一種二色波羅蜜提取物的提取方法、檢測方法和應用
【專利摘要】本發明公開了一種二色波羅蜜提取物的提取方法，取干燥的二色波羅蜜粉碎后采用乙醇提取1?3次后濃縮干燥得到含有活血化瘀活性部位的二色波羅蜜提取物；其中，半楓荷根和乙醇的比例為1g:30?90ml；每次用乙醇提取時間為0.5?2h。該提取方法提取準確性高、提取物活性高；此外本發明還提供一種二色波羅蜜提取物的提取方法和檢測方法，上述提取方法提取準確且效率高，上述檢測方法檢測精度高。同時，本發明還公開了上述二色波羅蜜提取物用于制備抗抑郁藥物。
【專利說明】
_種二色波羅蜜提取物的提取方法、檢測方法和應用
技術領域
[0001] 本發明涉及藥物分析技術領域，尤其涉及一種二色波羅蜜提取物的提取方法和檢 測方法以及應用。
【背景技術】
[0002] 二色波羅蜜為桑科波羅蜜屬植物，又名紅楓荷、紅山梅、半楓荷等，盛產于廣東、海 南、廣西、云南等地，以根入藥，具有祛風除濕、舒筋活血的功效。用于治療風濕性關節炎，腰 肌勞損，慢性腰腿痛，半身不遂等疾病。任剛等人先后研究了二色波羅蜜根皮的化學成分研 究、二色波羅蜜葉揮發油化學成分的氣相色譜-質譜聯用分析，進一步認識和利用該植物資 源提供依據。盧海嘯等人研究了二色波羅蜜莖的化學成分，并分離得到9個化合物，其中有7 個化合物首次從該植物中分離得到。從以上研究進一步的證實了二色波羅蜜具有很大的藥 用價值，其研發前景可觀。
[0003] 我國二色波羅蜜的資源豐富，尤其主產廣西，分布廣西玉林、平南、蒼梧等地。充分 利用二色波羅蜜的各種成分，深度開發二色波羅蜜，獲得具有市場競爭力的高附加值產品， 使二色波羅蜜的地方資源優勢轉化為產業和經濟優勢，對增加收入，調動生態建設的積極 性具有重大意義。
[0004] 中藥的藥效不是來自于任何單一的活性成分，而基本上是多種活性成分，甚至與 非活性成分的協同作用或生克作用。而化學成分組的建立不僅具備個體的絕對的唯一性， 更強調的是物種特征的唯一性與同種個體之間的相似性。基于化學成分組的分析技術的中 藥提取工藝穩定性評價方法。以化學成分組峰面積為評價指標，定量考察提取液色譜指紋 圖譜和溶劑倍數、溶劑濃度、提取時間、提取次數等工藝參數的關系。較好地表征中藥提取 過程中工藝參數波動導致的提取物整體質量變化情況，可用于指導工藝參數的調整及優 化，建立科學的生產工藝穩定性評價方法，闡明工藝參數與產品有效組分的內在關系，對指 導工藝參數的調整，進而保證中藥產品質量穩定具有重要意義。
[0005] 中藥提取工藝現主要以藥材浸出物總量、單一化學成分含量、大類組分提取率或 處方內指標成分在提取物中的量等為指標評價工藝狀況的優劣，但此類指標未能較全面地 表征出樣品的組成特征，未能直觀表現樣品中化學成分組的綜合提取效率以及對應的化學 成分。現有技術對中藥的提取多為單一化學成分和多種化學成分的含量為評價指標，但由 于中藥中化學成分多數不明確，這樣的檢測方法僅能精確標示某個成分含量，而不能反映 藥物的活性，難與功效相關。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種二色波羅蜜提取物的提取方法和檢測方法，上述提取方 法提取準確且效率高，上述檢測方法檢測精度高。同時，本發明還公開了上述二色波羅蜜提 取物用于制備抗抑郁藥物。
[0007] 本發明的技術方案為:一種二色波羅蜜提取物的提取方法，取干燥的二色波羅蜜 粉碎后采用乙醇提取1-3次后濃縮干燥得到含有活血化瘀活性部位的二色波羅蜜提取物；
[0008] 其中，半楓荷根和乙醇的比例為1 g: 30-90ml;每次用乙醇提取時間為0.5-2h。
[0009] 在上述的二色波羅蜜提取物的提取方法中，所述的提取溫度為80-100°C。
[0010] 在上述的二色波羅蜜提取物的提取方法中，所述的乙醇的體積百分比為80%，每 次加入的料液比為1 g: 60ml，在90°C下提取2次，每次提取時間為lh。
[0011] 同時，本發明還公開了一種二色波羅蜜提取物的檢測方法，包括以下步驟：
[0012] 步驟1:采用上述的方法提取lg干燥的二色波羅蜜，得到二色波羅蜜提取物，用色 譜甲醇溶解樣品定容至2ml，過0.45μπι的濾頭，得供試品溶液；
[0013] 步驟2:對步驟1制備的供試品溶液進行高效液相色譜測定，色譜條件為:色譜柱： ZORBAX SB-C18 5μπι 4.6x150mm;流動相：乙腈-體積比為0.2%乙酸，流動相臨用前經超聲 波脫氣處理;檢測波長:290nm;流速：lml/min;柱溫:30°C ;進樣量:20yL;
[0014] 流動相采用梯度洗脫的方式加入，0-10min乙腈-0.2%乙酸的體積比為2:8;
[0015] l〇-45min乙腈-0 · 2%乙酸的體積比為3:7;
[0016] 45min后乙腈-0.2%乙酸的體積比為83:17
[0017] 進一步地，本發明還公開了了上述的提取方法得到的二色波羅蜜提取物用于制備 抗抑郁藥物。
[0018] 本發明的有益效果如下：
[0019] (1)本發明利用高效液相色譜，以化學成分組為評價指標優化二色波羅蜜的提取 工藝，利用該方法高效、簡便的提取了二色波羅蜜中的中藥成分，最大化的利用了二色波羅 蜜的藥用價值，使得二色波羅蜜具有更加廣闊的市場。
[0020] (2)提高了二色波羅蜜有效成分的提取率，對二色波羅蜜有效成分的綜合提取工 藝進行研究，以期為該植物各有效成分進一步的化學及藥理研究打下基礎。以便充分利用 二色波羅蜜的各種成分，深度開發二色波羅蜜，獲得具有市場競爭力的高附加值產品，使二 色波羅蜜的地方資源優勢轉化為產業和經濟優勢。
[0021] (3)利于對二色波羅蜜各有效成分的提取，為二色波羅蜜的進一步深入研究提供 數據。
[0022] (4)二色波羅蜜具有較為廣泛的藥用價值，為相關藥物產品的生產提供優化的工 藝流程，提高產品有效成分得率，減少雜質，降低成本。
[0023] (5)本發明的方法可以應用于中藥提取工藝的參數優化，利用高效液相色譜，以化 學成分組作為指標，高效、簡便的提取中藥綜合有效成分，最大化的利用中藥的要用價值， 提尚利用率。
[0024] (6)本發明的二色波羅蜜的提取物具有顯著的抗抑郁作用，有效部位明確，藥理作 用強，具有良好的藥用前景。
【附圖說明】
[0025]附圖1為本發明的實施例1的序號18的測試圖譜。
【具體實施方式】
[0026]下面結合【具體實施方式】，對本發明的技術方案作進一步的詳細說明，但不構成對 本發明的任何限制。
[0027] 實施例1、二色波羅蜜提取物的制備
[0028] 根據單因素試驗，提取方法、提取溶劑、溶劑濃度、料液比、提取時間、提取次數、提 取溫度等對半楓荷提取率具有重要影響，采用七因素三水平正交試驗表，以化學成分組為 評價指標選用最佳提取參數。每個重復提取3個平行量，分別進樣。將3個平行量的色譜圖經 過積分后，將13個主峰對應峰面積的各平均值。通過對比不同提取方法所得的色譜圖中13 個主峰對應峰面積的平均值，篩選出最優提取方法。
[0029] 色譜柱:Z0RBAX SB-C18(5ym 4.6x 150mm);流動相：乙腈-0.2%乙酸.臨用前經超 聲波脫氣處理;檢測波長:290nm;流速：lml/min;柱溫:30°C ;進樣量:20yL。色譜條件如表1 所示。
[0030]表1色譜條件
[0032] 從表3和表4中數據可以判斷出序號18的提取方法明顯優于其他。
[0033] 表2為序號1~18的提取條件及每個條件三個平行量的得率和平均得率。
[0034] 表 2
[0035]
[0036]
[0037] 因此可以得出結論:提取方法為熱回流提取，提取溶劑為80%乙醇溶液，料液比1: 60，提取時間lh，提取溫度90°C，提取次數2次。
[0038] 表3和4為序號1~18提取液(三個平行量)的各色譜圖中13個主要峰的峰面積平均 值。
[0039] 表 3
[0042]表 4
[0044] 方法學考察：
[0045] 進行重現性試驗、穩定性試驗、精密度試驗對樣品重現性、穩定性，儀器精密度的 評價。
[0046] (1)重現性：
[0047]取同一批供試品5份，按"步驟（1)"項下的制備方法，分別制成供試品溶液進行分 析，檢測指紋圖譜，計算主要色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD。
[0048] 表5重現性相對保留時間
[0050] 表6重現性相對峰面積比
[0053] (2)穩定性；
[0054] 取同一批供試品溶液，分別在0、8、12、16、2處進樣，檢測指紋圖譜，計算主要色譜 峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD。
[0055]表7穩定性相對保留時間
[0058] 表8穩定性相對峰面積比 [0060] (3)精密度：
[0061]取同一批供試品溶液，連續進樣5次，檢測指紋圖譜，計算主要色譜峰的相對保留 時間和相對峰面積的RSD。
[0062]表9精密度相對保留時間
[0065] 表10精密度相對峰面積比
[0067] 實施例2、二色波羅蜜提取物對抗抑郁活性作用
[0068] 試驗用測試樣品二色波羅蜜提物的制備 [0069]提取物制備
[0070]取二色波羅蜜干燥藥材粉末適量，用80 %乙醇熱回流，料液比1:60，提取時間lh， 提取溫度90°C，提取次數2次，過濾，得到二色波羅蜜提取液，減壓濃縮至干，得二色波羅蜜 提取物，取部分二色波羅蜜提取物用水溶解成混懸液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃 取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液和水萃取液，分別減壓濃縮得到石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇和水部位提取物，備用。
[0071] 2、二色波羅蜜不同提取物對小鼠強迫游泳和懸尾不動時間的影響
[0072] 實驗分組之前均用相應儀器對小鼠進行神經行為學測試和篩選，剔除差異較大 的，再將差異較小的小鼠隨機分組，每組10只。小鼠隨機分為空白組、氟西汀組（50mg · kg <)、二色波羅蜜粗提物組、二色波羅蜜石油醚部位組、二色波羅蜜乙酸乙酯部位組、二色波 羅蜜正丁醇部位組和二色波羅蜜水部位組(均為200mg · kg4)，ig給藥，其中空白對照組ig 等容積生理鹽水，1次/d，連續10d，于第10天給藥后30min測定小鼠懸尾不動時間（小鼠倒位 6min，記錄后4min內累計不動時間）；測定小鼠強迫游泳不動時間（小鼠放入水中6min，記錄 后4min內累計不動時間）。二色波羅蜜5種提取物均具有縮短小鼠懸尾和強迫游泳的不動時 間（P<0.05)。在二色波羅蜜的4種不同極性提取物中，乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物作 用較為明顯(PC0.01)。
[0073] 表11二色菠蘿蜜不同提取物對小鼠強迫游泳和懸尾不動時間的影響(n = 10)
[0075] 注:與空白對照組比較:^40.05^^40.01。
[0076] 3、二色波羅蜜正丁醇提取物對利血平誘導小鼠抑郁癥模型的影響
[0077]小鼠隨機分為空白組、模型組、氟西汀組(50mg · kg-Ι)、正丁醇提取物高、中、低劑 量組(300，200，100mg · kg"1，ig)，其中空白對照組、模型組ig等容積生理鹽水，1次/d，連續 10d。末次給藥同時，除空白對照組外，各組ip利血平5mg · kg<。此后將小鼠豎起，根據眼瞼 下垂情況評分，評分標準為:眼閉1/4為1分，眼閉2/4為2分，眼閉3/4為3分，全閉為4分;2h后 測定小鼠肛溫。模型組由于利血平的作用出現了體溫下降和眼瞼下垂的癥狀(P<〇.01)。而 二色波羅蜜正丁醇提取物能拮抗利血平所引起的體溫下降和眼瞼下垂（P<〇.〇5SP< 0.01)。其中二色桂木正丁醇提取物的中、高劑量組尤其顯著(P<0.01)。
[0078]表12二色菠蘿蜜正丁醇提取物對利血平誘導小鼠抑郁癥模型的影響(n = 10)
[0080] 注:與空白對照組比較^^〈o.oi'pso.os。
[00811 實驗結果:二色波羅蜜提物及石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位均 可不同程度地縮短小鼠游泳和懸尾的不動時間，其中正丁醇部位的作用最顯著(P〈0.05或P 〈0.01)，并能顯著拮抗利血平引起的體溫下降和眼瞼下垂等生理變化(P〈0.05或P〈0.01)， 顯著提高。二色波羅蜜提物具有抗抑郁作用，其活性成分主要分布在正丁醇部位。
[0082]以上所述的僅為本發明的較佳實施例，凡在本發明的精神和原則范圍內所作的任 何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種二色波羅蜜提取物的提取方法，其特征在于:取干燥的二色波羅蜜粉碎后采用 乙醇提取1-3次后濃縮干燥得到含有活血化瘀活性部位的二色波羅蜜提取物； 其中，半楓荷根和乙醇的比例為lg:30-90ml;每次用乙醇提取時間為0.5-2h。2. 根據權利要求1所述的二色波羅蜜提取物的提取方法，其特征在于，所述的提取溫度 為80-100°C。3. 根據權利要求1所述的二色波羅蜜提取物的提取方法，其特征在于，所述的乙醇的體 積百分比為80%，每次加入的料液比為lg:60ml，在90°C下提取2次，每次提取時間為lh。4. 一種二色波羅蜜提取物的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1:采用權利要求1-3任一的方法提取Ig干燥的二色波羅蜜，得到二色波羅蜜提取 物，用色譜甲醇溶解樣品定容至2ml，過0.45μπι的濾頭，得供試品溶液； 步驟2:對步驟1制備的供試品溶液進行高效液相色譜測定，色譜條件為：色譜柱： ZORBAX SB-C18 5μπι 4.6x 150mm;流動相：乙腈-體積比為0.2%乙酸，流動相臨用前經超聲 波脫氣處理;檢測波長:290nm;流速：lml/min;柱溫:30°C ;進樣量:20yL; 流動相采用梯度洗脫的方式加入，〇-1 Omin乙腈-0.2 %乙酸的體積比為2:8; 10-45min乙腈-0.2 %乙酸的體積比為3:7; 45min后乙腈-0.2 %乙酸的體積比為83:17。5. -種如權利要求1-3提取得到的二色波羅蜜提取物的應用，其特征在于，所述的二色 波羅蜜提取物用于制備抗抑郁藥物。
【文檔編號】A61K36/60GK105902616SQ201610389879
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月6日
【發明人】盧海嘯
【申請人】玉林師范學院