一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，具體涉及一種果膠（PET）與八臂聚乙二醇（8ARM?PEG?COOH）分別為載體，聯合負載雙氫青蒿素（DHA）和白樺脂酸（BA），首先八臂聚乙二醇與白樺脂酸（BA）反應形成聚乙二醇?雙氫青蒿素（8ARM?PEG?BA），果膠與一定量的雙氫青蒿素反應形成果膠?雙氫青蒿素（PET?DHA），然后8ARM?PEG?BA與PET?DHA反應形成BA?PEG?PET?DHA，再與10?羥基喜樹堿(HCPT)自組裝形成納米粒子BA?PEG?PET?DHA(HCPT)·NPs，實現藥物的負載效率高，靶向性強。本發明的新型果膠納米藥物提供一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法具有緩釋功能，果膠與聚乙二醇的生物相容性好，形成的納米藥物毒性低。本發明屬于生物制藥和納米技術領域，制備工藝簡單，操作方便，實驗周期短。
【專利說明】
一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法
技術領域
[0001]本發明屬于生物制藥和納米技術領域，涉及藥物遞送系統，具體涉及一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法。
【背景技術】
[0002]結腸癌(colorectal cancer，簡稱CRC)是一種常見的消化道惡性腫瘤之一，為第三大常見癌癥，致死率居世界第四，是目前我國癌癥發病率上升最快的惡性腫瘤之一，而針對結腸癌的有效治療措施尚不明確，多種藥物諸如雙氫青蒿素(DHA)、白樺脂酸(BA)等都對結腸癌有抑制作用，口服時生物利用度不高，體內半衰期短，需要靜脈持續給藥，較高的毒副作用，如將DHA和BA制成在腫瘤局部達到較高藥物濃度的結腸靶向遞藥系統，將對結腸癌的治愈帶來重要的臨床應用價值。
[0003]果膠(pectin)是存在于植物細胞壁中的多糖類大分子物質，相對分子質量IX 15?3X105，它是一種新的結腸靶向材料，在胃及小腸中不被消化，而對結腸內菌群產生的果膠酶特異性降解。果膠來源豐富，價格低廉，易于提取獲得，具有良好的生物相容性和完全的可生物降解性。做藥物的載體或基質具有結腸定位準確、控釋緩釋、受腸道PH影響小等優點，且果膠自身具有一定的抗癌活性。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種新型雙載體共遞送納米藥物的制備方法，以果膠為藥物載體，制備雙氫青蒿素和白樺脂酸雙藥靶向遞藥體系，載藥果膠與載藥單臂聚乙二醇在水介質中可自組裝形成納米粒子，并能夠在自組裝過程中包裹10-羥基喜樹堿(HCPT)，實現三種藥的共同遞送，具備雙重靶向功能pH響應和多糖靶向作用調節藥物的釋放部位，實現多種藥物的協調靶向作用，為靶細胞的治療提供一種新的思路，使用果膠和單臂聚乙二醇為藥物載體，靶向性好，載藥量高，避免藥物的不完全釋放和突釋情況對患者帶來的毒副作用。
[0005]—種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法的技術方案如下:
一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，由多糖前藥載體果膠(PET)與雙氫青蒿素(DHA)形成復合物a，八臂聚乙二醇前藥載體與白樺脂酸(BA)形成高分子復合物b，然后a與b反應形成載有兩種藥的雙載體高分子化合物，再與10-羥基喜樹堿(HCPT)聯合自組裝形成納米粒子，所述的果膠酯化度為50?75%，多臂聚乙二醇分子量為40000ο
[0006]本發明所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，包括以下步驟:
1.用二甲基亞砜(DMSO)或吡啶(Py)溶解ΡΕΤ，然后加入激活劑1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，催化劑4-二甲氨基吡啶(DMAP)，攪拌，再加入一定摩爾質量的雙氫青蒿素反應36?48h，加入3V乙醚沉淀，攪拌均勻，離心后棄上清液，如此反復5次，將最終的沉淀真空干燥，得到PET-DHA粉末A;
2.將八臂聚乙二醇溶于四氫呋喃，加入EDC、DMAP和白樺脂酸(BA)，反應5?30h，然后加入乙醚/乙醇沉淀，離心去上清液，下層沉淀溶于三氯甲烷，用甲醇洗滌數次，離心，將沉淀物真空干燥，得到8ARM-PEG-BA粉末B ；
3.取一定量的步驟I和步驟2中的粉末A和B溶于DMSO，加入EDC和DMAP，反應30?60h，乙醚/乙醇沉淀，離心去上清液，多次用乙醇洗，將沉淀物真空干燥，得到BA-PEG-PET-DHA粉末C；
4.將步驟3中粉末C和10-羥基喜樹堿(HCPT)共同溶于二甲基亞砜，攪拌I?30min，取適量滴入高速攪拌的去離子水中，所得混合溶液透析，每4h換一次透析液，透析膜內液體冷凍干燥，得到所述BA-PEG-PET-DHA(HCPT).NPs。
[0007]優選地，步驟I所述的PET與DHA的摩爾比為1:0.5?1:10;
優選地，步驟2所述的8ARM-PEG-C00H與BA的摩爾比為1:0.01?1:1.5;
優選地，步驟4所述的透析所用的透析膜的分子截留量為I?200KD;
優選地，步驟4所述的BA-PEG-PET-DHA(HCPT).NPs的載藥量可控，納米粒子中DHA的載藥量為0.1%-15%，BA的載藥量為0.1%_50%，包裹HCPT的量為0.01%-5%，納米粒子的質量百分比 0.0I %-90%，納米粒徑 10-300nm;
優選地，1-4所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，具有緩釋功能、癌靶向性及穩定的粒徑大小。
[0008]相對現有技術，本發明具有以下有益效果:
本發明的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，具有雙靶向性，生物相容性好，毒副作用低，具有緩釋功能，BA-PEG-PET-DHA在自組裝的同時還包裹HCPT，增大了載藥量，增強其緩釋時間，以達到誘導腫瘤快速凋亡的目的，控制癌細胞的復制速度，同時減少患者大量服用藥物造成的毒副作用，延長食藥時間，具有很好的臨床應用前景。本發明的藥物合成及自組裝成納米藥物過程操作簡單，只需在水介質中形成納米粒子，納米粒子穩定。
【附圖說明】
[0009]圖1為納米粒子的透射電鏡形貌圖。
【具體實施方式】
[0010]下面結合【具體實施方式】，對本發明作進一步說明。
[0011]實施例1、一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法:
1.用1ml二甲基亞砜(DMSO)或吡啶(Py)溶解0.5g PET，然后加入0.52g激活劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，0.06g催化劑4-二甲氨基吡啶(DMAP)，攪拌，再加入Ig雙氫青蒿素反應48h，加入3V乙醚沉淀，攪拌均勻，離心后棄上清液，如此反復5次，將最終的沉淀真空干燥，得到PET-DHA粉末A;
2.將0.5g八臂聚乙二醇溶于5ml四氫呋喃，加入0.55gEDC、0.05g DMAP和Ig白樺脂酸(BA)，反應12h，然后加入3V乙醚/乙醇沉淀，離心去上清液，下層沉淀溶于三氯甲烷，用甲醇洗滌數次，離心，將沉淀物真空干燥，得到8ARM-PEG-BA粉末B;
3.取一定量的步驟I和步驟2中的粉末A0.2g和B 0.2g溶于lOmlDMSO，加入0.46g EDC和0.05g DMAP，反應48h，乙醚/乙醇沉淀，離心去上清液，多次用乙醇洗，將沉淀物真空干燥，得到BA-PEG-PET-DHA 粉末 C ；
4.將步驟3中粉末C0.2g和0.05gl0-羥基喜樹堿(HCPT)共同溶于二甲基亞砜，攪拌1min，取適量滴入高速攪拌的去離子水中，所得混合溶液透析，每4h換一次透析液，透析膜內液體冷凍干燥，得到所述BA-PEG-PET-DHA(HCPT).NPs，粒徑大小為40?150nm
實施例2、一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法:
在本實例中，通過與實施例1相同的合成方法及步驟，PET與DHA的摩爾比為1:5，8ARM-PEG-COOH與BA的摩爾比為1:1，測得粒徑大小為20?lOOnm。
【主權項】
1.一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，其特征在于，由多糖前藥載體果膠(PET)與雙氫青蒿素(DHA)形成復合物a，單八臂聚乙二醇前藥載體與白樺脂酸(BA)形成高分子復合物b，然后a與b反應形成載有兩種藥的雙載體高分子化合物，再與10-羥基喜樹堿(HCPT)聯合自組裝形成納米粒子，所述的果膠酯化度為50?75%，多臂聚乙二醇分子量為40000。2.如權利要求1所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)用二甲基亞砜(DMSO)或吡啶(Py)溶解PET，然后加入激活劑1_(3_二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，催化劑4-二甲氨基吡啶(DMAP)，攪拌，再加入一定摩爾質量的雙氫青蒿素反應36?48h，加入3V乙醚沉淀，攪拌均勻，離心后棄上清液，如此反復5次，將最終的沉淀真空干燥，得到PET-DHA粉末A; (2)將八臂聚乙二醇溶于四氫呋喃，加入EDC、DMAP和白樺脂酸(BA)，反應5?30h，然后加入乙醚/乙醇沉淀，離心去上清液，下層沉淀溶于三氯甲烷，用甲醇洗滌數次，離心，將沉淀物真空干燥，得到8ARM-PEG-BA粉末B; (3)取一定量的步驟(I)和步驟(2)中的粉末A和B溶于DMSO，加入EDC和DMAP，反應30?60h，乙醚/乙醇沉淀，離心去上清液，多次用乙醇洗，將沉淀物真空干燥，得到BA-PEG-PET-DHA粉末C; (4)將步驟(3)中粉末C和10-羥基喜樹堿(HCPT)共同溶于二甲基亞砜，攪拌I?30min，取適量滴入高速攪拌的去離子水中，所得混合溶液透析，每4h換一次透析液，透析膜內液體冷凍干燥，得到所述BA-PEG-PET-DHA(HCPT).NPs。3.如權利要求1、2所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，其特征在于，步驟(I)和(2 )所述的PET與DHA的摩爾比為1: 0.5?1:1O，8ARM-PEG-COOH與BA的摩爾比為1:0.01?1:1.5。4.如權利要求1、2、3所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，其特征在于，步驟(4)透析所用的透析膜的分子截留量為I?5KD。5.如權利要求1、2、3、4所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，其特征在于，其納米粒子中DHA的載藥量為0.1%-15%，BA的載藥量為0.1%_50%，包裹HCPT的量為0.01%-5%，納米粒子的質量百分比0.01%-90%，納米粒徑10-300nm。6.如權利要求1、2、3、4所述的一種基于果膠與多臂聚乙二醇的納米藥物共同遞送系統的制備方法，具有癌靶向性及緩釋功能。
【文檔編號】A61K31/4745GK105902520SQ201610408560
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月13日
【發明人】雷建都, 劉彥雪, 何靜, 劉靜, 王璐瑩, 晉祿祿
【申請人】北京林業大學