1分鐘，甩干，重復5次后，在干凈的吸水紙上拍干。
[0095] (5)每孔加顯色劑A、B液各50μ1，充分混勻，封片紙覆蓋反應板后，置37 °C孵育15分 鐘。
[0096] (6)每孔加入終止液50μ1，混勻。
[0097] (7)用酶標儀讀取波長450nm處各孔的0D值。
[0098] (8)根據測定數據計算藥物抗原抑制百分率。
[0101 ] 表5個冋濃度揑術天足對HepG2 · 2 · 15細腿分泌HBeAg的?Ψ制雙呆
[0099]
[0100]
[0102]
[0103] 表6不同濃度椿皮水提物對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg的抑制效果
[0104]
[0105] IC5Q=1.84X10-Hg/L)椿皮水提物的半數抑制藥物濃度為lMXIO'g/L)
[0106] 從表5、表6看，椿皮水提物對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg的抑制性能優于拉米夫 定。拉米夫定在其最大濃度時對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg的抑制率最高僅為35%，而椿皮 水提物為82 %。椿皮水提物和拉米夫定在加藥后第3天、第6天、第9天時對細胞分泌HBeAg的 抑制率變化不大，說明與作用時間關聯不大，在加藥后第3天即已達到了最高抑制率。
[0107] 四、藥物治療指數
[0108] 1.椿皮水提物對HBsAg的抑制數據計算其治療指數。
[0109] 椿皮水提物的治療指數(TI)=TC5Q/IC5Q = 0.665/7.19 X 10-2 = 9· 25>2.0
[011 0] 2.從椿皮水提物對HBeAg的抑制數據計算其治療指數。
[0111] 椿皮水提物的治療指數(ΤΙ) =TC5Q/IC5Q = 0 · 665/1 · 84 X 10-i = 3 · 61 >2 · 0
[0112] 說明椿皮水提物對抑制HBsAg和HBeAg都有效，而且低毒，進一步研究開發有意義。
[0113] 五、藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg抑制作用的定量測定
[0114] 1.實驗試驗所用試劑：乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒（電化學發光法），REF: 05957435 190。
[0115] 2.所用儀器:羅氏-E170電化學發光全自動免疫分析儀。
[0116] 3.試驗方法:雙抗體夾心法
[0117] (1)將前期收集的藥物作用第九天的各孔細胞上清液解凍，以不加藥物的空為對 照。
[0118] (2)離心后取上清200μ1加入測量杯。
[0119] (3)放入羅氏Ε-170電化學發光儀，自動分析取得結果如下。
[0120]
[0121] 表7兩組藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg抑制作用的定量測定
[0122]
[0123] IC5啦=0 · 25 X 10-Hg/L)，IC5_= 1 · 23 X 10-Hg/L)
[0124] 從表7看，拉米夫定和椿皮水提物在其最大濃度時對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的 抑制率都超過了 50 %，分別為67.99 %和83.08 %，而且椿皮水提物的抑制效果優于拉米夫 定;從相同濃度級數(ΠΓ^ΠΓ^ΠΓ3)看，椿皮水提物的抑制效果明顯優于拉米夫定，相差顯 著。
[0125] 六、藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg抑制作用的定量測定
[0126] 1.實驗試驗所用試劑：乙型肝炎病毒E抗原檢測試劑盒（電化學發光法），REF: 11820583 122。
[0127] 2.所用儀器:羅氏-E170電化學發光全自動免疫分析儀。
[0128] 3.試驗方法:雙抗體夾心法
[0129] (1)將前期收集的藥物作用第九天的各孔細胞上清液解凍，以不加藥物的空為對 照。
[0130] (2)離心后取上清200μ1加入測量杯。
[0131] (3)放入羅氏Ε-170電化學發光儀，自動分析取得結果如下。
[0132]
[0133] 表8藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg抑制作用的定量測定
[0134]
[0135] IC50 椿= 1.32X10_l(g/L)
[0136] 從表8看，拉米夫定和椿皮水提物在其最大濃度時對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg的 抑制率相差顯著，分別為44.48%和91.72 %，差別顯著;但隨著濃度的降低，椿皮水提物的 抑制效果下降顯著。
[0137] 七、藥物抑制HBV-DNA復制作用的定量測定
[0138] 1.試驗步驟
[0139] (1)提取病毒DNA:試劑使用TaKaRa公司的病毒RNA/DNA快速純化試劑盒。
[0140] 1)取200μ1細胞上清液加入到2ml離心管中，以不加藥物的空為對照。
[0141 ] 2)加入200μ1 butter VGB，20yl的Proteinasek和Ι.ΟμΙ的CarrierRNA，充分混勾 于56°C的水浴溫浴10分鐘；
[0142] 3)向裂解液中加入200μ1無水乙醇，充分吹打混勻后輕微離心；
[0143] 4)將Spin Column安置于Collection Tube上，溶液移至Spin Column中，12000rpm 離心2分鐘，棄濾液；
[0144] 5)將500μ1 的Butter RwA加入至Spin Column中，12000rpm離心 1 分鐘，棄濾液；
[0145] 6)將700μ1 的Butter RwB加入至Spin Column中，12000rpm離心 1 分鐘，棄濾液；
[0146] 7)重復上步操作1次；
[0147] 8)將Spin Column安置于Collection Tube上，12000rpm離心2分鐘；
[0148] 9)將吸附柱置于新的1.5ml的離心管中，晾置數分鐘，待乙醇揮發干凈。
[0149] 10)向吸附柱膜的中央處加入30μ1的洗脫液，室溫靜置5min;
[0150] ll)12000rpm 離心 2min 洗脫 DNA。
[0151] 12)以細胞對照組數值為標準系統默認它的值為1，表中所運用公式為:相對DNA量 =1/2(實驗組Ct值-對照組Ct值）
[0152] 抑制率=(細胞對照組一藥物對照組DNA表達量）X 100%
[0153] 2.引物與探針序列
[0154] HBVFP:5 '-TGTCCTG-GTTATCGCTGG-3 '
[0155] HBVRP:5 '-CAAACGGGCAA-CATACCTT-3 '
[0156] TaqMan 探針序列：
[0157] FAM-5 '-TGT-GTCTGCGGCGTTTTATCAT-3 '-TAMRA
[0158] 3.反應體系
[0159] 表9 HBV DNA定量測定反應體系
[0160]
[0161] DNA:總量150ng，各孔濃度不同，所加模板量不同，總體系251μ1，不足用水補足25μ 1〇
[0162] 4.反應條件
[0163] 表10 HBV DNA定量測定反應條件
[0164] L0165」擴增目的片段115bp。
[0166] 表11拉米夫定抑制HBV-DNA復制作用的定量測定結果
[0167]
[0168] 表12椿皮水提物抑制HBV-DNA復制作用的定量測定結果
[0169]
[0170] 從表11和表12看，拉米夫定和椿皮水提物在其最大濃度時抑制HBV-DNA復制作用 的效果都非常好，均超過了90 %，分別為94.17 %和98.63 % %，抑制效果相當；從相同濃度 級數（ΙΟ'ΙΟ'ΠΓ3)看，椿皮水提物的抑制效果明顯優于拉米夫定，相差顯著。圖1是拉米 夫定和椿皮水提物在各個濃度抑制HBV-DNA復制作用的定量測定結果比較。圖2和圖3分別 是拉米夫定和椿皮水提物作用后HBV-DNA定量PCR的曲線圖。圖4和圖5分別是拉米夫定和椿 皮水提物作用后HBV-DNA定量PCR的瓊脂糖凝膠電泳鑒定結果，均檢測到約lOObp大小的DNA 片段，大小正確。
[0171] 八、藥物治療指數
[0172] 1、椿皮水提物對HBsAg分泌的定量抑制數據計算其治療指數。
[0173] 椿皮水提物的治療指數(TI)=TC5Q/IC_=0.665/1.23X10-^5.41)2.0
[0174] 2、從椿皮水提物對HBeAg分泌的定量抑制數據計算其治療指數。
[0175] 椿皮水提物的治療指數(TI)=TC5Q/IC5Q 中=0.665/1.32X10-^5.03)2.0 說明椿 皮水提物對抑制HBsAg和HBeAg都有效，而且低毒。
[0176] 無論椿皮水提物對HBV抑制作用的定性還是定量研究來看，對HBsAg和HBeAg分泌 的抑制，以及對HBV DNA復制的抑制，椿皮水提物的抑制效果都優于拉米夫定;從治療指數 看，定性和定量一致，棒皮水提物都是尚效低毒。
【主權項】
1. 椿皮用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。2. 椿皮提取物用于制備治療慢性乙肝藥物的應用。3. 如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的椿皮提取物為椿皮水提物。4. 一種用于治療慢性乙肝的復方方劑，其特征在于，所述復方方劑中含有椿皮。
【文檔編號】A61P31/20GK105935373SQ201610349044
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年5月24日
【發明人】行利, 王文
【申請人】中國人民解放軍第四軍醫大學