一種乳房補片及其制備方法

一種乳房補片及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種乳房補片及其制備方法。制備方法包括步驟：削皮分選、脫脂脫細胞、裁切、輻照滅菌。本發明所提出的乳房補片制備方法，避免使用強酸強堿和酶，可保留豬真皮基質的天然三維膠原支架纖維結構，使乳房補片具有良好的機械性能以起到加強或修復缺損組織的作用，制得的乳房補片邊緣整齊，曲線平滑，達到醫療器械產品基本要求，確保了生物安全性。
【專利說明】
_種乳房補片及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及組織工程學醫用生物材料技術領域，具體地涉及一種乳房補片及其制 備方法。
【背景技術】
[0002] 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。由于治療乳腺癌時，常常為了徹底清除癌 變組織，防止復發，對乳腺、乳房正常組織均有較大的損傷。乳房切除會給病人軀體和心理 均會造成巨大的損害。乳房重建過程中，通常會由于切除了大部分乳房組織而造成乳房軟 組織薄弱，在乳房重建填充乳房假體后，常導致假體移位，脫落，形成包囊攣縮等并發癥。
[0003] 針對這個問題，以前的手術采用自體筋膜瓣或肌肉瓣進行乳房軟組織加強，再植 入乳房假體。美國于2005年左右開始采用同種異體脫細胞真皮基質，2007年左右開始采用 異種脫細胞真皮基質，應用于乳房腫瘤切除后的軟組織加強。目前也有采用脫細胞牛心包、 蠶絲網片、鈦涂層高分子網片作為修補加強材料應用至臨床。但總體而言，還是同種異體脫 細胞真皮基質及脫細胞豬真皮基質應用最為廣泛;然而由于同種異體材料供體有限，脫細 胞豬真皮基質具有取材方便、來源廣泛的巨大優勢。
[0004] 目前有較多的如何制備脫細胞豬真皮基質的專利技術報道，但大部分均有一定缺 陷：
[0005] (1)采用酶及TritonX-100作為脫細胞試劑，試劑殘留較難清洗，對膠原纖維破壞 較大；
[0006] (2)采用苯扎溴銨溶液消毒，NaCl或EDTA高滲溶液及去垢劑Tween、SDS或Triton脫 細胞，最后采用磷酸鹽緩沖液洗滌后環氧乙烷滅菌，該方法采用的消毒液毒性較大，采用的 脫細胞試劑較難清洗，對膠原纖維破壞亦較大；
[0007] (3)采用反復凍融及超聲方法進行細胞脫除，該方法脫細胞效果不佳；
[0008] (4)采用工藝中也使用到過氧乙酸強酸、去垢劑、胰酶等對材料破壞較大的試劑， 材料完整性被破壞。
[0009] 為了解決上述問題，本發明亟需開發一種高效的乳房補片及其制備方法。

【發明內容】

[0010] 本發明的目的是提供一種高效的乳房補片及其制備方法。
[0011] 在本發明中，本發明一方面提供了一種無細胞的乳房補片，所述的乳房補片為經 脫脂和脫細胞處理的豬皮皮片，所述皮片是真皮層皮片，并且所述乳房補片中脂肪含量為 <3wt%，以所述乳房補片的總重量計；
[0012] 并且所述乳房補片的厚度為0.3-3.0mm;
[0013] 并且，所述的乳房補片具有選自下組的一個或多個特征：
[0014] (1)所述乳房補片的縫合強度為彡10N，按《YY 0500-2004心血管植入物人工血管》 中8.8的方法測定；
[0015] (2)所述乳房補片的拉伸強度為彡20MPa，按《GB/T 528-2009硫化橡膠或熱塑性橡 膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0016] (3)所述乳房補片的拉伸伸長率為彡20%，按《GB/T 528-2009硫化橡膠或熱塑性 橡膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0017] (4)所述乳房補片的頂破力為彡35N，按《GB/T 19976-2005紡織品頂破強力的測定 鋼球法》方法測定。
[0018] 優選地，所述的乳房補片同時具有上述（1)、（2)、（3)和(4)中所述的縫合強度、拉 伸強度、拉伸伸長率和頂破力。
[0019] 在另一優選例中，所述乳房補片具有選自下組的一個或多個特征：
[0020] (a)所述乳房補片中脂肪含量為<2wt%，較佳地<lwt%，按所述乳房補片的總重 量計；
[0021] (b)所述乳房補片中細胞殘留數量個/g，較佳地<0.5個/g，按所述乳房補片的 總重量計；
[0022] (c)所述乳房補片中DNA殘留量彡10ng/mg，按所述乳房補片的總重量計；
[0023] (d)所述乳房補片的縫合強度為彡12N，較佳地彡15N，按《YY 0500-2004心血管植 入物人工血管》中8.8的方法測定；
[0024] (e)所述乳房補片的拉伸強度為彡25MPa，更佳地彡27N，按《GB/T 528-2009硫化橡 膠或熱塑性橡膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0025] (f)所述乳房補片的拉伸伸長率為彡25%，更佳地彡28%，按《GB/T 528-2009硫化 橡膠或熱塑性橡膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0026] (g)所述乳房補片的頂破力為彡40N，更佳地彡45N，按《GB/T 19976-2005紡織品頂 破強力的測定鋼球法》方法測定。
[0027]在另一優選例中，所述的乳房補片是未經酶處理，也未經堿(或強堿)處理的。
[0028] 在另一優選例中，所述的乳房補片中無酶殘留和無堿殘留。
[0029] 在另一優選例中，所述乳房補片中無有機溶劑殘留。
[0030] 在另一優選例中，所述的"無有機溶劑殘留"指醇溶劑殘留量彡0.0002wt%，按乳 房補片的總重量計;其他有機試劑殘留量為Owt%。
[0031 ]在另一優選例中，所述乳房補片的厚度偏差<0.5mm，較佳地<0.3mm。
[0032] 在另一優選例中，所述的厚度偏差指單個乳房補片的最大厚度dmax與其最小厚度 cUn的厚度差。
[0033] 在另一優選例中，所述的乳房補片由或基本上由真皮層皮片構成。
[0034] 在另一優選例中，所述乳房補片包括：
[0035] (i)薄型:厚度為0 · 3-1 · 2mm(較佳地0 · 4-1 · 1_);
[0036] (i i)標準型:厚度為1 · 2-2 · 0mm(較佳地 1 · 2-1 · 8mm);
[0037] (i i i)厚型:厚度為2 · 0-3 · 0mm(較佳地2 · 0-2 · 8mm)。
[0038] 在另一優選例中，所述乳房補片的形狀選自下組：圓形、矩形、多邊形、卵圓形。 [0039]在另一優選例中，所述乳房補片的表面積為24-600cm 2。
[0040]在另一優選例中，所述乳房補片中蛋白的含量為：
[0041 ] I型膠原蛋白含量為570-610yg/mg，較佳地590-600yg/mg;
[0042] ΙΠ 型膠原蛋白含量為90-120yg/mg，較佳地90-105yg/mg;
[0043] 彈性蛋白含量為70-90yg/mg，較佳地80-90yg/mg。
[0044] 在另一優選例中，所述乳房補片的降解速率與新鮮豬皮相近。
[0045] 在另一優選例中，所述乳房補片無或基本上無細胞毒性。
[0046] 在另一優選例中，所述乳房補片基本上無免疫原性。
[0047] 在本發明的第二方面，提供了一種乳房補片的制備方法，包括步驟：
[0048] (a)提供一真皮層皮片，所述真皮層皮片來源于豬皮；
[0049] (b)對上一步驟獲得的所述的真皮層皮片進行脫脂處理，從而獲得經脫脂的真皮 層皮片；
[0050] (c)對上一步驟獲得的所述的真皮層皮片進行脫細胞處理，從而獲得經脫細胞的 真皮層皮片；
[0051] (d)將上一步驟獲得的真皮層皮片進行后處理，其中所述的后處理包括:用裁切裝 置進行裁切和/或滅菌，從而獲得所述的乳房補片；
[0052] 其中，步驟(b)和(c)的次序可以互換。
[0053]優選地，在步驟(b)中，所述的脫脂處理包括：用醇溶劑浸泡所述真皮層皮片一段 時間tb，然后進行水洗，從而獲得所述經脫脂的真皮層皮片。
[0054] 在另一優選例中，所述的時間tb為17-37小時，較佳地20-37小時，更佳地20-30小 時。
[0055]在另一優選例中，所述的醇溶劑包括:C3-C4烷基醇，較佳地選自下組:正丙醇、異 丙醇、或其組合。
[0056] 在另一優選例中，在步驟(b)中，處理溫度為4-50°C，較佳地10_35°C，更佳地15-30 Γ。
[0057]在另一優選例中，在步驟(b)中，所述的水洗次數為1-5次，較佳地2-3次。
[0058]在另一優選例中，在步驟(c)中，所述的脫細胞包括:在靜水壓力60_180MPa的條件 下，對所述真皮層皮片進行一段時間t。處理，然后進行水洗，從而獲得所述經脫細胞的真皮 層皮片。
[0059] 在另一優選例中，所述的靜水壓力為80_180MPa，更佳地為100_150MPa。
[0060] 在另一優選例中，所述的時間tc為5-30分鐘，較佳地10-30分鐘，更佳地20-30分 鐘。
[0061 ] 在另一優選例中，在步驟(C)中，處理溫度為4-50°C，較佳地10-35°c，更佳地15-30 Γ。
[0062] 在另一優選例中，在步驟(c)中，所述的水洗次數為3-15次，較佳地5-10次。
[0063] 在另一優選例中，先進行步驟(b)，再進行步驟(c)。
[0064] 在另一優選例中，先進行步驟(c)，再進行步驟(b)。
[0065] 在另一優選例中，在步驟(b)和（c)之間，或步驟(c)和(b)之間，還包括以下步驟： (m)對所述真皮層皮片進行消毒。
[0066]在另一優選例中，在步驟(m)中，所述的消毒包括：用乙醇浸泡所述真皮層皮片一 段時間U，然后進行水洗，從而獲得所述經消毒的真皮層皮片。
[0067] 在另一優選例中，在步驟(m)中，所述乙醇為65-85% (v/v)的乙醇水溶液。
[0068] 在另一優選例中，所述的時間U為10-120分鐘，較佳地20-80分鐘，更佳地30-60分 鐘。
[0069] 在另一優選例中，在步驟(m)中，所述的水洗次數為1-5次，較佳地2-3次。
[0070] 在另一優選例中，在步驟(d)中，還包括以下步驟：（η)對所述真皮層皮片進行消 毒。
[0071] 在另一優選例中，在步驟(η)中，所述的消毒包括：用乙醇浸泡所述真皮層皮片一 段時間tn，然后進行水洗，從而獲得所述經消毒的真皮層皮片。
[0072] 在另一優選例中，在步驟(η)中，所述乙醇為65-85% (v/v)的乙醇水溶液。
[0073] 在另一優選例中，所述的時間tn為10-120分鐘，較佳地20-80分鐘，更佳地30-60分 鐘。
[0074] 在另一優選例中，在步驟(η)中，所述的水洗次數為1-5次，較佳地2-3次。
[0075] 在另一優選例中，在步驟(d)中，所述步驟(η)位于裁切和/或滅菌之前。
[0076] 在另一優選例中，所述步驟(d)包括子步驟：
[0077] (dl)將上一步驟獲得的真皮層皮片進行裁切，從而獲得經裁切的真皮層皮片；
[0078] (d2)將上一步驟獲得的真皮層皮片進行輻照滅菌，從而獲得經輻照滅菌的真皮層 皮片。
[0079] 在另一優選例中，所述步驟(d)包括子步驟：
[0080] (dl'）將上一步驟獲得的真皮層皮片進行輻照滅菌，從而獲得經輻照滅菌的真皮 層皮片；
[0081] (d2'）將上一步驟獲得的真皮層皮片進行裁切，從而獲得經裁切的真皮層皮片。
[0082] 在另一優選例中，所述步驟(a)包括子步驟：
[0083] (al)提供一去毛去皮下組織的豬皮；
[0084] (a2)用厚度測定系統對步驟(al)中的豬皮進行厚度測定；
[0085] (a3)根據步驟(a2)測得的數據確定皮片厚度均勻的區域；
[0086] (a4)按步驟(a3)確定的區域，對所述豬皮進行分割，從而獲得經分割的皮片；
[0087] (a5)對所述經分割的皮片進行削切處理，從而獲得去除表皮并去除基底膜的、經 削切的真皮層皮片。
[0088] 在另一優選例中，所述的步驟(a5)中經削切的真皮層皮片的厚度偏差<0.5mm，較 佳地 <0.3mm。
[0089] 在另一優選例中，在步驟(a5)中，用大型取皮刀或電動取皮刀進行削切處理。
[0090] 在本發明的第三方面，提供了本發明第一方面所述的乳房補片的用途，用于進行 乳房軟組織修補。
[0091] 應理解，在本發明范圍內中，本發明的上述各技術特征和在下文(如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0092] 圖1為本發明的厚度測定系統示意圖。
[0093] 圖2是本發明的生物補片裁切裝置示意圖。
[0094] 圖3是實施例1制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質主要成分定量檢測對比結 果圖。
[0095] 圖4是實施例1制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質HE檢測對比結果圖。
[0096] 圖5是實施例1、實施例2制備得到的乳房補片與同類產品及新鮮豬真皮基質縫合 強度、拉伸強度、拉伸伸長率、頂破力等檢測對比結果圖。
[0097] 圖6是實施例3制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質體外降解性能檢測對比結 果圖。
[0098] 圖7是實施例2制備得到的乳房補片體外細胞毒性檢測結果圖。
[0099] 圖8是實施例2制備得到的乳房補片體外淋巴細胞增殖檢測結果圖。
[0100] 圖9是實施例4制備得到的乳房補片用于犬乳房軟組織修復結果圖。
[0101] 圖1〇是實施例5制備得到的乳房補片的外觀圖。
【具體實施方式】
[0102] 本發明人經過廣泛而深入的研究，首次開發了一種乳房補片及其制備方法。所述 方法包括步驟：削皮分選、脫脂脫細胞、裁切、輻照滅菌。本發明所提出的乳房補片制備方 法，避免使用強酸強堿和酶，可保留豬真皮基質的天然三維膠原支架纖維結構，使乳房補片 具有良好的機械性能以起到加強或修復缺損組織的作用，制得的乳房補片能完整保留豬真 皮基質的天然結構，具有良好的組織相容性，無任何病毒傳播隱患。
[0103] 術語
[0104] 如本文所用，術語"生物補片裁切裝置"、"裁切裝置"均指同一裝置。
[0105] 乳房補片
[0106] 在一實施方式中，提供了一種無細胞的乳房補片，所述的乳房補片為經脫脂和脫 細胞處理的豬皮皮片，所述皮片是真皮層皮片，并且所述乳房補片中脂肪含量為<3wt%， 以所述乳房補片的總重量計。
[0107] 并且所述乳房補片的厚度為0.3-3.0mm。
[0108] 并且，所述的乳房補片具有選自下組的一個或多個特征：
[0109] (1)所述乳房補片的縫合強度為彡10N，按《YY 0500-2004心血管植入物人工血管》 中8.8的方法測定；
[0110] (2)所述乳房補片的拉伸強度為彡20MPa，按《GB/T 528-2009硫化橡膠或熱塑性橡 膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0111] (3)所述乳房補片的拉伸伸長率為彡20%，按《GB/T 528-2009硫化橡膠或熱塑性 橡膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0112] (4)所述乳房補片的頂破力為彡35N，按《GB/T 19976-2005紡織品頂破強力的測定 鋼球法》方法測定。
[0113] 優選地，所述的乳房補片同時具有上述（1)、（2)、（3)和(4)中所述的縫合強度、拉 伸強度、拉伸伸長率和頂破力。
[0114] 在另一優選例中，所述乳房補片具有選自下組的一個或多個特征：
[0115] (a)所述乳房補片中脂肪含量為<2wt%，較佳地按所述乳房補片的總重 量計；
[0116] (b)所述乳房補片中細胞殘留數量個/g，較佳地<0.5個/g，按所述乳房補片的 總重量計；
[0117] (c)所述乳房補片中DNA殘留量彡10ng/mg，按所述乳房補片的總重量計；
[0118] (d)所述乳房補片的縫合強度為彡12N，較佳地彡15N，按《YY 0500-2004心血管植 入物人工血管》中8.8的方法測定；
[0119] (e)所述乳房補片的拉伸強度為彡25MPa，更佳地彡27N，按《GB/T 528-2009硫化橡 膠或熱塑性橡膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0120] (f)所述乳房補片的拉伸伸長率為彡25%，更佳地彡28%，按《GB/T 528-2009硫化 橡膠或熱塑性橡膠拉伸應力應變性能的測定》方法測定；
[0121] (g)所述乳房補片的頂破力為彡40N，更佳地彡45N，按《GB/T 19976-2005紡織品頂 破強力的測定鋼球法》方法測定。
[0122]在另一優選例中，所述的乳房補片是未經酶處理，也未經堿(或強堿)處理的。
[0123] 在另一優選例中，所述的乳房補片中無酶殘留和無堿殘留。
[0124] 在另一優選例中，所述乳房補片中無有機溶劑殘留。
[0125] 在另一優選例中，所述的"無有機溶劑殘留"指醇溶劑殘留量<0.0002wt%，按乳 房補片的總重量計;其他有機試劑殘留量為〇wt%。
[0126] 在另一優選例中，所述乳房補片的厚度偏差<0.5mm，較佳地<0.3mm。
[0127] 在另一優選例中，所述的厚度偏差指單個乳房補片的最大厚度dmax與其最小厚度 cUn的厚度差。
[0128] 在另一優選例中，所述的乳房補片由或基本上由真皮層皮片構成。
[0129] 在另一優選例中，所述乳房補片包括：
[0130] (i)薄型:厚度為0· 3-1 · 2mm(較佳地0.4-1 · 1mm);
[0131] (i i)標準型:厚度為1.2-2.0mm(較佳地 1.2-1.8mm);
[0132] (iii)厚型:厚度為2 · 0-3 · 0_(較佳地2 · 0-2 · 8mm)。
[0133] 在另一優選例中，所述乳房補片的形狀選自下組：圓形、矩形、多邊形、卵圓形。
[0134] 在另一優選例中，所述乳房補片的表面積為24-600cm2。
[0135] 在另一優選例中，所述乳房補片中蛋白的含量為：
[0136] I型膠原蛋白含量為570-610yg/mg，較佳地590-600yg/mg;
[0137] ΙΠ 型膠原蛋白含量為90-120yg/mg，較佳地90-105yg/mg;
[0138] 彈性蛋白含量為70-90yg/mg，較佳地80-90yg/mg。
[0139] 在另一優選例中，所述乳房補片的降解速率與新鮮豬皮相近。
[0140]在另一優選例中，所述乳房補片無或基本上無細胞毒性。
[0141 ]在另一優選例中，所述乳房補片基本上無免疫原性。
[0142] 制備方法
[0143] 在一實施方式中，提供了一種乳房補片的制備方法，包括步驟：
[0144] (a)提供一真皮層皮片；
[0145] (b)對上一步驟獲得的所述的真皮層皮片進行脫脂處理，從而獲得經脫脂的真皮 層皮片；
[0146] (c)對上一步驟獲得的所述的真皮層皮片進行脫細胞處理，從而獲得經脫細胞的 真皮層皮片；
[0147] (d)將上一步驟獲得的真皮層皮片進行后處理，其中所述的后處理包括:用裁切裝 置進行裁切和/或滅菌，從而獲得所述的乳房補片；
[0148] 其中，步驟(b)和(c)的次序可以互換。
[0149] 優選地，在步驟(b)中，所述的脫脂處理包括：用醇溶劑浸泡所述真皮層皮片一段 時間tb，然后進行水洗，從而獲得所述經脫脂的真皮層皮片。
[0150] 在另一優選例中，所述的時間tb為17-37小時，較佳地20-37小時，更佳地20-30小 時。
[0151 ]在另一優選例中，所述的醇溶劑包括:C3-C4烷基醇，較佳地選自下組:正丙醇、異 丙醇、或其組合。
[0152] 在另一優選例中，在步驟(b)中，處理溫度為4-50°C，較佳地10_35°C，更佳地15-30 Γ。
[0153] 在另一優選例中，在步驟(b)中，所述的水洗次數為1-5次，較佳地2-3次。
[0154] 在另一優選例中，在步驟(c)中，所述的脫細胞包括:在靜水壓力60_180MPa的條件 下，對所述真皮層皮片進行一段時間t。處理，然后進行水洗，從而獲得所述經脫細胞的真皮 層皮片。
[0155] 在另一優選例中，所述的靜水壓力為80_180MPa，更佳地為100_150MPa。
[0156] 在另一優選例中，所述的時間tc為5-30分鐘，較佳地10-30分鐘，更佳地20-30分 鐘。
[0157] 在另一優選例中，在步驟(c)中，處理溫度為4_50°C，較佳地10_35°C，更佳地15-30 Γ。
[0158] 在另一優選例中，在步驟(c)中，所述的水洗次數為3-15次，較佳地5-10次。
[0159] 在另一優選例中，先進行步驟(b)，再進行步驟(c)。
[0160] 在另一優選例中，先進行步驟(c)，再進行步驟(b)。
[0161] 在另一優選例中，在步驟(b)和（c)之間，或步驟(c)和(b)之間，還包括以下步驟： (m)對所述真皮層皮片進行消毒。
[0162] 在另一優選例中，在步驟(m)中，所述的消毒包括：用乙醇浸泡所述真皮層皮片一 段時間U，然后進行水洗，從而獲得所述經消毒的真皮層皮片。
[0163] 在另一優選例中，在步驟(m)中，所述乙醇為65-85% (v/v)的乙醇水溶液。
[0164] 在另一優選例中，所述的時間U為10-120分鐘，較佳地20-80分鐘，更佳地30-60分 鐘。
[0165] 在另一優選例中，在步驟(m)中，所述的水洗次數為1-5次，較佳地2-3次。
[0166] 在另一優選例中，在步驟(d)中，還包括以下步驟：（η)對所述真皮層皮片進行消 毒。
[0167] 在另一優選例中，在步驟(η)中，所述的消毒包括：用乙醇浸泡所述真皮層皮片一 段時間tn，然后進行水洗，從而獲得所述經消毒的真皮層皮片。
[0168] 在另一優選例中，在步驟(η)中，所述乙醇為65-85 % (v/v)的乙醇水溶液。
[0169] 在另一優選例中，所述的時間tn為10-120分鐘，較佳地20-80分鐘，更佳地30-60分 鐘。
[0170] 在另一優選例中，在步驟(η)中，所述的水洗次數為1-5次，較佳地2-3次。
[0171] 在另一優選例中，在步驟(d)中，所述步驟(η)位于裁切和/或滅菌之前。
[0172] 在另一優選例中，所述步驟(d)包括子步驟：
[0173] (dl)將上一步驟獲得的真皮層皮片進行裁切，從而獲得經裁切的真皮層皮片；
[0174] (d2)將上一步驟獲得的真皮層皮片進行輻照滅菌，從而獲得經輻照滅菌的真皮層 皮片。
[0175] 在另一優選例中，所述步驟(d)包括子步驟：
[0176] (dl'）將上一步驟獲得的真皮層皮片進行輻照滅菌，從而獲得經輻照滅菌的真皮 層皮片；
[0177] (d2'）將上一步驟獲得的真皮層皮片進行裁切，從而獲得經裁切的真皮層皮片。
[0178] 在另一優選例中，所述步驟(a)包括子步驟：
[0179] (al)提供一去毛去皮下組織的豬皮；
[0180] (a2)用厚度測定系統對步驟(al)中的豬皮進行厚度測定；
[0181] (a3)根據步驟(a2)測得的數據確定皮片厚度均勻的區域；
[0182] (a4)按步驟(a3)確定的區域，對所述豬皮進行分割，從而獲得經分割的皮片；
[0183] (a5)對所述經分割的皮片進行削切處理，從而獲得去除表皮并去除基底膜的、經 削切的真皮層皮片。
[0184] 在另一優選例中，所述的步驟(a5)中經削切的真皮層皮片的厚度偏差<0.5mm，較 佳地 <0.3mm。
[0185] 在另一優選例中，在步驟(a5)中，用大型取皮刀或電動取皮刀進行削切處理。
[0186] 厚度測定系統
[0187] 圖1顯示了本發明的生物膜厚度測定系統的示意圖。
[0188] 如圖所示，該系統由厚度測定裝置6和與其連接數據處理設備4組成。厚度測定裝 置6由傳感器基座1，接觸式傳感器2，物料基座3，機械立柱5及位移測定裝置組成（圖中未畫 出）。傳感器基座1位于物料基座3上方。機械立柱5與傳感器基座1之間設有第一固定架7,機 械立柱5與物料基座3之間設有第二固定架8。機械立柱5上設有傳動裝置9,用于通過第一固 定架7控制傳感器基座1以5~200mm/min的速度勻速下移。傳感器基座1上設有接觸式傳感 器2,接觸式傳感器2為可伸縮接觸式探頭2,用于探測感應待測厚度的物料。可伸縮接觸式 探頭2與傳感器基座1的連接處設有接觸式銅片。傳感器基座1與物料基座3尺寸，長度為50 ~300cm，寬為50~250cm，物料基座3尺寸不小于傳感器基座1尺寸。接觸式傳感器2為多個 突出傳感器基座平面10~30mm的直徑為1~5_的可伸縮接觸式探頭，接觸到物料表面的可 伸縮接觸式探頭2發生微小位移，使可伸縮接觸式探頭2與所述傳感器基座1的連接處設有 的接觸式銅片分離，該分離信號傳導至數據處理設備4。探頭相互之間間距為10~100mm，在 同一傳感器基座上的所有探頭高度相同。機械立柱5裝有傳感器基座1與物料基座3位移測 定裝置，當兩者緊密貼合時數據記錄為〇_，并可將數據實時反饋至數據處理設備4。數據處 理設備4具有配套軟件，能夠控制機械立柱5帶動傳感器基座1下移的速率，可實時收集所有 傳感器探頭2接觸物料表面瞬間的傳感器基座1與物料基座3之間的距離數據，并能夠采用 該配套軟件繪制物料厚度分布數據圖。使用本厚度測定系統時，先將待測物料平鋪于物料 基座3，確保物料與物料基座3之間無氣泡，無褶皺產生;操作數據處理設備4的軟件，控制傳 感器基座1以一定速度勻速下移，直至所有傳感器探頭2觸及物料表面，終止傳感器基座1下 移，并采用數據處理設備4的配套軟件分析處理所采集的數據，繪制物料厚度分布數據圖。 最后按物料實際尺寸比例打印厚度分布數據圖，將圖與實物對照完成原料分割。
[0189] 裁切裝置
[0190] 圖2顯示了本發明的生物補片裁切裝置的形狀及結構。
[0191] 如圖所示，該裝置由裁切底座(b)及裁刀（a)組成，裁刀為矩形柱狀裁刀柱體1(長 度為10~30cm)，柱體一端接近邊緣處具有開孔2(直徑5~10mm)，柱體另一端具有矩形刀刃 3(長為8~28cm，寬為4~16cm)，裁切底座6(邊長為20~40cm，厚度為5~15mm)上設有與裁 刀1形狀匹配的凹槽5(深1~3mm)，裁切底座6四角設有物料固定小柱4(直徑為1~5mm，高度 為5~10mm)。裁切底座及固定物料小柱材質為滿足醫療器械生產質量管理規范相關要求的 材料，如316不銹鋼，醫用級PE，醫用級PMMA等；裁刀材質為不銹鋼。使用本生物補片裁切裝 置時，將裁刀柱體1通過其上一端開孔2固定于常規臺式沖床，將裁切底座6置于裁刀3之下， 向下緩慢降低裁刀柱體1，確定并固定裁切底座6與裁刀3相對位置，確保裁刀3沖壓時可與 底座矩形凹槽5吻合;將物料通過固定小柱4固定，固定方法可為將物料直接打孔穿于小柱 之上，也可為采用縫線穿過物料再將縫線綁于固定小柱之上;再向下快速沖壓裁刀柱體1， 即可裁切得到所需生物補片。
[0192] 本發明的主要優點包括：
[0193] (1)采用本發明制備方法得到的乳房補片，整體工藝未使用酶、表面活性劑、強酸 強堿等對材料破壞較大試劑，可有效保留較完整的真皮基質膠原纖維結構及彈性蛋白成 分，對本發明制備的乳房補片進行上述結構及成分的檢測，結果表明本發明制備的乳房補 片產品與新鮮豬真皮的膠原纖維結構及彈性蛋白成分含量相差較小，說明本發明制備方法 可實現豬真皮基質的天然結構及功能蛋白成分的保留。
[0194] (2)采用本發明設計的裁切裝置，可在較短時間內完成皮片的裁切（1~2分鐘每 片），并且裁切得到的葉片形補片邊緣整齊，曲線平滑。
[0195] (3)本發明在保留豬真皮基質天然纖維結構同時，還能保證最終制備得到的乳房 補片的無菌水平及病毒滅活效果，保證了乳房補片達到醫療器械產品基本要求，確保了生 物安全性。本發明輻照滅菌及乙醇消毒工藝，經病毒滅活工藝驗證，可完全保證各類病毒滅 活，保證臨床使用的安全性。
[0196] (4)采用本發明技術制備的乳房補片，可提供良好的機械支持加固作用，同時也避 免了材料過早降解達不到治療目的。
[0197] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條 件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數是重量百分比和重量 份數。
[0198] 需要說明的是，在本專利的權利要求和說明書中，諸如第一和第二等之類的關系 術語僅僅用來將一個實體或者操作與另一個實體或操作區分開來，而不一定要求或者暗示 這些實體或操作之間存在任何這種實際的關系或者順序。而且，術語"包括"、"包含"或者其 任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者 設備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、 方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句"包括一個"限定的要 素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。
[0199] 實施例1
[0200] 步驟一、削皮分選
[0201] 提供一去毛去皮下組織的豬皮，用圖1所示的厚度測定系統對其進行厚度測定，根 據測定數據確定皮片厚度均勻的區域（以〇. 5mm為步進，將皮片厚度劃分為0.8~1.3mm，1.3 ~1.8mm，1.8~2.3mm，2.3~2.8mm，2.8mm以上等可使用區域），按區域分割皮片，再采用大 型取皮刀削切去表皮及基底膜，得到區域厚度均勻的真皮層皮片。
[0202] 步驟二、先脫脂后脫細胞處理
[0203] 將步驟一制得的真皮層皮片按照下表進行工藝參數選擇，按下表順序依次完成各 步驟處理，處理溫度為20 °C:
[0204]
[0205] 步驟三、裁切
[0206] 將步驟二制備得到的脫脂脫細胞的豬真皮基質，采用圖2所示的生物補片裁切裝 置進行裁切。
[0207] 步驟四、輻照滅菌
[0208] 將步驟三制備得到的裁切成型的脫脂脫細胞豬真皮膜片內包，并在2°C下進行伽 馬射線或電子束輻照滅菌，輻照劑量為15kGy，從而獲得乳房補片。
[0209] 本實施例制備得到的乳房補片由真皮層皮片構成，未經酶處理也未經堿處理，所 述的乳房補片中無酶殘留和無堿殘留，且所述乳房補片中無有機溶劑殘留。
[0210] 所述的乳房補片的厚度為1.1mm，所述乳房補片的表面積為100cm2,所述乳房補片 中蛋白的含量為：I型膠原蛋白含量為eOOyg/mg; ΙΠ 型膠原蛋白含量為100yg/mg;彈性蛋白 為90yg/mg。按所述乳房補片的總重量計，所述乳房補片中脂肪含量為lwt%，所述乳房補片 中細胞殘留數量為1個/g，所述乳房補片中DNA殘留量為10ng/mg，且所述乳房補片中無有機 溶劑殘留。
[0211] 本實施例制備得到的乳房補片的縫合強度為15.2N，拉伸強度為25.2MPa，拉伸伸 長率為35%，頂破力為45N。
[0212]如圖3所示，圖3是本實施例制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質主要成分定量 檢測對比結果圖。圖中FP代表新鮮豬皮，BP代表乳房補片，C0LI為I型膠原，COLm為m型膠 原，Elastin為彈性蛋白。圖片顯示:乳房補片的膠原成分與天然豬真皮基質無明顯差異。 [0 213]如圖4所示，圖4是本實施例制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質HE檢測對比結 果圖。圖中1為帶有真皮及表皮組織的新鮮豬皮，2為僅有真皮組織的乳房補片。圖片顯示： 乳房補片保留了與新鮮豬真皮相近的膠原纖維結構，整體結構完整，膠原纖維束方向有序 可見，無異種細胞殘留。
[0214]本實施例制備得到的乳房補片無細胞毒性且無免疫原性，可有效保留較完整的真 皮基質膠原三維支架纖維結構，避免真皮基質結構受到酶、強酸堿、表面活性劑等試劑的較 大破壞，確保乳房補片的結構完整性。
[0215] 實施例2
[0216] 步驟一、削皮分選
[0217] 提供一去毛去皮下組織的豬皮，用圖1所示的厚度測定系統對其進行厚度測定，根 據測定數據確定皮片厚度均勻的區域(以1mm為步進，將皮片厚度劃分為0.8~1.8mm，l.8~ 2.8mm，2.8mm以上等區域），按區域分割皮片，再采用電動取皮刀削切去表皮及基底膜，得到 區域厚度均勻的真皮層皮片。
[0218] 步驟二、先脫細胞后脫脂處理
[0219] 將步驟一制得的真皮層皮片按照下表進行工藝參數選擇，按下表順序依次完成各 步驟處理，處理溫度為30°C:
[0220]
[0221] 步驟三、裁切
[0222] 將步驟三制備得到的脫細胞脫脂的豬真皮基質，采用圖2所示的生物補片裁切裝 置進行裁切。
[0223] 步驟四、輻照滅菌
[0224]將步驟四制備得到的裁切成型的脫細胞脫脂豬真皮膜片內包，并在8°C下進行伽 馬射線或電子束輻照滅菌，輻照劑量為30kGy，從而獲得乳房補片。
[0225] 本實施例制備得到的乳房補片的厚度為1.8mm，所述乳房補片的表面積為150cm2， 所述乳房補片中膠原蛋白的含量為：1型膠原蛋白含量為601yg/mg;m型膠原蛋白含量為 104yg/mg，彈性蛋白含量為89yg/mg。
[0226] 本實施例制備得到的乳房補片的縫合強度為14.3N，拉伸強度為21.2MPa，拉伸伸 長率為38%，頂破力為46N。
[0227] 如圖5所示，圖5是實施例1和本實施例制備得到的乳房補片與同類產品及新鮮豬 真皮基質縫合強度、拉伸強度、拉伸伸長率、頂破力等檢測對比結果圖。圖中樣品編號1，2為 實施例1和本實施例制備的乳房補片，3為同類產品，4為新鮮豬真皮基質。圖片顯示:實施例 1和本實施例制備的乳房補片與同類產品及新鮮豬真皮基質機械性能無顯著差異，顯示本 實施例制備的乳房補片具有良好的臨床應用前景。
[0228] 如圖7所示，圖7是本實施例制備得到的乳房補片體外細胞毒性檢測結果圖。圖中 BP代表本實施例制備的乳房補片，CK代表空白對照組，TO代表高密度聚乙烯陰性對照組， DMS0代表二乙烯基砜陽性對照組，縱坐標百分率表示L929細胞的體外培養增殖率。圖片顯 示：乳房補片、空白組及陰性組的細胞增殖率無顯著差異，而陽性組細胞增殖率低于20%， 表明本實施例制備的乳房補片具有良好的細胞相容性。
[0229] 如圖8所示，圖8是本實施例制備得到的乳房補片體外淋巴細胞增殖檢測結果圖。 圖中BP代表本實施例制備的乳房補片，CK代表空白對照組，CP代表同類產品，縱坐標百分率 表示人淋巴細胞體外培養增殖率。圖片顯示:乳房補片以及同類產品與空白對照組相比，均 未引起人淋巴細胞體外異常增殖或凋亡，表明本實施例制備的乳房補片具有良好的免疫原 性。
[0230] 本實施例制備得到的乳房補片具有良好的生物相容性，體外細胞毒性及體外淋巴 細胞增殖實驗檢測結果顯示，乳房補片無體外細胞毒性，無刺激或抑制淋巴細胞的免疫原 性，用于乳房軟組織修補的加強具有良好的安全性保證。
[0231] 實施例3
[0232]步驟一、削皮分選
[0233] 提供一去毛去皮下組織的豬皮，用圖1所示的厚度測定系統對其進行厚度測定，根 據測定數據確定皮片厚度均勻的區域（以〇. 5mm為步進，將皮片厚度劃分為0.8~1.3mm，1.3 ~1.8mm，1.8~2.3mm，2.3~2.8mm，2.8mm以上等可使用區域），按區域分割皮片，再采用大 型取皮刀削切去表皮及基底膜，得到區域厚度均勻的真皮層皮片。
[0234] 步驟二、先脫脂后脫細胞處理
[0235] 將步驟一制得的真皮層皮片按照下表進行工藝參數選擇，按下表順序依次完成各 步驟處理，處理溫度為20 °C:
[0236]
[0237] 步驟三、輻照滅菌
[0238] 將步驟二制備得到的脫脂脫細胞的豬真皮基質內包，并在2°C下進行伽馬射線或 電子束輻照滅菌，輻照劑量為15kGy。
[0239] 步驟四、裁切
[0240] 將步驟三制備得到的脫脂脫細胞的豬真皮基質，采用圖2所示的生物補片裁切裝 置進行裁切，從而獲得乳房補片。
[0241] 本實施例制備得到的乳房補片的厚度為2.8mm，所述乳房補片的表面積為250cm2。
[0242] 如圖6所示，圖6是本實施例制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質體外降解性能 檢測對比結果圖。圖中Hyp為體外降解產物羥脯氨酸，time為降解時間，FP代表新鮮豬皮，BP 代表乳房補片。圖片顯示:本實施例制備得到的乳房補片與新鮮豬真皮基質體外降解性能 無明顯差異，乳房補片的降解速率與新鮮豬皮相近。
[0243] 實施例4
[0244] 步驟一、削皮分選
[0245] 提供一去毛去皮下組織的豬皮，用圖1所示的厚度測定系統對其進行厚度測定，根 據測定數據確定皮片厚度均勻的區域（以0.4mm為步進，將皮片厚度劃分為0.8~1.2mm，l.2 ~1.6mm，1.6~2.0mm，2.0~2.4mm，2.4~2.8mm，2.8mm~3.2mm等可使用區域），按區域分割 皮片，再采用電動取皮刀削切去表皮及基底膜，得到區域厚度均勻的真皮層皮片。
[0246] 步驟二、先脫細胞后脫脂處理
[0247] 將步驟一制得的真皮層皮片按照下表進行工藝參數選擇，按下表順序依次完成各 步驟處理，處理溫度為15°C:
[0248]
[0250] 步驟三、裁切
[0251] 將步驟二制備得到的脫細胞脫脂的豬真皮基質，采用圖2所示的生物補片裁切裝 置進行裁切。
[0252] 步驟四、輻照滅菌
[0253] 將步驟三制備得到的裁切成型的脫細胞脫脂豬真皮膜片內包，并在4°C下進行伽 馬射線或電子束輻照滅菌，輻照劑量為22kGy，從而獲得乳房補片。
[0254] 本實施例制備得到的乳房補片的厚度為2.5mm，所述乳房補片的表面積為80cm2。
[0255] 如圖9所示，圖9是本實施例制備得到的乳房補片用于犬乳房軟組織修復結果圖。 圖中犬編號表示實驗動物的編號，"1周"、"4周"、"8周"、"16周"、"26周"代表動物觀察周期。 圖片顯示:在犬動物實驗26周的觀察期間，乳房補片加強薄弱破裂組織效果顯著，無感染、 炎癥、假體移位或露出等并發癥發生，保證了優異的動物實驗有效性結果。
[0256] 實施例5
[0257] 步驟一、削皮分選
[0258] 提供一去毛去皮下組織的豬皮，用圖1所示的厚度測定系統對其進行厚度測定，根 據測定數據確定皮片厚度均勻的區域（以〇. 5mm為步進，將皮片厚度劃分為0.8~1.3mm，1.3 ~1.8mm，1.8~2.3mm，2.3~2.8mm，2.8mm以上等可使用區域），按區域分割皮片，再采用大 型取皮刀削切去表皮及基底膜，得到區域厚度均勻的真皮層皮片。
[0259] 步驟二、先脫脂后脫細胞處理
[0260] 將步驟一制得的真皮層皮片按照下表進行工藝參數選擇，按下表順序依次完成各 步驟處理，處理溫度為20 °C:
[0261]
[0262] 步驟三、裁切
[0263] 將步驟二制備得到的脫脂脫細胞的豬真皮基質，采用圖2所示的生物補片裁切裝 置進行裁切。
[0264] 步驟四、輻照滅菌
[0265] 將步驟三制備得到的裁切成型的脫脂脫細胞豬真皮膜片內包，并在4°C下進行伽 馬射線或電子束輻照滅菌，輻照劑量為25kGy，從而獲得乳房補片。
[0266] 本實施例制備得到的乳房補片的厚度為1.0mm，所述乳房補片的表面積為300cm2。
[0267] 本實施例制備得到的乳房補片如圖10所示，工藝中采用厚度測定系統及專用裁切 裝置，較好保證了制備得到的乳房補片厚度均勻程度及補片規整的外觀，確保了臨床應用 時的穩定性。
[0268] 實施例6
[0269] 本實施例利用實施例5制備得到的乳房補片，進行乳房軟組織修補。
[0270] 對比例
[0271] 中國專利CN 1330316采用500~1500MPa的超高靜水壓力處理各類軟組織，中國專 利申請CN 102470149采用至少200MPa的超高靜水壓力處理軟組織，中國專利申請CN 101185770采用600~lOOOMPa的超高靜水壓力處理豬血管，經本發明人驗證，上述超高靜水 壓力值均不適合處理豬真皮基質，經上述壓力參數處理后的豬真皮基質，相比處理前的體 外降解速率要顯著增快，植入后降解速率與機體組織再生速率不匹配，制備得到的真皮基 質降解過快而無法作為植入材料應用于乳房軟組織修補。
[0272]在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨 引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可 以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范 圍。
【主權項】
1. 一種無細胞的乳房補片，其特征在于，所述的乳房補片為經脫脂和脫細胞處理的豬 皮皮片，所述皮片是真皮層皮片，并且所述乳房補片中脂肪含量為<3wt%，以所述乳房補 片的總重量計； 并且所述乳房補片的厚度為0.3-3. Omm; 并且，所述的乳房補片具有選自下組的一個或多個特征： (1) 所述乳房補片的縫合強度為彡10N，按《YY 0500-2004心血管植入物人工血管》中 8.8的方法測定； (2) 所述乳房補片的拉伸強度為彡20MPa，按《GB/T 528-2009硫化橡膠或熱塑性橡膠拉 伸應力應變性能的測定》方法測定； (3) 所述乳房補片的拉伸伸長率為彡20%，按《GB/T 528-2009硫化橡膠或熱塑性橡膠 拉伸應力應變性能的測定》方法測定； (4) 所述乳房補片的頂破力為彡35N，按《GB/T 19976-2005紡織品頂破強力的測定鋼球 法》方法測定。2. 根據權利要求1所述的乳房補片，其特征在于，所述乳房補片的厚度偏差<0.5mm; 和/或所述乳房補片的表面積為24-600cm 2。3. 根據權利要求1所述的乳房補片，其特征在于，所述乳房補片中蛋白的含量為： I型膠原蛋白含量為570-610yg/mg; ΙΠ 型膠原蛋白含量為90-120yg/mg; 彈性蛋白含量為70-90yg/mg。4. 一種權利要求1所述的乳房補片的制備方法，其特征在于，包括步驟： (a) 提供一真皮層皮片，所述真皮層皮片來源于豬皮； (b) 對上一步驟獲得的所述的真皮層皮片進行脫脂處理，從而獲得經脫脂的真皮層皮 片； (c) 對上一步驟獲得的所述的真皮層皮片進行脫細胞處理，從而獲得經脫細胞的真皮 層皮片； (d) 將上一步驟獲得的真皮層皮片進行后處理，其中所述的后處理包括：用裁切裝置進 行裁切和/或滅菌，從而獲得所述的乳房補片； 其中，步驟(b)和(c)的次序可以互換。5. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(b)中，所述的脫脂處理包括： 用醇溶劑浸泡所述真皮層皮片一段時間t b，然后進行水洗，從而獲得所述經脫脂的真皮層 皮片。6. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(c)中，所述的脫細胞包括:在 靜水壓力60-180MPa的條件下，對所述真皮層皮片進行一段時間處理，然后進行水洗，從 而獲得所述經脫細胞的真皮層皮片。7. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(b)和（c)之間，或步驟（c)和 (b)之間，還包括以下步驟:(m)對所述真皮層皮片進行消毒。8. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(d)中，還包括以下步驟：（η)對 所述真皮層皮片進行消毒。9. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(a)包括子步驟： (al)提供一去毛去皮下組織的豬皮； (a2)用厚度測定系統對步驟(al)中的豬皮進行厚度測定； (a3)根據步驟(a2)測得的數據確定皮片厚度均勻的區域； (a4)按步驟(a3)確定的區域，對所述豬皮進行分割，從而獲得經分割的皮片； (a5)對所述經分割的皮片進行削切處理，從而獲得去除表皮并去除基底膜的、經削切 的真皮層皮片。10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于，在步驟(a5)中，用大型取皮刀或電動 取皮刀進行削切處理。
【文檔編號】A61L27/36GK105903080SQ201610343981
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月23日
【發明人】劉博文, 周寧輝, 王志東, 朱鑫建, 俞鴻飛
【申請人】蘇州恒瑞迪生醫療科技有限公司, 上海宏創醫療科技有限公司