抑制Dcf1基因表達對阿茲海默癥的行為能力的應用
【專利摘要】本發明涉及一種抑制Dcf1基因表達對阿茲海默癥的行為能力的應用。本發明主要是本發明通過在神經系統內共表達dcf1和AD最終毒性蛋白Aβ42，發現dcf1表達后在幼蟲和成蟲兩個階段均惡化了AD果蠅的病癥，表現為幼蟲爬行軌跡縮小、成蟲壽命縮短和爬壁能力下降，表明dcf1具有惡化AD病癥的能力。這同時提示了dcf1是一個潛在的AD治療靶點，若能在AD病人中抑制dcf1蛋白的表達，則可能抑制AD病程的發展，為AD的治療提供了一種新的選擇。
【專利說明】
抑制Dcf 1基因表達對阿茲海默癥的行為能力的應用
技術領域
[0001 ]本發明涉及一種抑制Dcf I基因表達對阿茲海默癥的行為能力的應用。
【背景技術】
[0002]阿茲海默癥是一種不可逆的，致死性的神經退行性疾病，該病自19世紀發現至今，人們對此病依然缺乏有效的治療手段。該病在臨床上以記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆表現為特征，病理上的特征則是淀粉樣蛋白斑塊聚集(老年斑，SP)和神經纖維纏結(NFT)。雖然AD的致病機制的假說有很多，但無論是哪一種理論，均認為淀粉樣蛋白前體APP的降解產物Αβ42在AD發病的過程中起到著極為重要的作用。
[0003]盡管最終作用尚無定論，但Αβ的產生機制已經研究得較為透徹。在腦內，淀粉樣蛋白前體APP首先被β分泌酶(BACE)，降解為sAPPi3和另一個含有ΑΜ2的肽段C99 Χ99隨后再在γ分泌酶的作用下，降解為Αβ42，并最終聚集為老年斑。對于AD的治療而言，一般是通過抑制老年斑的形成，來抑制AD病癥的進一步惡化。
[0004]樹突狀細胞因子(dendritic cell factor I，Dcf I )，也稱為跨膜蛋白59(transmembrane protein 59，Dcfl)，屬于一種單次跨膜蛋白。Wang, L; et al研究發現，在神經干細胞中過量表達Dcfl，可維持神經干細胞的未分化狀態，而沉默Dcfl則能促進神經干細胞的分化。Li, X; et al通過小分子microRNA-351下調DcfI的表達，神經干細胞系C17.2向膠質方向分化。綜合以上結果，表明Dcfl的表達對神經元有著重要的作用。本實驗室前期研究發現Dcfl有著延長AD果蠅壽命的能力，表明Dcfl對AD可能有著潛在的治療用途。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供抑制dcfI基因表達在制備緩解阿茲海默癥中的彳丁為能力衰退藥物中的應用。
[0006]本發明通過在神經系統內共表達Dcf I和AD最終毒性蛋白AM2，來研究Dcfl對AD的影響。我們發現，在Dcfl表達后在幼蟲層面惡化了幼蟲的行為，盡管在爬行距離上和AM2組沒有差異，但是在爬行的軌跡上Dcfl表達組爬行的范圍明顯要比Αβ42組小得多；而成蟲中的結果中Dcfl表達后縮短了 AD果蠅壽命并惡化了果蠅的爬壁能力，則進一步表明Dcfl有惡化AD病癥的能力，說明了Dcf I可能是一個潛在的AD治療靶點，若能在AD病人中抑制DCFl的表達，可能有制止AD疾病進一步惡化的能力。
【附圖說明】
[0007]圖1為DcfI對AD果蠅幼蟲行為學的影響。
[0008]圖2為DcfI對AD果蠅成蟲行為學的影響。
【具體實施方式】
[0009]下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。
[0010]實施例1:行為學實驗檢測Dcfl對AD果蠅幼蟲的影響
稱5g瓊脂粉于電磁鍋中，加入300mL水，稱6g甜菜根粉于玻璃瓶中，加入50mL水。加熱瓊脂液，煮沸后加入甜菜根液，邊攪拌邊繼續加熱。煮沸后，停止加熱，用攪拌棒撇去上層泡沫。將沒有泡沫的混液倒入準備好的干凈平板，用移液槍吸取殘存的氣泡，待15min，讓其完全冷卻凝固。完全凝固后，挑取三齡幼蟲置于平板正中央，爬行6分鐘拍攝視頻，并以每兩分鐘為一個時間段用EthoVis1n XT 5.1進行分析。盡管在爬行的距離上，Dcfl表達并沒有對幼蟲的爬行距離產生影響(圖1B、1D、1F)，但是在Dcfl明顯縮小了 AD幼蟲的爬行范圍(圖1A、1C)，使得其軌跡變得很集中，這說明幼蟲花了更長的時間來適應環境，表明Dcfl惡化了AD幼蟲的行為
實施例2:Dcf!對AD果蠅成蟲壽命和爬壁能力的影響。
[0011]果蠅羽化后在8-12小時內每管12只分裝至培養管內。壽命實驗雌蠅前20天每5天計數一次，20天后兩天計數一次;雄蠅壽命實驗前40天每5天計數一次，后40天每2天計數一次，培養基每周換一次。爬壁實驗果蠅同樣在8-12小時內每12只分裝至培養管內，分裝24小時后進行第一次爬壁計數，之后每隔六天進行一次爬壁實驗。雌蠅爬壁標準:15秒內爬上培養管頂部和中線部分的果蠅數量;雄蠅標準，10秒內爬上培養管頂部的果蠅數量。每次爬壁重復4次，一直記錄至第42天結束。可見Dcfl表達后，不僅縮短了 AD果蠅的壽命(圖2A、2B)，并損害了 AD果蠅的爬壁能力(2C、2D)并在雄蠅中有多個時間段有顯著性差異，進一步說明了Dcfl對AD果蠅病癥的惡化作用。
【主權項】
1.抑制dcf I基因表達在制備緩解阿茲海默癥中的彳丁為能力:?退藥物中的應用D
【文檔編號】A61K45/00GK105903017SQ201610360600
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月28日
【發明人】文鐵橋, 干林華, 馮瑞麗, 王嬌
【申請人】上海大學