糖胺聚糖和環糊精的組合的制作方法
【專利摘要】本發明涉及兩種特定糖胺聚糖，透明質酸和硫酸軟骨素與環糊精的可注射組合，以及該組合用于治療骨骼系統相關疾病治療，特別是在關節內治療，以及皮內治療中的用途。
【專利說明】糖胺聚糖和環糊精的組合發明摘要
[0001]本發明涉及兩種特定糖胺聚糖，透明質酸和硫酸軟骨素與環糊精的可注射組合，以及該組合用于治療骨骼系統相關疾病治療，特別是在關節內治療，以及皮內治療中的用途。
[0002]發明背景
[0003]糖胺聚糖為由1—4或β1—3連接到己醣胺，葡糖胺或半乳糖胺殘基上的糖醛酸，葡糖醛酸或艾杜糖醛酸重復單元形成的多糖家族。己醣胺和透明質酸殘基可以以多種方式硫酸化。在糖胺聚糖家族中，除了硫酸肝素和硫酸乙酰肝素，也包括了透明質酸和硫酸軟骨素。生理上，糖胺聚糖在蛋白聚糖中組織，蛋白聚糖由糖胺聚糖以連接域方式連接到其上的蛋白核形成。通過收集和釋放蛋白和生長因子的方式，這些結構在生化反應中具有控制作用(J.F.Kennedy，C.A.White,B1active Carbohydrates ,1983,Ellis Horwood Ltd,211-227) ο
[0004]特別是，硫酸軟骨素位于軟骨和胃粘膜上皮部分或尿道上皮中。其賦予軟骨彈性并控制其抗力，而在粘膜和上皮中，在胃上皮情況下其保護上皮自身免受酸侵襲，在尿道上皮情況下其保護上皮自身免受鉀。在硫酸軟骨素量低的疾病，如胃炎或間質性膀胱炎中，施用硫酸軟骨素幫助減輕炎癥和由于低硫酸軟骨素含量相關的破壞。
[0005]硫酸軟骨素由二糖重復單元形成，二糖重復單元含β1— 3連接到第4位或第6位硫酸化半乳糖胺上的葡糖醛酸。在相同的分子中ChSA和ChSC基均存在。偶爾在多糖鏈中也存在少量重硫酸化和非硫酸化的二糖。
[0006]透明質酸為非硫酸化糖胺聚糖，其由連接到N-乙酰葡糖胺上的1-3-葡糖醛酸二糖線性序列形成。
[0007]透明質酸在上皮和結締組織中廣泛存在，例如，但不僅是在皮膚和軟骨中。
[0008]已知硫酸軟骨素和透明質酸的組合在受損關節軟骨，例如由于骨關節炎，再生中的用途。
[0009]也已知透明質酸和/或硫酸軟骨素作為軟組織和粘膜填充物(例如作為美容醫學治療“填充物”)的皮內用途。
[0010]上面的治療是有效的，但目前存在的缺陷是，由于注射的組分被接受組織快速重吸收，需要非常頻繁地重復這些治療。
[0011]發明目的
[0012]本發明的目的是提供可用于皮內和關節內施用的活性成分組合，其得到有效和持久的結果，
[0013]本發明進一步的目的是提供透明質酸，硫酸軟骨素和環糊精的固定組合，其用于皮內和關節內施用。
[0014]本發明進一步的目的是本發明的組合用于治療骨骼疾病，特別是關節內疾病的用途。
[0015]本發明進一步的目的是本發明的組合用于美容醫學治療，特別作為軟組織和粘膜“填充物”的用途。
[0016]發明描述
[0017]因此，根據其一方面，本發明的目的是由透明質酸，硫酸軟骨素和至少一種環糊精組成的藥物組合。
[0018]除非另有規定，本說明書中術語“透明質酸”和“硫酸軟骨素”是指，每種獨立地，透明質酸和硫酸軟骨素本身，或者例如以其藥學可接受鹽形式，而根據優選的實施方式，以其鈉鹽形式。
[0019]如上定義的透明質酸和硫酸軟骨素本領域已知，而且根據本發明，可以是任何來源的，例如甚至是生物技術和/或發酵來源的。
[0020]根據優選的實施方式，透明質酸為非動物來源的，再根據優選的實施方式，透明質酸具有包含于10000Da到5000000Da之間，有利地500000Da和3000000Da之間，優選地從約100000Da和2500000Da，例如lOOOOOODa，或甚至更優選地約2000000Da的平均分子量。
[0021]根據另一個特別有利的實施方式，透明質酸具有3000000Da的平均分子量。
[0022]對于硫酸軟骨素，平均分子量不是關鍵，并且通常從約5000到100000，有利地從I OOOODa到50000Da，再更優選地從I OOOODa到40000Da;而也可以使用其他分子量。
[0023]表述“至少一種環糊精”在本文中定義為由連接在一起并環化的6、7或8個糖苷單元組成的天然環形寡糖家族。環糊精為商業上可購得的化合物并廣泛用于醫藥領域。
[0024]本文中所用的術語“環糊精”是指任何藥學可接受環糊精，并也包括環糊精衍生物，例如多硫酸化衍生物，如EPl 301192中描述的那些，或者羥丙基衍生物，當腸胃外如注射使用時其顯示較好的耐受性。
[0025]根據本發明，可用的環糊精為β-環糊精，例如羥丙基-β-環糊精。
[0026]除非另有建議，本說明書中組合成分間的比率總表示為重量/重量(w/w)比率。
[0027]優選地，本發明的組合為固定的組合，即其中使用固定成分比率的組合。
[0028]根據實施方式，成分透明質酸和硫酸軟骨素間一種對另一種的比率約為1:1，w/w。
[0029]根據優選的實施方式，本發明的組合中，成分透明質酸鈉和硫酸軟骨素鈉間一種對另一種的比率為I: I，w/w。
[0030]再根據本發明優選的實施方式，環糊精成分在固定組合中有利地以較少的量存在;優選地，固定組合的比率會是透明質酸鈉/硫酸軟骨素鈉/環糊精= 1/1/0.3-0.8。
[0031]例如，本發明代表性固定組合物的組分的重量比率包括1/1/0.5比率的透明質酸鈉/硫酸軟骨素鈉/環糊精。
[0032]優選地，本發明固定組合中，成分透明質酸/硫酸軟骨素/羥丙基-β-環糊精的重量比率為1/1/0.5。
[0033]本發明組合的所有成分商業上可購得。
[0034]本發明組合可以用于皮內或關節內，治療性和預防性治療。
[0035]例如，通過關節內治療方式，本組合可以用作粘彈性補充治療的物理-機械劑，作為關節滑液的替換，該關節滑液受退化或機械關節病影響，引起疼痛或活動力降低;或作為關節軟骨水平組織再生過程的激活物。
[0036]通過皮內治療方式，本組合可以用作軟組織和粘膜填充劑，即作為“生物復蘇物”和/或“填充物”來填充皺紋和表情線，重塑形象并為嘴唇或其他臉和身體部位提供體積。
[0037]這樣的治療用途和方法代表了本發明進一步的方面。
[0038]對于根據本發明的用途，組合，特別是固定的組合，優選地配制于藥物組合物中，特別是適合所述施用的無菌液體組合物中，以用于關節內和皮內使用。這樣的組合物代表了本發明進一步的方面。
[0039]根據本領域技術人員所知的技術制備這樣的組合物，例如，通過將組合的成分溶解于適合關節內和皮內施用的液體中，有利地，生理緩沖溶液中，例如含氯化鈉，可選地加入常規賦形劑和添加劑，如例如穩定劑，緩沖劑等。
[0040]會為明顯的施用需求以無菌或其使用前滅菌的方式制備這樣的組合物。隨后組合物會被注入人或動物中(例如，哺乳動物如狗，馬等中)。
[0041]根據優選的實施方式，本發明的組合物含0.5到4%，有利地I到4%透明質酸(w/v，本身或，優選地，以其藥學可接受鹽，有利地鈉鹽形式)，0.5到4%，有利地I到4%硫酸軟骨素(w/v，本身或，優選地，以其藥學可接受鹽，有利地鈉鹽形式)和0.5到2%w/v的至少一種環糊精，有利地，羥丙基-β_環糊精。
[0042]根據本發明的實施方式，本發明的組合物為液體并含約2%(w/v，例如2ml組合物中40mg)透明質酸(本身或以其藥學可接受鹽，優選地鈉鹽形式)，約2 % (w/v，例如2ml組合物中40mg)硫酸軟骨素(本身或以其藥學可接受鹽，優選地鈉鹽形式)和約l%(w/v，例如2ml組合物中20mg)的至少一種環糊精，優選地，羥丙基-β_環糊精。
[0043]根據本發明特別有利地實施方式，本發明的組合物為液體并含約2% (w/v，例如3ml組合物中60mg)透明質酸(本身或以其藥學可接受鹽，優選地鈉鹽形式)，約2% (w/v，例如3ml組合物中60mg)硫酸軟骨素(本身或以其藥學可接受鹽，優選地鈉鹽形式)和約l%(w/V，例如3ml組合物中30mg)的至少一種環糊精，優選地，輕丙基_β_環糊精。
[0044]本發明組合物中組合的成分的量以液體組合物重量/體積來提供，并經常是指未成鹽成分的重量。
[0045]根據優選的實施方式，本發明的組合物容納于即用型注射器中，有利地2ml注射器中容納約2% (w/v，S卩40mg)透明質酸(本身或以其藥學可接受鹽，優選地鈉鹽形式)，約2%(?八，8卩40!^)硫酸軟骨素(本身或以其藥學可接受鹽，優選地鈉鹽形式)和約1%(?八，8口20mg)的至少一種環糊精，優選地，羥丙基-β-環糊精。
[0046]根據特別優選的實施方式，本發明的組合物容納于即用型注射器中，有利地3ml注射器中容納約2% (w/v，即60mg)透明質酸鈉，約2% (w/v，即60mg)硫酸軟骨素鈉和約I % (w/V，即30mg)的至少一種環糊精，優選地，羥丙基-β-環糊精。
[0047]根據優選的實施方式，本發明目的也為含有無菌液體組合物3ml預填充注射器，該無菌液體組合物包括60mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW3000000Da)，60mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉和30mg羥丙基-β-環糊精，以及藥學可接受賦形劑和載體。
[0048]優選的本發明組合物，在可注射制劑用組合和水之外，也會包含一種或多種添加劑，例如選自不致熱氯化鈉，磷酸氫二鈉和二水磷酸二氫鈉。
[0049]當本發明的組合物用于關節內施用時，其也包含其它活性成分，如抗炎劑，例如，選自非留體抗炎藥和留體抗炎藥(cortisonics類)。
[0050]由于甲基磺酰甲烷的多種有益特性，該成分也可加入用于關節內使用的本發明組合物中。[0051 ]代表性的本發明組合物在本說明書實驗部分詳細報道。
[0052]本發明也涉及根據本發明的藥物組合物，其用于治療或預防軟骨退化和關節炎或關節疾病，或者作為軟組織和粘膜填充劑。
[0053]本發明也涉及用于治療或預防軟骨退化和關節炎或關節疾病，或者作為軟組織和粘膜填充劑的方法，其包括給需要其的對象施用有效量的上述組合或組合物。
[0054]相比僅含透明質酸和/或硫酸軟骨素的已知組合物，已經顯示本發明的組合提供在其注射位置保持更久的優點。實際上，環糊精的存在允許減緩治療組織對組合中其他兩種成分的重吸收。因此清楚其要求較低頻率的含組合組合物注射，由此顯著改善治療對象的依從性。
[0055]報道下列實施例是專門為了展示目的，其絕對不是限制本發明。
[0056]實驗部分
[0057]實施例1
[0058]根據本發明的組合物的實施例
[0059]2ml無菌液體組合物含:
[0060]-40mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW 2000000Da)
[0061 ]_40mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉
[0062]-20mg羥丙基-β-環糊精
[0063]-17.85mg不致熱氯化鈉
[0064]-0.33mg無水磷酸氫二鈉
[0065]-0.09mg 二水磷酸二氫鈉
[0066]-可注射制劑用水按需至2ml
[0067]實施例2
[0068]根據本發明的組合物的實施例
[0069]2ml無菌液體組合物含:
[0070]_30mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW 2000000Da)
[0071 ]_30mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉
[0072]-15mg羥丙基-β-環糊精
[0073]-17.85mg不致熱氯化鈉
[0074]-0.33mg無水磷酸氫二鈉
[0075]-0.09mg 二水磷酸二氫鈉
[0076]-可注射制劑用水按需至2ml
[0077]實施例3
[0078]根據本發明的組合物的實施例
[0079]2ml無菌液體組合物含:
[0080]-30mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW 2000000Da)
[0081 ]_30mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉
[0082]-15mg羥丙基-β-環糊精
[0083]-12.80mg不致熱氯化鈉
[0084]-0.25mg無水磷酸氫二鈉
[0085]-0.06mg 二水磷酸二氫鈉
[0086]-可注射制劑用水按需至2ml
[0087]實施例4
[0088]根據本發明的組合物的實施例
[0089]2ml無菌液體組合物含:
[0090]-50mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW 2000000Da)
[0091 ]_50mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉
[0092]-25mg羥丙基-β-環糊精
[0093]-17.85mg不致熱氯化鈉
[0094]-0.33mg無水磷酸氫二鈉
[0095]-0.09mg 二水磷酸二氫鈉
[0096]-可注射制劑用水按需至2ml
[0097]實施例5
[0098]根據本發明的組合物的實施例
[0099]2ml無菌液體組合物含:
[0100]-50mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW 2000000Da)
[0101 ]_50mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉
[0102]-25mg羥丙基-β-環糊精
[0103]-22.30mg不致熱氯化鈉
[0104]-0.41mg無水磷酸氫二鈉
[0105]-0.1lmg 二水磷酸二氫鈉[Ο?Ο?]-可注射制劑用水按需至2ml
[0107]實施例6
[0108]3ml注射器含下列無菌液體組合物:
[0109]-60mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW 3000000Da)
[0110]_60mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉
[0111]_30mg羥丙基-β-環糊精
[0112]-25.50mg不致熱氯化鈉
[0113]-0.48mg無水磷酸氫二鈉
[0114]-0.13mg二水磷酸二氫鈉
[0115]-可注射制劑用水按需至3ml
[0116]實施例7
[0117]步驟1:透明質酸降解的評價方法
[0?18]在37 0C以透明質酸酶酶處理透明質酸不同的時間。通過Morgan-El son檢測的方式監測降解產物。通過加入四硼酸鹽的方式封閉反應，加熱到沸騰5分鐘。冷卻后，通過加入DMAB(對甲氨基苯甲醛)，孵育I小時后，有與光譜可測量的降解透明質酸量成比例的顏色呈現。
[0119]透明質酸定量已在處理前和后已用第二種分析方法驗證以確定所得結果。
[0120]在特定Nucleogel(Macherey-nagelGFC 300.8)柱上的HPLC-UV分析。[0121 ]步驟2:透明質酸穩定性評價
[0122]制備了無菌環境下3種不同的含透明質酸混合物:
[0123]a)僅透明質酸
[0124]b)透明質酸+硫酸軟骨素
[0125]c)透明質酸+硫酸軟骨素+環糊精多硫酸鹽
[0126]在不同時間評價了混合物對酶降解的穩定性。
[0127]相對于配制品(a)和(b)，配制品(C)顯示了對酶降解更好的保護。
【主權項】
1.藥物組合，其由透明質酸或其藥學可接受鹽，硫酸軟骨素或其藥學可接受鹽，和至少一種環糊精組成。2.根據權利要求1的組合，特征在于透明質酸具有包含于10000Da到5000000Da之間的平均分子量。3.根據權利要求2的組合，特征在于透明質酸具有約3000000Da的平均分子量。4.根據權利要求1-3任一項的組合，特征在于透明質酸和硫酸軟骨素為其鈉鹽形式。5.根據權利要求1-4任一項的組合，特征在于所述至少一種環糊精選自β-環糊精和羥丙基-β-環糊精。6.根據權利要求1-5任一項的組合，特征在于其為固定的組合，其中成分透明質酸和硫酸軟骨素一種對另一種的比率為I: I (w/w)。7.根據權利要求1-5任一項的組合，特征在于其為固定的組合，其中成分透明質酸鈉和硫酸軟骨素鈉一種對另一種的比率為I: I (w/w)。8.根據權利要求1-6任一項的組合，特征在于三種成分透明質酸/硫酸軟骨素/環糊精的重量比率為1/1/0.5(w/w)。9.根據權利要求1-5任一項的組合，特征在于其由I /1 /0.5比率(w/w)的透明質酸鈉/硫酸軟骨素鈉/羥丙基-環糊精的固定組合組成。10.根據權利要求1-9任一項的組合，其用于治療或預防軟骨退化和關節炎或關節疾病。11.根據權利要求1-9任一項的組合，其作為軟組織或粘膜填充劑。12.液體可注射溶液形式的藥物組合物，包含根據權利要求1-9任一項的組合，聯合一種或多種藥學可接受的賦形劑。13.根據權利要求12的藥物組合物，特征在于其包含I到4%(w/v)的透明質酸(本身或以其藥學可接受鹽的形式)，I到4% (w/v)的硫酸軟骨素(本身或以其藥學可接受鹽的形式)和0.5到2% (w/v)的至少一種環糊精。14.根據權利要求13的藥物組合物，特征在于其包含2% (w/v)的透明質酸鈉，2 % (w/v)的硫酸軟骨素鈉以及I % (w/V)的至少一種環糊精。15.根據權利要求12-14任一項的藥物組合物，特征在于所述環糊精為羥丙基-β-環糊相ο16.根據權利要求12-15任一項的藥物組合物，特征在于其容納于即用型注射器中。17.根據權利要求12-16任一項的藥物組合物，其用于治療或預防軟骨退化和關節炎或關節疾病，或者作為軟組織和粘膜填充劑。18.預填充注射器，其容納根據權利要求12-16任一項的藥物組合物。19.根據權利要求18的預填充注射器，特征在于其為3ml注射器并含有無菌液體組合物，該無菌液體組合物包括60mg可注射制劑用透明質酸鈉(平均MW3000000Da)，60mg可注射制劑用硫酸軟骨素鈉和30mg羥丙基-β-環糊精，以及藥學可接受賦形劑和載體。
【文檔編號】A61K47/40GK105899233SQ201480069024
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年12月15日
【發明人】安吉洛·皮佐尼, 保羅·皮佐尼
【申請人】阿法瑪公司