一種丹參的微波提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種丹參的微波提取工藝取丹參，粉碎，加水，微波提取，濃縮，即得。本發明對丹參微波提取工藝參數進行了篩選和優化。本發明所述的丹參微波提取工藝制成的丹參提取物，丹參中的有效成分沒有變性。本發明工藝還具有高效、節能、無污染、高選擇性等優點。
【專利說明】
-種丹參的微波提取工藝
技術領域
[0001] 本發明設及一種丹參的微波提取工藝，屬于藥品技術的領域。
【背景技術】
[0002] 丹參為唇形科鼠尾草植物丹參（Salvia Μ化iorrhizaBge)的干燥根及根莖，具有 桂疲止痛、活血通經、清屯、除煩之功。臨床上用于治療屯、絞痛、冠屯、病等屯、血管疾病。丹參主 要含有水溶性和脂溶性兩類成分。水溶性成分主要是酪酸類，如丹酪酸B、丹參素、原兒茶醒 等，其中丹酪酸B含量最高，是活血化疲的有效成分，具有保護腦損傷、屯、臟W及抗氧化等作 用，多作為工藝研究的指標性成分。
[0003] 目前，丹參提取時，常采用傳熱加熱方式進行提取，即加熱回流提取，但是加熱回 流提取時，由于傳熱速度慢，因此提取溶劑從室溫升高到提取溫度所需時間長，易造成丹酪 酸B、丹參酬IIA等熱敏性物質在逐漸的加熱過程被分解。微波加熱與傳熱加熱方式上存在 較大的區別，微波加熱是通過水對微波能的吸收作用，進行選擇性加熱，利用微波能使植物 細胞中的水分或有機溶劑迅速升溫，升壓，細胞壁穿孔，從而把提取物從細胞中溶出。微波 提取丹參時，耗時短，大大縮短了提取物在高溫條件下的受熱時間，有利于丹參酬類物質的 提取。丹參微波提取相對傳統提取具有的優勢:①操作簡單;②提取效率高、耗時較短，微波 提取時間僅用傳統提取時間的1/4,且綜合有效成分含量差不多；③能耗低，節約了生產成 本，微波提取在工業化生產中具有較大的應用價值。
[0004] 然而，微波技術用于中藥有效成分提取目前還存在應用原理、技術及工程放大等 一系列問題：1、中藥療效的多途徑、多祀點是基于中藥多組分，改變傳統的加熱方式，是否 會引起中藥物質組在質量或數量上的變化，從而影響療效;2、微波對不同的植物細胞或組 織有不同的作用，細胞內產物的釋放也有一定的選擇性，因此應根據產物的特性及其在細 胞內所處的位置的不同，選擇不同的處理方式;3、微波提取僅適用于對熱穩定的產物，如生 物堿、黃酬、巧類等，而對于熱敏感的物質如蛋白質、多膚等，微波加熱能導致運些成分的變 性，甚至失活;4、由微波加熱原理可知，微波提取要求被處理的物料具有良好的吸水性，否 則細胞難W吸收足夠的微波能將自身擊破，使其內容物難W釋放出來。
[0005] 丹參為唇形科植物丹參Salvia mltiorrhiza Bge的干燥根及根莖,在中醫臨床上 具有桂疲止痛、活血通經、清屯、除煩和滋補之功效，現代藥理研究表明丹參對屯、血管系統、 血液系統的作用十分顯著，丹參中含有大量的熱敏感的物質如蛋白質、多膚等，按照常規微 波技術提取，微波加熱能導致運些成分的變性，甚至失活。
【發明內容】
[0006] 本發明目的在于，提供一種丹參的微波提取工藝。本發明所述的丹參微波提取工 藝制成的丹參提取物，丹參中的有效成分沒有變性。本發明工藝還具有高效、節能、無污染、 高選擇性等優點。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案實現:一種丹參的微波提取工藝， 取丹參，粉碎，加水，微波提取，濃縮，即得。
[000引前述的丹參的微波提取工藝中，微波提取時，提取功率為500-700W。
[0009] 前述的丹參的微波提取工藝中，提取功率為600W。
[0010] 前述的丹參的微波提取工藝中，微波提取時，提取時間為20-30min。
[0011] 前述的丹參的微波提取工藝中，提取時間為25min。
[0012] 前述的丹參的微波提取工藝中，微波提取時，固液比0.5-1.1:10-14。
[0013] 前述的丹參的微波提取工藝中，固液比為1:12。
[0014] 發明人進行了大量的實驗，W下是部分實驗研究：
[0015] 實驗例1:提取工藝研究
[0016] 1實驗材料
[0017] 超高效液相色譜儀（型號:Wates U化C，沃特斯中國有限公司）；奧潤微波提取器； 數顯恒溫水浴鍋(常州奧華儀器有限公司）；電子天平(AE/240,上海特勒儀器有限公司）。
[0018] 丹參藥材均購于貴陽同濟堂(批號20130928,產地山東），經鑒定為中國藥典品種； 迷迭香酸(批號111871-201102)購于中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用;丹酪酸B(批 號115939-25-8)購于成都植標化純生物技術有限公司，純度含98% ;乙臘(色譜純）；甲酸 (色譜純）；屈臣氏蒸饋水。其他試劑均為分析純。
[0019] 2方法和結果
[0020] 2.1丹參微波工藝含量測定方法的建立
[002。 2.1.1色譜條件
[0022] 色譜柱：ACQUITY IMX BEH aiield RP18 1.化 m 2.1X50mm Column;流動相： 0.5%甲酸水溶液(A)-乙臘(B)梯度洗脫;柱溫:30°C ;流速:0.2mL/min;檢測波長:280皿;進 樣量化L。梯度洗脫條件：0~lOminaO~27%B;10~15min，27~32%B;15~35min，32~ 50%B〇
[0023] 2.1.2對照品溶液的制備
[0024] 精密稱取迷迭香酸、丹酪酸B，放入25mL棟色容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀釋至刻 度，搖勻，制成制成迷迭香酸〇.〇55mg · mL-i、丹酪酸B 0.135mg · mL-i、對照品儲備液。
[0025] 2.1.3標準曲線的制備
[0026] 分別精密吸取迷迭香酸儲備液、丹酪酸B儲備液不同量配成6個不同濃度的對照品 溶液。混合對照品溶液中迷迭香酸的濃度分別為13.75，41.25，68.75，82.50，96.25，110.00 μg·mL-l;丹酪酸B的濃度分別為10.00,90.00，165.00，195.00,280.00,580.00μg·mL-l。注 入UPLC測定，W進樣量為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程(見表1)。 結果表明：迷迭香酸、丹酪酸B分別在0.0275~0.2200，0.0200~1. leOOug內線性關系良好。
[0027] 表1 5種指標性的回歸方程 [002引
[0029] 2.1.4精密度試驗
[0030]取同一份丹參微波提取的樣品溶液，按上述相應的色譜條件連續進樣6次，測定其 中各成分的峰面積。結果表明：6次進樣5種成分的峰面積RSD均小于2.26%，表明儀器精密 度良好。
[00川 2.1.5穩定性試驗
[0032] 取同一份丹參微波提取的樣品溶液，分別于0、2、4、8、12、2地進行檢測，測定各成 分的峰面積，結果表明：6次進樣5種成分的峰面積RSD均小于2.27%，表明樣品溶液在24h內 穩定。
[0033] 2.1.6重復性試驗
[0034] 在同一提取工藝條件下，平行制備6份丹參微波提取的樣品溶液，分別取樣測定。 記錄迷迭香酸、丹酪酸B色譜峰的峰面積，計算各成分含量RSD(n = 6)。結果表明6份供試品 溶液中巧中成分含量結果RSD均小于2.62%，說明此方法的重復性良好。
[00巧]2.2丹參微波水提的正交工藝考察
[0036] W固液比、提取時間、微波功率為考察因素，每個因素設計3個水平，W迷迭香酸、 丹酪酸B的含量之和考察指標(綜合Π )，每份樣品50g，按L9(34)正交表按排試驗。因素水平 見表2，試驗安排及結果見表3，方差分析結果見表4。
[0037] 表2因素水平表 [00；3 引
[0040] 分別取丹參藥材9份，每份50g，按L9(34)正交表設計進行微波提取，過濾，按2.1.1 項下色譜條件測定上述樣品，計算綜合指標的含量，結果分別見表3。
[0041] 表3微波水提正交實驗結果
[0042]
[0045] 注:Fo'o 己(2,2) = 19
[0046] 從結果可知，影響綜合指標的因素順序為A>B>C，無顯著性。微波水提取最佳工 藝為A3B3C2,即功率600w、提取時間25min和固液比1:12。
[0047] 2.3驗證試驗
[004引取丹參藥材50g，按上述優選工藝提取，測定含量并比較圖譜，與傳統提取方法進 行比較，結果見表5。
[0049]表5丹參傳統提取與微波提取的比較(n = 3)
[(Κ)加]
[0051 ] W上試驗表明，微波提取參數為:功率600w、提取時間25min和固液比1:12時，提取 效果最好。且該提取工藝，提取效率高、耗時較短，且綜合有效成分含量差不多；能耗低，傳 統提取方法的能耗為IkW · h，而微波提取的能耗僅為0.25kW · h，大大降低了能耗，節約了 生產成本。
[0052]實驗例2:藥效對比研究 [0化3] 1實驗材料
[0化4] 1.1動物:清潔級SD大鼠，雌雄各半，體重200g±20g，80只。重慶市動物質檢中屯、提 供，合格證號：SCXK(渝)2012-0005。
[0055] 1.2試藥：陽性西藥:硝酸異山梨醋片（山東魯抗東岳制藥有限公司，批號140107)， 陽性中藥:復方丹參滴丸(天津天±力制藥股份有限公司，批號：140511),本發明微波提取 工藝樣品（按實施例1進行提取）、傳統提取工藝樣品均由貴陽中醫學院藥物制劑實驗室自 審IJ，鹽酸異丙腎上腺素(上海禾豐制藥有限公司，批號141002)，烏拉坦(天津市光復精細化 工研究所，20140306) dCK(肌酸激酶）、LDH(乳酸脫氨酶）、S0D(超氧化物歧化酶）、MDA(丙二 醒)試劑盒均購于齊一生物科技(上海)有限公司，批號:201502。
[0化6] 1.3儀器:Bレ420S生物機能實驗系統（成都泰盟科技有限公司），顯微鏡（BX51T- P皿-J11，日本奧林己斯），CM0S(日本奧林己斯），多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(美 國Media切bernetics公司Image-Pro Plus),石蠟切片機（德國萊卡RM2015)微量高速離屯、 機(型號：TG16W)，酶標儀(型號:面M-9602,北京普朗新技術有限公司），隔水式恒溫培養箱 (型號:GNP-9080 )，洗板機（型號:AC8，Thermo Labsysterns)等。
[0化7] 2實驗方法
[0化引2.1動物分組及造模方法
[0059] 取健康大鼠80只，隨機分成8組，每組10只，即空白組，模型組，消屯、痛組，即陽性西 組(3.2mg/kg)，本發明低劑量組(0.2g/kg)，本發明高劑量組(0.8g/kg)，傳統工藝高劑量組 (0.8g/kg)，傳統工藝低劑量組(0.2g/kg)，陽性中藥組(86.00mg/kg)。實驗開始后，各組均 按Iml/kg的灌胃容積給予相應劑量的藥物，空白組及模型組給予等體積蒸饋水，每天1次， 連續15天。從實驗第13天開始，除空白組腹腔注射同體積生理鹽水外，其他各組均于灌胃給 藥后化腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液(5mg/kg)連續注射3天，時間間隔均為2地。
[0060] 2.2現憶指標
[0061 ] 2.2.1生理指標
[0062] 記錄各組造模前的屯、電圖，W及末次給予異丙腎上腺素后記錄Imin，5min，lOmin， 15min，30min各時間點的屯、電圖，W屯、電圖出現ST段抬高或Τ波變化標志造模成功。
[0063] 2.2.2血清生化指標
[0064] 屯、電圖結束后，大鼠股動脈取血，300化pm離屯、lOmin，分離出上清液，用放射免疫 法測定血清中CK、LDH、SOD、MDA的含量。
[00化]2.2.3組織形態學指標測定
[0066] 取血后立即取出屯、臟，W冰冷生理鹽水漂洗去殘留血液，除去大血管、結締組織， 濾紙吸干，然后將屯、臟組織固定在4%多聚甲醒中保存，常規取材，脫水，石蠟包埋，制切片， 肥染色，在光學顯微鏡下觀察屯、肌組織病理學改變。
[0067] 2.3統計分析
[0068] 采用SPSS16.0軟件進行統計分析。實驗數據W均數±標準差（丈，組間比較 采用t檢驗，顯著性水平Wp<0.05和ρ<0.01為標準。
[0069] 3 結果
[0070] 3.1對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠屯、電圖及Τ波高度的影響
[0071] 結果見圖1和表6,可見，與空白組比較，模型組大鼠屯、電圖T波段顯著增加（p< 0.01);大鼠在給予鹽酸異丙腎上腺素造模后，陽性組、微波工藝劑量組、傳統工藝劑量組均 能一定程度的降低屯、電圖T波段的高度，與模型組比較具有顯著性差異(p<0.01);微波工 藝組與傳統工藝組比較，對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠屯、電圖及T波高度的影響沒有顯著性差 異。
[0072] 表6對急性屯、肌缺血模型大鼠屯、電圖T波高度的影響
[0073]
[0074] 注與正常比較，沖<0.05，*沖<0.01;與模型組比較，▲?<0.05，▲▲?<0.01;與 傳統工藝組比較，★P<0.05，^^P<0.01;N=10
[0075] 3.2對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠血清CK、LDH活性的影響
[0076] 結果見表7,可W看出，鹽酸異丙腎上腺素造模后，模型組大鼠血清中的CK和LDH水 平均升高，與空白組比較有差異(P<〇.01);微波工藝高劑量組與傳統工藝高劑量組大鼠血 清中的CK、LDH水平明顯降低，與模型組比較有顯著性差(P<0.01);微波工藝高劑量組與傳 統工藝高劑量組比較后，對于大鼠血清中的CK、LDH水平的影響都沒有差異(P>ο. 05)。 [0077] 表7對血清CK、LDH活性的影響 [007引
[0079] 注與正常比較，沖<0.05，*沖<0.01;與模型組比較，▲?<0.05，▲▲?<0.01;與 傳統工藝高劑量組組比較，★?<〇. 05，★★?<0.01; N= 10。
[0080] 3.3對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠血清SOD、MDA活性的影響
[0081] 結果見表8,可知，模型組與空白組比較，SOD活性顯著降低（P<0.01)，而血清中 MDA含量顯著升高(P<0.01);與模型組比較，本發明工藝高劑量組、本發明工藝低劑量組、 傳統工藝高劑量組、傳統工藝低劑量組、陽性西組、陽性中組各組大鼠血清SOD活性顯著升 高(P<0.01)，MDA含量顯著降低(P<0.01)。本發明工藝高劑量組、本發明低劑量組。傳統工 藝低劑量組和傳統工藝高劑量組對于大鼠血清中的SOD活性及MDA含量的影響都沒有差異 (P>0.05)〇
[0082] 表8對血清S0D、MDA活性的影響
[0083]
[0084] 注與正常比較，沖<0.05，*沖<0.01;與模型組比較，▲P<0.05，^^P<0.01; 與傳統工藝高劑量組組比較，★?<〇. 05，★★?<0.01; N= 10。
[00化]3.4對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠屯、肌組織病理學的影響
[0086] 從圖2中可W看出，空白組大鼠的屯、肌組織結構正常，屯、肌纖維排列整齊，沒有變 性、壞死、肥大、萎縮的病變。而模型組大鼠注射鹽酸異丙腎上腺素后，引起了屯、肌損傷，有 大片壞死灶，肌纖維排列素亂、壞死細胞質溶解。與模型組比較，給藥組大鼠屯、肌病變的程 度明顯減輕。I SO誘導的屯、肌缺血大鼠屯、肌組織病理改變對高劑量組影響很小，本發明工藝 高劑量組與傳統工藝高劑量沒有明顯的區別。
[0087] 結論:微波加熱是通過水對微波能的吸收作用，進行選擇性加熱，利用微波能使植 物細胞中的水分或有機溶劑迅速升溫，升壓，細胞壁穿孔，從而把提取物從細胞中溶出。而 傳統提取方法則是通過胞內外溶液濃度差和滲透壓差使成分透過半透膜的方式溶出。傳統 的加熱提取，由于傳熱速度慢，因此提取溶劑從室溫升高到提取溫度所需時間長，易造成丹 酪酸B等熱敏性物質在逐漸的加熱過程被分解。
[0088] 微波提取后的綜合有效成分含量為45.392mg · g-i，高于傳統提取;微波工藝、傳統 工藝都能降低顯著的降低血清中CK、LDH的水平;對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠屯噸圖、T波高 度、組織病理改變的影響沒有顯著性差異；能顯著的降低反應自由基MDA水平，升高自由基 清除劑SOD水平，減少內皮細胞的損傷，抑制血栓的形成，也減輕了生物膜的損傷。
[0089] 因此，兩種工藝所得的丹參提取物在有效成分、藥效相同的提前條件下，微波提取 用時僅為傳統提取1/4,提取效率高、耗時較短，大大降低了能耗，節約了生產成本，為微波 提取在工業化生產中的推廣應用具有較大的實用價值。
[0090] 與現有技術相比，本發明所述的丹參微波提取工藝制成的丹參提取物，丹參中的 有效成分沒有變性。本發明工藝還具有高效、節能、無污染、高選擇性等優點。
【附圖說明】
[0091] 圖1是不同提取工藝對急性屯、肌缺血模型大鼠屯、電圖；（a:空白組屯、電圖，b:模型 組屯、電圖，C:陽性西（消屯、痛)組屯、電圖，d:本發明工藝高劑量組，e:傳統工藝高劑量組，f: 本發明藝低劑量組，g:傳統工藝低劑量組）；
[0092] 圖2對ISO誘導的屯、肌缺血大鼠屯、肌組織病理學圖；（a:空白組，b:模型組，C:傳統 工藝低劑量組，d:本發明工藝低劑量組，e:陽性中組，f:陽性西，g:傳統工藝高劑量，h本發 明工藝高劑量組）。
【具體實施方式】
[0093] 實施例1:
[0094] -種丹參的微波提取工藝，取丹參，粉碎，加水，微波提取，提取功率為600W，提取 時間為25min，固液比為1:12，濃縮，即得。
【主權項】
1. 一種丹參的微波提取工藝，其特征在于:取丹參，粉碎，加水，微波提取，濃縮，即得。2. 如權利要求1所述的丹參的微波提取工藝，其特征在于：微波提取時，提取功率為 500-70013. 如權利要求2所述的丹參的微波提取工藝，其特征在于:提取功率為600W。4. 如權利要求1所述的丹參的微波提取工藝，其特征在于:微波提取時，提取時間為20-30min〇5. 如權利要求4所述的丹參的微波提取工藝，其特征在于:提取時間為25min。6. 如權利要求5所述的丹參的微波提取工藝，其特征在于：微波提取時，固液比0.5-1.1:10-14。7. 如權利要求6所述的丹參的微波提取工藝，其特征在于：固液比為1:12。
【文檔編號】A61K36/537GK105878375SQ201610304846
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年5月10日
【發明人】張永萍, 徐劍, 楊立勇, 繆艷燕, 劉耀
【申請人】貴陽中醫學院