利用乳酸菌中的氧化應激途徑促進腸道內穩態的制作方法

利用乳酸菌中的氧化應激途徑促進腸道內穩態的制作方法
【專利摘要】本文中公開了用于向受試者提供抗氧化作用，例如，調節或以其它方式改善氧化應激途徑和/或中和或減少有害反應性氧物質(ROS)的組合物和方法。
【專利說明】利用乳酸菌中的氧化應激途徑促進腸道內穩態
[0001]相關申請
[0002]本申請是2013年8月13日提交的國際申請第PCT/US2013/054811號(其完整教導通過引用并入本文)的部分延續。
[0003]發明背景
[0004]疾病控制和預防中心估計，在美國有多達140萬患者受炎性腸疾病影響。炎性腸疾病的兩個最常見形式潰瘍性結腸炎和克羅恩病各自的特征在于在胃腸道的復發性炎癥。
[0005]潰瘍性結腸炎的特征在于被限制在結腸和直腸中并且與伴隨粘液和血液排出的腹瀉、痙攣、腹部疼痛、炎癥以及粘膜水腫和潰瘍斑相關的彌漫性粘膜炎癥。克羅恩病主要影響回腸和空腸，在較低的程度上影響結腸，并且常常與腹瀉、痙攣、食欲缺乏和體重減輕以及局部膿腫和疤痕形成的損失相關。
[0006]響應于急性和慢性炎癥，受試者(例如，哺乳動物)常常產生能引起組織損傷的反應性氧物質(例如，超氧化物和過氧化氫)，特別是在不能有效降解或中和此類反應性氧物質的受試者中。累積反應性氧物質可通過它們氧化和降解必不可少的細胞成分(包括誘發對細胞核酸的損傷)的能力促進炎癥。另外，反應性氧物質可充當促炎信號轉導劑，也可激活已知上調參與炎癥應答的基因的表達的某些轉錄因子(Connor EM，等InflammatoryBowel Diseases;2(2): 133-147( 1996))。因為胃腸道經受響應損傷或其它病理狀態的氧化應激，因此反應性氧物質的存在和積累可進一步促成表征炎性腸病的炎癥。
[0007]存在對提供抗氧化作用的方法的需要，以及對預防和/或治療氧化作用，例如因反應性氧物質和/或氧化應激而產生的或與其相關的氧化作用的方法的需要。
[0008]還需要用于治療和/或預防影響胃腸道的炎性疾病，諸如炎性腸病的新療法或防范性措施。特別需要的是能夠減輕(例如，減少或改善癥狀)反應性氧物質對胃腸道的細胞和組織施加的損傷性作用的安全有效的療法。還需要的是可成功地誘發炎性腸病的緩解和預防其復發的新療法。
[0009]發明概述
[0010]本文中提供的是治療或預防炎性病況，特別是影響了細胞和胃腸道的組織的那些炎性病況(例如，潰瘍性結腸炎、克羅恩病、導流結腸炎、隱窩炎、腸易激綜合征、胃腸道癌癥、肥胖癥和II型糖尿病)的新型組合物(例如，預防性或治療性組合物)和方法。在某些實施方案中，所公開的組合物和方法可用于在受試者中提供抗氧化作用(例如，減少或以其它方式中和反應性氧物質(ROS)的損傷性作用，減少氧化應激等)，和/或誘導炎性腸病的緩解和/或預防其復發。
[0011]在一些實施方案中，本發明涉及具有特別期望的性質(例如，抗氧化性質)的酶(例如，超氧化物歧化酶(SOD)酶諸如超氧化物歧化酶A酶)ο在某些實施方案中，通過乳酸菌諸如乳酸乳球菌(Lactococcus Iactis)(例如，從乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株)產生，從其衍生或從其分離所述酶(例如，SOD酶)。
[0012]在一些實施方案中，本發明涉及向受試者提供抗氧化作用的方法，所述包括向所述受試者施用有效量的組合物，其中所述組合物包含從乳酸菌菌株(例如，乳酸乳球菌諸如乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株)獲得且任選分離的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。本發明還涉及用于為受試者提供抗氧化作用的組合物，所述組合物包含從乳酸菌菌株(例如，乳酸乳球菌，諸如乳酸乳球菌CNCM 1-1613菌株)獲得且任選分離的超氧化物歧化酶(SOD)的酶或其功能性部分。本發明還涉及組合物用于制造用于為受試者提供抗氧化作用的藥劑(包括功能性食品)的用途，所述組合物包含從乳酸菌菌株(例如，乳酸乳球菌諸如乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株)獲得且任選分離的超氧化物歧化酶(SOD)的酶或其功能性部分。
[0013]在某些實施方案中，本發明涉及組合物用于制造用于在有需要的受試者中減輕ROS誘發的損傷或治療炎性病況的藥劑的用途，所述組合物包含從乳酸乳球菌菌株獲得的超氧化物歧化酶(S0D)酶或其功能性部分。例如，在一些實施方案中，所述ROS誘發的損傷由選自由以下組成的組的一個或多個病況導致:炎性腸病、潰瘍性結腸炎、改道性結腸炎、克羅恩病、胃腸道癌癥、腸易激綜合征、肥胖癥和II型糖尿病。在一些實施方案中，乳酸乳球菌菌株為CNCM 1-1631。在一些實施方案中，SOD酶是超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶或包含含有SEQ ID NOiUSEQ ID N0:2、SEQ ID NO: 3或其功能性部分的分離的多肽。在一些實施方案中，抗氧化作用涉及減少反應性氧物質(ROS)誘發的對受試者的胃腸道的損傷，并且所述方法包括向所述受試者施用有效量的組合物，從而減少ROS誘發的損傷，其中所述組合物包含從乳酸菌(例如，乳酸乳球菌諸如乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株)獲得且任選分離的酶或其功能性部分。
[0014]在一些實施方案中，抗氧化作用涉及減少受試者中的氧化應激，并且所述方法包括向受試者施用效量的組合物施用，并由此減少氧化應激，其中所述組合物包含獲自乳酸菌(例如，乳酸乳球菌(Lactococcus Iactis)諸如乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株)且任選地分離的酶或其功能性部分。
[0015]在一些實施方案中，所述酶是抗氧化酶。在一些實施方案中，所述酶是超氧化物歧化酶(S0D)。在一些實施方案中，所述酶是超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶。在一些實施方案中，所述酶包括包含含有SEQ ID NO:1或其功能性部分的分離的多肽。在一些實施方案中，所述SOD-A由包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3或其功能性部分的多核苷酸編碼。在一些實施方案中，所述酶是分離的。在一些實施方案中，所述組合物包括至少一種細菌菌株。
[0016]在一些實施方案中，所述受試者是哺乳動物，諸如人。在一些實施方案中，口服施用所述組合物。在一些實施方案中，所述組合物選自由以下組成的組:食品(例如，醫療食品或功能性食品)、藥物和膳食補充劑。
[0017]在一些實施方案中，ROS誘發的損傷由選自由以下組成的組的一個或多個病況導致:炎性腸病、潰瘍性結腸炎、改道性結腸炎、克羅恩病、胃腸道癌癥、腸易激綜合征、肥胖癥和II型糖尿病。在一些實施方案中，所述氧化應激涉及受試者的胃腸道的組織。在一些實施方案中，所述氧化應激是選自由以下組成的病況的組的一個或多個病況的結果:炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、改道性結腸炎、隱窩炎、衰老、胃腸道癌癥、腸易激綜合征、肥胖癥和II型糖尿病。在某些實施方案中，所述氧化應激在腸道炎癥的過程中產生，以及在一些實施方案中，所述氧化應激包括反應性氧物質(ROS)誘發的對胃腸道的組織的損傷。
[0018]本發明還涉及鑒定候選治療性乳酸菌的方法，其中所述方法包括如下步驟:(a)篩選乳酸菌，以鑒定表達酶的候選細菌;和(b)在合適的模型中測試所述候選細菌的至少一種治療性質以鑒定候選治療性細菌。
[0019]在一些實施方案中，所述酶是抗氧化酶。在一些實施方案中，所述酶是超氧化物歧化酶(SOD)酶。在一些實施方案中，所述酶是S0D-A。
[°02°] 在一些實施方案中，(a)的乳酸菌選自由以下組成的組:乳球菌屬(Lactococcus)、乳桿菌屬(LactobaciIlus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、片球菌屬(Ped1coccus)和鏈球菌屬(Streptococcus)。在一些實施方案中，乳酸菌為乳酸乳球菌。
[0021]在一些實施方案中，至少一種治療性質是選自由以組成的組的一個或多個性質:中和反應性氧物質(ROS)的能力、減少ROS誘發的損傷的能力、減少氧化應激的能力、抗氧化作用、治療炎性病況的能力和治療炎性腸病的能力。在一些實施方案中，所述至少一種治療性質是治療潰瘍性結腸炎的能力，并且所述模型是一個TRUC鼠模型。在一些實施方案中，所述至少一種治療性質是治療潰瘍性結腸炎的能力，并且所述模型是一個IL10-/-小鼠模型。在一些實施方案中，所述治療性乳酸菌具有類似于乳酸乳球菌CNCM 1-1631細菌的性質。
[0022]本發明還涉及表達從乳球乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株分離的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分的分離的細菌菌株，其中所述分離的細菌菌株不是乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株。在一些實施方案中，SOD酶是S0D-A。在一些實施方案中，所述細菌菌株是乳酸乳球菌菌株。在一些實施方案中，用包含編碼SOD酶或其功能部分的多核苷酸的質粒(例如，編碼從乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株分離的SOD-A的質粒)轉染所述菌株。
[0023]本發明還涉及表達載體，所述表達載體包含編碼來自乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶或其功能性部分的多核苷酸。在一些實施方案中，所述載體是病毒或質粒。
[0024]本發明還涉及治療患有炎性病況的受試者的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用有效量的組合物，并由此治療所述炎性病況，其中所述組合物包含從乳酸菌菌株分離的酶或其功能性部分。在一些實施方案中，乳酸菌菌株選自由以下組成的組:乳桿菌屬(Lactobacillus)、明串珠菌屬、片球菌屬(Ped1coccus)、鏈球菌屬和乳球菌屬。在一些實施方案中，乳酸菌是乳酸乳球菌。在某些實施方案中，乳酸菌是乳酸乳球菌CNCM 1-1631細菌。
[0025]在一些實施方案中，所述酶是抗氧化酶。在一些實施方案中，所述酶是SOD，例如，SOD-A。在一些實施方案中，炎性病癥是由反應性氧物質(ROS)誘發的。
[0026]在一些實施方案中，組合物包含不天然(本身)產生酶且已被工程化來表達所述酶的細菌菌株。
[0027]在某些實施方案中，所述至少一個細菌天然(本身)產生抗氧化酶。在某些實施方案中，至少一種細菌被工程化來表達抗氧化酶(例如，SOD酶諸如S0D-A)或其功能性部分(例如，由包含SEQ ID NO: 3的多核苷酸序列編碼此類酶的功能性部分)。在某些實施方案中，所述至少一種細菌天然產生抗氧化酶并且被工程化來產生抗氧化酶(例如，工程化來產生額外量的相同酶或其部分或產生一個或多個另外的不同的酶或部分)。所述組合物還可包括細菌的混合物，例如不同細菌屬的混合物、不同細菌種類的混合物、天然存在的和工程化細菌的混合物等。
[0028]例如，細菌(例如，乳酸菌)可包含一個或多個相較于此類細菌的天然菌種、野生型菌種或其它未修飾的菌種導致抗氧化酶(例如，SOD-A)的過表達的遺傳修飾。所述細菌可以是，例如，選自由以下組成的組的乳酸菌:乳桿菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、鏈球菌屬和乳球菌屬。
[0029]在一些實施方案中，所述組合物包含乳酸菌(例如，乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株)，以及一種或多種分離的酶(例如，抗氧化酶)或其部分。
[0030]當結合所附實施例采用時，通過參考以下本發明的詳細描述，本發明的上面討論的和許多其它特征和伴隨的有利方面將變得更好理解。
[0031]附圖簡述
[0032]圖1舉例說明被施予水對照、牛奶對照、含有乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的五菌株的發酵乳制品或乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品的T-betv—Rag2v—(TRUC)小鼠的組織學結腸炎評分。施用產品，持續四周。進行利用Dunn事后檢驗的單因素方差分析(one-way ANOVA)以評估統計顯著性，林林表示p值〈0.0001。
[0033]圖2舉例說明被施予水對照、牛奶對照或乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的發酵乳制品(FMP)的1110—Λ小鼠的組織學結腸炎評分。施用產品，持續四周。進行利用Dunn事后檢驗的單因素方差分析以評估統計顯著性，*表示P值〈0.05。
[0034]圖3舉例說明利用右旋葡聚糖硫酸鈉處理5天(實驗第3天至第8天)并且被施予水對照、牛奶對照或乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天)的野生型小鼠中的組織學結腸炎評分。進行利用Dunn事后檢驗的單因素方差分析以評估統計顯著性，*表示P值〈0.0001。
[0035]圖4舉例說明反應性氧物質在潰瘍性結腸炎的TRUC鼠模型的末端結腸中相對于對照RAG2—Λ小鼠升高。空心條棒代表對照RAG2—Λ小鼠，陰影條棒代表TRUC小鼠(每組5至8只小鼠)。將平均值繪圖；誤差棒代表土 SD，對于TRUCl個月與TRUC 2_6個月之間的所有比較，ρ〈
0.001ο
[0036]圖5顯示DNA加合物，特別是反應性氧物質誘發的8-羥基-2’-脫氧鳥嘌呤DNA加合物在潰瘍性結腸炎的TRUC鼠模型中相對于對照RAG2—Λ小鼠顯著增加。空心條棒代表對照RAG2—Λ小鼠，陰影條棒代表TRUC小鼠(每組6至9只小鼠)。將平均值繪圖；誤差棒代表土 SD，對于TRUCl個月與TRUC 2-6個月之間的所有比較，p〈0.001。
[0037]圖6顯示利用介質、乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的發酵乳制品或缺乏SOD-A的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株孵育的原代結腸上皮細胞的超氧化物水平。黃嘌呤-黃嘌呤氧化物用于刺激上皮細胞的過氧化物水平，溴化二氫乙錠用于染色細胞以檢測超氧化物水平，并且分析細胞，以及使用流式細胞術計算平均熒光強度。每一個符號表示獲自2-4只小鼠的上皮細胞。顯示P值，水平線指定被比較的組，Kruskall-Wallis檢驗。
[0038]圖7舉例說明被施予乳酸乳球菌CNCM1_1631菌株的發酵乳制品四周、被施予已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品四周或被施予補充表達SOD-A的質粒的已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品四周的T-bet—ΛRag2—Λ小鼠的組織學結腸炎評分。進行利用Dunn事后檢驗的單因素方差分析以評估統計顯著性，****表示P值〈0.0001。
[0039]圖8舉例說明利用右旋葡聚糖硫酸鈉處理5天(實驗的第3天至第8天)并且被施予乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天)、已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天)，或補充表達SOD-A的質粒的已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天)的野生型小鼠的組織學結腸炎評分。進行利用Dunn事后檢驗的單因素方差分析以評估統計顯著性，林表示P值〈0.01。
[0040]圖9舉例說明從乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株中分離的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。
[0041]圖10舉例說明包含從乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株中分離的編碼區的超氧化物歧化酶(SOD-A)酶的多核苷酸序列的部分(SEQ ID N0:2)o
[0042]圖11舉例說明編碼從乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株分離的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶的功能性部分的多核苷酸序列(SEQ ID N0:3)o
[0043]發明詳述
[0044]本文所述的發明總體上涉及賦予受試者抗氧化作用和/或治療炎性病況諸如炎性腸病的新型組合物(例如，治療性或預防性組合物)和相關方法。提供了用于炎性腸疾病的治療和表征炎性腸病的癥狀的抑制的新型療法。具體地，本發明提供賦予抗氧化作用，諸如減少、減輕或以其它方式中和反應性氧物質(ROS)的損傷作用(特別是在胃腸道中)，和/或減少或以其它方式中和氧化應激以及此類氧化應激例如對胃腸道的細胞和組織施加的損傷作用的裝置。
[0045]如本文中所使，短語“炎性病況”一般指牽涉炎癥或否則具有炎性組分(例如，受試者因對損害或損傷或病理狀態的暴露而發展的炎癥應答)的任何疾病、病癥或病理狀態。示例性炎性病況包括炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、轉道性結腸炎、隱窩炎、衰老、腸易激綜合征和胃腸道癌癥、肥胖癥和II型糖尿病;這些疾病表現出氧化應激和ROS誘導的損傷的體征。
[0046]如本文中所用，短語“炎性腸病”廣泛地指一組慢性、特發性、免疫介導的病癥，其導致胃腸道的炎癥，并且此類短語總體上包括潰瘍性結腸炎、克羅恩病、腸易激綜合征、轉道性結腸炎、胃腸道癌癥和隱窩炎。
[0047]雖然炎性腸病的潛在原因尚未完全闡明，但ROS似乎在炎癥過程中起作用，以及此類ROS對胃腸道的細胞和組織施加損害作用。如本文中所用，術語“反應性氧物質”和“R0S”一般是指氧或含氧化合物諸如過氧化氫和超氧化物的自由基形式。ROS是可在患有炎性腸病的受試者的胃腸道中積累的化學反應性代謝副產物。積累ROS諸如超氧化物和過氧化氫能夠通過氧化DNA堿基促進DNA損傷并且以超過DNA修復機制的速度產生DNA加合物，從而進一步促成表征炎性腸病的炎癥(Garrett等Cancer Cell 16:208-219(2009))。
[0048]累積ROS增加受影響的受試者，尤其是此類受試者的細胞和細胞結構被暴露于其的氧化應激。如本文中所用，短語“氧化應激”廣泛地指導致ROS水平升高超過受試者的自然抗氧化能力的狀況(例如，可通過受試者可能暴露于其的免疫和/或環境應激物誘發的狀態)。因此，氧化應激的特征在于氧化和抗氧化反應的不平衡，其中此類失衡在氧化狀態的方向移動，由此導致氧化損傷。此類不平衡導致ROS的積累，這反過來又可促進炎癥狀態，并導致對細胞結構的損傷。其中受試者可處于氧化應激之下或處于發生氧化應激的風險中的狀況包括炎性腸病、衰老、腸易激綜合征、胃腸道癌癥、肥胖癥和糖尿病(例如，II型糖尿病)。
[0049]如本文中所述，由乳酸菌(例如，乳酸乳球菌菌株)產生的某些酶(例如，抗氧化酶諸如超氧化物歧化酶(SOD)酶)可用于治療或預防某些病理病況，包括炎性腸病。不希望受理論的束縛，據信所述酶減少或以其它方式中和R0S，從而治療或預防可部分地因由積累ROS引起的氧化作用而導致的病理病況(例如，炎性腸病)。
[0050]乳酸菌為產生乳酸作為碳水化合物發酵的主要代謝終產物的革蘭陽性棒狀桿菌或球菌。示例性乳酸菌包括乳酸桿菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、鏈球菌屬和乳球菌屬。在某些實施方案中，本發明涉及由乳酸菌產生的、從其衍生的酶(例如，具有抗氧化性質的酶)，以及這些酶的功能性部分、編碼這些酶和部分的多核苷酸、包含所述多核苷酸或產生所述酶或部分(天然/本身地，或作為引起不天然地產生所述酶的菌株產生所述酶的遺傳工程的結果，或作為引起菌株產生相較于天然菌株增加的量的所述酶的遺傳工程的結果)的細胞以及用途。
[0051]在某些實施方案中，乳酸菌包括乳球菌屬菌株(例如，乳酸乳球菌)。一個這樣的細菌菌株(其在本文中稱為“乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株”或“乳酸乳球菌DN 030 066菌株”已公開于國際公開第W0/1997/016529號，其全部內容通過引用并入本文。乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株(其是革蘭陽性的，主要為雙球菌屬微生物)已于1995年10月24日于登錄號1-1631下根據布達佩斯條約的條款和條件保藏在法國微生物菌種保藏中心(Collect1nNat1nale de Cultures de Microorganisms)ο
[0052]如本文中所述，乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株在潰瘍性結腸炎的鼠模型中以SOD-A依賴性方式有效地減小結腸炎評分。該菌株能夠減少或以其其它方式中和R0S，并由此治療可將氧化應激其作為其特性，或可并發于氧化應激的病況(例如，炎性腸病、腸易激綜合征、胃腸道癌癥、II型糖尿病、衰老和/或肥胖癥)。因此，在某些實施方案中，本發明涉及包含從乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株分離的酶(例如，SOD-A酶)的組合物以及使用此類組合物治療氧化應激的相關方法。例如，本文中公開的組合物和相關方法對于氧化應激的治療是有用的，所述氧化應激是在受試者中響應于急性或慢性炎性病況或響應于填充受試者的胃腸道的共生細菌種類而被誘發的。在某些實施方案中，所述分離的酶(例如，抗氧化劑酶，諸如SOD-A酶)可用于在胃腸道中減少氧化還原應激或維持或促進胃腸道的動態平衡。然而，在其它實施方案中，所述分離的酶(例如，SOD-A酶)和包含此類酶的組合物(例如，細菌)可被施用來為有需要的受試者(患有因ROS的存在或積累而引起的炎性病況或否則受其折磨的受試者)提供給抗氧化作用物。
[0053]本文中還公開的是被表征為具有抗氧化性質的酶或其功能部分(例如，從乳酸菌分離的酶)。如本文中所用，短語“抗氧化酶”是指具有抗氧化性質或另外地能夠減緩、延遲或抑制氧化或氧化應激的酶或其功能性部分。在某些實施方案中，此類抗氧化酶分離自乳酸菌(例如，乳酸乳球菌)。在某些實施方案中，此類抗氧化酶分離自乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株。示例性抗氧化酶可以是，例如，超氧化物歧化酶(S0D)。
[0054]如在本文中用于描述細胞或酶(例如，SOD酶或SOD-A酶)一樣，術語“分離的”通常意指已被取出或從天然環境中分離出來。例如，可從表達或產生(例如，本身/天然地)所述酶的乳酸乳球菌菌株分離分離的SOD-A酶。
[0055]如本文中所用，短語“抗氧化作用”通常是指化合物或組合物(例如，包含SOD-A的組合物)減少、減緩、延遲或以其它方式抑制氧化應激(例如，減少或抑制ROS誘發的對細胞組分諸如DNA的氧化損傷)的能力。
[0056]本發明的組合物可用于治療或減少ROS誘發的損傷(例如，ROS誘發的對受試者的胃腸道的損傷)。例如，本文中公開的是包括向有需要的受試者施用組合物的治療方法，所述組合物包含來自(例如，由其產生或從其分離的)乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的抗氧化酶(例如，S0D，諸如S0D-A)。此類組合物可包含一種或多種細菌(例如，已被工程化或遺傳修飾以便它們表達SOD酶或導致抗氧化酶的過表達的細菌)。
[0057]本文中還提供了已被修飾(例如，遺傳修飾)以便它們產生一種或多種抗氧化酶或增加所述一種或多種酶(S0D，如S0D-A)的量的分離的細胞，所述酶由乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株產生。例如，可用包含編碼所述酶或其功能性部分的多核苷酸的質粒轉染分離的細胞(例如，細菌細胞)。優選地細胞將是不天然產生所述酶的細胞(例如，如果SOD酶來源于乳酸乳球菌CNCM 1-1631，則所述遺傳修飾的菌株不是乳酸乳球菌CNCM 1-1631)。然而，在某些實施方案中，細胞天然表達所述酶和并且遺傳修飾導致所述酶的過量產量。在將此類核酸整合進分離的細胞的基因組中并表達后，此類細胞將產生或分泌抗抗氧化酶(例如，來自乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的SOD-A酶)。可從培養基分離(例如，收獲)此類抗氧化酶并按照本發明的教導將其向受試者施用，以減少或治療氧化性應激或炎性病況的。或者，可向受試者施用所述培養基或細菌細胞本身。在某些實施方案中，所述分離的細胞包含導致抗氧化酶(例如，相對于未修飾的細胞)的過表達的一種或多種遺傳修飾。例如，可遺傳修飾一種或多種本身產生抗氧化酶(例如，SOD-A)的分離的細胞，以便增加此類產生的抗氧化酶的量(例如，增加 2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10_ 倍或更多)。
[0058]編碼來自乳酸乳球菌CNCM 1-1631的SOD-A酶的多核苷酸序列示于SEQ ID N0:2(圖1O)中。SOD-A酶(或本文中公開的其它酶)的功能性部分可使用本領域中已知的方法來鑒定。例如，可以使用標準方法產生所述酶的部分，并測試其目標性質(例如，在鼠模型中治療潰瘍性結腸炎的能力，減少或中和ROS的能力等)。如本文中所用，酶的“功能性部分”是與親代(完整)酶共享一個或多個功能性性質的部分。在某些實施方案中，所述酶的功能部分是由包含SEQ ID NO:3的乳酸乳球菌CNCM 1-1631的多核苷酸序列編碼的SOD-A酶的功能性部分。優選地，共享性質或屬性是與本文所述的方法相關那些性質，諸如中和反應性氧種(ROS)的能力、減少ROS誘發的損傷的能力、減少氧化應激的能力、抗氧化作用、治療炎性病癥的能力和/或治療炎性腸病的能力。
[0059]本文中還提供了可用于遺傳修飾一種或多種分離的細胞(例如，細菌細胞)的表達載體。可按照本發明的教導使用經遺傳修飾的細胞和其表達產物(例如，SOD-A酶或其功能性部分)。在某些實施方案中，所述表達載體包含編碼來自乳酸菌的酶或其功能性部分(例如，SOD、SOD-A或其部分)的多核苷酸。在某些實施方案中，此類表達載體包含編碼來自乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的酶或其功能性部分(例如，S0D、S0D-A或其部分)多核苷酸。此類表達載體可以是，例如，如本領域中已知的病毒、質粒等。
[0060]在某些方面，本發明的方法包括向具有其中牽涉氧化應激的疾病或病況(例如，炎性病況諸如潰瘍性結腸炎)的受試者施用有效量的一種或多種酶(例如，SOD-A酶，諸如從乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株分離的酶)。乳酸乳球菌CNCM 1-1631的SOD-A酶的氨基酸序列在本文中提供為SEQ ID N0:1(圖9)。如本文中所用，術語“受試者”意指任何哺乳動物，包括人。在本發明的某些實施方案中，所述受試者是成人或青少年。
[0061]如本文中所用，短語“有效量”意指足以實現有意義的益處(例如，中和有害ROS或減少炎性腸病的癥狀)的量。本發明的組合物中的酶(例如，SOD-A酶)的有效量一般可基于此類酶發揮抗氧化作用的能力來確定。通常，向受試者施用的酶(例如，S0D、S0D-A酶)的量將決于受試者的特征和受試者者的氧化應激、疾病或炎性病況的嚴重程度。在某些實施方案中，可每日一次、每日兩次、每日三次、每日四次、每日五次、每日六次、每日七次、每日八次或更多次向受試者施用(例如，口服施用)所述組合物。
[0062]可通過任何合適的施用途徑向受試者施用本發明的組合物。優選地，在施用此類組合物后，在胃腸道的組織中(例如，胃腸道的內腔內)實現和/或維持酶的治療性濃度(例如，SOD或SOD-A酶)。在某些實施方案中，將所述組合物與合適的賦形劑組合并配制用于經腸或直腸施用。或者，在某些實施方案中，可制備本發明的組合物以用于胃腸外施用。適用于本發明的組合物的配制和施用的一般技術可見于“Remington，s PharmaceuticalSciences/'Mack Publishing C0.,Easton,Pa.，最新版中。還可將本發明的組合物作為治療方案的部分與其它合適的治療劑或預防劑一起施用或共施用(例如，同時或依次施用)。
[0063]在其中向受試者口服施用組合物的實施方案中，可將此類組合物制備或配制為食品(例如，乳制品，優選地發酵乳制品諸如酸奶)，或功能性食品(例如，營養補充劑)。在其它實施方案中，可將此類組合物制備或配制例如為藥物、膳食補充劑和/或醫療食品。在一個實施方案中，可通過利用乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株以及任選地其它菌株(諸如，例如，保加利亞乳桿菌(L.Bugaricus)和嗜熱鏈球菌(S.thermophiIus)菌株的混合物)發醇培養基(優選地牛奶)來獲得發酵乳制品。
[0064]本發明提供鑒定另外的候選治療性乳酸菌，以及鑒定和分離這些細菌的有益抗氧化酶(例如，SOD酶)的方法。
[0065]例如，本領域技術人員可容易地篩選乳酸菌，以鑒定表達抗氧化酶的候選細菌，然后在適當的模型中測試這些候選細菌的至少一個治療性質，以鑒定另外的候選治療性細菌。一旦鑒定此類細菌，就分離抗氧化酶并且測試其如本文中所述以及如本領域技術人員容易知道的類似的治療性質。通過這些方法鑒定的另外的細菌和SOD基因可用于如本文所述的方法(例如，治療方法)。
[0066]如本文中在說明書和權利要求中所用，除非明確指出相反，否則冠詞“一個/種(a)”和“一個/種(an)”應被理解為包括復數所指對象。除非指出相反或另外地根據上下文明顯相反，否則如果組成員的一個、不止一個或全部存在于，應用于給定的產品或方法中或另外地與其相關，則在一組的一個或多個成員之間包括“或”的權利要求或說明被認為是滿意的。本發明包括其中組的正好一個成員存在于，應用于給定的產品或方法中，或另外地與其相關的實施方案。本發明還包括在其中不止一個或整個組的成員存在于，應用于給定的產品或方法中，或另外地與其相關的實施方案。此外，應理解的是，除非另有所指或除非對于本領域普通技術人員來說很明顯的是將產生矛盾或不致，否則本發明包括其中來自一個或多個所列權利要求的一個或多個限制、元素、條款、說明性術語等被引入從屬于所述相同的基本權利要求的另一個權利要求(或，作為相關的任何其它權利要求)的所有變化、組合和排列。當將要素以列表(例如，以Markush群或類似格式)呈現時，應當理解，要素的每一個亞組也被披露，并且可從該組除去任何元件。應當理解的是，一般地，當本發明或本發明的各方面包含/涉及包含特定要素、特征等時，本發明的某些實施方案或本發明的各方面由此類要素、特征等組成或基本由其組成。為了簡單起見，這些實施方案在每一種情況下在本文中的這么多的話語中未被特別陳述。還應該理解的是，可從權利要求明確排除本發明的任何實施方案或方面，無認特定排除是否記載在說明書中。在整個本申請中引述的所有參考資料(包括參考文獻，授權的專利和公開的專利申請和網站)的全部內容由此通過引用明確地并入。
[0067]本文所述的實施方案將通過以下實施例(其不應被解釋為限制)進一步說明。
[0068]實施例1
[0069]TRUC(T_bet—RAG2V—)鼠模型代表了評估本發明減輕或以其它方式治療炎性腸病的能力的合適的模型。TRUC小鼠產生特征在于功能障礙和上皮屏障完整性的喪失的自發性、高度滲透的、攻擊性的共生依賴性潰瘍性結腸炎，這由先天免疫系統中的T-bet缺乏引起(Garrett等Cell 131(1):33-45(2007);Garret等Cytokine48(1-2):144-147(2009))。TRUC小鼠因而提供了用于評估乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株緩解在此類TRUC小鼠中誘發的結腸炎的能力和評估本發明的功效的有用模型。
[0070]本研究通過用水對照(n = 5)、牛奶對照(n = 13)、含有乳酸乳桿菌CNCM 1-1631菌株的五菌株的發酵乳制品(n = 5)或乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(n = 19)處理TRUC小鼠4周來進行本研究。在每一種情況下，通過溫和的口服滴注將對照和包含所述乳酸乳球菌細菌的發酵乳制品遞送至小鼠。
[0071]在4周的處理后，處死小鼠，取出它們的結腸，將其從肛門至盲腸的遠端分離開來，除去結腸內容物，并用PBS清潔結腸，隨后在4%PFA或10 %中性緩沖的福爾馬林中固定，隨后進行常規石蠟包埋。在石蠟包埋后，切成0.5微米切片，對其進行染色和檢查。基于賦予的組織學結腸炎評分來評估結腸炎。
[0072]如圖1中所舉例說明的，含有乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的發酵乳制品的施用改善在處理的TRUC小鼠中誘發的結腸炎，如通過組織學評估證明的。相反地，水和牛奶對照的每一種的施用不能緩解誘發的結腸炎。前述結果表明，乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株能夠改善或以其它方式緩解該TRUC小鼠模型中的結腸炎。
[0073]實施例2
[0074]本發明人還評估了乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株在結腸炎的白細胞介素10敲除(1110—Λ)小鼠模型中影響組織學結腸炎評分的能力，所述小鼠模型與人炎性腸病的許多方面相似。
[0075]向所述1110—Λ小鼠施用水對照(η= 8 )、牛奶對照(η = 8)或乳酸乳球菌C N CM 1-1631菌株的發酵乳制品(η = 9)，持續4周。在每一種情況下，通過溫和的口服滴注將所述對照和含有乳酸乳球菌細菌的發酵乳制品遞送至小鼠。
[0076]在4周的處理后，處死1110—Λ小鼠，取出它們的結腸，將其從肛門至盲腸的遠端分離開來，除去結腸內容物，并用I3BS清潔結腸，隨后在4%PFA或10 %中性緩沖的福爾馬林中固定，隨后進行常規石蠟包埋。在石蠟包埋后，切成0.5微米切片，對其進行染色和檢查。基于賦予的組織學結腸炎評分來評估結腸炎。
[0077]如圖2中舉例說明的，含有乳酸乳球菌CNCM1_1631菌株的發酵乳制品的施用改善在1110—Λ小鼠中誘發的結腸炎，如通過組織學結腸炎評分證明的。相反地，水和牛奶對照的每一種的施用不能緩解在1110—Λ小鼠中誘發的結腸炎，如也通過組織學結腸炎評分證明的。前述結果表明，乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株能夠改善或以其它方式緩解該1110—Λ小鼠模型中的結腸炎。
[0078]實施例3
[0079]右旋葡聚糖硫酸鈉的施用導致結腸中的上皮損傷和強烈炎癥應答，所述損傷和炎癥應答持續數天，是急性結腸炎的已確認的小鼠炎癥損傷模型。進行本研究以評估乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株影響被施予右旋葡聚糖硫酸鈉5天的野生型小鼠的組織學結腸炎評分的能力。
[0080]用右旋葡聚糖硫酸鈉處理(實驗的第3天至第8天)野生型小鼠，并從實驗的第I天至第10天向其施用水對照(n = 8)、牛奶對照(n = 8)或乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品。
[0081]在10天的處理后，處死右旋葡聚糖硫酸鈉處理的小鼠，取出它們的結腸，將其從肛門至盲腸的遠端分離開來，除去結腸內容物，并用PBS清潔結腸，隨后在4%PFA或10%中性緩沖的福爾馬林中固定，隨后進行常規石蠟包埋。在石蠟包埋后，切成0.5微米切片，對其進行染色和檢查。基于賦予的組織學結腸炎評分來評估結腸炎。
[0082]如圖3中舉例說明的，乳酸乳球菌CNCM1_1631菌株的發酵乳制品的施用緩解在右旋葡聚糖硫酸鈉處理的小鼠中誘發的結腸炎，如通過組織學結腸炎評分證明的。相反地，水和牛奶對照的每一種的施用不能緩解在右旋葡聚糖硫酸鈉處理的小鼠中誘發的結腸炎，如也通過組織學結腸炎評分證明的。前述結果進一步表明，乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株能夠改善或以其它方式緩解用右旋葡聚糖硫酸鈉處理的野生型小鼠中的結腸炎。
[0083]實施例4
[0084]TRUC(T_bet—RAG2V—)鼠模型也表示了評估本發明減少有害反應性氧物質的能力的合適的模型。如圖4中舉例說明的，TRUC小鼠的遠端結腸相對于RAG2V—小鼠的遠端結腸富含反應性氧物質。如圖5中所示，如通過8-羥基-2-脫氧鳥苷的水平測量的DNA加合物的存在是在TRUC小鼠中測量的反應性氧的不利結果，并且這些加合物的水平在TRUC小鼠中在I至2個月中增加至3倍，并且在4個月和6個月的老TRUC小鼠中最高(Garre tt等，Cancer Ce 1116:208-219(2009))。因此TRUC小鼠為評估本發明減少或以其它方式中和反應性氧的能力提供有用的模型。
[0085]為了評估本發明影響原代結腸上皮細胞中的超氧化物水平的能力，用對照介質、乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株或缺乏SOD-A的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株孵育原代結腸上皮細胞。將黃嘌呤-黃嘌呤氧化物用于刺激上皮過氧化物水平，將溴化二氫乙錠用于對細胞進行染色以檢測超氧化物水平，并使用流式細胞術分析細胞和計算平均熒光強度。
[0086]如圖6舉例說明的，含有乳酸乳球菌CNCM1_1631菌株的發酵乳制品的施用相對于對照介質和缺乏SOD-A的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株降低結腸上皮細胞中的超氧化物水平，如通過平均熒光強度的降低所證明的。因此前述結果表明，乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株能夠以SOD-A依賴性方式減少結腸上皮細胞中的超氧化物水平。
[0087]實施例5
[0088]為了進一步證明乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株以SOD-A依賴性方式改善結腸炎，進行了進一步研究以證明乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株影響TRUC(T-bet—ARag2—Λ)小鼠的組織學結腸炎評分的能力。
[0089]向TRUC小鼠施用野生型乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(η = 9)、已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(n = 20)、或具有用表達SOD-A的質粒補充的表達的已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(n=12)。在4周的處理后，處死小鼠，取出它們的結腸，將其從肛門至盲腸的遠端分離開來，除去結腸內容物，并用I3BS清潔結腸，隨后在4%PFA或10 %中性緩沖的福爾馬林中固定，隨后進行常規石蠟包埋。在石蠟包埋后，切成0.5微米切片，對其進行染色和檢查。基于賦予的組織學結腸炎評分來評估結腸炎。
[0090]如圖7中舉例說明的，野生型乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品以及具有利用表達SOD-A的質粒補充的表達的已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品的施用，改善了在處理的TRUC小鼠中誘發的結腸炎，如通過組織學評估證明的。相反地，已刪除基因組SOD-A基因乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品的施用未能緩解誘發的結腸炎。前述結果進一步表明，表達SOD-A的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株能夠在TRUC小鼠模型中以SOD-A依賴性方式改善或以其他方式緩解結腸炎。
[0091 ] 實施例6
[0092]如先前所論述的，右旋葡聚糖硫酸鈉的施用導致結腸的上皮損傷和強烈的炎癥應答(持續若干天并且為急性結腸炎的已建立的鼠炎癥損傷模型)。還評估了乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株影響用右旋葡聚糖硫酸鈉處理5天(實驗的第3天至第8天)的野生型小鼠的組織學結腸炎評分的能力。
[0093]用右旋葡聚糖硫酸鈉處理野生型小鼠，并向其施用乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天，n = 5)、已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天，η= 11)或具有利用表達SOD-A的質粒補充的表達的已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品(從實驗的第I天至第10天，η = 5)。
[0094]處理后，處死小鼠，并取出它們的結腸，將其從肛門至盲腸的遠端分離開來，除去結腸內容物，并用PBS清潔結腸，隨后在4%PFA或10%中性緩沖的福爾馬林中固定，隨后進行常規石蠟包埋。在石蠟包埋后，切成0.5微米切片，對其進行染色和檢查。基于賦予的組織學結腸炎評分來評估結腸炎。
[0095]如圖8中所舉例說明的，野生型乳酸乳球菌CNCM1_1631菌株的發酵乳制品和具有利用表達SOD-A的質粒補充的表達的已刪除基因組SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品的施用，改善了在右旋葡聚糖硫酸鈉處理的小鼠中誘發的結腸炎，如通過組織學評估證明的。相反地，已刪除基因組SOD-A基因乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株的發酵乳制品的施用未能緩解右旋葡聚糖硫酸鈉誘發的結腸炎。前述結果提供了進一步的表明:表達SOD-A的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株能夠在右旋葡聚糖硫酸鈉處理的小鼠中改善或以其他方式緩解結腸炎，并且觀察到的作用以SOD-A依賴性方式發生。
[0096]前述研究因此證明，乳酸乳球菌，特別是表達SOD-A的乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株，或從乳酸乳球菌CNCM 1-1631分離的SOD-A的施用可成功地減少反應性氧物質(ROS)，減少氧化應激，以及改善或以其它方式緩解炎性腸病(例如，結腸炎)，從而治療炎性腸病、誘導其緩解以及預防其復發。
【主權項】
1.一種向受試者提供抗氧化作用的方法，其中所述方法包括向受試者施用組合物，所述組合物包含從乳酸乳球菌(Lactococcus Iactis)菌株獲得且任選分離的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗氧化作用涉及減少反應性氧物質(ROS)誘發的對受試者的胃腸道的損傷，并且其中所述方法包括向所述受試者施用有效量的組合物，從而減少ROS誘發的損傷，其中所述組合物包含從乳酸乳球菌菌株獲得且任選分離的酶或其功能性部分。3.根據權利要求2所述的方法，其中所述ROS誘發的損傷由選自由以下組成的組的一個或多個病況導致:炎性腸病、潰瘍性結腸炎、改道性結腸炎、克羅恩病、胃腸道癌癥、腸易激綜合征、肥胖癥和II型糖尿病。4.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗氧化作用涉及減少受試者中的氧化應激，并且其中所述方法包括向所述受試者施用有效量的組合物，從而減少所述氧化應激，其中所述組合物包含從乳酸乳球菌菌株獲得且任選分離的酶或其功能性部分。5.根據權利要求4所述的方法，其中所述氧化應激涉及所述受試者的胃腸道的組織。6.根據權利要求4或5中任一項所述的方法，其中所述氧化應激是選自由以下組成的組的一個或多個病況的結果:炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、改道性結腸炎、隱窩炎、衰老、胃腸道癌癥、腸易激綜合征、肥胖癥和II型糖尿病。7.根據權利要求4-6中任一項所述的方法，其中所述氧化應激在腸炎癥過程中產生。8.根據權利要求4-7中任一項所述的方法，其中所述氧化應激包含反應性氧物質(ROS)誘發的對所述胃腸道的組織的損傷。9.根據權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述酶為抗氧化酶。10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述酶為超氧化物歧化酶(S0D)。11.根據權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述酶為超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶。12.根據權利要求11所述的方法，其中所述SOD-A由包含SEQID N0:2、SEQ ID N0:3，或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的功能性部分的多核苷酸編碼。13.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述酶包含含有SEQID NO:1或其功能性部分的分離的多肽。14.根據權利要求1-13中任一項所述的方法，其中所述組合物至少包含所述菌株。15.根據權利要求1-14中任一項所述的方法，其中所述乳酸乳球菌菌株為CNCM1-1631。16.根據權利要求1-15中任一項所述的方法，其中所述酶是分離的。17.根據權利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述受試者為哺乳動物。18.根據權利要求1-17中任一項所述的方法，其中所述受試者為人。19.根據權利要求1-18中任一項所述的方法，其中口服施用所述組合物。20.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述組合物選自由以下組成的組:食品、藥物和膳食補充劑。21.根據權利要求1-20中任一項所述的方法，其中所述組合物為醫療食品或功能性食品O22.一種鑒定候選治療性乳酸菌的方法，其中所述方法包括如下步驟:(a)篩選乳酸菌，以鑒定表達酶的候選細菌;和(b)在合適的模型中測試所述候選細菌的至少一種治療性質以鑒定候選治療性細菌。23.根據權利要求22所述的方法，其中所述酶是抗氧化酶。24.根據權利要求22或23中任一項所述的方法，其中所述酶是超氧化物歧化酶(SOD)酶。25.根據權利要求22-24中任一項所述的方法，其中所述酶為S0D-A。26.根據權利要求22-25中任一項所述的方法，其中(a)的乳酸菌選自由以下組成的組:乳球菌屬(Lactococcus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、片球菌屬(Ped1coccus)和鏈球菌屬(Streptococcus)。27.根據權利要求26所述的方法，其中所述乳酸菌為乳酸乳球菌。28.根據權利要求21-27中任一項所述的方法，其中所述至少一個治療性質為選自由以下組成的組的一個或多個性質:中和反應性氧物質(ROS)的能力、減少ROS誘發的損傷的能力、減少氧化應激的能力、抗氧化作用、治療炎性病況的能力和治療炎性腸病的能力。29.根據權利要求22-28中任一項所述的方法，其中所述至少一個治療性質是治療潰瘍性結腸炎的能力，并且所述模型選自由TRUC鼠模型和1110—Λ鼠模型組成的組。30.根據權利要求22-29中任一項所述的方法，其中所述治療性乳酸菌具有與乳酸乳球菌CNCM 1-1631細菌類似的性質。31.—種表達從乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株分離的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分的分離的菌株，其中所述分離的菌株不是乳酸乳球菌CNCM 1-1631菌株。32.根據權利要求31所述的分離的菌株，其中所述SOD酶為S0D-A。33.根據權利要求31或32中任一項所述的分離的菌株，其中所述菌株為乳酸乳球菌菌株。34.根據權利要求31-33中任一項所述的分離的菌株，其中用包含編碼所述SOD酶或其功能性部分的多核苷酸的質粒轉染所述菌株。35.—種表達載體，所述表達載體包含編碼來自乳酸乳球菌CNCM1-1631菌株的超氧化物歧化酶A( S0D-A)酶或其功能性部分的多核苷酸。36.根據權利要求35所述的表達載體，其中所述載體是病毒。37.根據權利要求35所述的表達載體，其中所述載體是質粒。38.—種治療具有炎性病況的受試者的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用有效量的組合物，從而治療所述炎性病況，其中所述組合物包含從乳酸菌分離的酶或其功能性部分。39.根據權利要求38所述的方法，其中所述乳酸菌選自由以下組成的組:乳桿菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、鏈球菌屬和乳球菌屬。40.根據權利要求38或39中任一項所述的方法，其中所述乳酸菌為乳酸乳球菌。41.根據權利要求38-40中任一項所述的方法，其中所述乳酸菌為乳酸乳球菌CNCM1-1631細菌。42.根據權利要求38-41中任一項所述的方法，其中所述酶為抗氧化酶。43.根據權利要求38-42中任一項所述的方法，其中所述酶為SOD。44.根據權利要求38-43中任一項所述的方法，其中所述酶為SOD-A。45.根據權利要求38-44中任一項所述的方法，其中所述炎性病況由反應性氧物質(ROS)誘發。46.根據權利要求38-45中任一項所述的方法，其中所述組合物包含不天然產生所述酶且已被工程化來表達所述酶的菌株。47.—種組合物在制造用于在有需要的受試者中減少ROS誘發的損傷的藥劑中的用途，所述組合物包含從乳酸乳球菌菌株獲得的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。48.—種組合物在制造用于治療炎性病況的藥劑中的用途，所述組合物包含從乳酸乳球菌菌株獲得的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。49.根據權利要求47-48中任一項所述的用途，其中所述乳酸乳球菌菌株為CNCM1-1631。50.根據權利要求47-49中任一項所述的用途，其中所述SOD酶包含含有SEQID NO:1或其功能性部分的分離的多肽。51.根據權利要求47-50中任一項所述的用途，其中所述SOD酶為超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶。52.根據權利要求51所述的用途，其中所述SOD-A酶由包含SEQID NO: 2,SEQ ID N0:3、或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的功能性部分的多核苷酸編碼。53.根據權利要求47-52中任一項所述的用途，其中所述ROS誘發的損傷或炎性病況由選自由以下組成的組的一個或多個病況導致:炎性腸病、潰瘍性結腸炎、改道性結腸炎、克羅恩病、胃腸道癌癥、腸易激綜合征、肥胖癥和II型糖尿病。
【文檔編號】C12Q1/04GK105916516SQ201480056168
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2014年8月13日
【發明人】溫迪·S·格瑞特, 帕特里克·韋加, 索尼亞·阿羅拉·巴拉爾, 約翰·萬海爾克卡瑪·瑋力格, 加埃勒·奎勒, 佩吉·加羅
【申請人】哈佛學院校長同事會, 達能日爾維公司