一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備方法
【專利摘要】本發明涉及醫用生物材料技術領域。白內障治療成為眼科臨床關注的焦點，主要的治療手段為晶體的摘除結合人工晶體的植入。目前臨床存在的主要問題是晶體前囊的撕裂成功率較低，粘彈劑眼內的殘留引起眼壓升高等弊端。本發明提供了一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備方法。該材料中添加濃度為0.002-0.6%的臺盼藍染色劑，然后通過高溫高壓滅菌制備而成；染色劑的加沒有改變粘彈劑的凝膠性質，體外釋放60min釋放率為15%左右，由此可見染色劑可以持續緩慢釋放到達手術操作部位，達到選擇性染色的目的，同時不會造成對組織細胞的損害，基于此特性術后可依靠染色劑的指示作用對粘彈劑進行有效地清除。
【專利說明】
一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備方法
技術領域
[0001]本發明涉及醫用生物材料技術領域，具體涉及一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備方法，該粘彈劑具有良好的生物相容性，在晶狀體摘除手術中可以對晶狀體如囊進彳丁選擇性染色，提尚手術的成功率；同時提尚手術后粘彈劑的去除率，減小術后并發癥的發生。
【背景技術】
[0002]隨著老年醫療保健事業的發展，人類壽命普遍延長，白內障發病率有逐年增加的趨勢。估計到2020年我國白內障積存人數將達500萬人。鑒于白內障疾患的廣泛社會性及現代人對生活質量要求的提高，使得白內障治療成為眼科臨床關注的焦點，并以驚人的速度發展和提高。
[0003]目前到目前為止，白內障手術摘除合并人工晶體植入仍是公認的白內障治療最有效的手段。隨著顯微手術技術的不斷發展，白內障超聲乳化吸出加折疊人工晶體植入術已成為國內外白內障手術的主流，但該手術也存在一些并發癥，其中最常見最嚴重的即是角膜內皮細胞的損傷，粘彈劑的應用則減
少了這種損傷的發生，因此粘彈劑已被廣泛應用于人工晶狀體植入、穿透性角膜移植術以及眼外傷等顯微手術。
[0004]透明質酸鈉(HA)是一種鏈狀聚陰離子黏多糖，由葡萄糖醛酸和乙酰基氨基葡萄糖的雙糖單位重復連接組成，它是構成玻璃體、皮膚、關節滑液和軟骨組織的重要成分，參與多種細胞活動和生理過程，因此成為目前為止最常用的眼科粘彈劑。透明質酸鈉粘彈劑根據其組成和理化性質不同，分為內聚性粘彈劑和彌散性粘彈劑。內聚性粘彈劑由于其分子量較大，具有高假可塑性和高表面張力，在手術過程中，可以更好的維持前房的手術空間，且由于分子鏈較長術后容易被清除，避免了術后粘彈劑在眼內的過多殘留。彌散性粘彈劑分子量小，具有低假可塑性和低表面張力，在手術過程中更容易黏附于眼內組織表面，并且在手術過程中不會被輕易清除，從而更好的發揮了保護眼內組織的作用。目前市面上彌散性眼科粘彈劑主要以Viscoat為代表，而內聚性粘彈劑主要是以愛維為代表。
[0005]雖然上述不同類型的粘彈劑有效地保證了晶體植入的成功率，最大程度地保護了角膜的內皮細胞免受損傷，但由于透明質酸鈉類眼科粘彈劑為無色透明的凝膠，當植入眼部后與房水等組織液接觸后與晶狀體前囊膜間無法形成身份明顯的界限，對于連續環形撕囊術等關鍵手術造成極大的影響，是制約臨床該類手術成功率高低與否的關鍵因素，同時在術后的粘彈劑清除過程中由于無法有效地對粘彈劑進行分辨，造成粘彈劑的殘留引起眼壓升高等并發癥。針對上述臨床實際應用中出現的問題，涌現出一些解決辦法，其中最為常用的便是使用染色劑對晶狀體囊膜進行染色，進而提高連續環形撕囊術等關鍵手術的成功率。
[0006]現如今市面上最常見的染色劑為是臺盼藍和吲哚氰綠，雖然上述染色劑仍存在著一些弊端，吲哚氰綠在低濃度下即會對角膜內皮細胞產生毒性，雖然臺盼藍具有較小的細胞毒性，但單獨對囊膜進行染色的時也會造成玻璃體和植入的人工晶體也同時被染色，造成視力減退、單眼復視等不良后果，在Gouws等的回顧性對比研究中發現，應用臺盼藍染色的白內障超聲乳化手術病例中，術后黃斑囊樣水腫的發生率高于常規手術；造成上述問題的主要原因是單純的染色劑無粘性，非但無法做到選擇性染色，反而會無限制地延流并向后滲透如玻璃體等，造成其他組織的染色，進而產生系列的不良后果。因此將染色劑與粘彈劑混合后借助粘彈劑的粘彈性和內聚性做到選擇性染色是解決上述問題的關鍵所在，而截至目前為止還沒有類似的產品出現。
[0007]本專利即從臨床實際需求出發，以解決臨床使用難題為目的，制備了一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑，將醫用染色劑與透明質酸鈉粘彈劑進行物理混合，在不影響粘彈劑本身的物理特性的同時賦予其選擇性染色的功能，可在白內障手術的術前起到選擇性染色的作用提高撕囊手術的成功率，同時在術后的粘彈劑去除中起到指示劑的作用，提尚粘彈劑的清除率，減小眼壓升尚等不良反應的發生。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是提供一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備方法，該粘彈劑復合醫用染色劑，可對晶狀體的前囊起到選擇性染色，提高撕囊手術的成功率，手術結束后利用其攜帶的染色劑賦予的指示劑作用提高粘彈劑的清除效果，減小眼壓升高等不良反應的發生率。
[0009]本發明首先將醫用染色劑溶解于生理緩沖液中，然后添加透明質酸鈉干粉攪拌溶解，最后通過高溫高壓滅菌制備成具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑；隨后通過流變學檢測、染色劑釋放實驗以及粘彈劑吸光值與濃度關系的測定
本發明提供了一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備、流變學性能檢測、染色劑釋放實驗方法，具體內容如下:
一.染色劑的配制
稱取臺盼藍固體溶解于磷酸鹽緩沖液中(PH7.2)，配制成濃度為0.002-0.6% (w/v)的溶液，然后采用0.45Mfli的濾膜過濾，低溫靜置待用。
[0010]二.具有選擇性前囊染色功能的粘彈劑的配制
將透明質酸鈉干粉溶解于已配制好的染色劑溶液中，配制成濃度為1.2-2.3% (w/v)的凝膠溶液，低溫靜置直至溶解均勻，然后121°C高溫高壓滅菌15min，制備成具有選擇性前囊染色功能的透明質酸鈉粘彈劑。
[0011]三.染色劑的加入對透明質酸鈉粘彈劑性能影響的試驗研究
分別以磷酸鹽緩沖液和0.1%的臺盼藍染色劑溶液為溶劑，配制20mg/mL的透明質酸鈉溶液，并采用Haake Mars III流變儀在0.001-100HZ下進行頻率掃描。頻率掃描結果顯示(圖1)，添加臺盼藍后的透明質酸鈉凝膠在流變學性能上沒有改變，仍然保持透明質酸鈉凝膠自身的流變學特性和粘彈性能。因此，這種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑同透明質酸鈉凝膠在眼科手術中的作用一樣，可以有效的保護角膜內皮細胞免受損傷。
[0012]四.凝膠中的染色劑的體外釋放實驗研究
稱取一定質量以染色劑溶液配制的透明質酸鈉凝膠溶液，放于燒杯中，按照凝膠質量與外液體積為1:10的比例加入相應的磷酸鹽緩沖液，并置于37°c水浴中，分別與5min，10min, 20 min, 30 min, 60 min時取出一定體積的透析外液，并及時添加相同的體積的緩沖液。于607nm下測定吸光值，計算透析外液中染色劑的濃度，并計算出凝膠中染色劑的釋放率，繪制釋放曲線。實驗結果表明(圖2)，染色劑溶液為0.1%的透明質酸鈉凝膠溶液在PBS中放置lh，染色劑的釋放率為15%左右，可見透明質酸鈉凝膠可將染色劑包裹、封鎖住，使染色劑自身在等滲環境下不能很快的分散開來，這一特性有助于本產品在眼科手術中的應用，既可以保證其有效的染色效果，又可避免其在眼內擴散或非選擇性染色而造成玻璃體和植入的人工晶體被染色，導致視力減退、單眼復視等不良后果。
[0013]五.具有選擇性前囊染色功能的粘彈劑的染色效果觀察
以0.02%-0.2%的臺盼藍染色劑溶液為溶劑，配制濃度為0.5%HA溶液，將樣品于121°C高溫高壓滅菌15min后待用。取對數生長期的L929細胞用胰酶消化，用10%FBS_DMEM培養液調整細胞懸液密度為4 X 104個/mL。
[0014]取10PL細胞懸液加至96孔板，每孔的細胞數為4000個(邊緣孔用無菌PBS填充)。在37°C，5% C02的培養箱中，孵育24小時。每孔加入ΙΟΟμ?的樣品，每個樣本設6個復孔，陰性對照組加不含樣本的培養液ΙΟΟμ?，繼續放入培養箱中，培養Ih后于倒置顯微鏡下觀察染色效果和細胞形態，并于陰性對照組相比較。由細胞染色效果圖可看出(圖3)，當透明質酸鈉凝膠溶液中的臺盼藍濃度為0.1%時，細胞膜及其周圍環境便可著色，細胞清晰可見，肉眼很容易辨別染色區域，可見這一濃度的臺盼藍-透明質酸鈉凝膠溶液具有良好的選擇性染色效果。
【附圖說明】
[0015]圖1凝膠動力粘度對比圖。
[0016]圖2凝膠中染色劑釋放曲線。
[0017]圖3凝膠染色效果觀察。
【具體實施方式】
[0018]現結合實施例，對本發明作詳細描述，但本發明的實施不僅限于此。
[0019]實施例1:
稱取臺盼藍固體0.05g，溶于50mL的磷酸鹽緩沖液中，配制成濃度為0.1%的染色劑溶液，并通過0.45Mffl的濾膜過濾。稱取Ig透明質酸鈉干粉，溶于染色劑溶液中，配制成濃度為20mg/mL的透明質酸鈉凝膠溶液。
[0020]實施例2:
稱取臺盼藍固體0.025g，溶于50mL的磷酸鹽緩沖液中，配制成濃度為0.05%的染色劑溶液，并通過0.45Mffl的濾膜過濾。稱取Ig透明質酸鈉干粉，溶于染色劑溶液中，配制成濃度為20mg/mL的透明質酸鈉凝膠溶液。
[0021]實施例3:
以0.2%的臺盼藍染色劑溶液為溶劑，配制20mg/mL的透明質酸鈉溶液，121°C，滅菌15min，取樣0.5mL采用Haake Mars III流變儀在0.001-100HZ下進行頻率掃描。
[0022]實施例4:
稱取5.57g染色劑溶液為0.1%的透明質酸鈉凝膠溶液，放于燒杯中，按照凝膠質量與外液體積為1:10的比例加入相應的磷酸鹽緩沖液，并置于37°c水浴中，分別與5min，10min, 20 min, 30 min, 60 min時取出4mL的透析外液，并及時添加相同的體積的緩沖液。于607nm下測定吸光值，計算透析外液中染色劑的濃度，并計算出凝膠中染色劑的釋放率，繪制釋放曲線。
[0023]實施例5:
稱取4.45g染色劑溶液為0.05%的透明質酸鈉凝膠溶液，放于燒杯中，按照凝膠質量與外液體積為1:10的比例加入相應的磷酸鹽緩沖液，并置于37°C水浴中，分別與5min，10min, 20 min, 30 min, 60 min時取出4mL的透析外液，并及時添加相同的體積的緩沖液。于607nm下測定吸光值，計算透析外液中染色劑的濃度，并計算出凝膠中染色劑的釋放率，繪制釋放曲線。
[0024]實施例6:
以0.2%的臺盼藍染色劑溶液為溶劑，配制濃度為0.5%HA溶液，于121°C高溫高壓滅菌15min后待用。取對數生長期的L929細胞用胰酶消化，用10%FBS_DMEM培養液調整細胞懸液密度為4X104個/mL。取ΙΟΟμ?細胞懸液加至96孔板，每孔的細胞數為4000個(邊緣孔用無菌PBS填充)。在37°C，5% C02的培養箱中，孵育24小時。每孔加入ΙΟΟμ?的樣品，每個樣本設6個復孔，陰性對照組加不含樣本的培養液ΙΟΟμ?，繼續放入培養箱中，培養Ih后于倒置顯微鏡下觀察染色效果和細胞形態，并于陰性對照組相比較。與對數生長期的L929細胞共培養，培養Ih后于倒置顯微鏡下觀察染色效果和細胞形態，并于陰性對照組相比較。
[0025]實施例7:
以0.05%的臺盼藍染色劑溶液為溶劑，配制濃度為0.5%ΗΑ溶液，于121°C高溫高壓滅菌15min后待用。取對數生長期的L929細胞用胰酶消化，用10%FBS_DMEM培養液調整細胞懸液密度為4 X 14個/mL。取10PL細胞懸液加至96孔板，每孔的細胞數為4000個(邊緣孔用無菌PBS填充)。在37°C，5% CO2的培養箱中，孵育24小時。每孔加入100μ?的樣品，每個樣本設6個復孔，陰性對照組加不含樣本的培養液100μ?，繼續放入培養箱中，培養Ih后于倒置顯微鏡下觀察染色效果和細胞形態，并與陰性對照組相比較。與對數生長期的L929細胞共培養，培養Ih后于倒置顯微鏡下觀察染色效果和細胞形態，并于陰性對照組相比較。
【主權項】
1.一種具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑的制備方法，其主要特征為將透明質酸鈉干粉溶解于一定濃度的染色劑溶液中，低溫靜置得到一定濃度的透明質酸鈉溶液，然后通過高溫高壓滅菌制備成具有選擇性前囊染色功能的眼科粘彈劑。2.權利要求1所述的一定濃度的染色劑溶液是指0.002%~0.6% (w/w)的臺盤藍、葉黃素、原花青素等溶液。3.權利要求1所述的一定濃度的透明質酸鈉溶液的濃度為0.1%~10% (w/w)。
【文檔編號】A61L31/04GK105903088SQ201510926178
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2015年12月14日
【發明人】魏長征, 宋瑞瑞, 蔣麗霞
【申請人】上海其勝生物制劑有限公司