一種抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物及制法
【專利摘要】本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物及制法，該藥物組合物是以漏蘆、青皮或醋青皮為原料藥，用于抑制腫瘤新生血管生成，該藥物組合物能有效抑制腫瘤生長，有良好的藥用價值，為臨床提供了一種新的選擇。
【專利說明】
-種抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物及制法
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體設及一種抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物及制 法。
【背景技術】
[0002] 血管生成(angiogenesis)是從已有血管發芽生成新血管的過程。運一過程與血管 內皮細胞遷移和增殖相關。胚胎發育過程伴隨著血管生成。但除了傷口愈合、女性經期及一 些病理過程(如癌癥)外，成人很少出現血管生成。
[0003] 血管生成對惡性實體腫瘤的生長、轉移乃至預后都有著極其重要的意義。血管生 成是惡性實體腫瘤突破上皮基底膜后進一步生長所必須的。腫瘤中新形成的血管具有其自 身獨特的結構特點，表現為管壁不完整，無平滑肌成分，僅由有孔的內皮細胞和片狀的基膜 構成。多數學者認為，新生血管的結構特點使惡性腫瘤組織發生遠處轉移成為可能。因此， 惡性實體腫瘤中新生血管的定量被認為是一種重要的獨立的預后標志。
[0004] 整甲為整科動物整化ionyx sinensis Wiegmann的背甲。性味咸、寒。滋陰潛陽，軟 堅散結，退熱除蒸。用于陰虛發熱，勞熱骨蒸，虛風內動，經閉，癒瘤，久追追母。用法用量為9 ~24克。現代醫學表明，整甲的炮制品有整甲和醋整甲兩種。現代研究表明，整甲含骨膠原 (collagen)、碳酸巧、憐酸巧、艦等。整甲浸出物含量W水浸出物為最多。背甲與腹甲均含 巧、憐、鋼、儀、鐘、鋒、鐵、儘、鉆、銅、神等11種元素。藥理作用如下：
[0005] 1、強壯作用：整多糖0.5、1.0、2.0g/kg灌胃15-20天，能明顯提高小鼠耐缺氧能力 和抗冷凍作用，可延長小鼠游泳時間，有抗疲勞作用。
[0006] 2、免疫促進作用:整多糖0.5、1.0、2.0g/kg灌胃15-20天，能顯著提高小鼠空斑形 成細胞的溶血能力，促進溶血素抗體生成;并增強小鼠遲發型超敏反應。
[0007] 3、抗腫瘤作用。整甲粉末口服280mg/kg對小鼠移植實質性癌MH134具有抑制作用， 使腫瘤直徑減小，腫瘤重量顯著減輕。對腹水癌則沒有顯著作用。對接種人腸癌細胞的裸鼠 每日按800mg/kg劑量口服整甲粉，治療35d后與對照組比較，抑瘤率為92.15 %，腫瘤壞死面 積達67%，與5-氣尿喀晚(5-Fu)組比較，其優點是不引起宿主白細胞數下降，表明整甲粉不 僅對人腸癌有抑制作用，且副反應小，對骨髓的抑制遠比5-化輕。
[000引 4、其它：W0.5%或1.0 %整多糖Renger液浸泡贍餘坐骨神經脾腸肌標本，有增加 收縮高度和畫紋面積、延長持續收縮時間的作用。該品能抑制結締組織的增生，可消失結 塊;并具有增加血漿蛋白的作用，可用于肝病所致的貧血。
[0009] 漏蘆為菊科植物祁州漏蘆的干燥根。味苦性寒。功效清熱解毒，消癡，下乳，舒筋通 脈。用于乳癡腫痛，癡痘發背，療痛瘡毒，乳汁不通，濕搏拘李。用法用量5-9g。現代研究表明 漏蘆藥理作用如下：
[0010] 1、對中樞神經系統的作用，藍刺頭堿的作用與±的寧相似，小劑量對動物表現興 奮作用，大劑量則引起疫李，W后出現全身抑制，對己比妥引起的小鼠睡眠有蘇醒作用，并 能興奮神經肌肉裝置，促進周圍神經的恢復過程。
[0011] 2、對屯、血管系統的影響，藍刺頭堿對麻醉貓可引起血壓下降，屯、收縮力增強，對離 體蛙屯、可使屯、收縮張力上升，收縮幅度減弱，高濃度可使屯、臟停止收縮期，對離體兔耳表現 血管擴張。
[0012] 3、其他，藍刺頭堿可使貓離體腸管張力增加，對兔離體腸管則抑制。
[0013]青皮為蕓香科植物橘Cihus reticulata Blanco及其栽培變種的干燥幼果或未 成熟果實的果皮。味苦、辛，性溫。有疏肝破氣，消積化滯的功效。用于胸脅脹痛，痛氣疼痛， 乳癖，乳癡，食積氣滯，腕腹脹痛。用法用量3~lOg。青皮的炮制品有青皮和醋青皮兩種。
[0014] 野菊花為菊科植物野菊的干燥頭狀花序，性微寒，味苦、辛。功效清熱解毒，疏風平 肝。用于療瘡癡腫，目赤腫痛，頭痛眩暈。用法用量9-15g。現代研究表明，野菊花可治療呼吸 道炎癥、宮頸炎、癡毒巧腫、感冒、上呼吸道感染等。
[0015] 雖然有報道稱整甲、漏蘆、青皮、野菊花具有抗腫瘤作用，但是并未發現其具有抑 制腫瘤新生血管生成的作用。
【發明內容】
[0016] 本發明所解決的第一個技術問題是提供一種抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合 物。
[0017] 本發明藥物組合物是W漏蘆和青皮或醋青皮為原料藥，重量配比如下：
[0018] 漏蘆1-10份、青皮或醋青皮1-10份.
[0019] 優選的，漏蘆2-8份、青皮或醋青皮2-8份；
[0020] 最優選的，漏蘆5份、青皮或醋青皮5份。
[0021] 本發明抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物是W漏蘆、青皮或醋青皮為主要原料 藥，按照藥學常規方法，加入藥學上常規輔料制備而成的藥劑。
[0022] 上述技術方案中，所述的藥劑是口服制劑或者注射劑。通過口服、肌肉注射、靜脈 輸入或腹腔注射等方式給藥。
[0023] 上述技術方案中，所述日服制劑為水煎劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、日服液、合 劑或糖漿劑。
[0024] 上述技術方案中，所述常規輔料包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘 合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
[0025] 本發明所解決的第二個技術問題是提供上述技術方案中所述抑制腫瘤新生血管 生成的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟：
[0026] 方法一:將各原料藥粉碎成細粉，混合即成散劑;或
[0027] 方法二:將各原料藥粉碎成細粉，裝膠囊即成膠囊劑;或 [002引方法Ξ :將各原料藥粉碎成細粉，壓片即成片劑;或
[0029] 方法四：將各原料藥用水煎煮提取后，過濾得煎煮液;或
[0030] 方法五:將各原料藥用水煎煮提取后，過濾得煎煮液，干燥煎煮液;或
[0031 ]方法六:將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，即成顆粒劑;或
[0032] 方法屯:將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，裝膠囊即成膠囊劑； 或
[0033] 方法八:將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，壓片即成片劑;或
[0034] 方法九：將各原料藥用水煎煮提取后，制成水煎劑，或加常規輔料制成口服液、糖 漿、合劑。
[0035] 上述技術方案中，方法五所述所干燥煎煮液至含水量低于5%。
[0036] 具體的可W制成口服制劑或者注射劑，可加入的常規輔料包括藥學領域常規的稀 釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑 等。
[0037] 綜上，本發明抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物療效顯著，安全無毒，為臨床抑 制腫瘤新生血管生成W及治療腫瘤提供了一種全新的選擇。
【附圖說明】
[003引圖1整甲干預的幼魚光鏡圖
[0039] 圖2整甲干預的幼魚巧光顯微鏡顯示圖
[0040] 圖3整甲干預的幼魚背主動脈巧光顯微鏡顯示圖 [0041 ]圖4青皮干預的幼魚光鏡圖
[0042] 圖5青皮干預的幼魚巧光顯微鏡顯示圖
[0043] 圖6青皮干預的幼魚背主動脈巧光顯微鏡顯示圖
[0044] 圖7野菊花干預的幼魚光鏡圖
[0045] 圖8野菊花干預的幼魚巧光顯微鏡顯示圖
[0046] 圖9野菊花干預的幼魚背主動脈巧光顯微鏡顯示圖
[0047] 圖10漏蘆干預的幼魚光鏡圖
[004引圖11漏蘆干預的幼魚巧光顯微鏡顯示圖
[0049]圖12漏蘆干預的幼魚背主動脈巧光顯微鏡顯示圖
[(K)加]圖13陽性對照-PTK787干預的幼魚光鏡圖
[0051 ] 圖14陽性對照-PTK787干預的幼魚巧光顯微鏡顯示圖
[0052] 圖15陽性對照-PTK787干預的幼魚背主動脈巧光顯微鏡顯示圖
[0化3] 圖16陰性對照-Vehicle Control(0.1 %DMS0)干預的幼魚光鏡圖
[0化4] 圖17陰性對照-Vehicle Control(0.1 %DMS0)干預的幼魚巧光顯微鏡顯示圖
[0化5] 圖18陰性對照-Vehicle Control(0.1%DMS0)干預的幼魚背主動脈巧光顯微鏡顯 示圖
【具體實施方式】
[0056] 下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法;所述試劑和材料，如 無特殊說明，均可從商業途徑獲得。
[0057] -、考察用整甲、漏蘆、青皮、野菊花抑制腫瘤新生血管生成的試驗如下：
[0化引1.材料與方法
[0059] 1.1 材料
[0060] 中藥均購自四川回春堂醫藥有限公司。所有試劑均購自Sigma-Aldrich Co. (51:丄〇1113,]\10)，？11(787(>日1日1日]1化）購自56116。4油61]1。采用;1^1;[1日斗6。?轉基因斑馬魚進行 實驗。斑馬魚按照標準環境飼養。
[oow] 1.2試劑配制
[0062] 稱取中藥450g，8倍量水煎煮3次，每次1小時，將3次水煎液合并于800W電爐上濃縮 至約400ml，過100目篩網（濾渣留樣)后，均勻涂布于蒸發皿中，將蒸發皿置于電熱鼓風干燥 箱中，于60°C下間斷干燥62小時后，繼續于玻璃干燥器中室溫干燥直至制成水分含量巧％ (烘干法測定）的浸膏。
[0063] 1.3實驗過程
[0064] 將受精后22小時的胚胎放入12孔板中（每孔30個胚胎），采用中藥干預26小時。中 藥水提物溶解于0.1 %二甲亞諷(DMS0)中，每孔加入中藥水提物濃度為2(K)μg/ml。陽性對照 組為化g/ml ΡΤΚ787(瓦他拉尼vatalanib，一種血管內皮生長因子受體括抗劑），陰性對照 組為0.1 %DMS0。受精后48小時，Ξ卡因麻醉幼魚，使用Nikon SMZ 1500巧光顯微鏡分析拍 照。節間血管形成是評價中醫藥效果的主要指標。同時也評價中醫藥的毒性。
[0065] 1.4結果及結論
[0066] 采用整甲、漏蘆、青皮、野菊花、陽性對照-PTK787、陽性對照-PTK787干預的幼魚光 鏡圖、巧光顯微鏡顯示圖、背主動脈巧光顯微鏡顯示圖分別見圖1-18。
[0067] 所有采用整甲、漏蘆、青皮、野菊花4種中藥和PTK787干預的30條幼魚均出現了血 管生成的缺陷。光鏡和巧光顯微鏡顯示，與0.1%DMS0陰性對照比較，采用整甲、漏蘆、青皮、 野菊花4種中藥干預的幼魚，形成了較少的完整的節間血管。高倍鏡顯示，只能夠偶爾觀察 到背主動脈苗。扣g/ml PTK787陽性對照則能夠完全抑制節間血管和背部縱向血管。中藥沒 有導致斑馬魚死亡或者致崎。沒有發現中藥的神經毒性或者器官毒性。
[0068] 二、考察用整甲、漏蘆、青皮、野菊花組合應用抑制腫瘤新生血管生成的試驗如下：
[0069] 1.材料與方法
[0070] 1.1材料
[0071] 中藥整甲、漏蘆、青皮、野菊花均購自四川回春堂醫藥有限公司。所有試劑均購自 Sigma-Al化ich Co. (St .Louis ,ΜΟ)。采用f lila-EGFP轉基因斑馬魚進行實驗。斑馬魚按照 標準環境飼養。
[0072] 1.2試劑配制
[0073] 稱取中藥500g，8倍量水煎煮3次，每次1小時，將3次水煎液合并于800W電爐上濃縮 至約400ml，過100目篩網（濾渣留樣)后，均勻涂布于蒸發皿中，將蒸發皿置于電熱鼓風干燥 箱中，于60°C下間斷干燥62小時后，繼續于玻璃干燥器中室溫干燥直至制成水分含量巧％ (烘干法測定）的浸膏。
[0074] 其中，中藥為單味應用時，則整甲、漏蘆、青皮、野菊花各稱取500g;中藥為兩兩組 合應用時，則整甲、漏蘆、青皮、野菊花各稱取250g，然后根據配伍混合使用；中藥為Ξ者組 合應用時，則整甲、漏蘆、青皮、野菊花各稱取167g，然后根據配伍混合使用；中藥為四者組 合應用時，則整甲、漏蘆、青皮、野菊花各稱取125g混合使用。
[0075] 1.3實驗過程
[0076] 將受精后22小時的胚胎放入12孔板中（每孔30個胚胎），采用中藥干預26小時。中 藥水提物溶解于0.1 %二甲亞諷(DMS0)中，每孔加入中藥水提物濃度為2(K)μg/ml。受精后48 小時，Ξ卡因麻醉幼魚，使用Nikon SMZ 1500巧光顯微鏡分析拍照。完整的節間血管數量和 抑制率是評價中醫藥效果的主要指標。數出完整的節間血管（ISV)的數量，即：連接背主動 脈（dorsal aorta,DA)到背縱向吻合靜脈（dorsal longitudinal anastomotic vessel, DLAV)的節間血管的數量。數據結果W均數(最小值，最大值)表示。抑制率根據W下公式進 行計算：
[0077]抑制率（％ ) = (1 -1SV峨1?糧/1SV陰啦臓1?糧)X 100。
[007引1.4結果如下：
[00巧]1.4.1兩兩組合結果見表1-6:
[0080] 表1漏蘆+野菊花抑制新生血管的定量比較
[0081]
[0082] W上結果可知，漏蘆+野菊花組合抑制新生血管的效果與漏蘆比較，有統計學意義 的極顯著差異(P<〇.01);與野菊花比較，差異雖然沒有統計學意義，但是抑制率仍然有所提 局。
[0083] 表2漏蘆+青皮抑制新生血管的定量比較
[0084]
[0085] W上結果可知，漏蘆+青皮組合抑制新生血管的效果與漏蘆比較，有統計學意義的 極顯著差異(P<〇.01);與青皮比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.001)。
[0086] 表3野菊花+青皮抑制新生血管的定量比較
[0087]
[0088] W上結果可知，野菊花+青皮組合抑制新生血管的效果與野菊花比較，有統計學意 義的極顯著差異(P<〇.01);與青皮比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.001)。
[0089] 表4整甲+野菊花抑制新生血管的定量比較
[0090]
[0091] W上結果可知，整甲+野菊花組合抑制新生血管的效果與整甲比較，有統計學意義 的極顯著差異(P<〇.01);與野菊花比較，差異雖然沒有統計學意義，但是抑制率仍然有所提 局。
[0092] 表5整甲+漏蘆抑制新生血管的定量比較
[0093]
[0094] W上結果可知，整甲+漏蘆組合抑制新生血管的效果與整甲比較，有統計學意義的 極顯著差異(P<〇.01);與漏蘆比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.001)。
[00M]表6整甲+青皮抑制新生血管的定量比較
[0096]
[0097] W上結果可知，整甲+青皮組合抑制新生血管的效果與整甲比較，有統計學意義的 極顯著差異(P<〇.01);與青皮比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.001)。
[0098] 1.4.2Ξ者組合結果見表7-10:
[0099] 表7漏蘆+野菊花+青皮抑制新生血管的定量比較
[0100]
[0101] W上結果可知，漏蘆+野菊花+青皮組合抑制新生血管的效果與單獨使用漏蘆、青 皮、野菊花比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01)。漏蘆+野菊花+青皮組合抑制新生血 管的效果與漏蘆+青皮比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01);與漏蘆+野菊花比較，有 統計學意義的顯著差異(P<〇.05);與野菊花+青皮比較，差異雖然沒有統計學意義，但是抑 制率仍然略有提高。
[0102] 表8野菊花+整甲+青皮抑制新生血管的定量比較
[0103]
[0104] W上結果可知，野菊花+整甲+青皮組合抑制新生血管的效果與單獨使用整甲、青 皮、野菊花比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01)。野菊花+整甲+青皮組合抑制新生血 管的效果與整甲+青皮比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01);與野菊花+整甲比較，有 統計學意義的顯著差異(P<〇.05);與野菊花+青皮比較，差異雖然沒有統計學意義，但是抑 制率仍然略有提高。
[0105] 表9野菊花+整甲+漏蘆抑制新生血管的定量比較
[0106]
[0107] W上結果可知，野菊花+整甲+漏蘆組合抑制新生血管的效果與單獨使用整甲、漏 蘆比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01);與單獨使用野菊花比較有統計學意義的顯 著差異(P<〇.05)。野菊花+整甲+漏蘆組合抑制新生血管的效果與整甲+漏蘆比較，有統計學 意義的顯著差異(P<〇.05);與野菊花+整甲，野菊花+漏蘆比較，差異雖然沒有統計學意義， 但是抑制率仍然略有提高。
[0108] 表10整甲+青皮+漏蘆抑制新生血管的定量比較
[0109]
[0110] W上結果可知，整甲+青皮+漏蘆組合抑制新生血管的效果與單獨使用整甲、青皮、 漏蘆比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01)。整甲+青皮+漏蘆組合抑制新生血管的效 果與青皮+漏蘆比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01);與整甲+漏蘆比較，有統計學意 義的顯著差異(P<〇.05);與整甲+青皮比較，差異雖然沒有統計學意義，但是抑制率仍然略 有提局。
[0111] 1.4.3四者組合結果見表11:
[0112] 表11整甲+漏蘆+青皮+野菊花抑制新生血管的定量結果
[0113]
[0114] W上結果可知：
[0115] 1)漏蘆+野菊花+青皮+整甲組合抑制新生血管的效果較單獨使用整甲、漏蘆、青 皮、野菊花比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01)。
[0116] 2)漏蘆+野菊花+青皮+整甲組合抑制新生血管的效果與整甲、漏蘆、青皮、野菊花 兩兩組合的組合物比較:與漏蘆+青皮、漏蘆+野菊花、整甲+野菊花、整甲+青皮、整甲+漏蘆 比較，有統計學意義的極顯著差異(P<〇.01);與野菊花+青皮比較，差異雖然沒有統計學意 義，但是抑制率仍然略有提高。
[0117] 3)漏蘆+野菊花+青皮+整甲組合抑制新生血管的效果與整甲、漏蘆、青皮、野菊花 兩兩組合的組合物比較:與野菊花+整甲+漏蘆，整甲+青皮+漏蘆比較，有統計學意義的顯著 差異(P<0.05);與野菊花+整甲+青皮，漏蘆+野菊花+青皮比較，差異雖然沒有統計學意義， 但是抑制率仍然略有提高。
[0118] 綜上，本發明采用整甲、漏蘆、青皮、野菊花既可W單方入藥，也可W配伍入藥，而 且配伍使用時也未出現配伍禁忌，在抑制腫瘤新生血管生成作用方面顯著，為臨床抑制腫 瘤新生血管生成W及治療腫瘤提供了一種全新的選擇。
【主權項】
1. 抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，其特征在于：由如下重量配比的原料藥組成： 漏蘆1_1〇份、青皮或醋青皮1 _1〇份。2. 根據權利要求1所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，其特征在于：由如下重 量配比的原料藥組成： 漏蘆2-8份、青皮或醋青皮2-8份。3. 根據權利要求2所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，其特征在于：由如下重 量配比的原料藥組成： 漏蘆5份、青皮或醋青皮5份。4. 根據權利要求1-3任一項所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，其特征在于： 它是以漏蘆、青皮或醋青皮為原料藥，按照藥學常規方法，加入藥學上常規輔料制備而成的 藥劑。5. 根據權利要求4所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，其特征在于:所述的藥 劑是口服制劑或者注射劑。6. 根據權利要求5所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，其特征在于:所述口服 制劑為水煎劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、合劑或糖漿劑。7. 權利要求1 _3任一項所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物的制備方法，其特 征在于:包括如下步驟： 方法一:將各原料藥粉碎成細粉，混合即成散劑;或 方法二:將各原料藥粉碎成細粉，裝膠囊即成膠囊劑;或 方法三:將各原料藥粉碎成細粉，壓片即成片劑;或 方法四：將各原料藥用水煎煮提取后，過濾得煎煮液;或 方法五:將各原料藥用水煎煮提取后，過濾得煎煮液，干燥煎煮液;或 方法六:將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，即成顆粒劑;或 方法七:將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，裝膠囊即成膠囊劑;或 方法八:將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，壓片即成片劑;或 方法九:將各原料藥用水煎煮提取后，制成水煎劑，或加常規輔料制成口服液、糖漿、合 劑。8. 根據權利要求7所述的抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物的制備方法，其特征在 于:方法五所述所干燥煎煮液至含水量低于5%。
【文檔編號】A61K36/752GK105878489SQ201610090199
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年2月17日
【發明人】涂翔, 鐘森
【申請人】涂翔, 鐘森