一種紫背天葵皂甙的分離純化方法及其應用

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一種紫背天葵皂甙的分離純化方法及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種紫背天葵皂甙的分離純化方法及其應用。其中分離純化方法包括原材料的預處理、粉碎、脫脂，超聲波粗提制備紫背天葵粗皂甙，最后經過大孔樹脂梯度洗脫得到純度較高的3種紫背天葵皂甙組分。本發明進行了脫脂操作，使得后期的皂甙提取快速且充分；選用簡單快速的超聲波在最優的超聲波條件下進行浸提，能夠達到80%以上的提取率；提取完成后利用高濃度的乙醇進行沉淀處理，能夠有效去除蛋白等的雜質干擾。另外，通過動物實驗證明了紫背天葵皂甙具有極強的抗氧化性能，能夠顯著增強機體免疫力，能夠作為增強免疫力藥物或保健品進行開發利用。
【專利說明】-種紫背天葵皂巧的分離純化方法及其應用
[0001]
技術領域
[0002] 本發明屬于天然化合物分離純化領域，具體設及一種紫背天葵皂武的分離純化方法，本發明還設及分離純化得到的紫背天葵皂武的應用。
【背景技術】
[0003] 皂武是廣泛存在于植物界和某些海洋生物中的一種特殊巧類，大多可溶于水，振搖后易起持久性的肥皂樣泡沫，因而得名。皂武對人體的新陳代謝起著重要的生理作用。它可W抑制血清中脂類氧化，抑制過氧化脂質的生成，降低血清中膽固醇的含量，抑制過氧化脂質對肝臟的損傷，防止動脈硬化，因而它具有免疫調節的作用。它可W提高NK細胞、LAK 細胞的數量，增強機體免疫力。皂武對核酸和蛋白質合成有促進作用，可增加肝、肌肉組織中蛋白質與DNA的含量，提高機體的耐力，因而具有抗疲勞作用。皂武還可W抑制腫瘤細胞的生長并具有消腫抗炎癥的作用。許多皂武具有抗菌和抗病毒活性。皂武抗菌作用的機理之一是由于皂武能與細菌細胞膜中的膽固醇形成復合物，因此認為運種抗菌活性和溶血性質有關。皂武抗病毒的作用機理則是通過增強機體免疫功能或直接殺死病毒而起作用的。
[0004]紫背天葵(Begoniafimbritipula化nee)是廣東省鼎湖山國家級自然保護區的特色植物，見于海拔200~1120 m溪谷兩側近水處的向陽石壁處，屬中國特有物種。紫背天葵葉基生，常見1 一3片，表皮毛明顯。葉片既可人藥，又是一種很好的消食保健品，俗稱紅天葵。紫背天葵具清熱解毒、止渴生津、活血消腫、潤燥止咳之功效;大多推測運些功效與紫背天葵中的皂武有密切關系。但是目前還沒有對紫背天葵皂武進行具體研究，如何分離純化紫背天葵皂武，對紫背天葵皂武的構效關系尚未清楚，因而對其的實際活性研究也未見報道。鑒于紫背天葵獨特的藥物活性，分離純化紫背天葵皂武并進行進一步的研究是很有必要的，并且能為紫背天葵皂武的臨床應用研究提供理論依據。

【發明內容】

[0005] 為解決上述問題，本發明的目的之一是提供一種紫背天葵皂武的分離純化方法， W填補現有技術中關于紫背天葵皂武提取的空白；本發明的目的之二是提供紫背天葵皂武的應用，進一步掲示其藥用價值。
[0006] 為達到上述目的，本發明所采用的第一技術方案是，一種紫背天葵皂武的分離純化方法，其具體步驟為： (1) 預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用； (2) 粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末； (3) 脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油酸，超聲波冷浸，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用； (4)粗皂武提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入乙醇液超聲波提取，連續提取兩次；巧)提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液； (6) 沉淀處理:將步驟巧)得到的濃縮液加入乙醇，進一步沉淀去除雜質； (7) 離屯、:離屯、去除沉淀，保留上清液備用； (8) 萃取:將步驟(7)離屯、之后的上清液中加入乙酸，充分攬拌，靜置萃取； (9) 蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂武； (10) 純化:將步驟(9)制得的紫背天葵粗皂武加少量乙醇溶解，利用大孔樹脂進行進一步的分離； (11) 分析:通過香草醒-硫酸法測定收集各管中的皂武含量，繪制曲線，根據曲線不同峰值，混合峰值附近的收集管中的洗脫液，蒸發濃縮并凍干不同峰值的組分。
[0007] 進一步的，步驟(2)中所述的干燥粉碎的具體操作為:指在60-75°C真空干燥箱中干燥12-16.5h，粉砕后過孔徑為0.21-0.36mm的篩。
[0008] 進一步的，步驟(3)中在進行超聲波操作時，超聲波冷浸2-4h后，再靜置0.5-化，冷浸過程中不斷攬拌，攬拌速率為100-15化/min。
[0009] 進一步的，步驟(3)中所述紫背天葵葉粉末與石油酸的質量比為1:8-11。
[0010] 進一步的，步驟(4)中所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:25- 36;加入質量分數為46-55%的乙醇液超聲波提取，提取溫度為45-50°C，連續提取兩次，第一次提取時間為35-40min，第二次提取時間為30-34min。
[0011] 進一步的，步驟巧）中蒸發條件具體為:真空度為0.02-0.07MPa，冷凝水的溫度為- 8- -10°C，回收溫度為48-55Γ。
[0012] 進一步的，步驟(6)按照體積比1:4-6加入95%的乙醇，充分攬拌后，于4°C靜置2- 4h〇
[0013] 進一步的，步驟口)離屯、條件設定為:轉速為4000;rmp/min，離屯、15-20min。
[0014] 進一步的，步驟(8)中加入與上清液等體積的乙酸進行萃取，充分攬拌，靜置萃取 0.5-化，重復萃取3次。
[0015] 進一步的，步驟(9)中蒸發條件為:真空度為0.02-0.07MPa，冷凝水的溫度為-8-- 6°C，回收溫度為40-45°C。
[0016] 進一步的，在步驟（10)層析操作之前，通過AB-8大孔樹脂進行脫色實驗，使用6-8% 的乙醇液洗脫2-3個柱體積，最終W75-80%的乙醇回收，進行脫色處理。
[0017] 進一步的，步驟（10)大孔樹脂經68-75%的乙醇液、蒸饋水浸泡，清洗后裝柱，并W 蒸饋水充分清洗層析柱，上樣后分別W水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，設定流速為1.3ml/min，13ml每管收集洗脫液。
[001引進一步的，步驟（10)中的大孔樹脂優選為AB-8、Diaion HP - 10、Diaion HP - 20、HPD-450和Amberlite XAD-4。
[0019] 進一步的，步驟（10)中的大孔樹脂優選為Amberlite XAD-4。
[0020]上述制得的紫背天葵粗皂武經實驗驗證其有較強的抗氧化特性，能夠用于增強免疫力的藥物或保健品研究中。
[0021] 本發明的有益效果是:本發明首次對紫背天葵葉的皂武進行提取，并進行了有效的分離純化，為后期研究提供了實驗基礎和理論依據。為充分提取皂武，在原料前期處理時，進行了脫脂操作，使得后期的皂武提取快速且充分;選用簡單快速的超聲波在最優的超聲波條件下進行浸提，能夠達到80%W上的提取率;提取完成后利用高濃度的乙醇進行沉淀處理，能夠有效去除蛋白等的雜質干擾;利用梯度洗脫能夠有效分離紫背天葵葉粗皂武，得到了巧巾主要的組分，經分析明確了 Ξ種組分的純度均達到92%W上。另外，對提取得到的紫背天葵葉粗皂武進行生物學實驗，發現其有較強的抗氧化性能，在增強免疫力方面具有突出的價值。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合【具體實施方式】對本發明進行詳細說明。
[0023] 實施例1 一種紫背天葵皂武的分離純化方法，其具體步驟為： (1) 預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用； (2) 粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末;75°C真空干燥箱中干燥16.5h，粉碎后過孔徑為0.21mm的篩； (3) 脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油酸，超聲波冷浸2.化后，冷浸過程中不斷攬拌，攬拌速率為l(K)r/min，再靜置0.5-化，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用;所述紫背天葵葉粉末與石油酸的質量比為1:10; (4) 粗皂武提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入質量分數為55%的乙醇液超聲波提取，提取溫度為50°C，連續提取兩次，第一次提取時間為38min，第二次提取時間為 32min;所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:30; 巧)提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為〇.〇7MPa，冷凝水的溫度為-8°C，回收溫度為55°C ; (6) 沉淀處理:將步驟巧)得到的濃縮液按照體積比1:巧日入95%的乙醇，充分攬拌后，于 4°C靜置2-地，進一步沉淀去除雜質； (7) 離屯、:轉速為4000;rmp/min，離屯、15-20min，去除沉淀，保留上清液備用； (8) 萃取:將步驟(7)離屯、之后的上清液中加入等體積的乙酸，充分攬拌，靜置萃取0.5- 化，重復萃取3次； (9) 蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為〇.〇7MPa，冷凝水的溫度為-8°C，回收溫度為45°C，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂武； (10) 純化:將步驟(9)制得的紫背天葵粗皂武加少量乙醇溶解，利用Diaion HP - 20大孔樹脂進行進一步的分離;大孔樹脂經70%的乙醇液、蒸饋水浸泡，清洗后裝柱，并W蒸饋水充分清洗層析柱，上樣后分別W水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，設定流速為 1.3ml/min，13ml每管收集洗脫液;梯度洗脫的兩相條件:0-15min 90%水10%乙醇一40%水 60%乙醇；16-40min 40%水 60%乙醇一20%的水 80%的乙醇；41min-70min 20%的水 80%的乙醇一5%水95%乙醇； (11) 分析:通過香草醒-硫酸法測定收集各管中的皂武含量，繪制曲線，得到了 3個峰值，混合峰值附近的收集管中的洗脫液，蒸發濃縮并凍干不同峰值的組分，分別為S1、S2和 S3組分，最后再將得到的各組分進行皂武含量測定。
[0024] 實施例2 一種紫背天葵皂武的分離純化方法，其具體步驟為： (1) 預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用； (2) 粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末;60°C真空干燥箱中干燥12h，粉碎后過孔徑為0.36mm的篩； (3) 脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油酸，超聲波冷浸化后，冷浸過程中不斷攬拌，攬拌速率為15化/min,再靜置0.5-化，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用;所述紫背天葵葉粉末與石油酸的質量比為1:8; (4) 粗皂武提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入質量分數為50%的乙醇液超聲波提取，提取溫度為45°C，連續提取兩次，第一次提取時間為35min，第二次提取時間為 34min;所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:25; 巧)提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為0. 〇2MPa，冷凝水的溫度為-10°C，回收溫度為48°C ; (6) 沉淀處理:將步驟巧)得到的濃縮液按照體積比1:4加入95%的乙醇，充分攬拌后，于 4°C靜置2-地，進一步沉淀去除雜質； (7) 離屯、:轉速為4000;rmp/min，離屯、15-20min，去除沉淀，保留上清液備用； (8) 萃取:將步驟(7)離屯、之后的上清液中加入等體積的乙酸，充分攬拌，靜置萃取0.5- 化，重復萃取3次； (9) 蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為〇.〇2MPa，冷凝水的溫度為-6°C，回收溫度為40°C，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂武； (10) 純化:將步驟(9)制得的紫背天葵粗皂武加少量乙醇溶解，利用Amberlite XAD-4 大孔樹脂進行進一步的分離;大孔樹脂經75%的乙醇液、蒸饋水浸泡，清洗后裝柱，并W蒸饋水充分清洗層析柱，上樣后分別W水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，設定流速為 1.3ml/min，13ml每管收集洗脫液;梯度洗脫的兩相條件:0-15min 90%水10%乙醇一40%水 60%乙醇；16-40min 40%水 60%乙醇一20%的水 80%的乙醇；41min-70min 20%的水 80%的乙醇一5%水95%乙醇； (11) 分析:通過香草醒-硫酸法測定收集各管中的皂武含量，繪制曲線，得到了 3個峰值，混合峰值附近的收集管中的洗脫液，蒸發濃縮并凍干不同峰值的組分，分別為S1、S2和 S3組分，最后再將得到的各組分進行皂武含量測定。
[0025] 實施例3 一種紫背天葵皂武的分離純化方法，其具體步驟為： (1) 預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用； (2) 粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末;70°C真空干燥箱中干燥1地，粉碎后過孔徑為0.30mm的篩； (3) 脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油酸，超聲波冷浸4h后，冷浸過程中不斷攬拌，攬拌速率為12化/min,再靜置0.5-化，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用;所述紫背天葵葉粉末與石油酸的質量比為1:11; (4)粗皂武提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入質量分數為46%的乙醇液超聲波提取，提取溫度為48°C，連續提取兩次，第一次提取時間為40min，第二次提取時間為 30min;所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:36; 巧)提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為0. 〇5MPa，冷凝水的溫度為-9°C，回收溫度為52°C ; (6) 沉淀處理:將步驟巧)得到的濃縮液按照體積比1:6加入95%的乙醇，充分攬拌后，于 4°C靜置2-地，進一步沉淀去除雜質； (7) 離屯、:轉速為4000;rmp/min，離屯、15-20min，去除沉淀，保留上清液備用； (8) 萃取:將步驟(7)離屯、之后的上清液中加入等體積的乙酸，充分攬拌，靜置萃取0.5- 化，重復萃取3次； (9) 蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為0. 〇5MPa，冷凝水的溫度為-7°C，回收溫度為42°C，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂武； (10) 純化:將步驟(9)制得的紫背天葵粗皂武加少量乙醇溶解，利用HPD-450大孔樹脂進行進一步的分離;大孔樹脂經的乙醇液、蒸饋水浸泡，清洗后裝柱，并W蒸饋水充分清洗層析柱，上樣后分別W水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，設定流速為1.3ml/min， 13ml每管收集洗脫液;梯度洗脫的兩相條件：0-15min 90%水10%乙醇一40%水60%乙醇； 16-40min 40%水60%乙醇一20%的水80%的乙醇；41min-70min 20%的水80%的乙醇一5%水 95%乙醇； (11) 分析:通過香草醒-硫酸法測定收集各管中的皂武含量，繪制曲線，得到了 3個峰值，混合峰值附近的收集管中的洗脫液，蒸發濃縮并凍干不同峰值的組分，分別為S1、S2和 S3組分，最后再將得到的各組分進行皂武含量測定。
[00%] 對比例1: 一種紫背天葵皂武的提取方法，其具體步驟為： (1) 預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用； (2) 粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末;75°C真空干燥箱中干燥16.5h，粉碎后過孔徑為0.21mm的篩； (3) 脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油酸，超聲波冷浸2.化后，冷浸過程中不斷攬拌，攬拌速率為l(K)r/min，再靜置0.5-化，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用;所述紫背天葵葉粉末與石油酸的質量比為1:11; (4) 粗皂武提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入質量分數為55%的乙醇液攬拌提取，提取溫度為50°C，連續提取兩次，第一次提取時間為38min，第二次提取時間為 32min;所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:35; 巧)提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為〇.〇7MPa，冷凝水的溫度為-8°C，回收溫度為55°C ; (6) 沉淀處理:將步驟巧)得到的濃縮液按照體積比1:巧日入95%的乙醇，充分攬拌后，于 4°C靜置2-地，進一步沉淀去除雜質； (7) 離屯、:轉速為4000;rmp/min，離屯、15-20min，去除沉淀，保留上清液備用； (8) 萃取:將步驟(7)離屯、之后的上清液中加入等體積的乙酸，充分攬拌，靜置萃取0.5- 化，重復萃取3次； (9) 蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為〇.〇7MPa，冷凝水的溫度為-8°C，回收溫度為45°C，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂武;并通過香草醒-硫酸法測定其皂武含量。
[0027] 對比例2: 一種紫背天葵皂武的分離純化方法，其具體步驟為： (1) 預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用； (2) 粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末;72°C真空干燥箱中干燥16 h，粉碎后過孔徑為0.25mm的篩； (3) 脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油酸，超聲波冷浸化后，冷浸過程中不斷攬拌，攬拌速率為13化/min,再靜置0.化，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用;所述紫背天葵葉粉末與石油酸的質量比為1:9; (4) 粗皂武提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入質量分數為55%的乙醇液超聲波提取，提取溫度為50°C，連續提取兩次，第一次提取時間為36min，第二次提取時間為 33min;所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:35; 巧)提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為0. 〇6MPa，冷凝水的溫度為-8°C，回收溫度為55°C ; (6) 沉淀處理:將步驟巧)得到的濃縮液按照體積比1:巧日入95%的乙醇，充分攬拌后，于 4°C靜置2-地，進一步沉淀去除雜質； (7) 離屯、:轉速為4000;rmp/min，離屯、15-20min，去除沉淀，保留上清液備用； (8) 萃取:將步驟(7)離屯、之后的上清液中加入等體積的乙酸，充分攬拌，靜置萃取0.5- 化，重復萃取3次； (9) 蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，蒸發條件為:真空度為〇.〇6MPa，冷凝水的溫度為-8°C，回收溫度為45°C，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂武； (10) 純化:將步驟(9)制得的紫背天葵粗皂武加少量乙醇溶解，利用大孔樹脂進行進一步的分離；大孔樹脂經70%的乙醇液、蒸饋水浸泡，清洗后裝柱，并W蒸饋水充分清洗層析柱，上樣后W不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，20%乙醇洗脫2個柱體積，40%乙醇洗脫3個柱體積，60%乙醇洗脫2個柱體積； (11) 分析:通過香草醒-硫酸法測定步驟（10)中收集3組中的皂武含量，S1、S2和S3^ 組。
[0028] 經過對實施例1-3和對比例1-2的皂武含量分析，結果見表1，可W看出，本發明所提供的方法，超聲波提取的粗皂武含量較高，能夠滿足粗皂武在大多數實驗中使用;根據所設定的梯度洗脫，分離出的Ξ組分皂武含量達到92%W上，純度較高，相較于一般所用的洗脫方式，具有一定的優越性。
[0029] 表1各實驗組的皂武含量結果

下面通過動物實驗對紫背天葵粗皂武進行生物性能評價。
[0030] 1.實驗動物 C57/BL6小鼠，雄性，體重16-20g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK(京）2011-0008。
[0031] 2.試驗方法將巧7/化6小鼠按體重隨機分為4組:實施例1組、實施例2組、實施例3組、正常對照組，模型組，每組10只。實施例1組、實施例2組、實施例3組W及模型組均為過氧化氨損傷組，小鼠適應Ξ天后，實施例1組、實施例2組、實施例3組均按照180mg/kg的皂武含量進行灌服，模型組則灌服等量的蒸饋水。實驗期為一周。自由進食和進水，末日隔夜停食不停水，次日晨斷尾、眼眶取血后，頸椎脫白致死，并取所需器官進行各項指標測定。
[0032] 3.試驗結果通過試劑盒對小鼠血液中的SOD、MDA、CAT和GSH-PX進行活性測定，結果見表2。可W看出，實施例1組到3組與正常對照組之間均沒有顯著性差異，而模型組與實施例3組和正常對照組之間均有顯著性差異，甚至是極顯著性差異，W此說明了紫背天葵皂武能夠有效修復過氧化氨對小鼠機體的損害，即紫背天葵皂武具有較強的抗氧化性。另外，通過對各組小鼠脾臟、胸腺的重量指數分析，實施例1組到3組與正常對照組之間均沒有顯著性差異，而模型組與實施例3組和正常對照組之間均有顯著性差異，說明了紫背天葵皂武對小鼠的免疫器官具有良好的保護作用，進一步說明了紫背天葵皂武能夠增強免疫力，可W作為增強免疫力的藥物開發利用。
[QQ33] 表2紫背天葵皂武對小鼠血液中的S0D、MDA、CAT和GSH-PX活性影響_
注：*沖<0.01;沖<0.05。
【主權項】
1. 一種紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，具體步驟為：預處理:選取紫背天葵鮮嫩葉，去除雜物、清洗干凈后待用；粉碎:將處理好的紫背天葵葉干燥并粉碎成粉末；脫脂:將步驟(2)制得的紫背天葵葉粉末中加入石油醚，超聲波冷浸，然后過濾除去濾液，濾渣揮發干溶劑后得到紫背天葵葉脫脂品，備用；粗皂甙提取:將步驟(3)脫脂后的紫背天葵葉粉末加入乙醇液超聲波提取，連續提取兩次；提取液濃縮:將步驟(4)中得到的提取液進行真空旋轉蒸發得到濃縮液；沉淀處理:將步驟(5)得到的濃縮液加入乙醇，進一步沉淀去除雜質；離心:離心去除沉淀，保留上清液備用；萃取:將步驟(7)離心之后的上清液中加入乙醚，充分攪拌，靜置萃取；蒸干:將步驟(8)得到的萃取液混合，并進行真空旋轉蒸發得到濃縮液，得到蒸發濃縮液后進行冷凍干燥得到了紫背天葵粗皂甙；純化:將步驟(9)制得的紫背天葵粗皂甙溶解，利用大孔樹脂進行進一步的分離；分析:通過香草醛-硫酸法測定收集各管中的皂甙含量，繪制曲線，根據曲線不同峰值，混合峰值附近的收集管中的洗脫液，蒸發濃縮并凍干不同峰值的組分。2. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(2)中干燥粉碎的具體操作為:在60-75°C真空干燥箱中干燥12-16.5h，粉碎后過孔徑為0.21-0.36mm 的篩。3. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(3)中在進行超聲波操作時，超聲波冷浸2_4h后，再靜置0.5-lh，冷浸過程中不斷攪拌，攪拌速率為100-150r/min;所述紫背天葵葉粉末與石油醚的質量比為1:8-11。4. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(4)中所述紫背天葵葉脫脂粉末與提取液乙醇的質量比為1:25-36;加入質量分數為46-55%的乙醇液超聲波提取，提取溫度為45-50°C，連續提取兩次，第一次提取時間為35-40min，第二次提取時間為 30_34min。5. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(5)中蒸發條件具體為:真空度為0.02-0.071〇^，冷凝水的溫度為-8--10°(：，回收溫度為48-55°(：。6. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，在步驟（10)層析操作之前，通過AB-8大孔樹脂進行脫色實驗，使用6-8%的乙醇液洗脫2-3個柱體積，最終以75-80%的乙醇回收，進行脫色處理。7. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(10)大孔樹脂經68-75%的乙醇液、蒸餾水浸泡，清洗后裝柱，并以蒸餾水充分清洗層析柱，上樣后分別以水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫。8. 如權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(10)中的大孔樹脂為AB-8、Diaion HP-HKDiaion HP-20、HPD-450和Amberlite XAD-4。9. 如權利要求8所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法，其特征在于，步驟(10)中的大孔樹脂為AmberIite XAD-4 〇10. 權利要求1所述的紫背天葵皂甙的分離純化方法所制得的紫背天葵皂甙在制備增強免疫力藥物或保健品中的應用。
【文檔編號】A61K127/00GK105920065SQ201610252317
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月21日
【發明人】保澤慶, 吳偉斌, 閆莉
【申請人】肇慶醫學高等專科學校

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