一種注射用左旋聚乳酸填充劑及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種注射用左旋聚乳酸填充劑及其制備方法，該填充劑有效成分為左旋聚乳酸微粒、蜂巢HA和增效劑，所述蜂巢HA是將高分子量的透明質酸鈉和低分子量的透明質酸鈉復配而成的水溶液在堿性條件下醇沉、干燥而得；所述增效劑為甘露醇，或者為質量比1:0.05?0.12的甘露醇和蘆薈多糖的混合物。本發明填充劑制備簡單，復懸時間更短、有效期長，使用更加方便。
【專利說明】
-種注射用左旋聚乳酸填充劑及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明設及一種注射用左旋聚乳酸填充劑及其制備方法，屬于高分子醫療用品技 術領域。
【背景技術】
[0002] 聚乳酸(Pol^actic acicUPLA)是20世紀90年代迅速發展起來的新一代可完全降 解高分子材料，它是W微生物發酵產物乳酸為單體，用化學合成方法聚合而成的，是熱塑性 脂肪族樹脂的一種。合成聚乳酸的原料其分子中含有一個手性碳原子，具有旋光性。因此， 聚乳酸具有左旋聚乳酸(PLLA)、右旋聚乳酸(PDLA)、外消旋聚乳酸(D，L-PLA)和內消旋聚乳 酸(meso-PLA)等幾種不同的旋光異構聚合體。
[0003] 化LA在美容注射領域應該較為廣泛，其作為美容注射用材料有其獨特之處。與單 純填充劑不同，PLLA是一種可W刺激皮下膠原蛋白生長的人工合成真皮填充劑。PLLA可W 引起一種異物巨細胞反應，從而導致膠原蛋白逐漸生成。運個過程中，PLLA聚合狀態和分子 結構被分解破壞，通過非酶水解緩慢降解為乳酸，最終降解為C〇2和也0。在降解過程中，運些 乳酸可刺激膠原形成，導致真皮內纖維素增生產生想要的美容效果，隨著時間的增加使真 皮層增厚，填充部位完全被新生的自體組織代替，得到一個"永久性美容"的效果。
[0004] 目前國內市場尚沒有左旋聚乳酸填充劑產品上市，國外市場只有美國賽諾菲-安 萬特公司（Sanofi-aventis U.S.)的S州Iptra和S州Iptra Aesthetic產品在FDA批準上市。 S州Iptra和S州Iptra Aesthetic采用了CMC-fe作為左旋聚乳酸微粒的助懸劑，CMC-Na存在 兩方面問題:一是CMC-Na不是人體內源性物質，生物相容性沒有透明質酸好;二是CMC-Na作 為助懸劑時，Sculptra和Sculptra Aesthetic需要很長時間（一般為2 h左右）的水化作用 才能用于皮內注射，作為美容注射填充劑，給患者的應用帶來不便。此外，Sculptra和 Sculp化a Aesthetic水化結束后注射前需要將填充劑混勻后才能注射，運就使得聚乳酸微 粒不能夠充分混勻，容易聚集，從而造成皮下結節的出現。
[0005] 目前，國內對左旋聚乳酸填充劑研究較少，相關專利也較少，公布號為CN 104258470 A的專利介紹了一種注射用聚乳酸微球和交聯透明質酸混合凝膠及其制備方 法，該混合凝膠由聚乳酸微球和交聯透明質酸凝膠的鹽溶液組成，聚乳酸微球的分子量為 15-120kDa，平均粒徑為10-150微米。該專利產品聚乳酸微球是在含水凝膠環境中保存，研 究發現，PLLA微粒在含水環境下不能長時間穩定存在，儲存超過1個月時就可能發生微球結 構巧塌或微粒黏連等，可見，該混合凝膠存在穩定性差、有效期短等缺點。公布號為CN 104147640 A的專利介紹了一種由右旋聚乳酸高分子樹脂制備成的微米與納米級的整形美 容填充顆粒及其制備方法，運種顆粒的粒徑為50至0.45微米，由右旋聚乳酸和氨基酸組成， 還可W含有甘露醇或其他小分子物質作為賦形劑。但是，該專利產品中的右旋聚乳酸納米 微粒在人體中降解生成的D-乳酸無法被人體直接吸收，容易造成局部的D-乳酸積累。
【發明內容】
[0006] 針對目前左旋聚乳酸填充劑較少、填充劑水化時間長、注射后容易造成皮下結節 等不足，提供了一種注射用左旋聚乳酸填充劑及其制備方法，該填充劑為固態，保質期長、 穩定性好，且通過有效成分的選擇，填充劑水化混勻時間大大縮短，聚乳酸微粒也更容易分 散均勻，減少了皮下結節的出現，為美容注射領域提供了新的選擇。
[0007] 本發明還提供了上述填充劑的制備方法，該方法操作簡單、易于實施，制得的填充 劑性能更優。
[0008] 本發明具體技術方案如下： 一種注射用左旋聚乳酸填充劑，該填充劑有效成分為左旋聚乳酸微粒、蜂巢HA和增效 劑，所述蜂巢HA是將高分子量的透明質酸鋼和低分子量的透明質酸鋼復配而成的水溶液在 堿性條件下醇沉、干燥而得;所述增效劑為甘露醇，或者為質量比1:0.05-0.12的甘露醇和 蘆苔多糖的混合物。
[0009] 上述填充劑中，由左旋聚乳酸微粒、蜂巢HA和增效劑復配而成。所述蜂巢HA是由高 分子HA和低分子HA復配而得，在水溶液中，HA分子由于氨鍵的作用呈螺旋狀態，當高分子量 HA和低分子量HA在堿性環境下達到一定濃度和比例時，HA分子間逐漸由螺旋結構變成網狀 結構，最后變成類似蜂巢結構。蜂巢HA在水溶液中具有親體仿生性的類蜂巢結構，可W更好 的分散聚乳酸微粒，防止其聚集，從而減少由于聚乳酸分布不均造成的皮下結節的出現;而 且經過堿性醇沉后，蜂巢HA其溶解速度較普通HA更快，減少了產品水化混勻時間。增效劑為 甘露醇或甘露醇與蘆苔多糖的混合物，所述甘露醇是一種抗氧化物，能夠清除氧自由基，提 高膚感，并且較高濃度的甘露醇能夠明顯抑制HA的降解，延長填充時間。所述蘆苔多糖具有 美白保濕、抗氧化、消炎、修復肌膚、延緩衰老的作用，能夠減緩皮膚注射時的炎癥反應，也 能抑制HA的降解。同時，甘露醇和蘆苔多糖還能夠促進產品凍干成型，與單一甘露醇相比更 有利于產品復懸，進一步減少了產品混勻時間。
[0010] 進一步的，甘露醇和蘆苔多糖的質量比1:0.083。
[0011] 本發明所用的蜂巢HA是W高分子量和低分子量的透明質酸鋼為原料經過處理得 到的。高分子量的透明質酸鋼的分子量優選為1000~3000 kDa，低分子量的透明質酸鋼的 分子量優選為1~500 kDa。
[0012] 進一步的，所述蜂巢HA中，高分子量的透明質酸鋼與低分子量的透明質酸鋼的復 配質量比為：1:9~9:1。
[0013] 進一步的，蜂巢HA是按W下方法制得的：將高分子量的透明質酸鋼和低分子量的 透明質酸鋼溶于水中，充分攬拌均勻后調節溶液pH至8-13,然后在攬拌下加入體積分數為 95%的乙醇或95%的甲醇溶液進行醇沉，過濾除去上層液體，剩余沉淀用體積分數為75~80% 的乙醇或75~80%的甲醇溶液洗涂脫鹽，脫鹽Ξ次后，將沉淀用無水乙醇、無水甲醇或無水丙 酬脫水、干燥，得到蜂巢HA。圖8是原子力顯微鏡下蜂巢HA的微觀結構圖，原子力顯微鏡的參 數為:Multimode化noscope VIII，探針是XSC11，掃描模式是scanasyst，掃描速度是IHz， 分辨率是512X512。從圖中可W看出，蜂巢HA具有親體仿生性的類蜂巢結構。
[0014] 進一步的，所述左旋聚乳酸的分子量為30000~100000 Da,優選分子量為30000~ 60000 Da。
[0015] 進一步的，所述左旋聚乳酸為形狀不規則的微米級顆粒(簡稱微粒），或者為形狀 規則的微球。左旋聚乳酸的粒徑為微米級，粒徑一般為15~75 μπι，優選為20~50 μπι。
[0016] 本發明注射用左旋聚乳酸填充劑為固體制劑，優選為凍干粉。運樣可W保證左旋 聚乳酸一直處于無水狀態下儲存，不會存在左旋聚乳酸微球結構巧塌或左旋聚乳酸微粒黏 連，延長了填充劑的穩定性和有效期。
[0017] 進一步的，在填充劑中，左旋聚乳酸在填充劑中的質量百分比含量為10-60%，所述 蜂巢HA在填充劑中的質量百分比含量為10%~20%，所述增效劑在填充劑中的質量百分比含 量為20%~80%。上述含量中，各有效成分的含量均指的是有效成分在填充劑固體制劑中的含 量。
[001引優選的，左旋聚乳酸在填充劑中的質量百分比含量為40%-50%，所述蜂巢HA在填充 劑中的質量百分比含量為10%~20%，所述增效劑在填充劑中的質量百分比含量為30%-60%。
[0019] 最優選的，左旋聚乳酸在填充劑中的質量百分比含量為41%，所述蜂巢HA在填充劑 中的質量百分比含量為11%，所述增效劑在填充劑中的質量百分比含量為48%。
[0020] 本發明還提供了上述注射用左旋聚乳酸填充劑的制備方法，該方法包括W下步 驟： (1) 將高分子量的透明質酸鋼和低分子量的透明質酸鋼溶于水中，充分攬拌均勻后調 節溶液抑至8-13，然后在攬拌下加入體積分數為95%的乙醇或95%的甲醇溶液進行醇沉，過 濾除去上層液體，剩余沉淀用體積分數為75~80%的乙醇或75~80%的甲醇溶液洗涂脫鹽，脫 鹽Ξ次后，將沉淀用無水乙醇、無水甲醇或無水丙酬脫水、真空干燥，得到蜂巢HA; (2) 將蜂巢HA與增效劑溶于水中，得蜂巢HA與增效劑的混合液； (3) 取左旋聚乳酸微粒或微球，加入蜂巢HA與增效劑的混合液中，攬拌均勻后將抑調節 至中性，冷凍干燥，得注射用左旋聚乳酸填充劑。
[0021] 上述方法制得的填充劑為凍干粉。
[0022] 上述步驟(1)中，水的用量滿足將透明質酸鋼完全溶解即可，可W根據實際情況進 行調整。
[0023] 上述步驟（1)中，高低分子量的透明質酸鋼攬拌均勻后再調節抑至8-13,然后在同 樣的轉速下加入乙醇或甲醇溶液進行醇沉。攬拌速度可W選擇200-25化/min。
[0024] 上述步驟(1)中，用氨氧化鋼調節抑。
[0025] 上述步驟(2)中，水的用量滿足將蜂巢HA與增效劑完全溶解即可，可W根據實際情 況進行調整。
[00%] 上述步驟(3)中，攬拌轉速可W為500-600 r/min。
[0027]優選的，上述步驟(3)采用特殊的攬拌方式使有效成分充分混合，具體為:攬拌按 照正向、反向交替攬拌30s的方式進行，共攬拌20-40min。由于正反向交替攬拌，混合物中有 微小氣泡產生，運些微小氣泡使凍干后的樣品質地更加疏松，減少了產品應用時的水化混 勻時間。
[00%]進一步的，攬拌時，轉子離液面的深度為液面高度的30-40%時效果較佳。
[0029] 上述制備方法中，所用的左旋聚乳酸微粒或微球可W市購，也可W按照現有技術 中公開的方法自行制備。本發明的具體技術方案中，采用機械法制備左旋聚乳酸微粒，采用 乳化-溶劑揮發法制備左旋聚乳酸微球。
[0030] 機械法制備左旋聚乳酸微粒的具體方法為:在工作壓力為0.2~0.8 MPa、左旋聚乳 酸的進料速度為30~100 g/min的條件下，用氣流粉碎機粉碎左旋聚乳酸，得到的微粒用pH 6. ο的鹽酸溶液浸潤洗涂兩次，真空干燥，得左旋聚乳酸微粒。
[0031] 為了使左旋聚乳酸微粒的粒度更為集中，還可W對所得微粒進行進一步的懸浮篩 分處理，具體為:將得到的微粒用抑6.0的鹽酸溶液浸潤洗涂兩次后，將微粒轉移至孔徑10 WI1的微孔濾器中并浸于pH 6.0的體積濃度15%~20%的乙醇溶液中，在攬拌下通過死端過濾 篩分出微小顆粒，然后真空干燥，得到粒度集中的左旋聚乳酸微粒。
[0032] 乳化-溶劑揮發法制備左旋聚乳酸微球的具體方法為:將左旋聚乳酸溶于二氯甲 燒中，配成質量濃度為2.5%~4%的溶液，按照左旋聚乳酸和聚乙締醇1:0.8的質量比，將左旋 聚乳酸二氯甲燒溶液在200~800 r/min攬拌下緩慢注入濃度為0.1%~0.2%(w/v)的聚乙締醇 (PVA)水溶液中，室溫下攬拌乳化;乳化完成后，常壓或減壓下攬拌揮發除去二氯甲燒，剩余 反應液過濾收集濾餅，洗涂即得左旋聚乳酸微球。
[0033] 為了使左旋聚乳酸微球的粒度更為集中，也可W按照上述方法對微球進行懸浮篩 分處理，具體為:將洗涂得到的左旋聚乳酸微球轉移至孔徑10皿的微孔濾器中并浸于pH 6.0的體積濃度15%~20%的乙醇的混合溶液中，在攬拌下通過死端過濾篩分出微小微球，然 后真空干燥，得到粒度集中的左旋聚乳酸微球。
[0034] 本發明具有W下有益效果： 1、本發明在左旋聚乳酸填充劑的配方中加蜂巢HA。蜂巢HA由高分子量HA與低分子量HA 復配后在堿性條件下醇沉所得，經過此方法制得的蜂巢HA在水中溶解速度快，能夠形成仿 生性的蜂巢結構，可W更好的分散左旋聚乳酸微粒，減少其聚集，從而減少皮下結節的發 生。而且，堿性醇沉后的蜂巢HA的溶解速度比普通HA更快，減少了產品使用過程中的水化混 勻時間。
[0035] 2、本發明在左旋聚乳酸填充劑的配方中加入高含量的甘露醇或甘露醇與蘆苔多 糖的混合物。甘露醇和蘆苔多糖均具有抗氧化物、提高膚質的作用，能夠明顯抑制HA的降 解，延長填充時間，維持更好的填充效果。同時，它們的存在還會加快填充劑在水中的混勻 速度，減少混勻時間。
[0036] 3、本發明在制備左旋聚乳酸填充劑時優選采用正反向交替混勻的方式，與單向混 勻相比，正反向交替混勻可W使混合液產生更多的微小氣泡，凍干后的產品質地更疏松，產 品的混勻時間更短。
[0037] 4、本發明優選采用懸浮篩分的方式將氣流粉碎或乳化-溶劑揮發制得左旋聚乳酸 微粒或微球進行篩分處理，所得左旋聚乳酸填充劑中聚乳酸顆粒更集中、復懸時間更短、產 品更加穩定。
[0038] 5、本發明將填充劑優選制成固體制劑，例如凍干粉，避免了左旋聚乳酸與水接觸， 化LA微粒或微球均為干燥狀態儲存，更有利于提高產品的穩定性，延長了填充劑的有效期。
【附圖說明】
[0039] 圖1氣流磨粉碎所得化LA微粒粒度分布圖。
[0040] 圖2懸浮篩分后所得化LA微粒粒度分布圖。
[0041 ]圖3懸浮篩分篩出的化LA微粒粒度分布圖。
[0042] 圖4化LA不規則微粒顯微鏡圖（放大倍數10X15)。
[0043] 圖5化LA微粒在含水溶液中室溫放置1個月顯微鏡圖（放大倍數10X15)。
[0044] 圖6化LA微球顯微鏡圖（放大倍數10X15)。
[0045] 圖7化LA微球在含水溶液中室溫放置1個月顯微鏡圖（放大倍數10X15)。
[0046] 圖8原子力顯微鏡下蜂巢HA的微觀結構圖。
【具體實施方式】
[0047] 為了更好的理解本發明，下面結合具體實施例來進一步說明。但是本發明不僅限 于W下具體實施例。如無特別說明，所用各成分的含量均為質量百分比含量。
[004引實施例1 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，甘露醇48%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0049] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微粒的制備:在工作壓力為0.6 Μ化、左旋聚乳酸的進料速度為60g/min 的條件下，用氣流粉碎機粉碎，制備平均粒徑為30μπι、分子量為50000Da的左旋聚乳酸微粒， 得到的微粒用pH 6.0的鹽酸溶液浸潤洗涂兩次，真空干燥，得左旋聚乳酸微粒。
[0050] 2、蜂巢HA的制備：將3g分子量為2000kDa的高分子量透明質酸鋼和7g分子量為 300W)a的低分子量透明質酸鋼溶于400 g水中，200 r/min的轉速下攬拌1 h，用化0H調節溶 液抑至10,然后在攬拌下迅速加入水的2體積倍的體積分數為95%的乙醇或甲醇溶液進行醇 沉，攬拌至沉淀完全，過濾除去上層液體，剩余沉淀加入體積分數為75~80%的乙醇或甲醇溶 液洗涂，溶解其中的鹽，然后過濾，連續用體積分數為75~80%的乙醇或甲醇溶液洗涂脫鹽Ξ 次，然后將沉淀用無水乙醇、無水甲醇或無水丙酬脫水、真空干燥，得到蜂巢HA; 3、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入1.1 g的蜂巢HA和4.8 g甘露醇，混勻即得蜂巢 HA與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微粒，調整轉子離液面深度 為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替轉動30 S，共攬拌 20-30min，然后調節溶液抑至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充劑。 [0化1]實施例2 填充劑配方:同實施例1。
[0052] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微粒的制備:在工作壓力為0.6 Μ化、左旋聚乳酸的進料速度為60g/min 的條件下，用氣流粉碎機粉碎，制備平均粒徑為30μπι、分子量為50000Da的左旋聚乳酸微粒， 得到的微粒用pH 6.0的鹽酸溶液浸潤洗涂兩次，然后將左旋聚乳酸微粒轉移至10 WI1的微 孔濾器中并浸于用鹽酸調節至抑為6.0的體積分數15%~20%(v/v)的乙醇溶液中，在攬拌下 通過死端過濾篩分出部分微小顆粒，真空干燥，得到左旋聚乳酸微粒。
[0053] 圖1-3是采用Winner2308A激光粒度分析儀測試的微粒的粒度分布，從圖中可W看 出，氣流粉碎后80%W上的左旋聚乳酸微粒粒徑在20~75 μπι，約60%的微粒粒徑在20~50 μπι; 經懸浮篩分后的左旋聚乳酸微粒約80%W上粒徑在20~60 μπι，平均粒徑為30 μπι;篩出的左 旋聚乳酸微粒粒徑90%W上在13 μL?Κ下。運表明懸浮篩分增加了微粒的集中度。
[0054] 圖4是所得左旋聚乳酸微粒的顯微鏡圖，圖5是將微粒在含水溶液中室溫放置1個 月的顯微鏡圖。從圖的對比可W看出，PLLA微粒在含水環境下不能長時間穩定存在，儲存超 過1個月時就可能發生微粒黏連。
[0055] 2、蜂巢HA的制備：同實施例1; 3、填充劑的制備：同實施例1。本發明填充劑為凍干粉，PLLA微球在干燥狀態儲存，穩定 性高，有效期長。
[0056] 實施例3 填充劑配方(wt%):左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，甘露醇48%。左旋聚乳酸的分子量為 50000 Da。
[0057] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微球的制備:將左旋聚乳酸溶于二氯甲燒中，配成質量濃度為3.0%的溶 液，取40ml該溶液，在600 r/min攬拌下緩慢注入640mL 0.15%(w/v)的聚乙締醇(PVA)水溶 液中，室溫下攬拌乳化5 min;乳化完成后，常壓或減壓下攬拌揮發除去二氯甲燒，剩余反應 液過濾，濾餅洗涂3次，即得左旋聚乳酸微球，粒徑30μπι，左旋聚乳酸分子量50000Da。
[0058] 2、蜂巢HA的制備：將3g分子量為2000kDa的高分子量透明質酸鋼和7g分子量為 300W)a的低分子量透明質酸鋼溶于400g水中，200 r/min的轉速下攬拌1 h，用化0H調節溶 液抑至10,然后在攬拌下迅速加入水的2體積倍的體積分數為95%的乙醇或甲醇溶液進行醇 沉，攬拌至沉淀完全，過濾除去上層液體，剩余沉淀用體積分數為75~80%的乙醇或甲醇溶液 洗涂脫鹽Ξ次，然后將沉淀用無水乙醇、無水甲醇或無水丙酬脫水、真空干燥，得到蜂巢HA; 3、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入1.1 g的蜂巢HA和4.8 g甘露醇，混勻即得蜂巢 HA與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微球，調整轉子離液面深度 為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替轉動30 S，共攬拌 20-30min，然后調節溶液抑至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充劑。 [0化9] 實施例4 填充劑配方(wt%):左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，甘露醇48%。左旋聚乳酸的分子量為 50000 Da。
[0060] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微球的制備:將左旋聚乳酸溶于二氯甲燒中，配成質量濃度為3.0%的溶 液，取40ml該溶液，在600 r/min攬拌下緩慢注入640mL 0.15%(w/v)的聚乙締醇(PVA)水溶 液中，室溫下攬拌乳化5 min;乳化完成后，常壓或減壓下攬拌揮發除去二氯甲燒，剩余反應 液過濾，濾餅洗涂3次，即得左旋聚乳酸微球。將左旋聚乳酸微球轉移至10 WI1的微孔濾器中 并浸于用鹽酸調節至pH為6.0的體積分數15%~20%(v/v)的乙醇溶液中，在攬拌下，通過死 端過濾篩分出部分微小顆粒，真空干燥，得左旋聚乳酸微球，粒徑30μπι，左旋聚乳酸分子量 50000 Da。
[0061] 圖6是所得左旋聚乳酸微球的顯微鏡圖，圖7是將微球在含水溶液中室溫放置1個 月的顯微鏡圖。從圖的對比可W看出，PLLA微球在含水環境下不能長時間穩定存在，儲存超 過1個月時就可能發生微球結構巧塌。
[0062] 2、蜂巢HA的制備：同實施例3; 3、填充劑的制備：同實施例3。本發明填充劑為凍干粉，PLLA微球在干燥狀態儲存，穩定 性高，有效期長。
[0063] 實施例5 填充劑配方(wt%):同實施例2。
[0064] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微粒的制備：同實施例2。
[0065] 2、蜂巢HA的制備:將一定量的高分子量透明質酸鋼和低分子透明質酸鋼溶于400g 水中，200 r/min的轉速下攬拌1 h，用化OH調節溶液抑至13,然后在攬拌下迅速加入水的2 體積倍的體積分數為95%的乙醇或甲醇溶液進行醇沉，攬拌至沉淀完全，過濾除去上層液 體，剩余沉淀用體積分數為75~80%的乙醇或甲醇溶液洗涂脫鹽Ξ次，然后將沉淀用無水乙 醇、無水甲醇或無水丙酬脫水、真空干燥，得到蜂巢HA; 3、填充劑的制備：同實施例2。
[0066] 制備蜂巢HA時，所用的高分子量、低分子量的透明質酸鋼按照下表所示進行選擇：
實施例6 填充劑配方(wt%):左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，甘露醇48%。
[0067] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微球的制備:將左旋聚乳酸溶于二氯甲燒中，配成質量濃度為2.5%的溶 液，取400ml該溶液，在600 r/min攬拌下緩慢注入800mL 0. l%(w/v)的聚乙締醇(PVA)水溶 液中，室溫下攬拌乳化5 min;乳化完成后，常壓或減壓下攬拌揮發除去二氯甲燒，剩余反應 液過濾，濾餅洗涂3次，即得左旋聚乳酸微球。將左旋聚乳酸微球轉移至10 WI1的微孔濾器中 并浸于用鹽酸調節至pH為6.0的體積分數15%~20%(v/v)的乙醇溶液中，在攬拌下，通過死 端過濾篩分出部分微小顆粒，真空干燥，得左旋聚乳酸微球，所得微球的平均粒徑和分子量 如下表所示。
[0068] 2、蜂巢HA的制備：同實施例4; 3、填充劑的制備：同實施例4。
[0069] 制備的左旋聚乳酸微球的分子量和平均粒徑如下表所示：
實施例7 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸50%，蜂巢HA 20%，甘露醇30%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0070]填充劑的制備方法同實施例2。
[0071 ]實施例8 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸10%，蜂巢HA 10%，甘露醇80%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0072] 填充劑的制備方法同實施例2。
[0073] 實施例9 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸60%，蜂巢HA 20%，甘露醇20%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0074] 填充劑的制備方法同實施例2。
[00對實施例10 填充劑配方(wt%):左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，增效劑48%。左旋聚乳酸的分子量為 50000 Da，增效劑為質量比1:0.083的甘露醇和蘆苔多糖的混合物。
[0076] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微球的制備：同實施例4。
[0077] 2、蜂巢HA的制備：同實施例4; 3、填充劑的制備：同實施例4。
[007引實施例11 填充劑配方(wt%):左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，增效劑48%。左旋聚乳酸的分子量為 50000 Da，增效劑為質量比1:0.05的甘露醇和蘆苔多糖的混合物。
[0079] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微球的制備：同實施例4。
[0080] 2、蜂巢HA的制備：同實施例4; 3、填充劑的制備：同實施例4。
[00川實施例12 填充劑配方(wt%):左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，增效劑48%。左旋聚乳酸的分子量為 50000 Da,增效劑為質量比1:0.12的甘露醇和蘆苔多糖的混合物。
[0082]填充劑的制備方法如下： 1、 左旋聚乳酸微球的制備：同實施例4; 2、 蜂巢HA的制備：同實施例4; 3、 填充劑的制備：同實施例4。
[008；3] 實施例13 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，甘露醇48%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0084] 填充劑的制備方法如下： 1、 左旋聚乳酸微粒的制備：同實施例2; 2、 蜂巢HA的制備：同實施例2; 3、 填充劑的制備:在50ml注射用水中加入l.lg的蜂巢HA和4.8g甘露醇，混勻即得蜂巢 HA與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微粒，調整轉子離液面深度 為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下沿同一方向攬拌20-30min，然后調節溶液抑至 中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充劑。
[0085] 實施例14 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸25%，蜂巢HA 15%，甘露醇60%。左旋 聚乳酸的分子量為40000 Da。
[0086] 填充劑的制備方法如下： 1、左旋聚乳酸微粒的制備:在工作壓力為O.SMPa、左旋聚乳酸的進料速度為lOOg/min 的條件下，用氣流粉碎機粉碎，制備平均粒徑為15μπι、分子量為40000Da的左旋聚乳酸微粒， 得到的微粒用pH 6.0的鹽酸溶液浸潤洗涂兩次，真空干燥，得左旋聚乳酸微粒。
[0087] 2、蜂巢HA的制備：同實施例1; 3、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入1.5g的蜂巢HA和6g甘露醇，混勻即得蜂巢HA 與甘露醇混合液，向該混合液中加入2.5g上述的左旋聚乳酸微粒，調整轉子離液面深度為 溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替轉動30 S，共攬拌20- 30min，然后調節溶液抑至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充劑。
[008引實施例15 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸40%，蜂巢HA 15%，甘露醇45%。左旋 聚乳酸的分子量為40000 Da。
[0089] 填充劑的制備方法如下： 1、將左旋聚乳酸溶于二氯甲燒中，配成質量濃度為4.0%的溶液，取40ml該溶液，在200 r/min攬拌下緩慢注入640mL 0.2%(w/v)的聚乙締醇（PVA)水溶液中，室溫下攬拌乳化5 min;乳化完成后，常壓或減壓下攬拌揮發除去二氯甲燒，剩余反應液過濾，濾餅洗涂3次，即 得左旋聚乳酸微球，粒徑50μπι，左旋聚乳酸分子量40000 Da。
[0090] 2、蜂巢HA的制備：將5g分子量為2000kDa的高分子量透明質酸鋼和3g分子量為 300W)a的低分子量透明質酸鋼溶于400g水中，200 r/min的轉速下攬拌1 h，用化0H調節溶 液pH至8,然后在攬拌下迅速加入水的2體積倍的體積分數為95%的乙醇或甲醇溶液進行醇 沉，攬拌至沉淀完全，過濾除去上層液體，剩余沉淀用體積分數為75~80%的乙醇或甲醇溶液 洗涂脫鹽Ξ次，然后將沉淀用無水乙醇、無水甲醇或無水丙酬脫水、真空干燥，得到蜂巢HA; 3、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入1.5g的蜂巢HA和4.5g甘露醇，混勻即得蜂巢 HA與甘露醇混合液，向該混合液中加入4g上述的左旋聚乳酸微球，調整轉子離液面深度為 溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替轉動30 S，共攬拌20- 30min，然后調節溶液抑至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充劑。
[0091] 對比例1 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸41%，蜂巢HA 11%，甘露醇48%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0092] 填充劑的制備方法為： 1、左旋聚乳酸微粒的制備：同實施例2。
[0093] 2、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入l.lg的分子量lOOOkDa的HA和4.8 g甘露 醇，混勻即得HA混合物與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微粒，調 整轉子離液面深度為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替 轉動30 S，共攬拌20-30min，然后調節溶液pH至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅 菌，即得填充劑。
[0094] 對比例2 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸41%，簇甲基纖維素鋼11%，甘露醇 48%。左旋聚乳酸的分子量為50000 Da。
[00M]填充劑的制備方法為： 1、左旋聚乳酸微粒的制備：同實施例2。
[0096] 2、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入1. Ig的簇甲基纖維素鋼和4.8 g甘露醇， 混勻即得簇甲基纖維素鋼與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微 粒，調整轉子離液面深度為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反 向交替轉動30 S，共攬拌20-30min，然后調節溶液抑至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙 燒滅菌，即得填充劑。
[0097] 對比例3 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸41%，氨基酸11%，甘露醇48%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0098] 填充劑的制備方法為： 1、左旋聚乳酸微粒的制備：同實施例2。
[0099] 2、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入l.lg的氨基酸和4.8 g甘露醇，混勻即得 氨基酸與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微粒，調整轉子離液面 深度為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替轉動30 S，共 攬拌20-30min，然后調節溶液pH至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充 劑。
[0100] 對比例4 填充劑配方為(wt%，下述實施例亦同）：左旋聚乳酸41%，交聯HA 11%，甘露醇48%。左旋 聚乳酸的分子量為50000 Da。
[0101] 填充劑的制備方法為： 1、左旋聚乳酸微粒的制備：同實施例2。
[0102] 2、交聯透明質酸鋼顆粒的制備:將分子量為2000kDa的透明質酸鋼加入O.lmol/L 的化師容液中，加入交聯劑1，4-下二醇縮水甘油酸(BDDE)，攬拌均勻后，30°C交聯24h得到 交聯透明質酸鋼，然后轉移到PBS緩沖液中純化12h(每化換一次緩沖液），純化完成后交聯 透明質酸鋼凝膠冷凍干燥得到交聯透明質酸鋼干粉。
[0103] 3、填充劑的制備:在50ml注射用水中加入l.lg的交聯HA和4.8 g甘露醇，混勻即得 交聯HA與甘露醇混合液，向該混合液中加入4. Ig上述的左旋聚乳酸微粒，調整轉子離液面 深度為溶液高度的30-40%，在500 r/min的轉速下攬拌，攬拌時正向反向交替轉動30 S，共 攬拌20-30min，然后調節溶液pH至中性后立即分裝并冷凍干燥，環氧乙燒滅菌，即得填充 劑。
[0104] 將上述實施例和對比例制備的左旋聚乳酸填充劑進行下列功效學試驗，W對其性 能進行評價。
[0105] 試驗1:填充劑的混勻時間評價 取5mL注射水，分別加入5mL實施例和對比例的填充劑中，用旋轉混勻器混勻，測定不同 樣品的混勻時間。混勻標準為:混勻后的懸濁液均一，無大塊聚乳酸顆粒和團狀凝膠。
[0106] 各實施例和對比例的填充劑的混勻時間如下表所示：
通過實施例1和2、實施例3和4的對比可w看出，PLLA微粒或微球的粒度篩分對化LA的 混勻有一定的提升作用;通過實施例2和實施例5的對比可W看出，高低分子量透明質酸鋼 分子量的選擇W及配比的選擇對于蜂巢HA的形成有重要影響，從而使所得填充劑的混勻時 間產生較大不同；通過實施例4和實施例6的對比可W看出，在本發明范圍內，PLLA分子量和 粒徑的大小對于填充劑的混勻時間影響較小;通過實施例2、7-9的對比可W看出，填充劑有 效成分的含量對于填充劑混勻時間有較大影響;通過實施例4和實施例10-12的對比可W看 出，當選擇甘露醇和蘆苔多糖的混合物作為增效劑時，比單一甘露醇更有利于化LA的分散， 能夠減少混勻時間;通過實施例2和13的對比可W看出，正反向交替攬拌比單一方向攬拌能 夠使蜂巢HA與左旋聚乳酸微粒充分混合，更有利于填充劑的混勻。通過實施例2和對比例Ι? α 的對比可 W 看出 ，蜂巢 HA 和甘露醇的選擇使填充劑的混勻時間大大降低，運使填充劑植入 皮下后減少了紅腫、皮下結節等不良反應的發生，并且產品混勻時間的減少給施針醫師的 操作帶來更多便利。
[0107] 試驗2:局部注射反應評價 選擇SPF級Wistar大鼠進行試驗，雌雄各半，重量約為180-230邑。
[0108] 取45只大鼠，平均分為9組，每組5只，每組分別注射實施例2、實施例5-1、實施例5- 3、實施例7、實施例10、對比例1、對比例2、對比例3、對比例4的填充劑。注射方法如下：取 0.3ml試驗1中混勻后的填充劑溶液，分別植入大鼠背部皮下，感受注射過程中注射器推擠 的難易程度，一周后觀察是否有紅腫、皮下結節等不良反應出現。
[0109] 各實施例和對比例的填充劑的注射反應見下表：
實驗結果表明，填充劑中蜂巢HA的加入，使得注射過程中注射器更容易推擠，并且蜂巢 HA包裹聚乳酸微粒使填充劑更容易分散，注射完成一周后也無紅腫、皮下結節等不良反應 出現，表明對皮膚的刺激小，適用于軟組織填充。采用同樣的方法對其他實施例的填充劑產 品進行局部注射反應評價，結果均顯示填充劑在注射過程中注射器容易推擠、填充劑容易 分散且注射后無紅腫、皮下結節等不良反應。
【主權項】
1. 一種注射用左旋聚乳酸填充劑，其特征是：有效成分為左旋聚乳酸、蜂巢HA和增效 劑，所述蜂巢HA是將高分子量的透明質酸鈉和低分子量的透明質酸鈉復配而成的水溶液在 堿性條件下醇沉、干燥而得，所述增效劑為甘露醇，或者為質量比I: 〇. 05-0.12的甘露醇和 蘆薈多糖的混合物。2. 根據權利要求1所述的注射用左旋聚乳酸填充劑，其特征是:所述左旋聚乳酸的分子 量為30000~100000 Da，優選分子量為30000~60000 Da;所述蜂巢HA中，高分子量的透明質 酸鈉的分子量為1000~3000 kDa，低分子量的透明質酸鈉的分子量為1~500 kDa。3. 根據權利要求1所述的注射用左旋聚乳酸填充劑，其特征是:所述蜂巢HA中，高分子 量的透明質酸鈉與低分子量的透明質酸鈉的復配質量比為:1:9~9:1。4. 根據權利要求1所述的注射用左旋聚乳酸填充劑，其特征是:其為凍干粉。5. 根據權利要求1-4中任一項所述的注射用左旋聚乳酸填充劑，其特征是:左旋聚乳酸 在填充劑中的質量百分比含量為10-60%，所述蜂巢HA在填充劑中的質量百分比含量為10~ 20%，所述增效劑在填充劑中的質量百分比含量為20~80%;優選的，左旋聚乳酸在填充劑中 的質量百分比含量為40-50%，所述蜂巢HA在填充劑中的質量百分比含量為10~20%，所述增 效劑在填充劑中的質量百分比含量為30-60%;更優選的，左旋聚乳酸在填充劑中的質量百 分比含量為41%，所述蜂巢HA在填充劑中的質量百分比含量為11%，所述增效劑在填充劑中 的質量百分比含量為48%。6. 根據權利要求1所述的注射用左旋聚乳酸填充劑，其特征是:所述左旋聚乳酸為形狀 不規則的微粒，或者為形狀規則的微球;所述左旋聚乳酸粒徑為15~75 μπι，優選為20~50 μ m〇7. -種權利要求1所述的注射用左旋聚乳酸填充劑的制備方法，其特征是包括以下步 驟： (1)將高分子量的透明質酸鈉和低分子量的透明質酸鈉溶于水中，充分攪拌均勻后調 節溶液pH至8-13，然后在攪拌下加入體積分數為95%的乙醇或95%的甲醇溶液進行醇沉，過 濾除去上層液體，剩余沉淀用體積分數為75~80%的乙醇或75~80%的甲醇溶液洗滌脫鹽，脫 鹽三次后，將沉淀用無水乙醇、無水甲醇或無水丙酮脫水、干燥，得到蜂巢HA; (2 )將蜂巢HA與增效劑溶于水中，得蜂巢HA與增效劑的混合液； (3)取左旋聚乳酸微粒或微球，加入蜂巢HA與增效劑的混合液中，攪拌均勻后將pH調節 至中性，冷凍干燥，得注射用左旋聚乳酸填充劑。8. 根據權利要求7所述的制備方法，其特征是:步驟(3)中，攪拌按照正向、反向交替攪 拌30s的方式進行，共攪拌20-40min。9. 根據權利要求7所述的制備方法，其特征是：左旋聚乳酸微粒按照以下方法制得:在 工作壓力為0.2~0.8 MPa、左旋聚乳酸的進料速度為30~100 g/min的條件下，用氣流粉碎機 粉碎左旋聚乳酸，得到的微粒用pH 6.0的鹽酸溶液浸潤洗滌兩次后，將微粒轉移至孔徑10 μπι的微孔濾器中并浸于pH 6.0的體積濃度15%~20%的乙醇溶液中，在攪拌下通過死端過濾 篩分出微小顆粒，然后真空干燥，得到左旋聚乳酸微粒。10. 根據權利要求7所述的制備方法，其特征是：左旋聚乳酸微球按照以下方法制得:將 左旋聚乳酸溶于二氯甲烷中，配成質量濃度為2.5%~4%的溶液，按照左旋聚乳酸和聚乙烯醇 1:0.8的質量比，將左旋聚乳酸二氯甲燒溶液在200~800 r/min攪拌下緩慢注入質量體積濃 度為O . 1%~0.2%的聚乙烯醇水溶液中，室溫下攪拌乳化;乳化完成后，常壓或減壓下攪拌揮 發除去二氯甲烷，剩余反應液過濾收集濾餅，洗滌得左旋聚乳酸微球，將左旋聚乳酸微球轉 移至孔徑10 μπι的微孔濾器中并浸于pH 6.0的體積濃度15%~20%的乙醇溶液中，在攪拌下通 過死端過濾篩分出微小微球，然后真空干燥，得到左旋聚乳酸微球。
【文檔編號】A61L27/20GK105879124SQ201610263435
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月26日
【發明人】劉建建, 耿鳳, 楊瑩瑩, 蘇江偉, 張燕, 郭學平
【申請人】華熙福瑞達生物醫藥有限公司