藥物遞送用載體、偶聯物及含有這些成分的組合物以及它們的施予方法

藥物遞送用載體、偶聯物及含有這些成分的組合物以及它們的施予方法
【專利摘要】本發明提供用于將藥物遞送至腦的囊泡、偶聯物及含有這些成分的組合物以及它們的施予方法。本發明提供含有藥物遞送用載體、用于按照施予計劃施予至對象的組合物，所述施予計劃包括：將所述組合物施予至已使其禁食或已誘發低血糖的對象，并且誘發所述對象的血糖值上升，所述載體的外表面經GLUT1配體修飾。
【專利說明】藥物遞送用載體、偶聯物及含有送些成分的組合物從及它們 的施予方法
[0001] 相關申請的相互參考
[0002] 本申請享受日本特愿2013-242347號（申請日：2013年11月22日）及日本特愿 2014-96935號（申請日：2014年5月8日）的優先權權益，上述申請通過引用整體并入本說明 書中。
技術領域
[0003] 本發明設及藥物遞送用載體、偶聯物及含有運些成分的組合物W及它們的制造方 法和施予方法。
【背景技術】
[0004] 已知在血液與腦之間，存在限制物質交換的血腦屏障。可W認為，其成因是腦血管 內皮細胞形成密合連接，細胞的間隙極其狹窄，W及，細胞自身進行選擇性的物質攝入及排 出。
[0005] 血腦屏障的選擇透過性高，除了一部分物質（例如，酒精、咖啡因、尼古下及葡萄 糖)之外幾乎無法通過。因此，運一現象使得利用腦治療藥的腦疾病治療、利用腦診斷劑的 腦疾病診斷或利用造影劑的腦造影變得困難。
[0006] 利用葡萄糖通過血腦屏障的特性，開發了將抗體遞送至腦的技術(專利文獻1)。但 是，該抗體僅設及對抗體進行糖基化的技術，效果有限。
[0007] 現有技術文獻 [000引專利文獻
[0009] 專利文獻 l:W02007/068429

【發明內容】

[0010] 本發明提供藥物遞送用載體、偶聯物及含有運些成分的組合物W及它們的施予方 法。
[0011] 本申請的發明人發現，將其外表面經葡萄糖修飾的膠束等囊泡施予至已誘發了低 血糖的對象、之后使血糖值上升，囊泡將被極其高效地遞送至腦。本發明是基于上述見解完 成的。
[0012] 旨P，本發明提供W下的發明。
[0013] (1)-種組合物，其是含有藥物遞送用載體、用于按照施予計劃施予至對象的組合 物，
[0014] 所述施予計劃包括:將所述組合物施予至已使其禁食、或已誘發低血糖的對象，并 且，誘發所述對象的血糖值上升，
[0015] 所述載體的外表面經GLUT1配體修飾。
[0016] (2)-種組合物，其是含有藥物與化UT1配體的偶聯物而成的、用于按照施予計劃 施予至對象的組合物，
[0017] 所述施予計劃包括:將所述組合物施予至已使其禁食、或已誘發低血糖的對象，并 且，誘發所述對象的血糖值上升。
[0018] (3)如上述(1)或(2)所述的組合物，其是用于將藥物遞送至腦的組合物。
[0019] (4)如上述(1)或(2)所述的組合物，其是用于使藥物通過血腦屏障的組合物。
[0020] (5)如上述（1)或(2)所述的組合物，其是用于使藥物通過血神經屏障、血視網膜屏 障或血腦脊液屏障的組合物。
[0021] (6)如上述（1)或（2)所述的組合物，其是用于將藥物遞送至腦血管內皮細胞的組 合物。
[0022] (7)如上述（1)~（6)中任一項所述的組合物，血糖值上升是通過施予葡萄糖而被 誘發的。
[0023] (8)如上述(7)所述的組合物，其中，組合物的施予與葡萄糖的施予同時進行，或或 者在施予葡萄糖之前施予組合物。
[0024] (9)如上述(1)~(8)中任一項所述的組合物，組合物被輸液施予至靜脈內，輸液施 予持續10分鐘W上。
[0025] (10)如上述（1)及(3)~(9)中任一項所述的組合物，其中，載體為囊泡，形成囊泡 的高分子中的10~40摩爾％經61^1'1配體修飾。
[0026] (11)如上述（1)及(3)~(9)中任一項所述的組合物，其中，載體為囊泡，形成囊泡 的高分子中的40~100摩爾％經61^1'1配體修飾。
[0027] (12)如上述（1)及(3)~（11)中任一項所述的組合物，其中，載體中包封待遞送的 藥物。
[00%] (13)如上述(1)及(3)~（12)中任一項所述的組合物，其中，載體為囊泡，囊泡為直 徑400nmW下的囊泡。
[0029] (14)如上述(2)~(9)中任一項所述的組合物，其中，偶聯物是藥物與GLUT1配體經 由連接體連接而成的。
[0030] (15)如上述(1)~（14)中任一項所述的組合物，其中，GLUT1配體為葡萄糖。
[0031 ] (16)如上述（1)~（15)中任一項所述的組合物，其中，藥物為選自生理活性物質、 抗體、核酸、生物相容性巧光色素、及造影劑中的至少巧巾藥物。
[0032] (17)、一種偶聯物，其是1分子化UT1配體與1分子高分子的偶聯物，偶聯物能夠W 使得GLUT1配體露出囊泡表面的方式形成囊泡。
[0033] (18)如上述(17)所述的偶聯物，其中，GLUT1配體為葡萄糖。
[0034] (19)如上述(18)所述的偶聯物，其中，葡萄糖經由其6號碳原子與高分子偶聯。
[0035] (20)如上述(19)所述的偶聯物或其藥學上允許的鹽，所述偶聯物由下述式(I)、下 述式(II)、下述式(III)或者下述式(XVI)表示：
[0043] {式中，山6為5~20,000的整數，mi6為2~5,000的整數。}。
[0044] (21)-種囊泡，其是含有上述(17)~(20)中任一項所述的偶聯物而成的藥物遞送 用囊泡，
[0045] 所述偶聯物占形成囊泡的全部高分子中的10~40摩爾％。
[0046] (22)-種囊泡，其是含有上述(17)~(20)中任一項所述的偶聯物而成的藥物遞送 用囊泡，
[0047] 所述偶聯物占形成囊泡的全部高分子中的40~100摩爾％。
[004引 （23)GLUT1配體的用于制造上述（1)~（16)中任一項所述的組合物、或上述(21)或 者(22)所述的囊泡的用途。
【附圖說明】
[0049] 圖1表示外表面被葡萄糖修飾而得的聚離子復合型膠束(PK膠束)與其制備方法。
[0050] 圖2表示實施例1中得到的Glc(6)-切5-PIC膠束的粒徑分布的動態光散射測定 (化S)的結果和利用透射電子顯微鏡(TEM)獲得的粒子圖像。此處，Glc(6)表示經由葡萄糖 的6號碳與形成膠束的高分子結合。
[0051 ]圖3是表示實施例1中得到的Glc(6)-切5-PIC膠束向腦中的選擇性的且有效的 蓄積的圖。
[0052] 圖4是表示使葡萄糖經由其3號或6號碳與高分子結合而得的膠束向腦中的蓄積的 圖。
[0053] 圖5是表示膠束被攝入到腦中時的腦實質部的巧光顯微鏡圖像（圖5A)及血糖值和 向腦中的攝入量的推移（圖5B)的圖。
[0054] 圖6是表示直徑為1 OOnm的PI Csome向腦中的蓄積的圖。
[0055] 圖7表示用葡萄糖修飾外表面而得的S i RNA膠束向腦中的蓄積。圖7 A表示S i RNA膠 束與其制備方法，圖7B表示向腦中的蓄積量的推移。
[0056] 圖8表示siRNA膠束向腦細胞內的蓄積的巧光顯微鏡圖像。
[0057] 圖9是表示偶聯有1分子葡萄糖的高分子向腦中的蓄積的圖。
[0058] 圖10是表示經由連接體連接有葡萄糖的IgG抗體向腦中的蓄積的圖。G-IgG表示 連接有葡萄糖的IgG。
[0059] 圖11是表示在腹腔內（i.p.)施予葡萄糖30分鐘后，靜脈內（i.v.)施予Glc(6)- C巧一PI卻交束時的腦實質的巧光強度變化的圖。
[0060] 圖12是表示Glc(6)-c巧一PK膠束的一部分可W在腦血管內皮細胞中蓄積的圖。
[0061] 圖13是表示小鼠大腦皮質中的靜脈施予后的PK膠束的偏在的圖。
[0062] 圖14是表示小鼠大腦皮質的切片中的靜脈施予后的PK膠束的偏在的圖。
[0063] 圖15是表示小鼠大腦皮質中的靜脈施予后的PK膠束的經時偏在變化的圖。
【具體實施方式】
[0064] 本發明中，所謂"藥物運送體"，是指用于藥物遞送的載體，可W舉出可W包封藥物 的微粒，例如，囊泡、樹枝狀大分子(den化imer )、水凝膠及納米球等。藥物轉運體一般具有 直徑為1 Onm~400nm的大小。
[0065] 本說明書中，所謂"囊泡"，是指膠束、中空微粒。囊泡優選具有生物相容性的外殼， 其外表面經GLUT1配體修飾。由此，囊泡能夠與GLUT1相互作用。
[0066] 本說明書中，所謂"膠束"，是指由1層分子膜形成的囊泡。作為膠束，可W舉出由表 面活性劑等兩親性分子形成的膠束、及由聚離子復合物形成的膠束(PIC膠束）。對于膠束而 言，已知從血中滯留時間的觀點考慮，優選用聚乙二醇修飾其外表面。
[0067] 本說明書中，所謂"脂質體"，是指由2層分子膜形成的囊泡。分子膜通常為由憐脂 形成的雙層膜。
[0068] 本說明書中，所謂"聚離子復合型聚合物囊泡"（W下也稱為"PICsome")，是指由聚 離子復合物形成的中空的微粒。對于PICsome而言，已知從血中滯留時間的觀點考慮，優選 用聚乙二醇修飾其外表面。
[0069] 本說明書中，所謂"聚離子復合物"（W下也稱為"PIC")，是指通過W下方式形成的 離子層:在水溶液中將PEG與陰離子性嵌段的共聚物和PEG與陽離子性嵌段的共聚物W中和 電荷的方式混合時，在兩嵌段共聚物的陽離子性嵌段與陰離子性嵌段之間形成離子層。使 PEG與上述荷電性鏈結合的意義是，抑制聚離子復合物凝集并沉淀，W及，由此使聚離子復 合物形成粒徑為數十nm的具有單分散核一殼結構的納米微粒。此時，已知由于PEG覆蓋納米 微粒的外殼(殼），因此，從生物相容性高、延長血中滯留時間的方面考慮是合適的。另外，已 經發現在聚離子復合物形成過程中，荷電性嵌段共聚物之一可W不需要PEG部分，而取代為 均聚物、表面活性劑、核酸及/或酶。并且，在聚離子復合物形成過程中，可W是陰離子性聚 合物及陽離子性聚合物中的至少1種與PEG形成共聚物，也可W是上述兩者與PEG形成共聚 物。另外，已知如果增加 PEG含量，貝化1C膠束容易被形成，如果減少PEG含量，貝化ICsome容易 被形成。作為廣泛用于聚離子復合物的制造的陰離子性聚合物或嵌段，例如，可W舉出聚谷 氨酸、聚天冬氨酸及核酸（例如，DNA、mRNA及SiRNA)，作為陽離子性聚合物或嵌段，例如，可 W舉出聚賴氨酸及聚（5-氨基戊基天冬氨酸）。此處，所謂mRNA，是指用于通過翻譯進行蛋 白質合成的信使RNA，所謂siRNA，是指可W誘導RNA干擾(RNAi)的雙鏈RNA(核酸）DsiRNA不 受特別限定，是由20~30bp組成的雙鏈RNA，優選為21~23bp、2化p、27bp，是具有與祀基因 的序列相同的序列的雙鏈RNA。
[0070] 本說明書中，所謂"藥物遞送用"，是指具有生物相容性、W及能夠將藥物包封于囊 泡內。本說明書中，所謂"藥物遞送用"，有時指利用了使藥物的血中滯留時間較之未包封藥 物的血中滯留時間而言延長的作用的用途。
[0071] 本說明書中，所謂"誘發低血糖"，是指使對象的血糖值較之如果未實施相應處置 而應呈現的血糖而言進一步降低。作為誘發低血糖的方法，可W舉出糖尿病藥的施予等。例 如，誘發低血糖時，只要達到誘發低血糖運一目的，例如也可W允許攝取其他藥物、或飲用 水等飲料。誘發低血糖也可W伴有實質上不影響血糖的其它處置。
[0072] 本說明書中，所謂"使之禁食"，是指使對象禁食，例如，使之禁食3小時W上、4小時 W上、5小時W上、6小時W上、7小時W上、8小時W上、9小時W上、10小時W上、11小時W上、 12小時W上、13小時W上、14小時W上、15小時W上、16小時W上、17小時W上、18小時W上、 19小時W上、20小時W上、21小時W上、22小時W上、23小時W上、24小時W上、25小時W上、 26小時W上、27小時W上、28小時W上、29小時W上、30小時W上、31小時W上、32小時W上、 33小時W上、34小時W上、35小時W上、36小時W上、37小時W上、38小時W上、39小時W上、 40小時W上、41小時W上、42小時W上、43小時W上、44小時W上、45小時W上、46小時W上、 47小時W上或48小時W上。通過禁食，引起對象的低血糖。禁食時間由醫生等根據對象的健 康狀態決定，例如，優選采用對象達到空腹時血糖水平的時間W上的時間。對于禁食時間而 言，例如，可W是化UT1在腦血管內皮細胞的血管內表面的表達上升或達到平穩狀態W上的 時間。對于禁食時間而言，例如，可W是上述時間中的12小時W上、24小時W上或36小時W 上。另外，禁食可W伴有實質上不影響血糖值、GLUT1在血管內表面的表達的其他處置。
[0073] 本說明書中，所謂"誘發血糖值上升"，是指使已誘發低血糖的對象、或使之維持低 血糖狀態的對象的血糖值上升。可w利用本領域技術人員已知的各種方法使血糖值上升， 例如，誘發血糖值上升的物質的施予，例如，葡萄糖、果糖(fructose)、半乳糖等誘發血糖值 上升的單糖的施予、麥芽糖等誘發血糖值上升的多糖的施予、或者淀粉等誘發血糖值上升 的碳水化合物的攝取、或通過進食使血糖上升。
[0074] 本說明書中，所謂"血糖操作"，是指針對對象誘發低血糖，之后，使血糖值上升。在 針對對象誘發低血糖之后，可W將對象的血糖值維持為低血糖。將對象的血糖值維持為低 血糖的時間可W采用例如0小時W上、1小時W上、2小時W上、3小時W上、4小時W上、5小時 W上、6小時W上、7小時W上、8小時W上、9小時W上、10小時W上、11小時W上、12小時W 上、13小時W上、14小時W上、15小時W上、16小時W上、17小時W上、18小時W上、19小時W 上、20小時W上、21小時W上、22小時W上、23小時W上、24小時W上、25小時W上、26小時W 上、27小時W上、28小時W上、29小時W上、30小時W上、31小時W上、32小時W上、33小時W 上、34小時W上、35小時W上、36小時W上、37小時W上、38小時W上、39小時W上、40小時W 上、41小時W上、42小時W上、43小時W上、44小時W上、45小時W上、46小時W上、47小時W 上、48小時W上。之后，可W使血糖值上升。本說明書中，所謂"維持血糖"，只要達到維持對 象的低血糖運一目的，例如也可W允許攝取其他藥物、或飲用水等飲料。誘發低血糖也可W 伴有實質上不影響血糖的其他處置。
[0075] 本說明書中，所謂"對象"，是指包括人在內的哺乳動物。對象可W是健康的對象， 也可W是罹患某種疾病的對象。此處作為疾病，可W舉出腦神經疾病，例如，精神病性障礙、 抑郁癥、情緒障礙、焦慮、睡眠障礙、癡呆癥及物質相關障礙。另外，作為癡呆癥，不受特別限 定，可W舉出阿茲海默癥及克羅伊茨費爾特一雅各布病(化eutzfeWt-Jakob)。
[0076] 本說明書中，所謂"血腦屏障"，是指存在于血液循環與腦之間、對于物質的透過持 有選擇性的功能性障壁。可W認為，血腦屏障的實體是腦血管內皮細胞等。關于血腦屏障的 物質透過性，存在許多不明之處，但已知葡萄糖、酒精及氧容易通過血腦屏障，脂溶性物質、 小分子(例如，分子量小于500)較之水溶性分子、高分子(例如，分子量為500W上)而言有容 易通過的趨勢。多種腦疾病治療藥、腦診斷劑無法通過血腦屏障，運一現象成為腦疾病的治 療、腦的分析等的巨大障礙。本說明書中，所謂"血神經屏障"，是指存在于血液循環與末梢 神經之間、對于物質的透過持有選擇性的功能性障壁。本說明書中，所謂"血腦脊液屏障"， 是指存在于血液循環與腦脊髓液之間、對于物質的透過持有選擇性的功能性障壁。本說明 書中，所謂"血視網膜屏障"，是指存在于血液循環與視網膜組織之間、對于物質的透過持有 選擇性的功能性障壁。可W認為，血神經屏障、血腦脊液屏障及血視網膜屏障的實體是存在 于各屏障的血管內皮細胞等，其功能與血腦屏障相同。
[0077] 本說明書中，所謂"化UT1配體"，是指與化UT1特異性結合的物質。作為化UT1配體， 已知各種配體，不受特別限定，例如，可W舉出葡萄糖及己糖等分子，GLUT1配體均可W在本 發明中代替葡萄糖用于載體或偶聯物的制備。對于化UT1配體而言，優選相對于化UT1具有 與葡萄糖等同或其W上的萊和性。已知2 -N-4 -（ 1一疊氮基一2,2,2 -Ξ氣乙基）苯甲酯 基一 1,3 -雙(D -甘露糖一4 -基氧基）一2 -丙胺(ATB - BMPA)、6_ (N- (7 -硝基苯基一 2 -氧雜_ 1,3 -二挫一4 -基）氨基）一2 -脫氧葡萄糖（6 - NBDG)、4,6 - 0 -亞乙基一α - D-葡萄糖、2-脫氧一D-葡萄糖及3-0-甲基葡萄糖也與化UT1結合，運些分子也可W作 為GLUT1配體而用于本發明。
[0078] 根據本發明，發現用葡萄糖修飾其外表面而得的上述載體僅通過施予至對象即顯 示出向腦中的蓄積。因此，本發明的施予計劃中，可W不禁食或者不誘發低血糖，及/或可W 不誘發血糖值上升。另外，本
【申請人】的發明人發現，將用葡萄糖W使得葡萄糖露出表面的方 式修飾其外表面而得的載體(具體而言，膠束或聚離子復合型聚合物囊泡(PICsome)等囊 泡）按照某施予計劃施予時，運些載體顯著跨越血腦屏障并被遞送至腦內（腦實質部）。因 此，本發明的施予計劃優選包括將該組合物施予至使之禁食或已誘發低血糖的對象，更優 選的是，本發明的施予計劃包括:將該組合物施予至使之禁食或已誘發低血糖的對象，并且 誘發該對象的血糖值上升。本發明的施予計劃中，該組合物可W與該對象的血糖值上升的 誘發同時地、連續地或逐次地被施予至該對象。對于施予計劃而言，對該對象的組合物的施 予與該對象的血糖值上升的誘發之間可W有間隔，也可W沒有間隔。與該對象的血糖值上 升的誘發同時施予該組合物時，所述組合物可與引起血糖值上升的誘發的藥物混合的 形態施予該對象，也可與引起該對象的血糖值上升的誘發的藥物不同的形態進行施 予。另外，該組合物與該對象的血糖值上升的誘發連續或逐次地被施予至該對象時，該組合 物可W在該對象的血糖值上升的誘發之前被施予至該對象，也可W在之后被施予，優選的 是，該組合物可W在該對象的血糖值上升的誘發之前施予至該對象。在對于該對象施予該 組合物之前誘發該對象的血糖值上升時，優選在誘發該對象的血糖值上升后1小時W內、45 分鐘W內、30分鐘W內、15分鐘W內或10分鐘W內將該組合物施予至該對象。另外，在對于 該對象施予該組合物之后誘發該對象的血糖值上升時，優選在將該組合物施予至該對象后 6小時W內、4小時W內、2小時W內、1小時W內、45分鐘W內、30分鐘W內、15分鐘W內或10 分鐘W內誘發該對象的血糖值上升。上述的施予計劃的循環可W實施2次W上。葡萄糖施予 與樣品施予的前后關系可W根據使其通過血腦屏障的時機決定。
[0079] 大腦皮質由6層構成，自表層起，存在分子層(第1層）、外顆粒層(第2層）、外錐體細 胞層(第3層）、內顆粒層(第4層）、內錐體細胞層(第5層)及多形細胞層(第6層），根據本發 明，可W在上述任一層中將載體遞送至腦實質。運些層中，特別地，在外錐體細胞層(第3層） 及內顆粒層(第4層）中，本發明的載體的遞送顯著有效。
[0080] 本發明中，像膠束或PICsome運樣的巨大載體(直徑為約40nm~lOOnm)可W被極其 高效地遞送至腦也是非常出乎意料的。即使是運樣的囊泡也能夠被遞送至腦運一事實是 指，通過將用葡萄糖修飾而得的各種巨大分子及載體按照上述施予計劃施予，可W使運些 巨大分子及載體有效地通過血腦屏障。
[0081] W下，對本發明的葡萄糖的血腦屏障的作用進行說明。可W認為，本發明的葡萄糖 的作用是與在腦的血管內皮細胞的血管內表面表達的葡萄糖轉運體即GLUT1結合。因此，本 發明中，GLUT1配體也可W起到與葡萄糖相同的作用。另外，本發明中，GLUT1配體可露 出載體外表面的方式與載體結合，從而可W與在腦的血管內皮細胞的血管內表面表達的葡 萄糖轉運體結合。因此，可W認為，如果是可W對化UT1呈遞化UT1配體的分子、復合體及囊 泡等，則可W與化UT1結合，結合后，在化UT1利用葡萄糖而被攝入細胞內時，被一同攝入血 管內皮細胞內。另外，如果被血管內皮細胞攝入，則被攝入的囊泡通過血腦屏障并移動至腦 實質。如果修飾囊泡的葡萄糖分子多，則到達腦實質的囊泡的比例略微降低。運一現象暗 示，如果修飾囊泡的葡萄糖分子多，則囊泡通過內吞作用被細胞攝入，并直接朝向腦實質通 過細胞，及，囊泡從血管內皮細胞向腦實質移動時，囊泡與血管內皮細胞的分離效率下降。 換言之，通過內吞作用而被細胞攝入的囊泡的一部分沒有與腦血管內皮細胞分離，而是在 腦血管內皮細胞中蓄積。因此，本發明的組合物或偶聯物可W用于遞送至腦血管內皮細胞。 另外，本發明的葡萄糖的作用在血神經屏障、血視網膜屏障及血腦脊液屏障中也相同。特別 地，在血神經屏障、血視網膜屏障及血腦脊液屏障中，GLUT1也在低血糖時的血管內皮細胞 中表達。因此，本發明的組合物或偶聯物可W用于使藥物通過血神經屏障、血視網膜屏障及 血腦脊液屏障。本發明的組合物或偶聯物還可W用于遞送至存在于血神經屏障、血視網膜 屏障及血腦脊液屏障的血管內皮細胞中。
[0082] 本
【發明人】還發現，較之使用經由葡萄糖的3號碳偶聯有葡萄糖的高分子而得到的 膠束，使用經由葡萄糖的6號碳偶聯有葡萄糖的高分子(例如，參見圖1(a))而得到的膠束向 腦中的攝入效率更高。已知化UT1與葡萄糖的結合和1號、3號及4號碳原子的取代基即0H基 顯著相關。經由不被用于與化UT1的結合的6號碳原子修飾高分子而得的膠束更容易在腦中 高效地蓄積，運一事實掲示了化UT1與腦蓄積的關系。另外，經由被認為是對于與化UT1的識 別而言重要的3號碳原子修飾高分子而得的膠束也顯示出向腦中的蓄積。運一事實表明，經 由與和化UT1的結合相關度低的2號碳原子修飾高分子而得的膠束引發了更多膠束向腦中 的蓄積。因此，葡萄糖可W經由其1號、3號及4號碳原子中的任1個碳原子、優選經由其2號碳 或6號碳原子與高分子、藥物偶聯。在一種實施方式中，偶聯的葡萄糖的至少1號、3號及4號 碳的0H基為還原末端。運樣，本發明中，GLUT1配體可不喪失其作為配體的功能的方式 修飾其他分子，本領域技術人員可W基于與化UT1的結合形式容易地決定與藥物的結合位 置。本說明書中，有時將經由η號碳原子結合的葡萄糖記為"Glc(n)"{其中，η是1~4及6中的 任一個整數}。例如，本說明書中，有時將經由6號碳原子結合的葡萄糖記為"Glc(6)"，將經 由2號碳原子結合的葡萄糖記為"GlcUr，將經由3號碳原子結合的葡萄糖記為"Glc(3)"。
[0083] 本發明中，也可W使用與GLUT1結合的葡萄糖的衍生物代替葡萄糖。
[0084] 本發明中，作為可W用化UT1配體修飾外表面的載體，可W舉出藥物遞送用膠束、 脂質體及PICsome等囊泡、W及樹枝狀大分子、納米球及水凝膠。本發明中，使用藥物遞送用 載體的優點在于，例如，將藥物包封于載體內部，提高在祀部位的藥物濃度，或者，減輕在祀 部位W外的由藥物導致的副作用。本發明中使用的載體不受特別限定，例如，其直徑為 400nmW下、200nmW下、150nmW下、lOOnmW下或80nmW下，例站I，為20nmW上、30nmW上或 40nm W上。本發明中使用的載體具有例如30nm~150nm、或、例如30nm~1 OOnm的直徑。
[0085] 作為本發明中使用的膠束，可W舉出藥物遞送用膠束。作為藥物遞送用膠束，已知 由嵌段共聚物形成的膠束。形成膠束的嵌段共聚物不受特別限定，為PIC膠束時，可W采用 荷電性聚合物嵌段(例如，聚陰離子嵌段或聚陽離子嵌段)與生物相容性嵌段(例如，聚乙二 醇嵌段)的共聚物或其藥學上允許的鹽。另外，作為嵌段共聚物，優選使用生物降解性的嵌 段共聚物，作為運樣的共聚物，已知各種共聚物，原理上均可W使用。例如，作為生物相容性 高、為生物降解性的嵌段共聚物，例如，可W使用聚乙二醇一聚天冬氨酸、聚乙二醇一聚谷 氨酸、及聚乙二醇一聚（巧一氨基戊基）一天冬氨酸)嵌段共聚物等。作為聚離子復合型膠束 (PIC膠束），已知具有聚離子復合物層的膠束，所述聚離子復合物層通過聚陰離子和聚陽離 子的靜電相互作用而形成。從在膠束內部使疏水性部分之間穩定化的觀點考慮，可W使各 荷電性嵌段在與形成外殼的PEG不同的末端與膽醬締基等疏水性部分連接(例如，參見實施 例的siRNA膠束）。用巧光色素對嵌段共聚物的標記可W通過用巧光色素修飾嵌段共聚物的 與聚乙二醇側相反的末端來進行（例如，圖1(a)的化合物的N出末端KPIC膠束中，通過使 GLUT 1配體連接至PEG側的末端，GLUT 1配體露出至膠束的外表面。
[0086] 作為本發明中使用的聚離子復合型聚合物囊泡，可W舉出藥物遞送用PICsome。作 為藥物遞送用PICsome，已知由嵌段共聚物形成的PICsome。作為形成PICsome的嵌段共聚 物，可W舉出PEG嵌段與聚陽離子嵌段的嵌段共聚物及均聚陰離子，或PEG嵌段與聚陰離子 嵌段的嵌段共聚物及均聚陽離子。作為嵌段共聚物，優選使用為生物降解性的嵌段共聚物， 作為運樣的共聚物，已知各種共聚物，原理上均可W使用。例如，作為生物相容性高、為生物 降解性的嵌段共聚物，例如，可W使用聚(天冬氨酸一四亞乙基五胺(Asp-TEP))嵌段共聚 物、及聚乙二醇一聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸)嵌段共聚物。PICsome中，通過使化UT1配 體連接至PEG側的末端，GLUT1配體露出至PICsome的外表面。
[0087] 根據本發明，分別提供下述式(I)~(XV)表示的化合物或其鹽。鹽優選為藥學上允 許的鹽。
[00則 Glc(6)-PEG-聚天冬氨酸
[0089]
[0090] {式中，山及虹分別為5~20,000。}
[0091] Glc(6)-PEG-聚谷氨酸
[0092]
[0093] {式中，Π 2及m2分別為5~20,000。}
[0094] Glc(6)-PEG-聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸)
[0095]
[0096] {式中，Μ及郵分別為5~20,000。}
[0097] PEG-聚天冬氨酸
[009引
[0099] {式中，114及1114分別為5~20,000。}
[0…0] PEG-聚谷氨酸
[0101]
[0102] {式中，η日及郵分別為5~20,000。}
[。…引 PEG-聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸)
[0104]
[010引 {式中，郵及郵分別為5~20,000。} 陶]聚天冬氨酸
[0107]
[010 引{式中，1117為5~20,000。}
[0…9] 聚谷氨酸
[0110]
[0111] {式中，郵為5~20,000。}
[0112] 聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸)
[0113]
[0114] {式中，1119為5~20,000。}
[0115] Glc(3)-PEG-聚天冬氨酸
[0116]
[0117] {式中，山〇及虹〇分別為5~20,000。}
[011引 Glc(3)-PEG-聚谷氨酸
[0119]
[0120] {式中，山成虹汾別為5~20,000。}
[0。。Glc(3)-PEG-聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸)
[0122]
[012；3] {式中，山2及虹2分別為5~20,000。}
[0124] Glc(2)-PEG-聚天冬氨酸
[0125]
[0126] {式中，山3及虹3分別為5~20,000。}
[0127] Glc(2)-PEG-聚谷氨酸
[012 引
[0129] {式中，山4及虹4分別為5~20，000。}
[0。0] Glc(2)-PEG-聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸)
[0131]
[om] {式中，山日及虹日分別為5~20,000。}
[0133]上述式（I)~式(XV)的化合物或其鹽可W用于形成其外表面被葡萄糖修飾的PIC 膠束或PICsome。為了使上述式（I)~式(XV)的化合物的鹽形成聚離子復合物，ηι、η2、η3、Π 4、 115、]16、117、118、119、111日、]111、]112、山3、1114及111日各自獨立并可^為5~20,000的整數，優選為10~5, 000的整數，較優選為40~500的整數，更優選為5~1,000的整數，進一步優選為10~200的 整數。另外，1111、1]12、1113、1114、111日、1]16、1117、郵、1119、1111日、1]111、1]112、11113、11114及1111日各自獨立并可^為2~20, 000的整數，優選為2~5，000的整數，較優選為40~500的整數，更優選為5~1，000的整數， 進一步優選為10~200的整數。鹽優選為藥學上允許的鹽。
[0134] 在一種實施方式中，PIC膠束可W通過將式(I)的化合物或者其鹽、式(X)的化合物 或者其鹽或式(XIII)的化合物或者其鹽、W及式（IV)的化合物或者其鹽、W及式(VI)的化 合物或者其鹽。在PIC膠束的更具體的實施方式中，上述式中111、]11日、]113、114及116為44，1]11、1]110、 mi3、及IM為80，m6為72。鹽優選為藥學上允許的鹽。
[0135] 在一種實施方式中，PICsome可W通過將W下成分混合而得到：式（I)的化合物或 者其鹽、式(X)的化合物或者其鹽或式(XIII)的化合物或者其鹽、W及式（IV)的化合物或者 其鹽、W及式（IX)的化合物或者其鹽。在PICsome的更具體的實施方式中，上述式中m、m〇、 山3、114及119為44，1]11、1]11日、1]113、及1]14為80，1]19為72。鹽優選為藥學上允許的鹽。
[0136] 在一種實施方式中，siRNA膠束可W通過將W下成分混合而得到:偶聯有膽固醇的 siRNA、W及偶聯有式(XVI)所示的膽固醇的Glc(6)-PEG-聚(Asp-TEP)或其鹽。鹽優選為 藥學上允許的鹽。偶聯有膽固醇的siRNA不受特別限定，是在RNA鏈的5'末端或3'末端偶聯 有膽固醇的siRNA，該siRNA可W由本領域技術人員W合適的方式合成，或可W通過定制合 成購買獲得，并在本發明中使用。SiRNA不受特別限定，優選可W使膽固醇偶聯至有義鏈的 3 '末端或反義鏈的5 '末端或者3 '末端。
[0。7] Glc(6)_PEG_ 聚(Asp-TEP)-Chol [013引【化20】
[0139]
[0140] {式中，山6及虹6分別為5~20，000。}
[0141 ] 1116為5~20，000的整數，優選為10~5，000的整數，較優選為40~500的整數，更優 選為5~1，000的整數。mi6為2~20,000的整數，優選為2~5,000的整數，較優選為40~500的 整數，更優選為5~1，000的整數，進一步優選為10~200的整數。SiRNA膠束的更具體的實施 方式中，上述中ni6為440，mi6為60。
[0142] 作為本發明中使用的脂質體，不受特別限定，可W舉出由憐脂，例如，二肉豆違酷 憐脂酷膽堿(DMPC)形成的脂質體。一直W來已知多種脂質體，本領域技術人員可合適 的方式進行制備。本領域技術人員可W使藥物W合適的方式包封于脂質體內。
[0143] 利用化UT1配體的囊泡的修飾不受特別限定，例如，可W在利用化UT1配體修飾形 成囊泡的高分子后形成囊泡而進行。從露出囊泡的外表面的觀點考慮，高分子的修飾部位 可W設為形成囊泡時位于外表面的部位。被運樣的GLUTl配體修飾的高分子可W由本領域 技術人員適當制備。作為一例，W下對被葡萄糖修飾的高分子(特別地，Glc(6)-PEG-聚 (陰離子)嵌段共聚物或Glc(6)-PEG-聚（陽離子)嵌段共聚物）的制備方法的例子進行說 明。例如，Glc(6)-PEG-聚（陰離子)嵌段共聚物或Glc(6)-PEG-聚（陽離子)嵌段共聚物 可W在保護葡萄糖的6號W外的碳上的徑基的基礎上，使葡萄糖與嵌段共聚物聚合而得到。
[0144] 合成路徑1A列舉了式(I)的化合物的合成路徑，其中，山為44,虹為80。
[0145] 合成路徑1A
[0146]
[0147] 合成路徑ΙΑ中，EO表不環氧乙燒;Κ-化地表不糞化鐘（Potassium naphthalene); TEA表不Ξ乙胺;MsCl表不甲橫酷氯;NHsaq.表不氨水;NCA -BLA表不L -天冬氨酸一β -節 醋一Ν-簇酸酢。
[0148] W下，簡單地說明合成路徑1Α。對于葡萄糖的保護基的導入而言，例如，利用1，2 - 0-異亞丙基5,6-0-亞芐基一a-D-巧喃葡萄糖下也稱為"BIG")達成。例如，制造 PIC 膠束或PICsome時，使環氧乙燒聚合至BIG,合成BIG-PEG-OH。對于BIG而言，例如，可W通 過用芐基保護1，2-0 -異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖（W下也稱為"MIG")的3號和5號碳的 取代基即0H基而得到。具體而言，BIG可W通過使MIG與苯甲醒反應，并用乙酸乙醋提取而得 到。接著，從使PEG的分子量統一為一定數值的觀點考慮，優選W下操作:在聚合反應前，在 反應容器內用苯使BIG-OH冷凍干燥，之后，使其減壓干燥(例如，于70°C過夜減壓干燥），使 BIG-0啡巧著于容器壁面。另外，聚合度可W通過添加的環氧乙燒的量進行適當調節。聚合 后，將BIG-陽G-OH的0H基進行氨基化得到BIG-陽G-N此，進一步地，通過使W下成分聚 合至BIG-陽G-N出的畑盛，可W得到BIG-陽G-聚（陰離子)或BIG-陽G-聚（陽離子）：聚 陽離子或聚陰離子或者其被保護的前體(例如，作為聚天冬氨酸的被保護的單體的L-天冬 氨酸一β-節醋一N-簇酸酢(BLA-NCA)或者作為聚谷氨酸的被保護的單體的L-谷氨酸一 丫 一節醋一Ν-簇酸酢(BLG-NCA))。聚合度可W通過聚陽離子或聚陰離子或者其被保護的 前體的量進行適當調節。最后，將葡萄糖及陰離子或陽離子的保護基脫保護，可W得到葡萄 糖一PEG-聚（陰離子)或葡萄糖一PEG-聚（陽離子）。結合有葡萄糖的共聚物可W用于PIC 膠束或PICsome的制備。具體而言，如果在水溶液中W中和電荷的比率將具有聚陽離子嵌段 的聚合物和具有聚陰離子嵌段的聚合物混合，貝化1C膠束或PICsome自發地形成。通過上述 操作，可W得到PIC膠束或PICsome，其中，聚離子復合物被生物相容性部分覆蓋，所述生物 相容性部分被葡萄糖修飾。
[0149] 同樣地，Glc(3)-陽G-聚（陰離子)及Glc(3)-陽G-聚（陰離子何W通過用例如 1，2,5,6 -二一0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖(DIG)代替上述中的BIG作為起始物質而 合成，其他部分與上述完全相同（參見合成路徑1B)。另外，同樣地，Glc(2)-PEG-聚（陰離 子)及Glc(2)-PEG-聚（陰離子)也可W由本領域技術人員適當合成。
[0150] 合成路徑1B中，列舉了式(X)的化合物的合成路徑，其中，m為44，mi為80。對于合成 路徑1B而言，除了用DIG代替BIG作為起始物質W外，與合成路徑1A相同。
[0151] 合成路徑1B
[0152]
[0153] 合成路徑IB中，EO表示環氧乙燒;Κ-化地表示糞化鐘；TEA表示Ξ乙胺;MsCl表示 甲橫酷氯;NHsaq.表示氨水;NCA-BLA表示L-天冬氨酸一β-節醋一N-簇酸酢。
[0154] 根據本發明，提供式(I)表示的偶聯物或其藥學上允許的鹽的制造方法，其包括W 下步驟：
[01W] (i)使式（la)表示的的1,2-0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖與苯甲醒反應，得 到式(扣)表示的1,2-0-異亞丙基5,6-0-亞芐基一a-D-巧喃葡萄糖(BIG);
[0156] (ii)使式（Ib)表示的BIG與環氧乙燒反應，得到式（Ic)表示的BIG-聚乙二醇 (BIG-PEG-OH)；
[0157] (iii)將式（Ic)表示的BIG-PEG-OH進行氨基化，得到式（Id)表示的BIG-陽G- 畑2;
[015引（iv)使L-天冬氨酸一0-節醋一N-簇酸酢與式（Id)表示的BIG-陽G-N此聚合， 之后，將保護基脫保護。
[0159]
[0160] {式中，山及虹分別為5~20,000。}
[0165] 根據本發明，提供式（II)表示的偶聯物或其藥學上允許的鹽的制造方法，其包括 W下步驟：
[0166] (i)使式（la)表示的1,2-0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖與苯甲醒反應，得到 式(扣)表不的1,2-〇 -異亞丙基5,6-〇 -亞芐基一α-D -巧喃葡萄糖(BIG);
[0167] (ii)使式（Ib)表示的BIG與環氧乙燒反應，得到式（Ic)表示的BIG-聚乙二醇 (BIG-PEG-OH)；
[016引 （iii)將式（Ic)表示的BIG-PEG-OH進行氨基化，得到式（Id)表示的BIG-陽G- 畑2;
[0169] (iv)使BIG-陽G-N此與L-谷氨酸一丫 一節醋一N-簇酸酢反應，之后，將保護基 脫保護。
[0173] {式中，山7與Π 2相同。}
[0174]
[0175] 根據本發明，提供式(III)表示的偶聯物或其藥學上允許的鹽的制造方法，其包括 W下步驟：
[0176] (i)使式（la)表示的1,2-0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖與苯甲醒反應，得到 式(扣)表示的1,2-0-異亞丙基5,6-0-亞芐基一a-D-巧喃葡萄糖(BIG);
[0177] (ii)使式（Ib)表示的BIG與環氧乙燒反應，得到式（Ic)表示的BIG-聚乙二醇 (BIG-PEG-OH)；
[017引（iii)將式（Ic)表示的BIG-PEG-OH進行氨基化，得到式（Id)表示的BIG-陽G- 畑2;
[0179] (iv)使式(Id)表示的BIG-PEG-N出與L-天冬氨酸_β_節醋一N-簇酸酢聚合；
[0180] (V)使得到的化合物與1，5 -二氨基戊燒(DAP)反應，之后，將保護基脫保護。
[0181]
[0182] {式中，Π3及郵分別為5~20,000。}:
[0183]

[0187] 根據本發明，提供式(X)表示的偶聯物或其藥學上允許的鹽的制造方法，其包括W 下步驟：
[0188] (i)使式(Xa)表示的1，2,5,6 -二一0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖(DIG)與環 氧乙燒反應，合成式(甜)表示的DIG-聚乙二醇(DIG-PEG-OH);
[0189] (ii)將式(Xb)表示的DIG-陽G-OH的0H基取代為氨基，得到式(Xc)表示的DIG- 陽G-N出；
[0190] (iii)使L-天冬氨酸一β-節醋一N-簇酸酢聚合到DIG-陽G-N出的氨基，之后， 將保護基脫保護。
[0191]
[01W] {式中，山〇及虹0分別為5~20,000。}
[0193]

[0197] 根據本發明，提供式(XI)表示的偶聯物或其藥學上允許的鹽的制造方法，其包括 W下步驟：
[0198] (i)使式(Xa)表示的1，2,5,6 -二一0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖(DIG)與環 氧乙燒反應，合成式(甜)表示的DIG-聚乙二醇(DIG-PEG-OH);
[0199] 。。將式(乂6)表示的016-陽6-0哺勺細基取代為氨基，得到式^(3)表示的016- 陽G-N出；
[0200] (iii)使L-谷氨酸一丫 一節醋一N-簇酸酢與DIG-PEG-N此的氨基反應，之后， 將保護基脫保護。
[0201]
[020^ {式中，山成虹1分別為5~20,000。}
[0206] 根據本發明，提供式(XII)表示的偶聯物或其藥學上允許的鹽的制造方法，其包括 W下步驟：
[0207] (i)使式(Xa)表示的1，2,5,6 -二一0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖(DIG)與環 氧乙燒反應，合成式(甜)表示的DIG-聚乙二醇(DIG-PEG-OH);
[020引（ii)將式(Xb)表示的DIG-陽G-OH的0H基取代為氨基，得到式(Xc)表示的DIG- 陽G-N出；
[0209] (iii)使L-天冬氨酸_β_節醋一N-簇酸酢聚合至化IG-PEG-N出的氨基；
[0210] (iv)使得到的化合物與1，5 -二氨基戊燒(DAP)反應，之后，將保護基脫保護。
[0217]同樣地，Glc(2)-PEG-聚（陰離子)及Glc(2)-PEG-聚（陰離子)也可w由本領域 技術人員適當合成。Glc(2)-PEG-聚（陰離子)及Glc(2)-PEG-聚（陰離子)不限于W下， 可W將取代2號碳的0H基W外的0H基被保護的葡萄糖用作起始物質而合成，例如，將1，3,4， 6-四一0-乙酷基一β-D-化喃甘露糖用作起始化合物，利用芐基保護取代2號碳的0H基， 之后，將乙酷基堿性水解為0H基，利用甲娃烷基系化保護基(例如，TBS基)進行保護后，利用 鈕催化劑或白金催化劑和氨氣將芐基脫保護，通過光延反應使取代2號碳的0H基立體性反 轉，可W得到取代2號碳的0H基W外的0H基被保護的葡萄糖。并且，本領域技術人員可W容 易地理解，可W將該分子用于代替BIG、DIG，此夕h通過與制造 Glc(3)、Glc(6)-陽G-聚（陰 離子)及Glc(2)-PEG-聚（陰離子)相同的方法進行合成。
[0218] 根據本發明，提供式(XVI)表示的偶聯物的制造方法，其包括W下步驟：
[0219] (i)使式（la)表示的1,2-0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖與苯甲醒反應，得到 式(扣)表不的1,2-〇 -異亞丙基5,6-〇 -亞芐基一α-D -巧喃葡萄糖(BIG);
[0220] (ii)使式（Ib)表示的BIG與環氧乙燒反應，得到式（Ic)表示的BIG-聚乙二醇 (BIG-PEG-OH)；
[0221] (iii)將式（Ic)表示的BIG-PEG-OH進行氨基化，得到式（Id)表示的BIG-陽G- 畑2;
[0222] Qv)使L-天冬氨酸一β-節醋一N-簇酸酢聚合到式(Id)表示的BIG-陽G-N此， 得到 BIG-PEG-PBLA;
[0223] (V)使BIG-PEG-PBLA與4-膽醬締基氨基一4-下酸反應，得到式(XVIa)表示的 BIG-PEG-PBLA-Chol;
[0224] (vi)使BIG-PEG-PBLA-Chol與四亞乙基五胺(TEP)反應，得到式(XVIb)表示的 BIG-PEG-聚(Asp-TEP)-chol，之后，將保護基脫保護。
[0225]
[0226] {式中，山6及虹6分別為5~20,000。}
[0227]

[0231]
[0232] 囊泡可W用上述聚合物通過公知的方法形成。一般而言，囊泡可W通過攬拌W - 定濃度W上的濃度溶解有上述那樣的聚合物的溶液而得到。另外，對于基于聚離子復合物 而形成的囊泡的情況而言，可W將具有聚陽離子部分的高分子和具有聚陰離子部分的高分 子W相同比例混合而得到。將藥物包封于囊泡的方法為本領域技術人員所公知，在本發明 中也可W使用公知的方法。例如，為了將藥物包封于PIC膠束，在膠束形成后，在膠束溶液中 添加藥物即可。藥物可W通過其電荷自發地包封于PIC膠束中。另外，例如，對于PICsome的 情況而言，制備形成PICsome的高分子和藥物的混合液，攬拌混合即可將藥物包封于 PICsome。對于脂質體而言，制備形成脂質體的高分子和藥物的混合液，攬拌混合即可將藥 物包封于脂質體。也可W將聚離子復合物的陰離子性嵌段與陽離子性嵌段交聯。作為用于 該目的的交聯劑，不受特別限定，例如，可W優選使用可W使氨基與簇基縮合的1-乙基一 3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽化DC)。
[0233] 構成囊泡的高分子中的葡萄糖結合高分子的比例為10~40%時，組合物向腦實質 的遞送效率尤其高，形成囊泡的高分子中的葡萄糖結合高分子的比例可W設為10~40%， 優選為20~30%，較優選為22~28%，更優選為24~26% (例如，約25% )。另外，構成囊泡的 高分子中的葡萄糖結合分子的比例為40% W上時，組合物向腦血管內皮細胞的遞送效率尤 其高，形成囊泡的高分子中的葡萄糖結合高分子的比例可W設為40~100%，例如，40~ 60%。為了用化UT1配體修飾囊泡的外表面，可W W囊泡為對象進行化UT1配體修飾(例如， 糖基化），從控制囊泡表面上的化UT1配體修飾的比例的觀點考慮，優選事先使構成囊泡的 高分子分別與化UT1配體結合，調節與未被化UT1配體修飾的高分子的配合比，繼而使高分 子形成囊泡。
[0234] 本發明中，藥物與化UT1配體的偶聯物也可W通過本發明的血糖操作向腦遞送。可 W經由連接體使藥物與化UT1配體偶聯。連接體可W采用生物相容性的連接體，例如，可W 使用聚乙二醇。藥物可W與2分子W上的化UT1配體偶聯。2分子W上的化UT1配體優選可W 經由連接體與藥物偶聯。將2分子W上的化UT1配體經由連接體偶聯至藥物時，例如，可W用 在側鏈上結合有多個GLUT1配體的聚氨基酸(例如，聚天冬氨酸)進行偶聯。在藥物和聚氨基 酸之間，也可W經由陽G等連接體。作為在側鏈上結合有多個化UT1配體的聚氨基酸（例如， 聚天冬氨酸），例如，可W使用下述式(XIX)表示的化合物。
[0235]
[OZ36] {式中，山9為5~20,000的整數，及虹9為2~5,000的整數。}
[0237] 1119為5~20，000的整數，優選為10~5，000的整數，較優選為40~500的整數，更優 選為5~1，000的整數，進一步優選為10~200的整數。mi9為2~20,000的整數，優選為2~5， 000的整數，較優選為40~500的整數，更優選為5~1，000的整數，進一步優選為10~200的 整數。某實施方式中，山9為273，mi9為48。
[0238] PEG與結合有多個GLUT1配體的聚天冬氨酸的共聚物可W如下合成。 腳9] 合成路徑2
[0240]
[0241] DMF表示N，N'_二甲基甲酯胺，化表示芐基，EDC表示1-乙基一3-(3-二甲氨基 丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。其他簡稱與上述合成路徑相同。
[0242] W下，簡單地說明合成路徑2。作為合成路徑2的起始化合物，式(XlXa)表示的化合 物可W如W下運樣得到：
[0243]
[0244] {式中，山9為5~20,000的整數。}。
[0245] 使2-(2-?基乙氧基）四氨化喃與環氧乙燒反應，得到THP-陽G-OH。接著，用甲 橫酷氯等將ΤΗΡ-陽G-OH的OH基進行甲橫酷化。使得到的MsO-陽G-THP與疊氮化鋼反應， 得到在一個末端具有疊氮基的四氨化喃基的聚乙二醇(化一PEG-THP)。之后，將THP保護基 脫保護，得到式(XlXa)表示的一個末端帶疊氮基的3-徑丙基的聚乙二醇(化一PEG-OH)。 聚合度可W通過添加的環氧乙燒的量適當調節。
[0246] 像上述那樣操作，得到式(XlXa)表示的化合物后，將化一PEG-OH的0H基氨基化而 得到化一PEG-N此，進一步地，使L-天冬氨酸一β-節醋一N-簇酸酢（BLA-NCA)與化一 陽G-N此的Ν此基反應，得到化一陽G-PBLA。通過堿性水解將保護基脫保護，之后，在抓C的 存在下使其與保護的氨基葡萄糖即6 -氨基一6 -脫氧一1,2:3,5 -二一〇 -異亞丙基一α - D-巧喃葡萄糖(Ρ-氨基葡萄糖)反應，使氨基葡萄糖的氨基與天冬氨酸殘基的簇基之間縮 合。之后，通過將保護基脫保護，可W得到一個末端為疊氮基的聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段 共聚物(化一陽G-P(Asp))。
[0247] 6_氨基_6_脫氧_1,2:3,5_二_0_異亞丙基一α -D_巧喃葡萄糖(P -氨基 葡萄糖）可W基于例如Carbohydr.Res.19,197-210(1971)的記載制造。根據 Carbohy化.Res. 19,197-210(1971)，P-氨基葡萄糖可W通過W下的合成路徑3得到。
[024引合成路徑3
[0249]
[0250] TsCl表示甲苯橫酷氯。
[0251] W下，簡單地說明合成路徑3。首先，將1,2-0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖（1) 進行甲苯橫酷化，得到1,2-0-異亞丙基一6-0-對甲苯橫酷基一a-D-巧喃葡萄糖(2)。 接著，使得到的1,2-0-異亞丙基一6-0-對甲苯橫酷基一a-D-巧喃葡萄糖(2)與2,2 - 二甲氧基丙烷反應，得到1,2:3,5-二一0-異亞丙基一6-0-對甲苯橫酷基一a-D-巧喃 葡萄糖(3)。之后，使1,2:3,5-二一0-異亞丙基一6-0-對甲苯橫酷基一a-D-巧喃葡萄 糖(3)與鄰苯二甲酯亞胺鐘反應，得到6-脫氧一1,2:3,5-二一0-異亞丙基一6-鄰苯二 甲酯亞胺一a-D-巧喃葡萄糖(4)。使6-脫氧一1,2:3,5-二一0-異亞丙基一6-鄰苯二 甲酯亞胺一a-D-巧喃葡萄糖(4)與阱水合物反應，可W得到6-氨基一6-脫氧一1,2:3， 5-二一0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖(P-氨基葡萄糖）（5)。
[0252] 本發明中，提供式(XIX)表示的多葡萄糖聚合物(multiglucose polymer)的制造 方法，其包括w下步驟：
[0巧3] (i)將式(XlXa)表示的化一陽G-OH的0H基進行氨基化，得到式(XlXb)表示的化一 陽G-N出；
[0254] (ii)使得到的N3-PEG-N出與L-天冬氨酸一β-節醋一N-簇酸酢反應，得到式 (XIXc)表示的化一陽G-PBLA;
[0255] (iii)將得到的化一陽G-PBLA的保護基通過堿性水解脫保護；
[0巧6] (iv)使得到的化一PEG-聚天冬氨酸的簇基與6-氨基一6-脫氧一1,2:3,5- 二一0-異亞丙基一a-D-巧喃葡萄糖的氨基縮合，之后，將0H基的保護基脫保護。
[0 巧 7]
[0巧引 {式中，山9為5~20,000的整數，及虹9為2~5,000的整數。}
[0%1] {式中，Bn表示作為保護基的芐基。}
[0262]作為本發明中使用的藥物，不受特別限定，可W使用生理活性物質、抗體、核酸、生 物相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等造影劑。本發明中，可W將藥物高選擇 性地遞送至腦。因此，作為藥物，不受特別限定，例如，可W使用提高腦的生理功能的生理活 性物質、可W處置腦的疾病的生理活性物質、識別腦疾病的特征性抗原的抗體、調節腦疾病 相關基因的表達的核酸、可W將腦染色的生物相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造 影劑等造影劑。例如，使用了作為藥物提高腦的生理功能的生理活性物質、可W處置腦的疾 病的生理活性物質、識別腦疾病的特征性抗原的抗體、調節腦疾病相關基因的表達的核酸 的本發明的組合物可藥物組合物的形式提供。使用了作為藥物可W將腦染色的生物相 容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等造影劑的本發明的組合物可診斷劑的 形式提供。
[0263] 本發明的組合物或偶聯物可W直接施予對象，也可W基于本發明的施予計劃施 予。本發明的施予計劃中，優選的是，首先，使對象禁食、或誘發對象的低血糖，之后，將該組 合物施予該對象。本發明的施予計劃中，更優選的是，首先，使對象禁食、或誘發對象的低血 糖，之后，將該組合物施予至該對象及誘發該對象的血糖值上升。此處，本發明的施予計劃 中，該組合物對該對象的施予與該對象的血糖值上升的誘發同時、連續或逐次地實施。可W 認為，低血糖狀態的誘發對于使化UT1在血管內皮細胞(例如，腦血管內皮細胞)的內表面表 達有用。但是，根據本發明，對于本發明的組合物或偶聯物而言，施予對象的血糖值上升對 于運些成分向腦的遞送極其有效。根據本發明，當使之禁食、或已誘發低血糖的對象的本發 明的組合物(載體等)或偶聯物的血中濃度為一定值W上時，通過使血糖值上升，可W將本 發明的組合物(載體等)或偶聯物極其有效地遞送至腦內。另外，根據本實施例，在誘發對象 的血糖值上升后的短時間內，本發明的組合物(載體等)或偶聯物也會被遞送至該對象的腦 內。
[0264] 從將本發明的組合物(載體等)或偶聯物的血中濃度保持為一定值W上的觀點考 慮，優選將本發明的組合物或偶聯物輸液施予至對象。通過運樣操作，即使是血中滯留時間 短的組合物或偶聯物，也容易確保一定的血中濃度。例如，如果將包封血中滯留時間短的 siRNA的siRNA膠束通過輸液施予至對象，則效果容易提高。輸液施予可W優選實施10分鐘 W上、15分鐘W上、30分鐘W上、45分鐘W上、60分鐘W上、90分鐘W上、或2小時W上。輸液 施予優選W-定的輸液速度進行。例如，如果使用精密施予累，則可W按照一定的輸液速度 施予。輸液施予可W與對象的血糖值上升的誘發同時實施，也可W在輸液施予過程中誘發 對象的血糖值上升。
[0265] 對于本發明的組合物或偶聯物而言，如果基于本發明的施予計劃施予，則向腦的 遞送效率會選擇性提高。因此，本發明的組合物或偶聯物可W用于將藥物遞送至腦。本發明 的組合物或偶聯物還可W使藥物通過血腦屏障。因此，本發明的組合物或偶聯物可W用于 將生理活性物質、抗體、核酸、生物相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等造影 劑等藥物遞送至W往難W遞送到達的腦實質。本發明的組合物或偶聯物還可W使藥物在腦 血管內皮細胞蓄積。因此，本發明的組合物或偶聯物可W用于將生理活性物質、抗體、核酸、 生物相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等造影劑等藥物遞送至W往難W遞送 到達的腦血管內皮細胞。另外，本發明的組合物或偶聯物也可W用于將減弱或破壞腦血管 內皮細胞間的連接的藥物遞送至腦血管內皮細胞。同樣地，本發明的組合物或偶聯物可W 用于將生理活性物質、抗體、核酸、生物相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等 造影劑等藥物遞送至視網膜、末梢神經及/或脊髓液。本發明的組合物或偶聯物還可W用于 將生理活性物質、抗體、核酸、生物相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等造影 劑等藥物遞送至各自存在于血神經屏障、血視網膜屏障或血腦脊液屏障的血管內皮細胞。 本發明的組合物或偶聯物也可w用于將減弱或破壞各自存在于血神經屏障、血視網膜屏障 或血腦脊液屏障的血管內皮細胞間的連接的藥物遞送至腦血管內皮細胞。通過減弱或破壞 血管內皮細胞間的連接，可W減弱屏障的功能，使各種藥物通過屏障。
[0266] 本發明的組合物及偶聯物可W通過口服施予及非口服施予（例如，靜脈內施予或 腹腔內施予)施予。
[0267] 本發明提供一種祀向腦組織的方法，所述方法包括將外表面被化UT1配體修飾的 藥物遞送用載體按照施予計劃施予至對象。本發明還提供一種祀向腦血管內皮細胞的方 法，所述方法包括將外表面被GLUT1配體修飾的藥物遞送用載體按照施予計劃施予至對象。 本發明的施予計劃優選包括將該載體施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象，更優選的 是，本發明的施予計劃包括將該組合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象及誘發該 對象的血糖值上升。同樣地，本發明提供一種祀向末梢神經組織、視網膜及/或脊髓液的方 法，所述方法包括將外表面被GLUT1配體修飾的藥物遞送用載體按照施予計劃施予至對象。 本發明還提供一種祀向各自存在于血神經屏障、血視網膜屏障或血腦脊液屏障的血管內皮 細胞的方法，所述方法包括將外表面被化UT1配體修飾的藥物遞送用載體按照施予計劃施 予至對象。
[0268] 根據本發明，可W將生理活性物質、抗體、核酸、生物相容性巧光色素、W及超聲 波、MRI及CT用造影劑等造影劑等藥物包封于載體，由此，可W將包封于載體的藥物有效地 遞送至腦、末梢神經組織、視網膜及/或脊髓液。
[0269] 本發明提供一種祀向腦組織的方法或將藥物遞送至腦組織的方法，所述方法包括 將藥物與化UT1配體的偶聯物或藥物與化UT1配體經由連接體連接而成的偶聯物按照施予 計劃施予至對象。本發明還提供一種祀向腦血管內皮細胞的方法，所述方法包括將藥物與 GLUT1配體的偶聯物或藥物與化UT1配體經由連接體連接而成的偶聯物按照施予計劃施予 至對象。本發明的施予計劃優選包括將該組合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象， 更優選的是，本發明的施予計劃包括將該組合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象 及誘發該對象的血糖值上升。同樣地，本發明提供一種祀向末梢神經組織、視網膜及/或脊 髓液的方法，所述方法包括將藥物與化UT1配體的偶聯物或藥物與GLUT1配體經由連接體連 接而成的偶聯物按照施予計劃施予至對象。本發明還提供一種祀向各自存在于血神經屏 障、血視網膜屏障或血腦脊液屏障的血管內皮細胞的方法，所述方法包括將藥物與GLUT1配 體的偶聯物或藥物與GLUT1配體經由連接體連接而成的偶聯物按照施予計劃施予至對象。
[0270] 根據本發明，作為偶聯物中含有的藥物，可W使用生理活性物質、抗體、核酸、生物 相容性巧光色素、W及超聲波、MRI及CT用造影劑等造影劑等藥物，由此，可W將藥物有效地 遞送至腦、末梢神經組織、視網膜及/或脊髓液。
[0271] 根據本發明，作為藥物，可W使用腦疾病治療藥或預防藥。運種情況下，本發明提 供一種腦疾病的治療或預防方法，所述方法包括將藥物遞送用載體按照施予計劃施予至需 要的對象，所述藥物遞送用載體的外表面被GLUT1配體修飾，且包封有腦疾病治療藥或預防 藥。同樣地，本發明提供一種腦疾病的治療或預防方法，所述方法包括將藥物遞送用載體按 照施予計劃施予至需要的對象，所述藥物遞送用載體的外表面被化UT1配體修飾，且包封有 末梢神經疾病治療藥或預防藥。同樣地，本發明提供一種腦疾病的治療或預防方法，所述方 法包括將藥物遞送用載體按照施予計劃施予至需要的對象，所述藥物遞送用載體的外表面 被化UTl配體修飾，且包封有視網膜疾病治療藥或預防藥。本發明的施予計劃優選包括將該 組合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象，更優選的是，本發明的施予計劃包括將該 組合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象及誘發該對象的血糖值上升。
[0272] 根據本發明，作為藥物，可W使用腦疾病治療藥或預防藥。運種情況下，本發明提 供一種腦疾病的治療或預防方法，所述方法包括將腦疾病治療藥或者預防藥與化UT1配體 的偶聯物或腦疾病治療藥或者預防藥與化UT1配體經由連接體連接而成的偶聯物按照施予 計劃施予至需要的對象。同樣地，本發明提供一種末梢神經疾病的治療或預防方法，所述方 法包括將末梢神經疾病治療藥或者預防藥與GLUT1配體的偶聯物或末梢神經疾病治療藥或 者預防藥與化UT1配體經由連接體連接而成的偶聯物按照施予計劃施予至需要的對象。同 樣地，本發明提供一種視網膜疾病的治療或預防方法，所述方法包括將視網膜疾病治療藥 或者預防藥與GLUT1配體的偶聯物或視網膜疾病治療藥或者預防藥與GLUT1配體經由連接 體連接而成的偶聯物按照施予計劃施予至需要的對象。本發明的施予計劃優選包括將該組 合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象，更優選的是，本發明的施予計劃包括將該組 合物施予至使之禁食、或已誘發低血糖的對象及誘發該對象的血糖值上升。
[0273] 因此，本發明提供一種用于處置或預防腦疾病的藥物組合物，所述組合物是含有 腦疾病治療藥或預防藥而成的。根據本發明可知，藥物向腦中的攝入提高，本發明的藥物組 合物對于腦疾病的治療或治療有用。本發明還提供一種用于處置或預防末梢神經疾病的藥 物組合物，所述藥物組合物是含有末梢神經疾病治療藥或者預防藥而成的。根據本發明可 知，藥物向末梢神經中的攝入提高，本發明的藥物組合物對于末梢神經疾病的治療或預防 有用。本發明還提供一種用于處置或預防視網膜疾病的藥物組合物，所述組合物是含有視 網膜疾病治療藥或者預防藥而成的。根據本發明可知，藥物向視網膜中的攝入提高，本發明 的藥物組合物對于視網膜疾病的治療或預防有用。根據本發明，上述治療藥或預防藥可W W包封于載體的形態包含在組合物中，或者，可W經由或未經由連接體而與GLUT1配體進行 偶聯的形態包含在組合物中。
[0274] 作為腦疾病，可W舉出可W通過使腦疾病治療藥通過血腦屏障來治療的腦疾病， 例如，焦慮、抑郁癥、睡眠障礙、阿茲海默癥、帕金森病及多發性硬化癥等。因此，本發明中， 為了治療運些腦疾病，可W使用抗焦慮劑、抗抑郁藥、睡眠誘導劑、阿茲海默癥治療藥、帕金 森病治療藥及多發性硬化癥治療藥等腦疾病治療藥或預防藥。作為阿茲海默癥治療藥，例 如，已知Αβ抗體，作為帕金森病治療藥，例如，已知多己胺受體激動劑及左旋多己，作為多發 性硬化癥治療藥，例如，已知腎上腺類固醇劑、干擾素 e(iF她）、及免疫抑制劑，運些治療藥 可W用于本發明。作為末梢神經疾病，可W舉出可W通過使末梢神經疾病治療藥通過血腦 屏障治療的末梢神經疾病，例如，吉蘭一己雷綜合征、菲希爾綜合征及慢性炎性脫髓銷性多 發性神經根神經病。作為視網膜疾病，可W舉出可W通過使視網膜疾病治療藥通過血腦屏 障治療的視網膜疾病，例如，視網膜色素變性癥、脈絡膜視網膜環狀萎縮、無脈絡膜癥、結晶 樣視網膜病變、先天性黑朦、先天性靜止性夜盲、小口病、白點狀眼底、白點狀視網膜炎、色 素性靜脈旁視網膜脈絡膜萎縮、斯特格(Stargardt)病、卵黃狀黃斑營養不良、青年性視網 膜分離癥、中屯、性輪狀脈絡膜萎縮、隱匿性黃斑營養不良、家族性滲出性玻璃體視網膜病變 及眼底血管樣條紋。
[0275] 實施例 腳引 實施例l:Glc(6)-PIC膠束的制造
[0277]實施例1中，進行了形成膠束所需要的高分子的合成。 腳引 l-l.Glc(6)-PEG-P(Asp)的合成
[02巧]首先，合成了 1,2 - 0 -異亞丙基一5,6 - 0 -亞芐基一a - D -巧喃葡萄糖（W下也 稱為"BIG-OH")。具體而言，在燒瓶中將lOg 1,2 -0-異亞丙基一α -D -巧喃葡萄糖（W下 也稱為"MIG")(和光純藥工業公司制）、40mL苯甲醒混合，一邊在旋轉式蒸發器中旋轉一邊 混合4小時，使之反應。反應后，添加66mL乙酸乙醋，用120mL蒸饋水清洗，僅回收有機層（乙 酸乙醋層），于〇°C添加500mL己燒進行重結晶，得到9.2g BIG-〇m收率為85% )。
[0280]接著，由得到的BIG-OH合成BIG-聚乙二醇(BIG-PEG-OH)。具體而言，為了使 BIG均勻地附著于反應容器的玻璃壁面，將苯冷凍干燥后于70°C過夜減壓干燥而得的0.72g BIG-0田容解于5mL四氨巧喃(THF)。由此，得到具有分子量統一的單峰性的峰的凝膠滲透色 譜圖（數據未示出）。在BIG-0田容液中滴入含有0.3M的糞化鐘的THF溶液3.3mL，在氣氣氣氛 下添加2.2mL環氧乙燒化0)并于常溫使之反應48小時。之后，在反應液中添加 ImL的甲醇，用 含有10%甲醇的冷卻酸使之再沉淀，回收2.8g BIG-PEG-〇m收率為89% )。
[0%1]進一步地，將得到的BIG-PEG-OH的0H基進行氨基化，合成具有氨基乙基的BIG- PEG-N此。具體而言，在溶解有0.8mL的Ξ乙胺的THF溶液20mL中溶解2. Og經過苯冷凍干燥 的BIG-陽G-OH。在將570mg甲橫酷氯溶解于20mL冷THF中而得的溶液中，添加上述的BIG- PEG-OH溶液，于室溫使之過夜反應。通過過濾除去沉淀的鹽，用包含含有10%甲醇的乙酸 的制冷劑500mL使濾液再沉淀，過濾后，減壓干燥。將得到的粉末溶解于100mL25%氨水溶 液，于室溫使之反應2天。用透析膜(截留分子量為1，000)在稀釋2000倍的氨水溶液中透析， 之后，在純水中透析。之后，用S邱hadex C-25(GE healthcare)除去未進行氨基化的饋分， 實施冷凍干燥，回收1.6g BIG-陽G-N出川欠率為85%)。純化后的BIG-陽G-N出的hInMR譜 圖中未觀察到由雜質引起的峰(數據未示出）。
[0282] 進一步地，由得到的BIG-陽G-N此合成BIG-PEG-聚化一天冬氨酸一β-節醋） (W下也稱為"BIG-陽G-PBLA")。具體而言，在3.5mL DMF中溶解1.7g L-天冬氨酸一β- 節醋一Ν-簇酸酢m下也稱為"BLA-NCA")，用30mL的二氯甲燒稀釋。在4mL的二氯甲燒中 溶解苯冷凍干燥后的BIG-PEG-N出200mg，在化A-NCA溶液中添加該溶液，在氣的存在 下，于35°C聚合40小時。通過IR分析確認到聚合反應結束后，在500mL己燒/乙酸乙醋= 6:4 中滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀了的聚合物，真空干燥，得到1.39g BIG-PEG-PBLA (收率為58%)。得到的BIG-PEG-PBLA顯示了具有分子量統一的單峰性的峰的凝膠滲透色 譜圖(數據未示出）。
[0283] 進一步地，由得到的BIG-PEG-PBLA合成BIG-PEG-聚天冬氨酸下也稱為 "BIG_PEG_P(Asp.r)。一邊在0.5N氨氧化鋼中懸濁500mg BIG-PEG-PBLA,-邊于室溫 水解芐基醋。共聚物溶解后，用透析膜(截留分子量為1，〇〇〇)在水中透析。將膜內的溶液冷 凍干燥，得到 132mg BIG-PEG-P(Asp. K收率為68% )。
[0284] 之后，由 BIG-陽 G_P(Asp.)合成 Glc(6)_ 陽 G_P(Asp.)。此處，Glc(6)是指葡萄 糖通過其6號碳與陽6結合。在1〇1^^氣乙酸/純水(8:2)中溶解10〇111邑616-陽〇-?^3口.）， 使之反應1小時。用透析膜(截留分子量為l，〇〇〇)W〇.〇lN NaOH、純水的順序進行透析。將膜 內的溶液冷凍干燥，得到70mg Glc(6) -PEG-P(Asp. K收率為70% )。
[02 化]l-2.PEG-P(Asp)及PEG-P(Asp.-AP)的合成
[0286] 首先，通過L-天冬氨酸一β-節醋一N-簇酸酢(BLA-NCAK委托中央化制品公司 審雌而得)的聚合得到聚乙二醇一聚化一天冬氨酸一β-節醋)嵌段共聚物(PEG-PBLA)。具 體而言，將18.9g BLA-NCA溶解于20mL Ν，Ν'一二甲基甲酯胺(DMF)中。在20mL DMF中溶解 2. Og具有甲氧基末端和氨基乙基末端的聚乙二醇(PEG-N出）（分子量為2，000)，在化A- NCA溶液中加入該溶液。一邊使混合溶液保持為35°C，一邊聚合40小時。通過紅外吸收光譜 (IR)分析確認到聚合反應結束之后，在化乙酸中滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀了的 聚合物，用乙酸清洗后真空干燥，得到15.51 g陽G -PBLA(收率為79 % )。
[0287] 接著，由陽G-PBLA合成聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物(PEG-P(Asp.)。具體 而言，一邊在0.5N氨氧化鋼中懸濁1. Og PEG-PBLA，一邊于室溫水解芐基醋。共聚物溶解 后，用透析膜（截留分子量為6,000-8,000)在水中透析。將膜內的溶液冷凍干燥，得到 654mg PEG-P(Asp.K收率為78%)。
[0288] 接著，由PEG-PBLA合成聚乙二醇一聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸）嵌段共聚物 (PEG - P (Asp . - AP))。具體而言，在1 OmL DMF中溶解1 g經過苯冷凍干燥的PEG - PBLA。在 PEG-PBLA溶液中加入8mL 1，5 -二氨基戊燒(DAP)。一邊將混合溶液保持為5°C，一邊使之 反應1小時。之后，在反應液中添加15.2mL 20重量％的乙酸水溶液，用透析膜(截留分子量 為6，000 - 8，000)在水中透析。將膜內的溶液冷凍干燥，得到954mg PEG - P (Asp. - AP K收 率為81%)。
[0289] 1-3.巧光標記化聚合物切5-PEG-P(Asp.)的合成
[0巧0] 將500mg通過上述得到的陽G-PBLA溶解于20mL二甲基亞諷(DMS0)。在PEG-PBLA 溶液中添加25mg橫酸基型Cy5 - N -徑基班巧酷亞胺醋化umiprobe公司制，制品編號： 43320)，于常溫使之反應2天。之后，添加75mL 0.5N氨氧化鋼，于室溫水解芐基醋。用透析膜 (截留分子量為6,000-8,000)W乙醇、水的順序透析。將膜內的溶液冷凍干燥，得到456mg 切5_PEG_P(Asp. K收率為86% )。
[0291] l-4.Glc(3)-PEG-P(Asp)的合成
[0292] 首先，由經過苯冷凍干燥的1，2,5,6_二_0_異亞丙基_a_D_巧喃葡萄糖 (DIG)得到DIG-陽G-OH。具體而言，在5mL THF中溶解0.72g DIG(TCI公司制），得到DIG- 0田容液。之后，在得到的DIG-0田容液中滴入3.5mL含有0.3M的糞化鐘的THF溶液，在氣氣氣 氛下添加2.5mL環氧乙燒化0)，于常溫使之反應48小時。之后，在反應液中添加 ImL的甲醇， 用使用制冷劑充分冷卻的含有10%甲醇的酸使之再沉淀，回收3.2g DIG-PEG-〇H(收率為 86%)。
[0巧3] 接著，將得到的DIG-陽G-OH進行氨基化，得至化IG-陽G-N此。具體而言，在32mL 溶解有0.8mL的Ξ乙胺的THF溶液中溶解3.2g經過苯冷凍干燥的DIG-PEG-OH。在上述的 DIG-PEG-0田容液中添加將912mg甲橫酷氯溶解于32mL冷THF而得的溶液，于室溫使之過夜 反應。通過過濾除去沉淀了的鹽，用500mL包含含有10%甲醇的乙酸的制冷劑使濾液再沉 淀，過濾后減壓干燥。在lOOmL 25%氨水溶液中溶解得到的粉末，于室溫使之反應2天。用透 析膜（截留分子量為1，000) W稀釋2000倍的氨水溶液中、純水的順序透析。之后，用 sephadex C - 25(GE healthcare)除去未進行氨基化的饋分，實施冷凍干燥，回收2.95g DIG-陽G-NH2川欠率為89% )。
[ο巧4] 進一步地，由得到的DIG-陽G-N此合成DIG-陽G-PBLA。具體而言，在3.5mL DMF 中溶解1.7g BLA-NCA，用30mL的二氯甲燒稀釋。在4mL的二氯甲燒中溶解苯冷凍干燥后的 DIG-陽G-N此200mg，在BLA-NCA溶液中添加所述溶液，在氣的存在下，于35°C聚合40小 時。通過IR分析確認到聚合反應結束后，在500mL己燒/乙酸乙醋（己燒/乙酸乙醋= 6:4)中 滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀了的聚合物，真空干燥，得到1.32g DIG-PEG-PBLA 川欠率為70%)。
[0巧5] 進一步地，由得到的DIG-PEG-PBLA合成DIG-PEG-聚天冬氨酸(DIG-PEG-P (Asp.))。具體而言，一邊在0.5N氨氧化鋼中懸濁500mg DIG-PEG-PBLA，一邊于室溫水解 芐基醋。共聚物溶解后，用透析膜(截留分子量為1，〇〇〇)在水中透析。將膜內的溶液冷凍干 燥，得到 145mg DIG-PEG-P(Asp. K收率為54% )。
[0 巧 6]進一步地，由得到的 DIG_PEG_P(Asp.)合成 Glc(3)_PEG_P(Asp.)。此處，Glc (3)是指葡萄糖通過其3號碳與PEG結合。具體而言，在lOmLS氣乙酸/純水(Ξ氣乙酸：水= 8:2)中溶解lOOmg DIG-陽G-P(Asp.)，使之反應1小時。用透析膜(截留分子量為1，000)W 0.01N化OH、純水的順序透析。將膜內的溶液冷凍干燥，得到75mg Glc(3)-PEG-P(Asp.) 川欠率為86%)。
[0巧7] 1-5.C巧一PIC膠束的制備
[0 巧引在501^10111]\0溝酸緩沖液。6，口^.4,〇111]\1化(：1)中溶解5〇111邑切5_?66_口^3口.）， 制備 Img/mL 的切 5-PEG-P(Asp.)溶液。同樣地，在 50mL PB 中溶解 50mg PEG-P(Asp.- AP)，制備Img/mL的陽G-P(Asp.-AP)溶液。在50mL的離屯、管中分別添加4mL切5-PEG-P (Asp.)和7.0mL PEG-P(Asp.-AP)運巧巾水溶液，用縱滿混合器（Votrex)攬拌2分鐘 (200化口111)。之后，加入含有水溶性縮合劑即1-乙基一3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽 酸鹽化DC)(10mg/mL)的PB溶液5.6mL，過夜靜置并將聚離子復合物的核交聯。之后，用附有 截留分子量為100,000的膜的超濾管除去與膠束形成無關的聚合物及邸C的副產物等。
[0巧9] 1-6.得到的C巧一PIC膠束的表征
[0300] 用Ze化sizer(Malvern)測定得到的切5-PIC膠束的大小（Z平均粒徑)及多分散指 數(PDI)。關于大小，測定通過布朗運動移動的粒子的擴散，將其測定結果利用斯一愛氏 (Stokes-Einstein)方程轉換為粒徑和粒度分布。此外，用透射電子顯微鏡（TEMJEM- iAOO) 評價膠束的形狀。此處，所謂 Z 平均粒徑，是指將粒子分散物等的動態光散射法的測定 數據用累積量(cumulant)解析法解析而得的數據。累積量解析中，得到粒徑的平均值和多 分散指數(PDI)，本發明中，將該平均粒徑定義為Z平均粒徑。嚴格而言，將使多項式擬合在 測定中得到的G1相關函數的對數的操作稱為累積量解析，W下式：
[0301] LN(Gl)=a+bt+ct2+化3+et4+……中的常數b被稱為二次累積量或Z平均擴散系數。 用分散介質的粘度和幾個裝置常數將Z平均擴散系數的值換算為粒徑而得的值為Z平均粒 徑，其作為分散穩定性的指標適于品質管理目的。
[030。1 -7 .Glc(6)-切 5-PIC 膠束的制備
[030；3]在6〇1111^1〇111]\0溝酸緩沖液。8,9町.4,〇111]\〇^(：1)中溶解2〇111旨61。（6)-?66-? (Asp.)和40mg 切5_PEG_P(Asp.)，制備Img/mL的切5_Glc(6)_陽G_P(Asp.)與陽G-P (ASP .)的混合溶液。同樣地，在5OmL PB中溶解5Omg PEG - P (ASP . - AP)，制備1 mg/mL的 PEG_P(Asp._AP)溶液。在50mL的離屯、管中分別添力日切5_PEG_P(Asp.)與PEG_P(Asp.) 的混合液4mL PEG-P(Asp . -AP)溶液和7 . OmL運巧巾水溶液，利用縱滿混合器攬拌2分鐘 (200化pm)。之后，添加5.6mL含有水溶性縮合劑邸C( lOmg/mL)的PB溶液，過夜靜置并將聚離 子復合物的核交聯。之后，用附有截留分子量為100,000的膜的超濾管除去與膠束形成無關 的聚合物、EDC的副產物等。
[0304] 1-8.61(；(6)_〔巧_?1卻$束的表征
[030日]用Ze1:asize;r(Malve;rn)測定得到的Glc(6)-切5 -PIC膠束的大小（Z平均粒徑）及 多分散指數(PDI)。其結果表明，得到了平均粒徑為40nm、粒徑均勻的膠束（圖2A)。另外，對 于膠束的形狀而言，使用透射電子顯微鏡(TEM，JEM-1400)，在用乙酸雙氧軸染色后進行觀 察（圖2B)。
[0306] l_9.Glc(3)_ 切 5-PIC 膠束的制備
[0307] 在60mL抑為7.4的lOmM憐酸緩沖液(PB，0mM化C1)中溶解20mg Glc(3)_陽G-P (Asp.)和40mg 切5_PEG_P(Asp.)，制備Img/mL的切5_Glc(3)_陽G_P(Asp.)與陽G-P (Asp .)的混合溶液。同樣地，在5OmL PB中溶解5Omg PEG - P (ASP . - AP)，制備1 mg/mL的 PEG_P(Asp. -AP)溶液。在50mL的離屯、管中分別添加4mL C巧_PEG_P(Asp. )、PEG_P (Asp.)的混合液和4.3mL PEG-P(Asp. -AP)溶液運巧巾水溶液，用縱滿混合器攬拌2分鐘 (200化pm)。之后，添加5.6mL含有水溶性縮合劑即抓C( lOmg/mL)的PB溶液，過夜靜置并將聚 離子復合物的核交聯。之后，用附有截留分子量為100,000的膜的超濾管除去與膠束形成無 關的聚合物、EDC的副產物等。用Ze1:asize;r(Malve;rn)測定得到的Glc(6) - 切5 - PIC膠束的 大小(Z平均粒徑)及多分散指數(PDI)。另外，用透射電子顯微鏡(TEM JEM -1400)評價膠束 的形狀。得到的膠束的直徑為32nm(PDI = 0.043)(數據未示出）。
[030引實施例2. PK膠束的體內動態評價實驗
[0309] 將實施例1中制造的膠束靜脈施予至小鼠，調查其體內動態。施予膠束時，也對血 糖操作的效果進行評價。
[0310] W下的實施例中，向腦中的蓄積基于相對于總施予量而言每Ig腦中蓄積的量（％ ) 進行評價。
[0311] 對24小時未喂食的禁食小鼠（Balb/c罕6周齡）與自由喂食的小鼠分別靜脈施予 (1.乂.）200化上述的各膠束溶液（即，61。（6)-切5-?1卻交束、61。（3)-切5-?1卻交束或 切5 -PIC膠束的溶液(濃度為Img/mL))。此處記載的Img/mL是通過用化no化op測定源于與 各自的聚陰離子結合的切5的巧光的結果求得的值。需要說明的是，禁食的小鼠組在膠束溶 液施予6小時后重新開始喂食。待經過規定的時間后，對小鼠實施麻醉開腹后，從腹部大動 脈采集血液，繼而取出腦、肝臟、脾臟、腎臟、屯、臟、肺及大腿肌肉。于4°(：、15,00化口111將采集 的血液離屯、5分鐘，制備血漿，分注于96孔板（Thermo Fisher，美國），通過使用Tecan Infinite M1000 PRO的巧光測定根據血漿的巧光強度定量血中的膠束濃度。此時，作為對 照，使用了未施予樣品的小鼠的血液。另外，假定小鼠的全血為2mL、其中血漿的量為55%， 評價藥物的體內動態。分別對腦、肝臟、脾臟、腎臟、屯、臟、肺及大腿肌肉添加溶解緩沖液和 金屬錐(metal cone)，粉碎并制成懸濁液，分別注入96孔板(Thermo Fisher,美國），通過使 用Tecan Infinite M1000PR0的巧光測定定量膠束向各臟器中的蓄積效率（％)。
[0312] 其結果是，將外表面經由葡萄糖的6號碳而被修飾的膠束(Glc(6)-PIC膠束)在使 小鼠禁食后施予至小鼠時，向腦中的蓄積量與喂食的重新開始同時顯著增大，相對于Ig腦 而言最多蓄積了總施予膠束量的約3.8% (圖3A)。此時，血中膠束濃度與喂食的重新開始同 時減少(數據未示出）。在未用葡萄糖修飾其外表面的膠束中，未觀察到上述向腦中的膠束 的蓄積量的增大。因此，由該結果可見，對于Glc(6)-PIC膠束向腦中的蓄積而言，通過禁食 使小鼠的血糖值降低、及在膠束施予前后使該小鼠的血糖值上升是重要的。但是，將膠束施 予使之禁食的小鼠后，即使在喂食重新開始前，一部分膠束也被腦攝入（圖3A的黑色方塊）。 另外，將膠束施予未使之禁食的小鼠后，一部分膠束也被腦攝入（圖3A的白色方塊）。另外， 評價了膠束向各臟器中的累積量，其結果是，血糖操作導致向腦中的蓄積量選擇性地增大 (圖3B)。因此，由血糖操作導致的蓄積量的增大可W理解為是腦特異性的。需要說明的是， 對于肝臟、腎臟而言，無論有無血糖操作，均分別顯示了約8%及4%的蓄積(數據未示出）。 另外，如果將制備其外表面經由葡萄糖的6號碳而被修飾的膠束(Glc(6)-PIC膠束)時使用 的陽離子性高分子全部設為Glc(6)-PEG-P(Asp.)，則可W得到葡萄糖導入率為50%的膠 束，如果將一半設為Glc(6)-PEG-P(Asp.)，則可W得到葡萄糖導入率為25%的膠束。若通 過上述方法施予得到的膠束，則葡萄糖導入率為25%的膠束顯示了大于3%的向腦中的蓄 積，相對于此，葡萄糖導入率為50 %的膠束顯示了約1.3 %的向腦中的蓄積。
[0313] 進一步地，比較了其外部表面經由葡萄糖的3號碳而被修飾的膠束(Glc(3)-PIC 膠束與Glc(6)-PIC膠束）的向腦中的蓄積量。具體而言，通過上述的方法將Glc(6)-切5- PIC膠束和Glc(3)-切5-PIC膠束i.v.施予至禁食小鼠，在6小時后重新開始喂食，在施予 起8小時后(喂食重新開始起2小時后)摘取腦，通過上述的方法算出各自的樣品向腦中的累 積量。結果，Glc(6)-PK膠束顯示了較之Glc(3)-PK膠束更多的向腦中的蓄積（圖4B)。
[0314] 為了更詳細地調查膠束向腦內的蓄積部位，實施了In vivo共焦顯微鏡觀察。具體 而言，首先，在2.5%異氣燒麻醉下實施24小時禁食后的小鼠（Balb/c，罕，6周齡)的開煩。接 著，一邊維持麻醉，一邊在微靜脈內設置用于樣品的i.v.施予的導管，另外，在腹腔內設置 用于葡萄糖溶液的腹腔內施予(i.P.)的導管，并置于共焦顯微鏡(Nikon A1R)的載物臺。在 觀察開始5分后將Glc(6)-切5-PIC膠束（lmg/mL、200化)通過導管i.v.施予(示意圖5B的0 分鐘為樣品施予的時機）。接著，在樣品施予30分鐘后將20v/v%葡萄糖溶液通過導管i.P. 施予。用激發波長為638nm的激光在約3小時內實時觀察腦內的樣品的巧光變化(巧光波長 為662~737nm)。結果，觀察到原本僅在血管內觀察到的巧光隨著時間經過滲出至腦實質 (例如，虛線部）的現象（圖5A)。根據上述的觀察中得到的視頻，W觀察經過的時間作為橫 軸，W與腦血管不重疊的5個區域（圖5A所示腦實質的虛線部）的R0K感興趣區域，region of interest)的巧光強度的平均值作為縱軸進行繪圖。結果，膠束的向腦實質中的攝入追 隨血糖值的上升而上升（圖5B)。需要說明的是，小鼠的血糖值是通過W下方法求得的：分別 在即將i.P.施予葡萄糖溶液之前、施予20分鐘后、30分鐘后、50分鐘后或90分鐘后通過微靜 脈采集5化血液，用實驗動物用血糖值測定儀測定血糖值（圖5B)。由于膠束向腦中的攝入伴 隨血糖值上升后的血糖值的降低而發生，可W認為，膠束的施予也可W在血糖值上升之后。
[0315] 接著，確認到即使在血糖值上升之后實施膠束的施予，膠束也會移動至腦實質。具 體而言，首先，在2.5%異氣燒麻醉下實施24小時禁食的小鼠（Balb/c，罕，6周齡)的開煩。接 著，一邊維持麻醉，一邊在腹腔內設置用于葡萄糖溶液的腹腔內施予（i.P.)的導管，并設置 于共焦顯微鏡(N化on A1R)的載物臺。通過導管i.P.施予20v/v%葡萄糖溶液，接著，在葡萄 糖施予30分鐘后，通過導管i.v.施予Glc(6)-切5-PIC膠束（lmg/mL，200化），或不使用導 管而進行i.P.施予，開始觀察(示意圖IIB的ο分鐘表示樣品施予的時機）。關于巧光，用激發 波長為638nm的激光在約3小時內W巧光強度為指標實時觀察圖11Α所示的4個腦實質區域 中的樣品的蓄積（巧光波長為662~73化m)。結果，如圖11B表示的那樣，樣品的i.v.施予之 后立刻觀察到向腦實質內的樣品的攝入，隨著時間經過，攝入量穩定地增大，在3小時內持 續攝入。通過改變葡萄糖施予與樣品施予的前后關系，樣品向腦實質中的攝入量的經時模 式變化。運意味著，通過改變葡萄糖施予與樣品施予的前后關系，可W控制通過血腦屏障的 時機。
[0316] 由此可見，本發明的組合物可W利用血糖操作而通過血腦屏障，有效地到達腦實 質。
[0317] 實施例3.PICsome的審Ij造與體內云力態評價實驗
[0318] 作為直徑為約lOOnm的中空載體，制造 PICsome，通過體內動態評價驗證對于腦的 革己向效果。
[0319] 3-1.均 P(Asp.-AP)的合成
[0320] 首先，通過化A-NCA的聚合得到聚化一天冬氨酸一β-節醋KPBLA均聚物）。具體 而言，在33.3mL Ν,Ν'一二甲基甲酯胺(DMF)、300血二氯甲燒中溶解20g L-天冬氨酸一β - 節醋一Ν-簇酸酢(BLA-NCA)。在上述BLA-NCA溶液中添加89.0化Ν-下胺。一邊將混合溶 液保持為35°C，一邊聚合40小時。通過紅外吸收光譜（IR)分析確認聚合反應結束之后，在1L 己燒/乙酸乙醋溶液（己燒：乙酸乙醋= 6:4)中滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀了的聚 合物，用乙酸清洗后真空干燥，得到14.82g(79 % )PBLA均聚物。
[0321] 接著，通過得到的PBLA均聚物合成聚（（5-氨基戊基）一天冬氨酸）（均P(Asp.- AP))。具體而言，在10血N-甲基一2 -化咯燒酬(NMP)中溶解1 g經過苯冷凍干燥的均PBLA。 在17.21^醒？中溶解17.2血04?，然后添加至均?81^\溶液。一邊將混合溶液保持為5°(：，一 邊反應40分鐘。之后，在反應液中添加10mL20重量％的乙酸水溶液，用透析膜(截留分子量 為6，000 -8，000)在水中透析。將膜內的溶液冷凍干燥，得到0.76g(82 % )P(Asp. -AP)。 [0：3。] 3_2.Glc(6)_ 切 5-PICsome 的制備
[0323] 在1 OmM憐酸緩沖液（PB、pH7.4、OmM化C1)6OmL中溶解2Omg實施例1中得到的G1C (6)_PEG_P(Asp.)和40mg 切5-陽G_P(Asp.)，制備Img/mL的Glc(6)_陽G_P(Asp.)與 切5-陽G-P(Asp.)的混合溶液。另外，同樣地，在50mL PB中溶解50mg均P(Asp.-AP)，制備 Img/mL的均P(Asp.-AP)溶液。接著，在50mL的離屯、管中分別混合4.0mL Glc(6)-陽G-P (Asp.)與切5-陽G-P(Asp.)的混合液及5.0血均P(Asp. -AP)溶液運巧巾水溶液，利用縱滿 混合器攬拌2分鐘（200化pm)。之后，添加5.6mL含有水溶性縮合劑即抓C( lOmg/mL)的PB溶 液，過夜靜置并將聚離子復合物的核交聯。之后，用附有截留分子量為100,000的膜的超濾 管除去與PICsome形成無關的聚合物、EDC的副產物等。用Zetasizer (Malvern)測定得到的 Glc(6)-切5-PICsome的大小(Z平均粒徑)及多分散指數(PDI)。另外，對于膠束的形狀而 言，使用透射電子顯微鏡(TEM，JEM-1400)，在用乙酸雙氧軸染色后觀察。結果表明，得到了 直徑為l〇〇nm(PDI = 0.086)的PICsome(數據未示出）。
[0扣4] 3-3.體內動態評價
[0325]除了施予得到的PICsome代替PIC膠束W外，用與實施例2完全相同的方法，將 PICsome施予小鼠，觀察PICsome的向腦中的蓄積。結果，觀察到僅有其外表面被葡萄糖修飾 的PICsome在喂食后在腦內急劇蓄積（圖6)。其外表面被葡萄糖修飾的PICsome的每Ig腦的 蓄積量為約2% (圖6)。
[03%]由此可見，囊泡即使直徑為lOOnm也可W毫無問題地通過血腦屏障。
[0327] 進一步地，用2光子顯微鏡（高速共焦激光顯微鏡用多光子激發激光Nikon A1RMP-1S-S33)觀察囊泡在腦(大腦皮質）深部的偏在。得到的結果如圖13所示。即，較之 腦表層，在腦深部觀察到更強的源于PK膠束的巧光。
[0328] 觀察自腦的表層起0皿、60皿、200皿、300皿、500皿或600皿的位置的切片的巧光圖 像。結果，在任一深度均確認到PIC膠束向腦實質的移動，特別地，在200μπι~500μπι，大量的 巧光偏在于腦實質（圖14)。
[0329] 進一步地，確認到大腦皮質中的經時性巧光強度變化。如圖15所示，在1日后~1周 后期間，大量的巧光偏在于腦實質。
[0330] 由此可見，若用葡萄糖修飾其表面而得的PIC膠束伴隨本發明的血糖操作被施予 至對象，則即使在腦深部(例如，60皿~600皿)也可W使膠束在腦實質蓄積。另外，所述蓄積 即使在施予1星期后也持續。對于腦而言，自表層起，存在分子層、外顆粒層、外錐體細胞層、 內顆粒層、內錐體細胞層及多形細胞層(例如，參見圖13~圖15)，在上述任一層中均實現了 將載體遞送至腦實質。運些層中，特別地，在外錐體細胞層及內顆粒層中的載體的遞送顯著 有效。
[0扣1] 實施例4: S iRNA膠束的制造與體內動態評價
[0332]本實施例中，用血中滯留時間短且遞送效率低的siRNA與實施例2及3同樣地實施 了體內動態評價。更具體而言，本實施例中，使用了由偶聯有葡萄糖的PEG-聚陽離子和巧 光標記SiRNA形成的膠束評價SiRNA向腦中的蓄積。
[。扣引 4-l.Glc(6)-PEG-P(Asp.-TEP)-Chol 的合成
[0334] 首先，由通過實施例1所述的方法得到的BIG-PEG-PBLA合成BIG-PEG-PBLA- 化〇1。具體而言，在lOmL NMP中溶解120mg BIG-陽G-PBLA，添加相對于PBLA的末端的氨基 而言為10當量的4-膽醬締基氨基一4-下酸及催化劑量的二甲基氨基化晚，之后，于室溫 攬拌6小時。在乙酸/2-丙醇(9:1)溶液中滴入反應溶液，使目標物沉淀。過濾沉淀物使之減 壓干燥，得到130mg BIG-陽G-PBLA-Ch〇K收率為95%)。
[0335] 接著，由得到的(BIG)_PEG_PBLA_Chol 合成 BIG_PEG_P(Asp_TEP)_Chol。具 體而言，在5mL醒P中溶解lOOmg BIG-PEG-PBLA-化〇1，在用匪P稀釋的四亞乙基五胺 (TEP)溶液中滴入聚合物溶液，之后，于20°C反應1小時。在冰冷卻的1N鹽酸中滴入反應溶 液，于4°C用截留分子量為12,000-14,000的透析膜透析。作為透析外液，使用0.01N鹽酸， 之后，將純水用作透析外液進行透析后，將得到的溶液冷凍干燥，回收56mg的BIG-PEG-P (Asp-TEP) -ChoK收率為73% )。
[0336] 最后，由 BIG-陽 G_P(Asp_TEP)_Chol 得到 Glc(6)_ 陽 G_P(Asp_TEP)_Chol。 具體而言，在8血Ξ氣乙酸/純水(8:2)溶液中溶解56mg BIG -陽G - P (Asp - TEP)-化01，使 之反應1小時。用透析膜(截留分子量為1，〇〇〇)使用0.01N化0H作為透析外液進行透析，繼 而在純水中透析。將得到的溶液冷凍干燥，得到67mg的G1C (6)-陽G - P (Asp - TEP)-化01 川欠率為82%)。
[0：337] 4-2.Glc(6)-siRNA膠束的制備
[033引按照圖7A的合成路徑制備Glc(6) -siRNA膠束。具體而言，用437.5化肥PES緩沖 液稀釋262.5化溶解有Glc(6) _陽G_P(Asp. - TEP) - Choi (2mg/mL)的lOmM 肥陽S緩沖液。 用1121化肥陽S緩沖液稀釋279化切5-siRNA-chol(75皿）（北海道System Science公司 制的隨機序列（scramble )siRNA)。將得到的巧巾溶液混合并吹吸(pipetting) 10次，得到Glc (6)-siRNA膠束。在In vivo實驗即將開始之前在2. ImL的膠束溶液中添加 65化的5M化Cl 溶液，通過吹吸制成等滲溶液后用于施予。用Zetasizer (Malvern)測定得到的Glc (6) - 切5-siRNA膠束的大小(Z平均粒徑)及多分散指數(PDI)。另外，對于膠束的形狀而言，使用 透射電子顯微鏡（TEM，JEM-1400)，用乙酸雙氧軸染色后觀察。結果表明，得到了直徑為 80nm(PDI = 0.104)的siRNA 膠束。
[0扣9] 4-3.體內動態評價
[0340] 將得到的Glc(6)-切5-siRNA膠束W200化/2小時的速度使用注射累化arvard公 司）通過靜脈施予在30分鐘或2小時內進行精密持續靜注，在施予開始5分鐘后腹腔內施予 20%葡萄糖溶液。在SiRNA膠束的施予結束起1小時后摘取腦，在用多珠振蕩器(Multi ? beads 化 ocker) 粉碎后 ，使 用商用 IVIS 成像系統 (Xenogen公司） 評價各自 的亮度 。結果 ，如 果靜脈施予的時間變長，則腦的亮度上升，2小時的靜脈施予導致的向腦中的蓄積多于30分 鐘的靜脈施予導致的向腦中的蓄積（圖7B)。另外，算出向腦中的蓄積量，結果表明，就SiRNA 膠束而言，在2小時的靜脈施予過程中，可W將其施予量的1.3%遞送至腦(每Ig)。進一步 地，在施予結束6小時后摘取腦，用共焦顯微鏡化SM510)實施觀察，測定腦實質的巧光強度。 結果表明，S iRNA膠束在腦細胞內蓄積（圖8)。
[0341] 由實施例4的結果可見，即使是血中滯留時間短、遞送效率低的SiRNA運樣的物質， 通過本發明的方法也可W極其有效地遞送至腦。根據本發明的血糖操作，即使通過急速靜 注也可W實質上將SiRNA膠束遞送至腦實質，本實施例中表明，通過持續靜注，可W大幅度 改善SiRNA膠束向腦實質中的遞送量。
[03創實施例5:葡萄糖修飾而得的嵌段共聚物的體內動態評價
[0343] 本實施例中，將未形成膠束的Glc(6)-PEG-聚天冬氨酸施予小鼠并評價其體內 動態。
[0344] 作為Glc(6)-PEG-聚天冬氨酸，使用了實施例1中合成的Glc(6)-PEG-聚天冬 氨酸。作為對照，使用了 PEG -聚天冬氨酸。
[0345] 對Ba化/c小鼠（罕，6周齡，n = 3)分別靜脈內施予200化的3mg/mL的Glc(6)-陽G- 聚天冬氨酸及對照。W-定速度實施2小時施予。在施予開始5分后腹腔內施予20%葡萄糖 溶液。在Glc(6)-PEG-聚天冬氨酸及對照的施予結束1小時后分析葡萄糖修飾而得的嵌段 共聚物的體內動態。
[0346] 結果如圖9所示。如圖9所示，未偶聯有葡萄糖的PEG-聚天冬氨酸未顯示向腦中的 蓄積，相對于此，偶聯有葡萄糖的Glc(6)-PEG-聚天冬氨酸顯示了每Ig腦中總施予量的 0.4%的腦的蓄積。運樣，上述聚合物只要被1分子葡萄糖修飾，則向腦中的遞送充分。而即 使是被認為極其容易突破血腦屏障的鹽酸多奈贓齊，相對于總施予量而言每Ig腦也只蓄積 0.13%(Drug Metabolism and Disposition,1999,27(12):1406-1414)。
[0347] 實施例6:葡萄糖偶聯物抗體的制備和體內動態評價
[0348] 本實施例中，使葡萄糖偶聯至抗體，評價體內動態。結果，抗體通過血糖操作也顯 示了向腦中的蓄積。
[0349] 作為抗體，使用了市售的小鼠 IgG、同型對照（Southern Biotechno logy Associates Inc.)。如下制造了抗體與葡萄糖的偶聯物。
[0巧0] 6-1.DyLi曲t488巧光標記葡萄糖導入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物的合成 惦51] 首先，合成THP-PEG-OH。具體而言，在lOOmL四氨巧喃(THF)中溶解0.104mL 2- (2 -徑基乙氧基）四氨化喃(THP)。在THP溶液中滴入2.8mL含有0.3M的糞化鐘的THF溶液，在 氣氣氣氛下添加8.9mL環氧乙燒化0)，于40°C使之反應1天。之后，用乙酸使反應液再沉淀， 得到8.56g-個末端為四氨化喃基、一個末端為3-徑丙基的聚乙二醇(THP-陽G-OH)(分 子量為12,000Κ收率為95%)。
[03對接著，將得到的ΤΗΡ-陽G-0Η的0Η基進行甲橫酷化。具體而言，在20血THF中溶解 19.7化甲橫酷氯(13(：1)。另夕1'，在101^四氨巧喃(1'邸）中溶解1.4邑1'冊一陽0-0^分子量為 12，000)，在該溶液中添加89化Ξ乙胺。在用水浴冷卻的MsCl溶液中滴入ΤΗΡ-PEG-0Η溶 液，攬拌3小時30分鐘。在200mL乙酸中滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀的聚合物，用乙 酸清洗后真空干燥，由此，得到1.50g-個末端為3-甲橫酷基、一個末端為四氨化喃基的聚 乙二醇(MsO-PEG-THPK收率為 100% )。
[0；353] 接著，由得到的MsO-PEG-THP合成化一陽G-THP。具體而言，在lOOmL N，N'_二 甲基甲酯胺(DMF)中溶解15g MsO-PEG-THP(分子量為12,000)。一邊于室溫攬拌反應溶 液，一般添加1.6：3g疊氮化鋼。一邊將混合溶液保持為45 °C，一邊攬拌71小時。使混合溶液恢 復室溫后，添加200mL純水。對于混合溶液，使用分液漏斗，用二氯甲燒200mL提取6次，將得 到的有機層利用旋轉式蒸發器濃縮至150mL。在化乙醇中滴入濃縮液，通過抽濾回收沉淀的 聚合物后，真空干燥，得到14.3g-個末端為疊氮基、一個末端為四氨化喃基的聚乙二醇 (化一陽G-THPK收率為95%)。
[0354] 接著，將化一PEG - THP脫保護，得到化一PEG - THP。具體而言，在200mL甲醇中溶解 14.1g化一陽G-THP(分子量為12,000)。于室溫下在混合溶液中加入24mLlN肥l水溶液。 一邊將反應溫度保持為25°C，一邊攬拌4小時。在2.化乙酸中滴入反應混合物，通過抽濾回 收沉淀的聚合物，用乙酸清洗后真空干燥，由此，得到13.7g-個末端為疊氮基、一個末端為 3-徑丙基的聚乙二醇(化一陽G-OHK收率為96%)。
[0巧日]接著，將化一陽G-OH進行氨基化，得到化一陽G-N此。具體而言，在30mL四氨巧喃 (THF)中溶解1.02gN3-陽G-OH(分子量為12,000)，在該溶液中添加47.4化^乙胺。在201^ 1'冊中溶解19.7化甲橫酷氯，一邊用室溫水浴冷卻化一陽6-0扣容液，一邊加入至化一?66 - 0田容液中。于室溫將混合溶液攬拌6小時。通過過濾除去沉淀的鹽，在950mL乙酸與50mL 2 - 丙醇的混合溶液中滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀的聚合物，用乙酸清洗后真空干燥。 在8mL 28%氨水溶液中溶解得到的粉末，于室溫使之反應3天。用透析膜(截留分子量為 6000-8000)在純水中透析。之后，用S邱hadex C-25(GE healthcare)除去未氨基化的饋 分，實施冷凍干燥，回收620mg-個末端為疊氮基、一個末端為3 -氨基丙基的聚乙二醇 (化一陽G-NH2K收率為61 % )。
[0巧6] 接著，由化一陽G-N此合成化一陽G-P化A。具體而言，在5.4mL的二氯甲燒中溶解 苯冷凍干燥后的化一陽G-NH2(分子量為12,000)150mg。在0.6mLDMF中溶解218mgL-天冬 氨酸一β-節醋一N-簇酸酢，在化一PEG-N出溶液中添加所述溶液，在氣存在下于35°C聚合 2天。通過IR分析確認聚合反應結束后，在150mL乙酸中滴入反應混合物，通過抽濾回收沉淀 的聚合物，真空干燥，得到250mg-個末端為疊氮基的聚乙二醇一聚化一天冬氨酸一β-節 醋)嵌段共聚物(Ν3-陽G-PBLA)(分子量為12,000Κ收率為91%)。
[0巧7] 接著，由化一陽G-PBLA得到化一PEG-P(Asp)。具體而言，在4mL乙臘中溶解250mg 化一陽G-PBLA，在該溶液中加入5.5mL 0.5N氨氧化鋼水溶液，于室溫攬拌1小時。用透析膜 (截留分子量為6000 - 8000)在水中透析反應液。將膜內的溶液冷凍干燥，得到189mg-個末 端為疊氮基的聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物(化一PEG-P(Asp))(分子量為12,000) 川欠率為89%)。
[0巧引接著，合成了6 -氨基一6 -脫氧一1,2:3,5 -二一0 -異亞丙基一a - D -巧喃葡萄 糖(P -氨基葡萄糖）。？一氨基葡萄糖基于化rbohy化.Res. 19,197-210( 1971)的記載合成。
[0359] 合成了導入了保護葡萄糖的聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物。具體而言，在4mL N，N'_二甲基甲酯胺（DMF)中溶解137mg6_氨基一6-脫氧_1，2:3,5_二_0_異亞丙 基一a-D-巧喃葡萄糖(P-氨基葡萄糖）。在4mL DMF及ImL水的混合溶劑中溶解40mg-個 末端為疊氮基的聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物（化一PEG-P(Asp))(分子量為12， 000)，在上述P-氨基葡萄糖溶液中加入該溶液。之后，進一步添加203mg 1-乙基一3- (3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。于室溫下將得到的混合溶液攬拌13小時。之后，用透 析膜(截留分子量為6,000-8,000)在DMS0中透析混合溶液，繼而在水中透析。將膜內的溶 液冷凍干燥，得到49mg導入了保護葡萄糖的聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物（收率為 96%)。
[0360] 接著，將葡萄糖的保護基脫保護，得到葡萄糖導入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共 聚物。具體而言，對于49mg保護葡萄糖導入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物，添加將18mL Ξ氣乙酸及2mL水混合而得的溶液，于室溫攬拌20分鐘。之后，使用透析膜(截留分子量為6， 000-8,000)，一邊保持為4°C 一邊在水中透析。將膜內的溶液冷凍干燥，得到40mg葡萄糖導 入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物(收率為87%)。
[0361] 進一步地，用巧光色素 DyLi曲t488標記了得到的共聚物。具體而言，在lOmL二甲基 亞諷(DMS0)中溶解40mg葡萄糖導入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物。另外，在5mL DMS0 中溶解DyLi曲t488N-班巧酷亞胺醋，在葡萄糖導入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物溶 液中加入所述溶液。于室溫下將混合溶液攬拌48小時。接著，用透析膜(截留分子量為6， 000-8,000)在水中透析混合溶液。將膜內的溶液冷凍干燥，得到黃色的固體。利用PD-10 柱(GE化althcare社）純化得到的固體。用透析膜(截留分子量為6,000-8,000)在水中透 析溶出液。將膜內的溶液冷凍干燥，得到33mg DyLi曲t488巧光標記的葡萄糖導入聚乙二 醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物。
[0362] 6-2.葡萄糖導入抗體的制備
[0363] 接著，使得到的DyLi曲t488巧光標記葡萄糖導入聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚 物與抗體偶聯，得到葡萄糖導入抗體。具體如下。
[0364] 首先，用Cy5標記IgG抗體。具體而言，將市售的小鼠 IgG、同型對照（Southern Biotechnology Associates Inc. K5mg/mL)溶液5血注入VIVASPIN(截留分子量為 10,000) 的上部部件。此處，在添加 O.IM憐酸緩沖液(p冊.4)后，重復于4°C、200化pm離屯、操作，將溶 劑置換為0.1M憐酸緩沖液(P冊.4)，之后，濃縮直到溶液量變為2.5mL。接著，在切5N-班巧 酷亞胺醋（切5-N服醋Klmg蛋白質標記用）（GE Healthcare公司）中添力日300化N，N-二甲 基甲酯胺，實施吹吸，在IgG溶液中添加所述溶液中的250化。之后，于室溫將混合溶液平穩 震蕩4小時。并且，用VIVASPIN(截留分子量為10，000)反復于4°C、200化pm進行超濾，在實施 IgG溶液的精制的同時，將溶劑置換為D-PBS (-)，得到被Cy5標記的IgG (Cy5 - IgG) (0.9mg/mL)溶液 SmL。
[0365] 接著，為了得到抗體與6-1中得到的共聚物的偶聯物，將二芐基環辛烘(DBCO)導 入抗體。具體而言，將2血切5-IgG 0.9mg/mL溶液注入VIVASPIN(截留分子量為10,000)的 上部部件。在上部部件中添加0.1M憐酸緩沖液(P冊.4)后，反復于4°C、20(K)rpm重復進行超 濾，將溶劑置換為0.1M憐酸緩沖液(P冊.4)，之后，濃縮直到溶液量變為2mL。接著，在IgG溶 液中加入二芐基環辛烘一N-班巧酷亞胺醋(DBC0-N服醋）的0.41mg/mL DMF溶液200化。將 混合溶液于室溫下平穩震蕩4小時。反應結束后，將反應液注入VIVASPIN(截留分子量為10， 000)的上部部件，在添加 D-PBS(-)后，反復于4°C、20(K)巧m進行超濾，在進行IgG溶液的精 制的同時，將溶劑置換為D-PBS(-)，得到4mL的導入了 DBC0的Cy5標記一IgG(Cy5標記 DBCO-IgG)溶液。
[0366] 進一步地，通過使DBC0與6-1中得到的共聚物的疊氮基反應，得到抗體與共聚物 的偶聯物。具體而言，首先，在800化D-PBS(-)中溶解3.5mg葡萄糖導入DyLi曲t488巧光 標記聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物。在2mL切5標記DBCO-IgG溶液中加入得到的溶 液。于一30°C將混合溶液靜置36小時，之后，于4°C靜置4小時，使之緩慢融解。將得到的反應 液注入VIVASPIN(截留分子量為50,000)的上部部件。在上部部件中添加 D-PBS(-)，反復 于4°C、200化pm進行超濾，實施IgG溶液的精制，得到相對于1分子抗體而言平均結合2分子 DyLi曲t488巧光標記聚乙二醇一聚天冬氨酸嵌段共聚物而得的切5標記IgG(Glc-polymer con化gated IgG)溶液（0. llmg/mL)3mL。
[0化7] 6 - 3.抗體的體內動態評價
[036引對8只6周齡的Balb/C罕小鼠停止喂食24小時。將8只小鼠分為A組、B組及對照組 (分別為3只、3只及2只）。對于A組的小鼠、B組的小鼠分別靜脈內注射200化各為750nM的 Glc -polymer con化gated IgG和切5 -IgG，在5分鐘后腹腔內施予200化20%葡萄糖溶液。 需要說明的是，各抗體的源于切5的巧光強度相同。在對A組及B組的小鼠各3只施予抗體后 57分鐘后施加乙酸麻醉，在3分鐘后實施采血和臟器摘取(腦、肝臟、腎臟、肺、屯、臟、脾臟及 大腿肌肉）。對于對照組的2只也另行實施采血和臟器摘取。將通過采血得到的血液分別于4 °C、15,0(K)rpm離屯、，回收上清。將8只小鼠的摘取的臟器首先測定總重量之后，分別切去一 半腦、約200mg肝臟，另外，取得一側的腎臟，實施重量的測定，在多珠振蕩器用的管中加入 臟器和金屬錐。另外，分別在除了對照組中的1只W外的7只腦及肝臟的樣品中加入600化1 X化ssive Lysis Buffer，在脾臟、屯、臟及大腿肌肉的樣品中加入300化，在腎臟及肺的樣 品中加入400化。另一方面，對于對照組中剩下的1只小鼠（100%對照）的臟器的樣品，計算 假定靜脈內注射的樣品全部累積于對應臟器時的樣品量，在臟器的樣品中加入對應量的 切5 -IgG溶液，并進一步添加1 X化ssive Lysis Buffer，使添加的溶液量的合計與其他7 只小鼠相同。利用多珠振蕩器將全部臟器樣品W2000rpm操作30秒，反復5次，將臟器均化。 從臟器的管中除去錐后，在多孔板的各孔中加入100化各樣品，用多孔板檢測儀 (Multiplate Reader) W激發波長643nm、巧光波長667nm實施巧光強度的測定。將對照組中 未加入切5-IgG溶液的樣品作為空白，將加入溶液的樣品作為100%，計算各臟器的抗體的 累積率，除了血液W外，算出將得到的累積率除W臟器的重量(g)而得的值。
[0369] 結果，偶聯有葡萄糖的抗體突破血腦屏障，到達了腦實質。抗體向腦實質中的到達 量為對照(C巧一IgG)的2倍（圖10)。
[0370] 根據上述實施例1~6,將用葡萄糖修飾外表面而得的PIC膠束(實施例2)、PICsome (實施例3)、siRNA膠束(實施例4)、葡萄糖偶聯物高分子(實施例5)及葡萄糖偶聯物抗體(實 施例6)伴隨血糖操作施予小鼠后，通過血腦屏障，在腦中顯著蓄積。血腦屏障的物質透過性 是限定性的，許多藥物無法通過血腦屏障，無法呈現其本來的效果。根據本發明，用葡萄糖 修飾藥物、或用葡萄糖修飾包封藥物的囊泡，并伴隨血糖操作施予后，即使是膠束、PICsome 運樣的巨大的囊泡也可W通過血腦屏障。該成果提供了將W往不能通過血腦屏障的分子遞 送至腦的劃時代性手法，可W適用于各種現存或今后研發的腦疾病藥及腦圖像診斷劑，開 拓了腦疾病治療或腦圖像診斷的新途徑。
[0巧1] 實施例7.向血管內皮細胞的遞送
[0372] 根據上述實施例2,葡萄糖導入率為25%的膠束顯示了大于3%的向腦中的蓄積， 相對于此，葡萄糖導入率為50%的膠束顯示了約1.3%的向腦中的蓄積。可W認為，運一現 象意味著葡萄糖的導入率增加導致了被腦血管內皮細胞攝入的膠束和腦血管內皮細胞的 分離降低。于是，本實施例中，確認了葡萄糖導入率與膠束向腦血管內皮細胞中的蓄積的關 系。
[0373] 首先，如實施例1-7及實施例2所述，調節Glc(6)-陽G-P(Asp.)與陽G-P(Asp.) 的混合量，制備葡萄糖導入率為10%的膠束、葡萄糖導入率為25%的膠束或葡萄糖導入率 為50 %的膠束。
[0374] 在將得到的膠束分別i.v.施予小鼠2日后，通過通常方法制作腦的組織切片（厚 度：14皿），通過免疫巧光染色將腦血管內皮細胞染色，觀察膠束的巧光的偏在。對于腦血管 內皮細胞而言，將抗PECAM-1抗體（Santa Cruz公司制，制品編號：SC18916，Rat monoclonal)用作一級抗體，將Alexa488偶聯一山羊抗大鼠 IgG(H+L)抗體（Invitrogen公司 審IJ，制品編號:A11006)用作二次抗體進行檢測。另外，利用C巧的巧光檢測膠束。
[0375] 結果，如圖12A所示，在施予了葡萄糖導入率為50%的膠束的小鼠的腦中，特別頻 繁地觀察到腦血管內皮細胞與膠束的共偏在（圖12A內的箭頭）。另外，如圖12B所示，葡萄糖 導入率為10 %、25 %及50 %的膠束也均觀察到了腦血管內皮細胞的與膠束的共偏在，但葡 萄糖導入率為50 %時，膠束在腦血管內皮細胞中的偏在頻率顯著增加。
[0376] 實施例1~6顯示，可W將表面覆蓋有葡萄糖的膠束等囊泡、偶聯有葡萄糖的抗體 等化合物通過腦血管內皮細胞極其高效地遞送至腦實質內，另一方面，也暗示了在腦血管 內皮細胞內蓄積一部分囊泡、化合物的可能性。特別地，對于表面覆蓋有葡萄糖的膠束而 言，葡萄糖的導入率越高，從腦血管內皮細胞脫離而進入腦實質的膠束的量越低，由此表 明，膠束也可W在腦血管內皮細胞中部分蓄積。實施例7進一步確認了運一事實，結果表明， 膠束確實也在腦血管內皮細胞中蓄積。另外，在葡萄糖導入率為50%時，也顯示出膠束在腦 血管內皮細胞中顯著蓄積。
【主權項】
1. 一種組合物，其是含有藥物遞送用載體、用于按照施予計劃施予至對象的組合物， 所述施予計劃包括:將所述組合物施予至已使其禁食或已誘發低血糖的對象，并且，誘 發所述對象的血糖值上升， 所述載體的外表面經GLUTl配體修飾。2. -種組合物，其是含有藥物與GLUTl配體的偶聯物、用于按照施予計劃施予至對象的 組合物， 所述施予計劃包括：將所述組合物施予至已使其禁食、或已誘發低血糖的對象，并且， 誘發所述對象的血糖值上升。3. 如權利要求1或2所述的組合物，其是用于將藥物遞送至腦的組合物。4. 如權利要求1或2所述的組合物，其是用于使藥物通過血腦屏障的組合物。5. 如權利要求1或2所述的組合物，其是用于使藥物通過血神經屏障、血視網膜屏障或 血腦脊液屏障的組合物。6. 如權利要求1或2所述的組合物，其是用于將藥物遞送至腦血管內皮細胞的組合物。7. 如權利要求1~6中任一項所述的組合物，血糖值上升是通過施予葡萄糖而被誘發 的。8. 如權利要求7所述的組合物，其中，組合物的施予與葡萄糖的施予同時進行，或者在 施予葡萄糖之前施予組合物。9. 如權利要求1~8中任一項所述的組合物，組合物被輸液施予至靜脈內，輸液施予持 續10分鐘以上。10. 如權利要求1及3~9中任一項所述的組合物，其中，載體為囊泡，形成囊泡的高分子 中的10~40摩爾％被61^1' 1配體修飾。11. 如權利要求1及3~9中任一項所述的組合物，其中，載體為囊泡，形成囊泡的高分子 中的40~100摩爾％被61^1' 1配體修飾。12. 如權利要求1及3~11中任一項所述的組合物，其中，載體中包封待遞送的藥物。13. 如權利要求1及3~12中任一項所述的組合物，其中，載體為囊泡，囊泡為直徑400nm 以下的囊泡。14. 如權利要求2~9中任一項所述的組合物，其中，偶聯物是藥物與GLUTl配體經由連 接體連接而成的。15. 如權利要求1~14中任一項所述的組合物，其中，GLUTl配體為葡萄糖。16. 如權利要求1~15中任一項所述的組合物，其中，藥物為選自生理活性物質、抗體、 核酸、生物相容性熒光色素、及造影劑中的至少1種藥物。17. -種偶聯物，其是1分子GLUTl配體與1分子高分子的偶聯物，偶聯物能夠以使得 GLUTl配體露出囊泡表面的方式形成囊泡。18. 如權利要求17所述的偶聯物，其中，GLUTl配體為葡萄糖。19. 如權利要求18所述的偶聯物，其中，葡萄糖經由其6號碳原子與高分子偶聯。20. 如權利要求19所述的偶聯物或其藥學上允許的鹽，所述偶聯物由下述式（I )、下述 式(II)、下述式(III)或者下述式(XVI)表示：式(XVI)中，n16為5~20, OOO的整數，m16為2~5, OOO的整數。21. -種囊泡，其是含有權利要求17~20中任一項所述的偶聯物的藥物遞送用囊泡， 所述偶聯物占形成囊泡的全部高分子中的10~40摩爾％。22. -種囊泡，其是含有權利要求17~20中任一項所述的偶聯物的藥物遞送用囊泡， 所述偶聯物占形成囊泡的全部高分子中的40~100摩爾％。
【文檔編號】A61K47/34GK105899192SQ201480063806
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年11月21日
【發明人】片岡則, 片岡一則, 安樂泰孝, 西山伸宏, 宮田完二郎, 石井武彥, 松本有, 福里優, 溝口明祐, 橫田隆德, 桑原宏哉, 仁科隆, 仁科一隆, 水澤英洋
【申請人】國立大學法人東京大學, 國立大學法人東京醫科齒科大學