緩釋微粒的制備方法、制得的緩釋微粒及其應用

緩釋微粒的制備方法、制得的緩釋微粒及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種緩釋微粒的制備方法，包括以下步驟：1)制備水溶性藥物與可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物的固體分散體；2)將制備的固體分散體溶于有機溶劑C中，形成固體分散體乳液；3)將得到的固體分散體乳液注入含有表面活性劑的油溶液中形成均勻的乳液；4)通過溶劑揮發或溶劑提取使乳液中的微粒固化，收集微粒，洗滌干燥，獲得所述緩釋微粒；本發明還公開了由所述緩釋微粒的制備方法制得的緩釋微粒及緩釋微粒在植入式緩釋藥物組合物中的應用。本發明的緩釋微粒的制備方法全程常溫或低溫，對于高溫敏感的藥物制備聚合物基質的組合物非常有利；同時，所制備的緩釋微粒具有接近零級的優異緩釋效果，藥物濃度在緩釋期間穩定。
【專利說明】
緩釋微粒的制備方法、制得的緩釋微粒及其應用
技術領域
[0001 ]本發明屬于水溶性藥物領域，尤其設及緩釋微粒的制備方法、制得的緩釋微粒及 緩釋微粒在植入式緩釋藥物組合物中的應用。
【背景技術】
[0002] 近年來，大量的生物活性類物質如寡膚、多膚和蛋白作為候選藥物獲得了大量關 注，其在治療嚴重的病狀(癌癥、貧血癥、多發性硬化、肝炎等）中發揮重要的作用。但是，運 些大分子活性成分比較脆弱，因為它們在胃腸道中的穩定性差(容易在低抑或蛋白酶解下 降解），循環半衰期較短，W及它們穿過腸壁的通透性差，從而導致生物利用度非常低，因此 難W 口服給藥。注射或胃腸外途徑給藥仍是多膚和蛋白等活性成分的優選給藥途徑。可通 過靜脈、肌肉或皮下途徑注射的膚和蛋白質的很多制劑已經上市或在研發當中，如亮丙瑞 林緩釋微粒、戈舍瑞林緩釋植入劑、曲普瑞林緩釋微粒等。
[0003] 對于許多膚試劑，特別是激素，需要W受控的速率長期連續給藥，運些活性成分在 祀組織或器官上產生期望的效果所需的全身濃度很高，因而需要通過頻繁地注射高劑量獲 得治療效用窗中所需的濃度，運常常造成對患者有損害的全身毒性。同時，注射給藥是疼痛 的，因此，患者的依從低，療效差，副作用大。運些問題可W通過基于聚合物的活性成分的長 效傳遞系統化rug Delivery System，DDS)得W解決，該系統通過將活性成分包封入生物可 降解和生物相容的聚合物基質中，制成微膠囊、微顆粒或可移植桿的形式，使活性成分長期 穩定地釋放出來，從而達到緩釋控釋的目的。
[0004] 已經報道的微粒制備方法有多種，比如溶劑揮發法(solvent evaporation)、凝聚 法(coacervation)、噴霧干燥法W及噴霧冷凍干燥法等。其中使用最多的是水相中溶劑揮 發法，它又可細分為單乳化法（0il/Water，0/W;Water/0il，W/0)和復乳化法(Water/0il/ Water，W/0/W;Water/0il/0il，W/0/0)。
[0005] 一種改進的復乳化方法（如CN102245210A、CN1826170B)，直接將多膚粉末懸浮在 有機相中，形成油包固（S/0)的懸濁液，然后將此懸濁液分散到水相中，形成S/0/W的復乳 液。由于多膚粉末一般不溶于中間有機相溶劑，此方法可避免Wi/O/W^復乳化方法中內水相 向外水相的擴散，進而提高包封率。
[0006] 在S/0/W方法中，預制備的活性物質顆粒的大小十分重要，當固體蛋白質顆粒的直 徑從5微米增大到20微米時，不僅初期的釋放速率翻倍，其微囊包封率從80%下降到20%。 通常得到的蛋白質、多膚凍干粉末平均粒徑在1〇-1〇〇〇μπι，比如，典型的蛋白質、多膚冷凍干 燥粉末平均粒徑約在10-500μπι。如果直接用如此大粒徑的粉末懸浮在有機溶劑中形成S/0 懸濁液，然后應用S/0/W復乳化方法制備微粒，藥物將得不到很好的包封，導致的結果是或 者包封率低，或者緩釋結果不令人滿意(前期藥物突釋較大，而后期藥物釋放量不足），或者 制備的微粒粒徑太大，難W注射給藥；同時，藥物顆粒的形狀也影響微粒的形狀。因此，一般 要采用某種方法預先將藥物粉末平均粒徑減小到l-l〇ym，然后將此粉末用于S/0/W復乳化 法制備緩釋微粒化SP 6270700;Takada S，et al.Journal of Controlled Release.2003， 88(2):229-42)。
[0007]然而，制備小粒徑的藥物往往要通過研磨、噴霧干燥、超聲粉碎、氣流粉碎、結晶法 等方法(如CN1494900B)工藝復雜，并且容易導致活性成分失活。研磨法受限于造成粉塵、重 金屬污染W及研磨熱引起的蛋白質變性;噴霧干燥法或許可W提供足夠小的蛋白顆粒，但 是噴嘴附近的高剪切力和液體與空氣間的界面張力會使蛋白變性;此外，噴霧干燥或噴霧 式冷凍干燥中須使用表面活性劑，而表面活性劑又造成蛋白質在下一步制劑程序中與溶劑 互相作用。同時，如果降低制備顆粒工藝的復雜性，犧牲粒徑大小W保證藥物的活性，制備 的顆粒粒徑相對微粒略小（即顆粒半徑比聚合物層厚度大得多），則會出現每個微粒只包裹 一個或很少幾個活性物質顆粒的情況，從而導致前期極少藥物釋放，而后期藥物釋快速釋 放，達不到緩釋效果。
[000引一種改進的復乳化法（CN102233129 B、CN 102871969 A、CN102266294 B等），將活 性物質與一種或幾種添加劑(如葡聚糖、聚乙二醇、海藻酸鋼等)制備小粒徑的顆粒，然后用 有機溶劑洗去部分或全部的添加劑，獲得多孔、半縷空或縷空的活性物質小顆粒，然后再用 S/0/hO工藝制備微粒。運種方法增加了制備小顆粒運一步較復雜的步驟，而且需要用有機 溶劑除去其中的添加劑。并且，運些添加劑大多為水溶性物質，如果沒有完全去除，容易影 響釋放效果，加快活性物質釋放，或者形成凝膠(如高分子量的葡聚糖、海藻酸鋼），可能導 致微粒漲破、藥物釋放延遲或者釋放不徹底。
[0009] 更進一步優化的制備方法化S5556642)，將水溶性活性物質和聚合物溶于共溶劑， 然后通過蒸發去除有機溶劑得到固體分散體，然后將固體分散體溶于有機溶劑中，通過0/W 法制備微粒。運種方法克服了傳統的S/0/W法前期沒有藥物釋放，而后期藥物釋急劇釋放的 缺點。然而，揮發有機溶劑制備固體的工藝不利于對溫度敏感的活性物質，容易致使其變 性;如果于較低溫度下揮發有機溶劑，由于溶劑揮發較慢則會造成活性物質在固化時聚集 析出，干燥后的固體分散體中活性物質也會W較大的體積存在，如塊狀、帶狀、絲狀，對后續 的制備微粒工藝造成困難或造成浪費，也會導致釋放不穩定。
[0010] 因此，本發明的目的在于，提供一種無需預先制備小粒徑藥物粉末，通過乳化-溶 劑揮發法制備緩釋組合物，工藝比較簡單而且又能保證活性物質的生物活性、理想的包封 率和優異的緩釋效果的方法。

【發明內容】

[0011] -方面，為解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種緩釋微粒的制備方法， 此方法的制備全程常溫或低溫，對于高溫敏感的藥物非常有利，能夠最大程度上保持活性 物質的生物活性。
[0012] 本發明采用的技術方案為:一種緩釋微粒的制備方法，包括W下步驟：
[0013] 1)制備水溶性藥物與可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物的固體分散體；
[0014] 2)將步驟1)制備的固體分散體溶于有機溶劑C中，形成固體分散體乳液（內油相）， 所述有機溶劑C為不能溶解所述水溶性藥物但可W溶解所述水難溶性聚合物、沸點低于水 且不溶于或難溶于水的有機溶劑；
[0015] 3)將步驟2)得到的固體分散體乳液注入含有表面活性劑的油溶液(外油相）中形 成均勻的乳液；
[0016] 4)通過溶劑揮發或溶劑提取使乳液中的微粒固化，收集微粒，用有機溶劑D洗涂數 次，再W超純水洗涂數次，W除去附著于微粒表面的表面活性劑，然后進行干燥，獲得所述 緩釋微粒;其中，所述有機溶劑D不能溶解水溶性藥物和水難溶性聚合物，其能與所述油溶 液混溶，同時對所述表面活性劑有良好的溶解性。
[0017] 所述的水溶性藥物包括分子量小于約3350化的堿性物質或含有堿性基團的物質 (如生物堿、短膚、括抗劑、抗生素、小分子核酸)及其鹽，W及分子量大于約3350化的堿性物 質或含有堿性基團的物質及其鹽(如多膚、蛋白、核酸、抗體、抗原、抗生素等）中的至少一 種。優選地，所述水溶性藥物為蛋白類藥物、膚類藥物和核酸類藥物中的至少一種。優選的， 所述水溶性藥物的分子量小于約3350化。
[0018] 所述蛋白包括天然的，合成的，半合成的或重組的化合物或蛋白質，或含有通過膚 鍵共價連接的α氨基酸的基本組成結構，或功能上相關。具體的，包括但不限于球狀蛋白（如 白蛋白、球蛋白、組蛋白），纖維蛋白（如膠原，彈性蛋白，角蛋白），化合物蛋白質（可含有一 個或多個非膚組分，如糖蛋白、核蛋白、粘蛋白、脂蛋白、金屬蛋白），治療性蛋白，融合蛋白， 受體，抗原(如合成的或重組的抗原），病毒表面蛋白，激素和激素類似物，抗體(如單克隆或 多克隆抗體），酶，化b片段，白介素及其衍生物，干擾素及其衍生物中的至少一種。
[0019] 所述核酸是指天然的、合成的、半合成的，或由兩個或更多個相同或不同的核巧酸 形成的至少部分重組的化合物，并且可W是單鏈或雙鏈。核酸的非限制性例子包括寡核巧 酸，反義寡核巧酸，適體，多核巧酸，脫氧核糖核酸，siRNA，核巧酸構建體、單鏈或雙鏈區段 物W及前體及其衍生物(如糖基化、超糖基化、PEG化、門TC標記、核巧，W及它們的鹽）。具體 的，戶片述核酉畫包括但不限于Mipomersen、A1 icaf orsen、Nusinersen、Volanesorsen、 Custirsen、Apatorsen、Plazomicin、RG-012、RG-101、ATL1102、ATL1103、lONIS-皿Vrx、 IONIS-HBV-Lrx、IONIS-GCGRrx、IONIS-GCCRrx、IONIS-HTTrx、IONIS-TTRrx、IONIS-PKKrx、 I0NIS-FXlRx、I0NIS-AP0(a)-LRx、I0NIS-ANGPTL3-LRx、I0NIS-AR-2.5Rx、I0NIS-DMPK-2.5Rx、 I0NIS-STAT3-2.5rx、I0NIS-S0D1rx、I0NIS-GSK4-Lrx、I0NIS-PTP1Brx、I0NIS-FGFR4rx、I0NIS- DGAT2rx中的至少一種。上述名詞為核酸藥物的名稱或代號。
[0020] 所述水溶性藥物優選含有至少一個堿性基團的水溶性物質(如膚類藥物），包括且 不限于促腎上腺皮質激素(ACTH)及其衍生物、表皮生長因子化GF)、血小板衍生生長因子 (1'06。）、促性腺素釋放激素化皿^及其衍生物或類似物、降巧素、膜島素樣生長因子(16尸- I、IGF-II)、細胞生長因子(例如EGF、TGF-a、TGF-β、PDGF、鹽酸FGF、堿性FGF等）、膜高血糖素 樣膚（如化P-1、化P-2)及其衍生物或類似物、神經營養因子（例如NT-3、NT-4、CNTF、GDNF、 抓NF等）、集落刺激因子(例如CSF、GCSF、GMCSF、MCSF等），W及它們的合成類似物、修飾物和 藥物活性片段中的至少一種。所述化P-1的衍生物或類似物包括但不限于exendin-3和 exendin-4〇
[0021] 所述含有至少一個堿性基團水溶性藥物優選膚類物質及其衍生物、類似物中的至 少一種，所述膚類物質包括且不限于依降巧素(31膚）、索瑪魯膚(31膚）、膜高血糖素樣膚-1 (31膚）、利拉魯膚(34膚）、特立帕膚(34膚）、普蘭林膚(37膚）、恩夫韋地(38膚）、艾塞那膚 (39膚）、促腎上腺皮質激素(39膚）、促腎上腺皮質激素釋放激素(41膚）、替莫瑞林(44膚）、 利西拉來(44膚）、促卵泡生成素（118膚）、杜拉魯膚(274膚）、阿必魯膚(645膚）、膜高血糖素 (29膚）、舍莫瑞林(29膚）、阿膚地爾（28膚）、膜泌素(27膚）、齊考諾膚(25膚）、替可克膚(24 膚）、比伐蘆定(20膚）、生長抑素（14膚）、特利加壓素（12膚）、戈舍瑞林（10膚）、曲普瑞林(10 膚）、那法瑞林(10膚）、戈那瑞林（10膚）、西曲瑞克（10膚）、地加瑞克（10膚）、安替膚(10膚）、 血管緊張素(6-10膚）、亮丙瑞林(9膚）、阿拉瑞林(9膚，丙氨瑞林）、布舍瑞林(9膚）、德舍瑞 林(9膚）、布雷默浪丹(7膚）、比伐蘆定（10膚）、奧曲膚(8膚）、蘭瑞膚(8膚）、布雷默浪丹（7 膚）、埃替非己膚(7膚）、海沙瑞林(6膚）、脾臟五膚(5膚）、胸腺五膚(5膚）中的至少一種。
[0022] 所述膚類物質優選具有不多于30個氨基酸殘基的短膚或多膚。所述膚類物質的衍 生物、類似物是指具有不多于30個氨基酸殘基的多膚及其變體、類似物中的至少一種經水 溶性或水難溶性的基團或物質修飾的產物，其具有更高的生物及藥理活性、穩定性，或具有 新的功能或屬性。
[0023] 所述膚類藥物的衍生物、類似物包括膜高血糖素樣膚（如化P-1、化P-2)及其衍生 物、類似物中的至少一種，包括但不限于exendin-3、exendin-4及它們的變體、衍生物中的 至少一種。
[0024] 所述變體、類似物是指氨基酸序列的一個或多個氨基酸殘基被取代(或替換）、缺 失、插入、融合、截短或其任意組合而不同的膚，變體多膚可W是完全功能性的或者可缺乏 一種或多種功能。如膜高血糖素膚-1 (GLP-1)的類似物exendin-4的第2位為甘氨酸，而化P- 1的第2位為丙氨酸，而且exendin-4能與GLP-1受體結合、并產生細胞信號級聯傳導。
[0025] 所述水溶性或水難溶性的基團或物質選自聚乙二醇及其衍生物、環糊精、透明質 酸、短膚、白蛋白、氨基酸序列、核酸、基因、抗體、憐酸、橫酸、巧光染料、KLH、OVA、PVP、PE0、 PVA、燒控、芳控、生物素、免疫球蛋白、清蛋白、聚氨基酸、明膠、班巧酷明膠、丙締酷胺衍生 物、脂肪酸、多糖、脂質氨基酸、殼聚糖和葡聚糖中的至少一種。優選聚乙二醇和/或其其衍 生物，所述聚乙二醇及其衍生物的結構可W是支鏈的、直鏈的、分叉的或啞鈴狀的。所述聚 乙二醇的衍生物包括但不限于單甲氧基聚乙二醇、丙酸甲氧基聚乙二醇。所述聚乙二醇及 其衍生物為市售的，或通過本領域技術人員熟知的技術自行制備的。
[0026] 所述水溶性或水難溶性物質經修飾為帶有活化基團的修飾劑后與所述膚類物質 衍生物相偶聯，所述活化基團選自馬來酷亞胺、面素、乙締基諷、二硫鍵、琉基、醒基、幾基、 0-取代徑氨、活性醋、締基、烘基、疊氮基及其他具有高化學反應活性的基團中的至少一種； 優選地，所述活化基團選自馬來酷亞胺、面素、乙締基諷和二硫鍵中的至少一種；更優選為 馬來酷亞胺和/或二硫鍵。聚合物上所帶有的活化基團個數為一個或多個，且當活化基團個 數大于一個時，所述活化基團可為相同或不同。
[0027] 一個或多個所述水溶性或水難溶性物質的分子量為l-60kDa，優選2-50kDa，更優 選5-40kDa。
[0028] 帶有活化基團的修飾劑可W通過氨基酸序列上的氨基、簇基、徑基或琉基等與膚 或其變體、類似物相偶聯。運樣的基團通常位于氨基酸殘基如Lys(賴氨酸）、Asp(天冬氨 酸）、Glu(谷氨酸）、切S(半脫氨酸）、化s(組氨酸）、4-琉基脯氨酸、時p(色氨酸）、Arg(精氨 酸）、Ala(丙氨酸）、Gly(甘氨酸）、Ser(絲氨酸)或化r(蘇氨酸）中的任何一個氨基酸或它們 的衍生物的N端、C端、側鏈或任意位點，優選為含有琉基的位點。如Exendin-4及其類似物 中，位于2、14、21、25、28、35、38或任意位的任一個半脫氨酸殘基位點或其他氨基酸殘基被 替換為半脫氨酸殘基的位點。
[0029] 所述膚及其變體、類似物的修飾為隨機修飾、定位修飾物(特異性修飾）、單點修飾 或多點修飾，優選單點定位修飾。
[0030] 所述膚及其變體、類似物采用常規的多膚合成方法制備，包括固相多膚合成方法、 液相多膚合成方法、固相-液相多膚合成方法W及重組方法;膚及其變體、類似物與修飾劑 的反應在水溶液或緩沖鹽溶液中進行，適當控制反應體系的抑值，WHPLC、GPC等對修飾產 物進行監測，并通過離子交換、凝膠色譜等分離純化，濃縮并冷凍干燥獲得目標產物。
[0031] W上所提及的水溶性藥物可W是游離形式或是藥學可接受的鹽的形式，其成鹽的 酸可選用無機酸或有機酸。所述無機酸包括鹽酸、硫酸、憐酸，有機酸包括醋酸、甲酸、丙酸、 乳酸、Ξ氣乙酸、構祿酸、富馬酸、丙二酸、馬來酸、酒石酸、Π 冬氨酸、苯甲酸、甲橫酸、苯橫 酸、巧樣酸、蘋果酸、草酸、班巧酸、碳酸;優選鹽酸、醋酸、富馬酸、馬來酸;更優選醋酸。
[0032] 所述可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物包括聚醋、聚碳酸醋、聚縮醒、聚 酢、聚徑基脂肪酸，W及它們的共聚物或共混物。詳細的，所述可生物降解和生物相容的聚 合物為聚丙交醋（PLA)、聚乙交醋(PGA)、丙交醋-乙交醋共聚物(PLGA)及它們與聚己內醋 (PCL)或聚乙二醇（PEG)的共聚物（如化 A-PEG、化 GA-PEG、PLGA-PEG-化 GA、PLA-PEG-PLA、 陽G-P化、P化-PLA-P化、P化-PLGA-P化、PEG-PLA-PEG、PEG-PLGA-PEG )、聚己內醋及其與聚乙 二醇的共聚物、聚徑基下酸、聚徑基戊酸、聚對二氧環己酬(PPD0)、殼聚糖、海藻酸及其鹽、 聚氯基丙締酸醋、纖維蛋白、聚酸酢、聚原酸醋、聚酷胺、聚憐臘、聚憐酸醋W及它們的共聚 物或混合物；優選PLA、PLGAW及它們與PCL或PEG的共聚物，W及它們混合物；更優選化A、 PLGA或它們的混合物。
[0033] 所述的PLA、PLGA及它們與P化或陽G的共聚物的重均分子量為25000-150000化，優 選分子量為30000-130000化，更優選分子量為35000-110000化。本說明中所使用的重均分 子量是通過凝膠滲透色譜(GPC)測量所獲得的值。
[0034] 所述的PLA、PLGA及它們與PCL或陽G的共聚物的粘度(測試條件為~0.5%(w/v)， CHC13，25°C)為0.22-1.1化/g，優選0.27-1. (WL/g，更優選0.31-0.9化/g。
[0035] 所述水難溶性聚合物的分子鏈都可W攜帶陰離子或陽離子基團，或者不攜帶運些 基團。優選的，聚合物具有端簇基或端醋基，更優選的具有端簇基的聚合物。
[0036] 所述化A JLGA及它們與P化或陽G的共聚物，其中丙交脂與乙交脂的比率從100:0 到50:50，優選從大約90:10到50:50，更優選為85:1巧化0:50。
[0037] 本發明的制備緩釋微粒的聚合物，可W為單一的聚合物，也可W為多種聚合物的 混合物，如丙交脂與乙交脂的比率及分子量相同但攜帶基團不同的PLGA的組合、丙交脂與 乙交脂的比率及攜帶基團相同但分子量不同的PLGA的組合、分子量及攜帶基團相同但丙交 脂與乙交脂的比率不同的PLGA的組合、分子量、攜帶基團及丙交脂與乙交脂的比率均不同 的PLGA的組合、PLGA與PLA的組合等。
[0038] 所述有機溶劑C，不能溶解水溶性藥物，但可W溶解可生物降解和生物相容的水難 溶性聚合物，沸點低于水且不溶于或難溶于水。所述有機溶劑C可為單一的有機溶劑，也可 W為混溶的兩種及W上的有機溶劑。所述有機溶劑C選自脂肪控(分子結構為直鏈、支鏈或 環狀，例如正己燒、正庚燒、正戊燒、環己燒、石油酸等）、面代控(如二氯甲燒、氯仿、氯乙燒、 四氯乙締、Ξ氯乙締、二氯乙燒、Ξ氯乙燒、四氯化碳、氣控、氯代苯(單、雙、Ξ取代）、Ξ氯氣 甲燒等）、脂肪酸醋（如乙酸乙醋、乙酸下醋等）、芳香控(如苯、甲苯、二甲苯等）、酸(如二乙 基酸、二異丙基酸、甲基異下基酸、甲基叔下基酸、甲氧基化酸、烷基酸、二面代酸、Ξ面代 酸、環酸、冠酸等）中的至少一種，優選面代脂肪控類溶劑，更優選二氯甲燒和氯仿中的至少 一種。所述內油相中有機溶劑C的比例根據不同藥物和聚合物有所不同，根據實際情況調 配。
[0039] 水難溶性聚合物于有機溶劑C中的濃度依據聚合物的類型、重均分子量W及有機 溶劑的類型而變化;通常，其質量濃度(聚合物質量/有機溶劑C質量*100%)為約1-18% (w/ W)，優選為約2-15% (w/w)，更優選為約3-12% (w/w)。
[0040] 所述有機溶劑D，同時不能溶解水溶性藥物和可生物降解和生物相容的水難溶性 聚合物，但能與所述油溶液混溶，同時對所述表面活性劑有良好的溶解性。所述有機溶劑D 可為單一的有機溶劑，也可W為可W混溶的兩種及W上的有機溶劑。所述有機溶劑D選自無 水乙酸、環己燒、正己燒、正庚燒、石油酸中的至少一種，優選正己燒、環己燒、正庚燒中的至 少一種，所述有機溶劑D的種類和比例根據不同表面活性劑、油溶液有所不同，根據實際情 況調配。
[0041] 所述沸點低于水且不溶于或難溶于水的有機溶劑是指只能夠與水^巧％體積比 混溶的有機溶劑，而且具有較低沸點（小于或遠小于100°c)，w便容易地通過例如凍干、蒸 發或鼓風來除去。
[0042] 所述內油相為低溫，所述低溫可W理解為20°C或W下，優選15°C或W下，更優選10 °(：或^下。
[0043] 所述含有表面活性劑的油溶液(又稱為外油相)為低溫，所述低溫可W理解為18°C 或W下，優選12°C或W下，更優選8°C。
[0044] 所述含有表面活性劑的油溶液的油基質為制藥工藝領域任何藥學上可接受的多 元醇、植物油、礦物油及其他油中的至少一種。該油基質可為單一組分，也可W為混溶的兩 種及W上的組分。所述植物油包括但不限于豆油、棉巧油、菜巧油、花生油、紅花油、芝麻油、 米慷油、玉米胚芽油、葵花油、磐粟油、橄攬油、玉米油、棉巧油、挪子油、亞麻子油、藍麻油、 棟桐油中的至少一種，運些植物油中優選使用豆油、花生油、藍麻油中的至少一種，更優選 花生油;所述礦物油包括但不限于硅油、液體石蠟;其他油包括通過植物油的部分氨化得到 的油(如氨化藍麻油)和液態的飽和脂肪酸(如己酸、辛酸等）；所述多元醇包括甘油、聚乙二 醇。所述油基質優選植物油和/或礦物油，更優選植物油。
[0045] 所述表面活性劑可W增加有機相的濕潤性質、提高乳化過程中小液珠的穩定性及 形狀，避免小液珠重新聚合、減少未包封的或部分包封的小球顆粒的數量，從而避免藥物在 釋放過程中的初始突釋。
[0046] 所述表面活性劑為陰離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、非離子性表面活性 劑或表面活性生物分子運樣的化合物，優選陰離子表面活性劑、非離子性表面活性劑，更優 選陰離子表面活性劑。
[0047] 所述非離子性表面活性劑包括但不限于失水山梨糖醇醋（司盤）、單硬脂酸甘油 醋、十六燒醇、十八十六醇、十八燒醇中的至少一種。
[0048] 所述陰離子表面活性劑包括但不限于憐脂及其衍生物、甘油醋、脂肪酸醋、脂肪醇 和其它膽汁酸(如膽酸、脫氧膽酸、甘氨膽酸、牛橫膽酸、甘氨脫氧膽酸）中的至少一種。
[0049] 所述陰離子表面活性劑優選憐脂及其衍生物，所述憐脂及其衍生物包括但不限于 憐脂酷膽堿(卵憐脂）、憐脂酷乙醇胺(腦憐脂）、憐脂酷絲氨酸、憐脂酷肌醇、憐脂酷甘油、雙 憐脂酷甘油（屯、憐脂）、甘油憐脂酸、溶血憐脂、大豆憐脂、二棟桐酷-憐脂酷膽堿、二油酷憐 脂酷-乙醇胺、二油酷憐脂酷膽堿和二肉豆違酷-憐脂酷甘油，及其混合物。所述憐脂可W是 鹽化的或非鹽化的、氨化的或部分氨化的、天然的、半合成的或全合成的。所述憐脂及其衍 生物優選憐脂酷膽堿、大豆憐脂、憐脂酷甘油，更優選大豆憐脂。
[0050] 所述表面活性劑(或穩定劑)在油基質中的質量百分比濃度一般在0.05-10%，優 選為0.25-8 %，更優選0.5-5 %。
[0051] 外油相的使用量，通常為內油相的約50倍體積W上，優選為約70倍體積W上，且特 別優選為約100倍體積W上。
[0052] 所述形成均勻的乳液的方法與眾所周知的乳化方法相同，采用產生高剪切力的裝 置(如磁力攬拌器、機械攬拌器、高速均質機、超聲儀、膜乳化器、轉子-定子混合器、靜態混 合器、高壓均質機等)將內油相與外油相混合，W形成均勻乳液。
[0053] 所述步驟4)中除去有機溶劑可W應用下述方法：
[0054] (1)通過加熱、減壓(或聯合加熱)除去有機溶劑；
[0055] (2)氣流鼓吹液體表面，并控制液相與氣相的接觸面積、乳液攬拌和循環的速率 (如肝-A-9-221418)加速有機溶劑的揮發，所述氣流優選干燥的氮氣；
[0056] (3)用空屯、纖維薄膜快速除去有機溶劑(如W00183594)，空屯、纖維薄膜優選娃橡膠 全蒸發薄膜，特別是由聚二甲基硅氧烷制備的全蒸發薄膜。
[0057] 所述步驟4)中所獲得的微粒通過離屯、、過篩或過濾的方式予W分離。
[0058] 所述步驟4)中洗涂微粒所用的超純水溫度為低溫，所述低溫可W理解為12°C或W 下，優選9°C或W下，更優選6°C或W下。
[0059] 所述步驟4)中洗涂所用的超純水中還可含有無機鹽(如鋒鹽），W減少洗涂過程中 水溶性活性物質溶滲至水相，提高藥物包封率，其機理為提高外相的滲透壓或降低活性物 質在外相中的溶解度。對于多膚、蛋白、核酸、抗體、抗原、抗生素等活性物質，含鋒離子的化 合物是比較理想的選擇，包括且不限于醋酸鋒、氯化鋒、硫酸鋒、硫酸氨鋒、硝酸鋒、葡萄糖 酸鋒、碳酸鋒或它們的任意混合物。超純水中無機鹽的質量濃度為0-3 %，優選0.01-1.5 %， 更優選0.01-1 %。
[0060] 優選地，所述步驟1)通過W下步驟實施：
[0061] 11)將可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物與水溶性藥物完全溶解于有機溶 劑A中，形成藥物和聚合物的混合溶液；
[0062] 12)將所述混合溶液注入有機溶劑B中或將有機溶液B注入所述混合溶液中，產生 均勻、細微的沉淀物，收集沉淀物，并用有機溶劑B洗涂數次，去除有機溶劑B，獲得水溶性藥 物和水難溶性聚合物的固體分散體;其中，有機溶劑B不能溶解所述水難溶性聚合物和所述 水溶性藥物。
[0063] 所述有機溶劑A，能同時溶解水溶性藥物和可生物降解、生物相容的水難溶性聚合 物。所述有機溶劑A可為單一的有機溶劑，也可W為混溶的兩種及W上的有機溶劑。所述有 機溶劑A選自冰醋酸、乙臘、Ξ氣乙酸、二甲基亞諷中的至少一種，優選冰醋酸和/或乙臘，更 優選冰醋酸。所述混合物中有機溶劑的種類和比例根據不同藥物和聚合物有所不同，可根 據實際情況調配。
[0064] 所述有機溶劑B，同時不能溶解水溶性藥物和可生物降解、生物相容的水難溶性聚 合物。所述有機溶劑B可為單一的有機溶劑，也可W為可W混溶的兩種及W上的有機溶劑。 所述有機溶劑B選自無水乙酸、己燒(包括環己燒、正己燒）、正庚燒中的至少一種，優選無水 乙酸和己燒(包括環己燒、正己燒）中的至少一種，更優選無水乙酸。所述混合物中有機溶劑 的種類和比例根據不同藥物和聚合物有所不同，可根據實際情況調配。
[0065] 所述有機溶劑A控制為常溫W下或低溫，所述常溫通常可W理解為20°C，優選10- 15°C;所述低溫通常可W理解為10°CW下，優選為4-6°C或W下；所述有機溶劑B控制為低 溫，所述低溫通常可W理解為15°CW下，優選為10°C或W下，更優選為6°CW下;有機溶劑A 比有機溶劑B的溫度高0-10°C，優選3-8°C。
[0066] 所述固體分散體中，水溶性藥物與可生物降解和生物相容的水不溶性聚合物的質 量比為1:1~1:99,優選2:3~3:97,更優選為7:13~1:19。
[0067] 所述水不溶性聚合物于有機溶劑A中的濃度依據聚合物的類型、重均分子量W及 有機溶劑的類型而變化。通常，其質量濃度(聚合物質量/有機溶劑A質量*100%)為1-18% (w/w)，優選為2-15% (w/w)，更優選為3-12% (w/w)。
[0068] 所述去除有機溶劑B的步驟在常溫W下或低溫下進行，所述常溫通常可W理解為 20-30°C，優選20-25°C;所述低溫通常可W理解為15°CW下，優選為10°C及W下。去除有機 溶劑的方法包括但不限于真空干燥、冷凍干燥、流化干燥。
[0069] 進一步的，本發明的緩釋微粒中可W包含一種或多種助劑。本發明的緩釋微粒的 制備方法還包括加入助劑的步驟，助劑在所述步驟1)制備固體分散體的過程中加入，或在 所述步驟2)制備固體分散體乳液時加入;優選在所述步驟2)制備固體分散體乳液時加入。 所述助劑溶解或混懸于內油相中。所述助劑加入時可為極細微的粉末，其粒徑小于0.5WI1， 優選為粒徑小于0. Ιμπι，更優選粒徑小于0.05WI1。
[0070] 所述助劑可W賦予活性藥物或微粒其它的特征，例如增加微粒、活性藥物或聚合 物的穩定性、促進活性藥物從微粒中的可控釋放或調節活性藥物的生物學組織滲透性。所 述助劑為所述水溶性藥物與水難溶性聚合物的質量之和的0.01-10%，優選0.1-8%，更優 選 0.5-8%。
[0071] 所述助劑包括但不限于糖類、氨基酸、脂肪酸、醇類、抗氧化劑、緩沖劑中的至少一 種。
[0072] 所述緩沖劑包括但不限于無機酸或有機酸的鹽，如碳酸、乙酸、草酸、巧樣酸、憐 酸、鹽酸的鹽。具體的，包括但不限于碳酸巧、氨氧化巧、肉豆遽酸巧、油酸巧、棟桐酸巧、硬 脂酸巧、憐酸巧、醋酸巧、醋酸儀、碳酸儀、氨氧化儀、憐酸儀、肉豆違酸儀、油酸儀、棟桐酸 儀、硬脂酸儀、碳酸鋒、氨氧化鋒、氧化鋒、肉豆遽酸鋒、油酸鋒、醋酸鋒、氯化鋒、硫酸鋒、硫 酸氨鋒、硝酸鋒、葡萄糖酸鋒、棟桐酸鋒、硬脂酸鋒、憐酸鋒、碳酸鋼、碳酸氨鋼、亞硫酸氨鋼、 硫代硫酸鋼、醋酸-醋酸鋼緩沖鹽，及它們的任意組合。優選無機酸或有機酸的鋒鹽，更優選 氯化鋒。所述緩沖劑為所述水溶性藥物與所述水難溶性聚合物的質量之和的0-5%，優選 0.01-3%，更優選 0.01-2%。
[0073] 所述抗氧化劑包括但不限于叔下基對徑基茵香酸、二下基苯酪、生育酪、肉豆遽酸 異丙醋、d-a乙酸生育酪、抗壞血酸、棟桐酸抗壞血酸醋、下基化徑基苯甲酸、下基化徑基釀、 徑基香豆素、下基化徑基甲苯、捂酸脂肪酸醋（如乙醋、丙醋、辛醋、月桂醋）、丙徑基苯甲酸 醋、Ξ徑基苯下酬、維生素 E、維生素 E-TPGS、P-徑基苯甲酸醋（如甲醋、乙醋、丙醋、下醋）中 的至少一種。抗氧化劑可w有效地去除緩釋微粒中的自由基或過氧化物。所述抗氧化劑為 所述水溶性藥物與所述水難溶性聚合物的質量之和的0-1%，優選0-0.5%，更優選0- 0.1%。
[0074] 所述糖類包括但不限于單糖、寡糖和多糖，W及它們的衍生物。具體的，包括但不 限于海藻糖、葡萄糖、薦糖、甘油、赤薛醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇、甘露糖醇、葡萄糖醒酸、 艾杜糖醒酸、神經氨糖酸、半乳糖醒酸、葡萄糖酬酸、甘露糖醒酸、透明質酸及其鹽、硫酸軟 骨素及其鹽、肝素、菊粉、幾下質及其衍生物、糊精、葡聚糖和海藻酸及其鹽中的至少一種。 優選薦糖、甘露糖醇、木糖醇，或它們的任意組合。所述糖類為所述水溶性藥物與所述水難 溶性聚合物的質量之和的0.01 -10%，優選0.1 -8%，更優選0.5-6%。
[0075] 所述氨基酸包括但不限于甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、賴氨酸、徑賴氨酸、組氨酸、精氨酸、脫氨酸、半脫氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、 異亮氨酸W及它們的衍生物中的至少一種；優選堿性氨基酸，包括但不限于精氨酸、組氨 酸、賴氨酸中的至少一種。所述氨基酸為所述水溶性藥物與所述水難溶性聚合物的質量之 和的0-4%，優選0-2%，更優選0.01-1 %。
[0076] 所述脂肪酸包括12~24燒酸及其衍生物，包括但不限于油酸、硬脂酸、月桂酸、肉 豆違酸、棟桐酸、花生酸、山俞酸、木質素酸，優選硬脂酸、山俞酸、棟桐酸中的至少一種。所 述脂肪酸為所述水溶性藥物與所述水難溶性聚合物的質量之和的0-5%，優選0.01-4%，更 優選 0.05-3 %。
[0077] 所述醇類包括但不限于聚乙二醇。所述聚乙二醇的分子量為400-6000化，優選為 400-4000Da，更優選為400-2000化。所述醇類為所述水溶性藥物與所述水難溶性聚合物的 質量之和的0-5%，優選0.01-4%，更優選0.05-3%。
[0078] 注射用的制劑要求無菌，具體的滅菌方法屬于本領域技術人員的一般知識和技 術，如采用無菌操作、熱壓、環氧乙燒或者伽馬射線保證制劑無菌。本發明制備緩釋微粒優 選無菌操作，如用醋酸纖維素膜過濾外相水溶液、用聚酸諷膜過濾化GA的乙酸溶液、用聚四 氣乙締膜過濾二氯甲燒，且全部設備是容易密閉的并配備有機溶劑回收裝置，W防止細菌 的污染W及有機溶劑擴散到空氣中。
[0079] 另一方面，本發明還提供了根據所述的緩釋微粒的制備方法制得的緩釋微粒。
[0080] 因為微粒用于注射給藥時，粒徑太大容易導致堵針，必須用更大號的注射針頭，患 者的疼痛感更強，而粒徑太小將導致共聚物無法很好的包裹藥物，達不到良好的緩釋效果。 本發明制備的緩釋微粒優選具有小于200WI1的平均幾何顆粒大小。所述緩釋微粒的粒徑為 10-200μπι，優選10-150μπι，更優選20-150μπι。緩釋微粒粒徑大小通過動態光散射方法(例如 激光衍射法）、或顯微技術(如掃描電鏡法)來測量。
[0081] 本發明的緩釋微粒可W包封大量的活性成分，劑量可依據活性成分的類型與含 量、劑型、釋放持續時間、給藥受試者、給藥途徑、給藥目的、祀標疾病及癥狀等而適當地選 擇。然而，只要活性成分可于活體內維持在藥物有效濃度達預期的持續時間，則該劑量可認 為是令人滿意的。
[0082] 本發明的緩釋微粒中，所述水溶性藥物的質量含量百分比大約為1-40%，優選3- 35%，更優選 5-30 %。
[0083 ]在本文中當陳述范圍時，意味著包含了其中的任何范圍或范圍的組合。
[0084] 又一方面，本發明還提供了一種混懸液制劑，其包括所述的緩釋微粒和分散介質。
[0085] 當微粒W混懸劑形式給藥時，其可與適當的分散介質制成混懸液制劑。
[0086] 所述分散介質包括非離子表面活性劑、聚氧乙締藍麻油衍生物、纖維素增稠劑、海 藻酸鋼、透明質酸、糊精、淀粉中的至少一種。或可選擇的，還可W與其他組分如等滲劑(如 氯化鋼、甘露醇、甘油、山梨醇、乳糖、木糖醇、麥芽糖、半乳糖、薦糖、葡萄糖等）、pH調節劑 (例如碳酸、醋酸、草酸、巧樣酸、憐酸、鹽酸或運些酸的鹽，例如碳酸鋼、碳酸氨鋼等）、防腐 劑(例如對徑基苯甲酸醋、對徑基苯甲酸丙醋、苯甲醇、氯代下醇、山梨酸、棚酸等)等結合制 成水性溶液，或者后續通過冷凍干燥、減壓干燥、噴霧干燥等方法固化，使用前再將固化物 溶解于注射用水中獲得分散微粒的分散介質。
[0087] 此外，緩釋注射劑也可通過下述方法獲得:將緩釋微粒分散于植物油(諸如芝麻油 及玉米油)或添加有憐脂(諸如卵憐脂)的植物油中，或者分散于中鏈甘油Ξ醋中，W獲得油 性混懸液。
[0088] 又一方面，本發明還提供了所述的固體分散體、緩釋微粒在植入式緩釋藥物組合 物中的應用。
[0089] 本發明制備的水溶性藥物緩釋藥物組合物，特別是蛋白、核酸W及膚類藥物的緩 釋藥物組合物還可W為棒狀物、片狀物，進一步地，本發明還提供了一種植入式緩釋藥物組 合物的制備方法，包括W下步驟：
[0090] ①制備水溶性藥物與可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物的固體分散體；
[0091] ②將步驟①中制得的固體分散體加熱后采用成型方法成型，冷卻即制得植入式緩 釋藥物組合物。
[0092] 成型方法在此不作限制，專業技術人員所熟知的成型方法皆可使用，如模壓成型、 擠出成型，緩釋組合物可成型為棒狀、片狀。
[0093] 本發明的制備水溶性藥物，特別是蛋白、膚類藥物和核酸的緩釋藥物組合物為棒 狀、片狀的植入劑。
[0094] 進一步地，一種植入式緩釋藥物組合物的制備方法，包括W下步驟：
[0095] ①'根據所述的緩釋微粒的制備方法制得緩釋微粒；
[0096] ②'將步驟①'制得的緩釋微粒通過專業技術人員所熟知的成型方法制得植入式 緩釋藥物組合物。緩釋藥物組合物可成型為棒狀、片狀。
[0097] 本發明獲得的緩釋微粒可用于顆粒劑形式、懸浮劑形式、埋植形式的制劑、注射劑 形式、粘附制劑形式等等，并可W 口服或非胃腸道給藥(肌內注射、皮下注射、經皮給藥、粘 膜給藥(頰內、陰道內、直腸內等））。
[0098] 本發明的植入劑W可生物降解、生物相容性材料為基質，外觀呈細棒狀、圓棒狀或 片狀(圓盤狀），可通過注射或手術方式植入到體內，藥物釋放完全后無需手術取出。該植入 劑的優點是容易獲得高包封率和載藥率，突釋率低，并能夠W穩定的速度持續釋放治療所 需劑量的活性藥物達一個月至數月之久，大大降低醫療成本，提高病患的順應性。
[0099] 本發明的有益效果為:本發明中，緩釋微粒的制備全程常溫或低溫，對于高溫敏感 的藥物，特別是蛋白、核酸及膚類藥物制備聚合物基質的組合物非常有利，相比已公開的技 術，能夠最大程度上在整個工藝過程中保持活性物質的生物活性;同時，所制備的緩釋微粒 具有接近零級的優異緩釋效果，藥物濃度在釋放期間穩定，解決了傳統的要預先制備藥物 微小顆粒的s/o/w工藝得到的微粒前期沒有藥物釋放，而后期藥物釋快速釋放的缺點；再 者，緩釋微粒具有較高的載藥率和藥物包封率。
[0100] 本發明的緩釋微粒在給藥后，蛋白、膚、核酸、生物堿等活性物質能夠在體內持續 輸送一段時間，釋放周期長達幾周或幾個月。
【附圖說明】
[0101] 圖1為實施例6的戈舍瑞林微粒、實施例7的亮丙瑞林微粒、實施例8的曲普瑞林微 粒和實施例12的布舍瑞林微粒給藥的大鼠的血清睪酬濃度-時間曲線圖。
【具體實施方式】
[0102] 為更好的說明本發明的目的、技術方案和優點，下面將結合具體實施例對本發明 作進一步說明。W下實施例中的"微粒"也即"緩釋微粒"；"緩釋植入劑"也即植入式緩釋藥 物組合物。
[0…引實施例1膜高血糖素/PLA微粒的制備 [0104] (I)固體分散體的制備
[01化]將0.99g PLA(分子量25kDa，端醋基)溶于約5.50mL冰乙酸中，然后加入0.0 lg醋酸 膜高血糖素、0.05g木糖醇和0.05g氨氧化鋒，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸 (8Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0106] (II)微粒的制備
[0107] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約5.50g二氯甲燒中獲得內油相，接著將內 油相注入200mL已預先恒溫至約10°C的0.05%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并使用潤輪式 均勻混合器乳化制備S/0/0乳液(潤轉速度約7000rpm，5min)。將S/0/0乳液轉移至密封玻璃 燒瓶中繼續機械攬拌約3小時（500巧m)固化微粒，然后使用離屯、機通過離屯、（約2500巧m， 5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后 離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得微粒中膜高血糖素的含量為 0.93%，微粒粒徑為42-100皿。
[0…引實施例2齊考諾膚/PLGA微粒的制備
[0109] (I)固體分散體的制備
[0110] 將0.97g PLGA(分子量25邸曰，單體比例90/10，端醋基)溶于約5.39mL乙臘中，然后 加入0.0：3g醋酸齊考諾膚、0.05g木糖醇和0.0：3g氯化鋒，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下 的環己燒(6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用環己燒萃取約5次，將沉淀物收集 后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC)，得固體分散體。
[0111] (II)微粒的制備
[0112] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約5.39g氯仿中獲得內油相，接著將內油相 注入290mL已預先恒溫至約8°C的0.1%(w/w)卵憐脂/液體石蠟溶液中，并使用高速均質機 制備5/0/0乳液（轉子速度約5000'9111，5111111)。將5/0/0乳液繼續機械攬拌約3.5小時 (500rpm)固化微粒，然后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正己燒將微 粒洗涂約5次后，再次分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍 干燥，獲得微粒。測得所得微粒中齊考諾膚的含量為2.81%，微粒粒徑為19-91μι。
[01。] 實施例3替可克膚/PLGA微粒的制備
[0114] (I)固體分散體的制備
[0115] 將0.95g化GA(分子量30kDa，單體比例85/15,端簇基）溶于約6.33mL冰乙酸和乙 臘的混合液中，然后加入0.05g醋酸替可克膚，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的正己燒 (6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用正己燒萃取約5次，將沉淀物收集后于真空 干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0116] (II)微粒的制備
[0117] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約6.3：3g四氯乙締中獲得內油相，接著將內 油相注入480mL已預先恒溫至約6°C的0.25%(w/w)卵憐脂/玉米油溶液中，并使用SPG膜乳 化器制備5/0/0乳液（膜孔徑20-504111，循環3次）。將5/0/0乳液繼續機械攬拌約3.5小時 (500rpm)固化微粒，然后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用環己燒將微 粒洗涂約5次后，再次分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍 干燥，獲得微粒。測得所得微粒中替可克膚的含量為4.57%，微粒粒徑為39-80WI1。
[011引實施例4生長抑素/PLGA微粒的制備
[0119] (I)固體分散體的制備
[0120] 將0.90g PLGA(分子量35kDa，單體比例75/25,端簇基)溶于約7.50mLS氣乙酸中， 然后加入0.10g醋酸生長抑素，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的正庚燒(6°C)中，產生白 色沉淀物，收集白色沉淀物并用正庚燒萃取約5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥 24h(l(TC)，得固體分散體。
[0121] (II)微粒的制備
[0122] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約7.50g二氯甲燒與氯仿的混合液中獲得 內油相，接著將內油相注入450mL已預先恒溫至約5°C的0.5%(w/w)卵憐脂/大豆油溶液中， 并使用靜態混合器制備S/0/0乳液(轉速5000巧m，循環3次）。將S/0/0乳液轉移至密封玻璃 燒瓶中繼續機械攬拌約3.5小時（500巧m)固化微粒，然后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm， 5min)收集微粒。用正庚燒和正己燒的混合液將微粒洗涂約5次后，再次分散于超純水巧°C) 中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得微粒中生長抑素 的含量為9.35%，微粒粒徑為39-8化111。
[012引實施例5特利加壓素 /PLGA微粒的制備 [0124] (I)固體分散體的制備
[01巧]將0.85g化GA(分子量40邸曰，單體比例65/35,端簇基）溶于約8.50mL二甲基亞諷 中，然后加入〇.15g醋酸特利加壓素，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸(6°C) 中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真空干 燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0126] (II)微粒的制備
[0127] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約8.50g^氯代苯中獲得內油相，接著將內 油相注入580mL已預先恒溫至約5°C的0.75%(w/w)卵憐脂/藍麻油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（120化pm，3min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約3.5小時巧OOrpm)固化微粒， 然后使用離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用石油酸將微粒洗涂約5次后，再次 分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得 所得微粒中特利加壓素的含量為14.20%，微粒粒徑為20-83皿。
[012引實施例6戈舍瑞林/PLGA微粒的制備
[0129] (I)固體分散體的制備
[0130] 將0.9625g PLGA(分子量35kDa，單體比例75/25，端簇基)溶于約6.42血冰乙酸中， 然后加入0. 〇375g醋酸戈舍瑞林和0.0?木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水 乙酸(6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后 于真空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0131] (II)微粒的制備
[0132] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約6.4?二氯甲燒中獲得內油相，接著將內 油相注入440mL已預先恒溫至約6°C的l%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌制 備S/0/0乳液（100化pm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約3.5小時巧OOrpm)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用無水乙酸將微粒洗涂約5次后，再次 分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得 所得微粒中戈舍瑞林的含量為3.48%，微粒粒徑為27-123^11。
[0。；3] 實施例7亮丙瑞林/PLGA微粒的制備
[0134] (I)固體分散體的制備
[0135] 將0.925g化GA(分子量40kDa，單體比例65/35,端簇基）溶于約7.71mL冰乙酸中， 然后加入0. 〇75g醋酸亮丙瑞林和0.06g木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙 酸(6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于 真空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0136] (II)微粒的制備
[0137] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約7.71g二氯甲燒中獲得內油相，接著將內 油相注入470mL已預先恒溫至約rC的1.25%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（1000巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時（500rpm)固化微粒使 用離，然后屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次 分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得 所得微粒中亮丙瑞林的含量為7.10%，微粒粒徑為21-80μπι。
[0。引實施例S曲普瑞林/PLGA微粒的制備
[0139] (I)固體分散體的制備
[0140] 將0.85g PLGA(分子量45kDa，單體比例50/50，端簇基)溶于約8.50mL冰乙酸中，然 后加入0.15g醋酸曲普瑞林和0.0：3g木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸 (6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0141] (II)微粒的制備
[0142] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約8.50g二氯甲燒中獲得內油相，接著將內 油相注入640mL已預先恒溫至約8°C的1.5%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（130化pm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時巧00巧m)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中曲普瑞林的含量為13.57%，微粒粒徑為23-79μπι。
[014引實施例9亮丙瑞林/PLGA微粒的制備
[0144] (I)固體分散體的制備
[0145] 將0.80g化GA(分子量50kDa，單體比例50/50，端簇基)溶于約10.0 OmL冰乙酸中， 然后加入0.20g醋酸亮丙瑞林，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸(6°C)中，產生 白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干 燥24h(l(TC)，得固體分散體。
[0146] (II)微粒的制備
[0147] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約10.OOg二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入900mL已預先恒溫至約10°C的2%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（120化pm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(eOOrpm)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約4000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中亮丙瑞林的含量為19.11%，微粒粒徑為36-112μπι。
[014引實施例10安替膚/PLGA微粒的制備
[0149] (I)固體分散體的制備
[0150] 將0.82g化GA(分子量55kDa，單體比例50/50,端簇基）溶于約11.71mL冰乙酸中， 然后加入0.1?醋酸安替膚和0.0?木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸 (6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0151] (II)微粒的制備
[0152] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約11.71g二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入700mL已預先恒溫至約10°C的2%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 審恪S/0/0乳液(900巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(400巧m)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約4000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中安替膚的含量為17.30 %，微粒粒徑為20-94μπι。
[015引實施例。那法瑞林/PLGA微粒的制備
[0154] (I)固體分散體的制備
[0155] 將0.80g化GA(分子量65kDa，單體比例65/35,端簇基）溶于約13.33mL冰乙酸中， 然后加入0.20g醋酸那法瑞林、0.05g薦糖和0.0 lg硬脂酸，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌 下的無水乙酸(6°C)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀 物收集后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC)，得固體分散體。
[0156] (II)微粒的制備
[0157] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約13.33g二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入900mL已預先恒溫至約10°C的3%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（1300巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(400rpm)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中那法瑞林的含量為18.95 %，微粒粒徑為27-10Ιμπι。
[015引實施例12布舍瑞林/PLGA微粒的制備
[0159] (I)固體分散體的制備
[0160] 將0.75g化GA(分子量75kDa，單體比例50/50,端簇基)溶于約15.00mL冰乙酸中， 然后加入0.25g醋酸布舍瑞林和0.0?甘露醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙 酸(6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于 真空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0161] (II)微粒的制備
[0162] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約15.OOg二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入1.1L已預先恒溫至約13°C的4%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（1400巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(400rpm)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中那法瑞林的含量為23.56%，微粒粒徑為26-11 Ιμπι。
[016；3] 實施例13阿拉瑞林/PLGA微粒的制備 [0164] (I)固體分散體的制備
[01化]將0.70g化GA(分子量90kDa，單體比例65/35，端簇基）溶于約17.50mL冰乙酸中， 然后加入0.30g醋酸阿拉瑞林、0.05g甘露醇和0.03評EG-400，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬 拌下的無水乙酸(6°C)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉 淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC)，得固體分散體。
[0166] (II)微粒的制備
[0167] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約17.50g二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入1.化已預先恒溫至約l〇°C的5% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（1500巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(400rpm)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中阿拉瑞林的含量為27.00 %，微粒粒徑為19-116μπι。
[016引實施例14奧曲膚/PLGA微粒的制備
[0169] (I)固體分散體的制備
[0170] 將0.65g PLGA(分子量llOkDa，單體比例50/50,端簇基)溶于約21.67mL冰乙酸中， 然后加入〇.35g醋酸奧曲膚和O.Olg木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸 (6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0171] (II)微粒的制備
[0172] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約21.67g二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入1.化已預先恒溫至約8°C的6% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌制 備S/0/0乳液（18(Κ)巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約5小時(700巧m)固化微粒，然后 使用離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分散 于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得 微粒中奧曲膚的含量為32.71 %，微粒粒徑為17-89WI1。
[017；3] 實施例15布雷默浪丹/PLGA微粒的制備 [0174] (I)固體分散體的制備
[01巧]將0.60g PLGA(分子量130kDa，單體比例50/50，端簇基)溶于約30.00血冰乙酸中， 然后加入0.40g醋酸布雷默浪丹和0.005g木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水 乙酸(6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后 于真空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0176] (II)微粒的制備
[0177] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約30.OOg二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入化已預先恒溫至約8°C的8% (w/w)卵憐脂/甘油溶液中，并通過機械攬拌制備S/ 0/0乳液(200化pm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約5小時(700rpm)固化微粒，然后使用 離屯、機通過離屯、（約3000rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分散于超 純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得微粒 中布雷默浪丹的含量為36.52%，微粒粒徑為22-85WI1。
[017引實施例16海沙瑞林/PLGA微粒的制備
[0179] (I)固體分散體的制備
[0180] 將0.50g PLGA(分子量150kDa，單體比例50/50,端簇基)溶于約50.00mL冰乙酸中， 然后加入0.50g醋酸海沙瑞林和0.0 Olg木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙 酸(6Γ)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于 真空干燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0181] (II)微粒的制備
[0182] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約50.OOg二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入2.化已預先恒溫至約8°C的10% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并使用潤輪式均 勻混合器乳化制備S/0/0乳液(潤轉速度約7000巧m，5min)。將S/0/0乳液轉移至密封玻璃燒 瓶中繼續機械攬拌約5小時（800巧m)固化微粒，然后使用離屯、機通過離屯、（約4000巧m， 5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后 離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得微粒中海沙瑞林的含量為44.00 %， 微粒粒徑為26-9祉m。
[018引實施例17 Exendin-4衍生物/PLGA微粒的制備
[0184] (I)固體分散體的制備
[0185] 固體分散體含有W下質量百分含量的成分:水溶性藥物:Exendin-4衍生物20%、 水難溶性聚合物:PLGA79.5 %、助劑:木糖醇0.5 % ;其中所述PLGA的分子量為50kDa，其中丙 交醋和乙交醋的比例為50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[01化](1)制備Exendin-4衍生物：制備lOkDa PEG-NHS醋，然后在PBS緩沖液中與 Exendin-4中28位的天冬酷胺反應，通過離子交換、凝膠色譜分離純化，濃縮并冷凍干燥獲 得Exendin-4衍生物。
[0187] (2)將水難溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中，然后再加入水溶性藥物和助劑至完 全溶解;其中水難溶性聚合物為冰乙酸的質量的6.5%;然后注入無水乙酸(6°C)使得產生 白色沉淀物，收集沉淀物，并用無水乙酸萃取5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C)，得固體分散體。
[018引（II)微粒的制備
[0189] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約12倍的二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入1L已預先恒溫至約5°C的2% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌制備 S/0/0乳液（140化pm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(600巧m)固化微粒，然后使 用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分散于 超純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得微 粒中虹611山11-4衍生物的含量為18.40%，微粒粒徑為27-109皿。
[0190] 實施例18 Exendin-4衍生物/PLGA微粒的制備
[0191] (I)固體分散體的制備
[0192] 固體分散體含有W下質量百分含量的成分:水溶性藥物:Exendin-4衍生物15%、 水難溶性聚合物:PLGA84%、助劑:木糖醇1 % ;其中所述PLGA的分子量為50kDa，其中丙交醋 和乙交醋的比例為50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[0193] (1)制備Exendin-4衍生物:通過固相多膚合成方法制備Exendin-4中28位的天冬 酷胺替換為半脫氨酸的Exendin-4變體，然后在PBS緩沖液中與lOkDa Y型單甲氧基聚乙二 醇-馬來酷亞胺反應，通過離子交換、凝膠色譜分離純化，濃縮并冷凍干燥獲得Exendin-4衍 生物。
[0194] (2)將水難溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中，然后再加入水溶性藥物和助劑至完 全溶解;其中水難溶性聚合物為冰乙酸的質量的6.5%;然后注入無水乙酸(6°C)使得產生 白色沉淀物，收集沉淀物，并用無水乙酸萃取5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C)，得固體分散體。
[0195] (II)微粒的制備
[0196] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約13倍的二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入970血已預先恒溫至約5°C的1.75% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬 拌制備S/0/0乳液（1400rpm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時巧OOrpm)固化微粒， 然后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次 分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得 所得微粒中Exendin-4衍生物的含量為13.25%，微粒粒徑為30-113皿。
[0197] 實施例19 Exendin-4衍生物/PLGA微粒的制備
[0198] (I)固體分散體的制備
[0199] 固體分散體含有W下質量百分含量的成分:水溶性藥物:Exendin-4衍生物20%、 水難溶性聚合物:PLGA78 %、助劑：山梨醇2 % ;其中所述PLGA的分子量為55kDa，其中丙交醋 和乙交醋的比例為50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[0200] (1)制備Exendin-4衍生物:通過固相多膚合成方法制備Exendin-4中20位的精氨 酸替換為半脫氨酸的Exendin-4變體，然后在PBS緩沖液中與化化單甲氧基聚乙二醇-馬來 酷亞胺反應，通過離子交換、凝膠色譜分離純化，濃縮并冷凍干燥獲得Exend in-4衍生物。
[0201] (2)將水難溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中，然后再加入水溶性藥物和助劑至完 全溶解;其中水難溶性聚合物為冰乙酸的質量的6%;然后注入無水乙酸(6°C)使得產生白 色沉淀物，收集沉淀物，并用無水乙酸萃取5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C)，得固體分散體。
[0202] (II)微粒的制備
[0203] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約14倍的二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入1L已預先恒溫至約5°C的1.5%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌制 備S/0/0乳液（14(Κ)巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時(500巧m)固化微粒，然后 使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分散 于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得 微粒中Exendin-4衍生物的含量為18.31 %，微粒粒徑為32-126皿。
[0204] 實施例20阿拉瑞林衍生物/PLGA微粒的制備
[0205] (I)固體分散體的制備
[0206] 固體分散體含有W下質量百分含量的成分:水溶性藥物:阿拉瑞林衍生物16%、水 難溶性聚合物:PLGA81 %、助劑:木糖醇3 % ;其中所述PLGA的分子量為45kDa，其中丙交醋和 乙交醋的比例為50/50，且所述PLGA具有端簇基。
[0207] (1)制備阿拉瑞林衍生物:通過固相多膚合成方法制備阿拉瑞林中4位的絲氨酸替 換為半脫氨酸的阿拉瑞林變體，然后在PBS緩沖液中與20kDa單甲氧基聚乙二醇-馬來酷亞 胺反應，通過離子交換、凝膠色譜分離純化，濃縮并冷凍干燥獲得阿拉瑞林衍生物。
[0208] (2)將水難溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中，然后再加入水溶性藥物和助劑至完 全溶解;其中水難溶性聚合物為冰乙酸的質量的7%;然后注入無水乙酸(6°C)使得產生白 色沉淀物，收集沉淀物，并用無水乙酸萃取5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C)，得固體分散體。
[0209] (II)微粒的制備
[0210] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約11倍的二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入970血已預先恒溫至約5°C的1.25% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬 拌制備S/0/0乳液（13(K)rpm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時巧OOrpm)固化微粒， 然后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次 分散于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得 所得微粒中阿拉瑞林衍生物的含量為13.74 %，微粒粒徑為32-12祉m。
[0211] 實施例21胸腺五膚衍生物/PLGA微粒的制備
[0212] 固體分散體含有W下質量百分含量的成分:水溶性藥物:胸腺五膚衍生物12%、水 難溶性聚合物:PLGA84%、助劑:木糖醇4% ;其中所述PLGA的分子量為40kDa，其中丙交醋和 乙交醋的比例為50/50，且所述PLGA具有端簇基。
[0213] (1)制備胸腺五膚衍生物:制備lOkDa PEG-N服醋，然后在PBS緩沖液中與胸腺五膚 中2位的賴氨酸反應，通過離子交換、凝膠色譜分離純化，濃縮并冷凍干燥獲得胸腺五膚衍 生物。
[0214] (2)將水難溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中，然后再加入水溶性藥物和助劑至完 全溶解;其中水難溶性聚合物為冰乙酸的質量的6.5%;然后注入無水乙酸(6°C)使得產生 白色沉淀物，收集沉淀物，并用無水乙酸萃取5次，將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C)，得固體分散體。
[0215] (II)微粒的制備
[0216] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約10倍的二氯甲燒中獲得內油相，接著將 內油相注入970mL已預先恒溫至約5°C的l%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌 制備S/0/0乳液（140化pm，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約4小時巧OOrpm)固化微粒，然 后使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用正庚燒將微粒洗涂約5次后，再次分 散于超純水(5Γ)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所 得微粒中胸腺五膚衍生物的含量為10.68%，微粒粒徑為35-132WI1。
[0217] 實施例22 Mipomersen/PLGA微粒的制備
[0218] (I)固體分散體的制備
[0219] 將〇.80g化GA(分子量30kDa，單體比例50/50,端簇基）溶于約6.53mL冰乙酸和乙 臘的混合液中，然后加入0.20g Mipomersen sodium和O.Olg木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢 注入攬拌下的無水乙酸(6°C)中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用正己燒萃取約5次， 將沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC)，得固體分散體。
[0220] (II)微粒的制備
[0221] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約6.5：3g四氯乙締中獲得內油相，接著將內 油相注500mL已預先恒溫至約6°C的l%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中，并通過機械攬拌制備 S/0/0乳液（10(Κ)巧m，5min)。將S/0/0乳液繼續機械攬拌約3.5小時(500巧m)固化微粒，然后 使用離屯、機通過離屯、（約3500rpm，5min)收集微粒。用環己燒將微粒洗涂約5次后，再次分散 于超純水(5°C)中洗涂約2次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得 微粒中Mipomersen的含量為18.10%，微粒粒徑為32-109μπι。
[0。。 實施例23白介素 /PLGA微粒的制備
[0223] (I)固體分散體的制備
[0224] 將0.82g PLGA(分子量35kDa，單體比例50/50,端簇基)溶于約6.12mL冰乙酸中，然 后加入0.1?白介素和0.02g木糖醇，滿旋下溶解，然后慢慢注入攬拌下的無水乙酸(6°C) 中，產生白色沉淀物，收集白色沉淀物并用無水乙酸萃取約5次，將沉淀物收集后于真空干 燥箱中干燥24h (1 (TC)，得固體分散體。
[0225] (II)微粒的制備
[0226] 將步驟I所得的固體分散體分均勻散于約6.1?二氯甲燒與氯仿的混合液中獲得 內油相，接著將內油相注入500mL已預先恒溫至約5°C的0.5%(w/w)卵憐脂/大豆油溶液中， 并通過機械攬拌制備S/0/0乳液(100化pm，5min)。將S/0/0乳液轉移至密封玻璃燒瓶中繼續 機械攬拌約4小時（500巧m)固化微粒，然后使用離屯、機通過離屯、（約3500巧m，5min)收集微 粒。用正庚燒和正己燒的混合液將微粒洗涂約5次后，再次分散于超純水(5Γ)中洗涂約2 次，然后離屯、收集，W冷凍干燥機冷凍干燥，獲得微粒。測得所得微粒中白介素的含量為 16.36%，微粒粒徑為31-114皿。
[0。7] 實施例24亮丙瑞林/PLGA緩釋植入劑的制備
[0228]將實施例9的步驟I制備的干燥的固體混合物進料到熱烙擠出機中，熱烙擠出成直 徑約1mm的條狀物，冷卻后切割得到長度約為5mm的亮丙瑞林緩釋植入劑。測得所得植入劑 中亮丙瑞林的含量為19.32%。
[0。9] 實施例25亮丙瑞林/PLGA緩釋植入劑的制備
[0230]將實施例9的步驟II中所得微粒填入的模具（內腔為圓柱狀，圓底直徑為 1mm，深度約為10mm)中，升溫至約43 °C后，模壓成型，得到柱狀（lmm*4.98mm)亮丙瑞林緩釋 植入劑。測得所得植入劑中亮丙瑞林的含量為19.05%。
[0231 ]上述實施例中微粒或植入劑的載藥率和藥物包封率分析方法為：取5mg微粒或植 入劑，溶于50mL乙臘(ACN)中，再加入0.1 %TFA 50化L，充分混合后，離屯、取上清液，用高效 液相色譜分析其中的藥物濃度。微粒(或植入劑）中包封的藥物質量與投藥量的比值即為藥 物的包封率，微粒(或植入劑）中包封的藥物質量與微粒質量的比值即為藥物的載藥率。所 有的實驗均重復3次W上。
[0232]上述實施例制備的微粒的粒徑分析方法為:將約lOmg微粒分散在液體石蠟中，超 聲約30s分散，使用Beckman Coulter的激光粒度分析儀進行測量。
[OZ3；3] 實施例26微粒及植入劑的突釋和體外釋放曲線的測定
[0234]將上述實施例制備的緩釋微粒及植入劑進行突釋和體外釋放曲線的測定，測定方 法是：精密稱取含藥微粒或植入劑20mg置15mL離屯、管中，WpH為7.4的憐酸緩沖液（含 0.02%疊氮化鋼作為抑菌劑)為釋放介質，置于恒溫氣浴搖床中，在振蕩速度l(K)rpm、溫度 37°C±0.5°C條件下進行微粒或植入劑的體外釋放度測定。分別在1天、2天、7天、14天、21 天、28天、40天、50天和60天取出全部釋放介質并補充等量的新釋放介質，高效液相色譜法 測定藥物釋放量，測定方法為：
[02巧]液相色譜儀:安捷倫1260;
[0236] 色譜條件：色譜柱：Phenomenex Gemini NX 加 C18 4.6X 150mm;
[0237] 流動相乙胺溶液-乙臘-丙醇；
[023引流速：lmL/min;
[0239] 檢測波長:280nm。
[0240] 測試結果如表1所示。
[0241] 表1緩釋微粒及植入劑體外釋放累計釋放度結果
[0242]
[0244]由表1的體外釋放結果可W看出，采用本發明所述固體分散體制備得到的緩釋微 粒及所制得的植入劑，沒有突釋現象或明顯的遲釋現象，整個釋放趨勢接近零級釋放。其 中，有的樣品體外釋放周期長達40-50天，有的樣品體外釋放周期長達50-60天，有的樣品體 外釋放周期超過60天，具有優異的緩釋效果。
[0245] 實施例27微粒通針性實驗
[0246] 將約20mg微粒樣品混懸于2mL稀釋劑(3%簇甲基纖維素、0.9%化C1)中，然后吸入 注射器，分別通過24-30G的注射針頭注入市售的化g重的豬后腿(肌肉）中。每次注射進行20 秒或W下，觀察沒有阻塞W及推針順楊性，結果如表2所示。
[0247] 表2微粒通針性實驗結果 [024引
[0249 ]注:++推針順楊性很好，+推針順楊性一般，-推針有阻滯感，--堵針。
[0250] 表2的通針性結果表明，本發明制備的不同粒徑的微粒懸浮液均可W通過30號針 頭吸入注射器內并將注射器中的內含物完全注射到豬肉中的能力，沒有出現阻滯或堵針的 現象，說明本發明的微粒可W通過皮下或肌肉注射的方式進行給藥。
[0251] 實施例28有機溶劑殘留量測定試驗
[0252] 本發明實施例1-23制備的固體分散體和緩釋微粒中有機溶劑A、有機溶劑B、有機 溶劑C和有機溶劑D的殘留量測定，測定方法為眾所周知的測定方法。測定結果如表3所示。
[0253] 表3有機溶劑殘留量測定結果
[ο 巧 4]
[02W]注:-表示沒有檢測到或含量低于檢測限。
[0256]由表3的有機溶劑殘留量結果可W看出，本發明制備的固體分散體和緩釋微粒中， 有機溶劑的殘留量很低，或者沒有檢測到，或殘留量低于可檢測范圍，給藥后對病人無因有 機溶劑產生的副作用，也有利于保持微粒的穩定性，延長貨架期。
[0巧7] 實施例29動物試驗
[0巧引選取健康雄性SD大鼠40只，體重250 ±20g，隨機每組8只分成給藥組(4組）和空白 組（1組），給藥組大鼠分別皮下注射實施例6的戈舍瑞林微粒、實施例7的亮丙瑞林微粒、實 施例8的曲普瑞林微粒和實施例12的布舍瑞林微粒，微粒用含有3%簇甲基纖維素、0.9% 化C1的稀釋劑混懸。給藥組每只大鼠注射藥物劑量為2(K)yg/kg，空白組皮下注射同體積的 生理鹽水。在給藥的第 0d、0.5d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d、14d、21d、28d、35d、42d、49d、56d、 63d、70d的同一時間從尾靜脈取血，采用放射免疫分析法測定血清中睪酬濃度，然后制作血 清睪酬濃度-時間的曲線圖，結果如圖1所示。
[0259]由圖1曲線圖可知，本發明的制備的實施例6的戈舍瑞林微粒、實施例7的亮丙瑞林 微粒、實施例8的曲普瑞林微粒和實施例12的布舍瑞林微粒在給藥后的70天內能夠很好地 控制血清睪酬濃度，且在給藥后的第4-63天內的血清睪酬濃度小于5ng/mL，7-50天內的血 清睪酬濃度小于約4ng/mL，明顯比空白組低，說明本發明的戈舍瑞林微粒、亮丙瑞林微粒、 曲普瑞林微粒和布舍瑞林微粒給藥后能夠長時間釋放其中的活性藥物，并達到理想的治療 效果，能夠降低給藥頻率，有利于提高病人的依從性。
[0260]最后所應當說明的是，W上實施例僅用W說明本發明的技術方案而非對本發明保 護范圍的限制，盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當 理解，可W對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質 和范圍。
【主權項】
1. 一種緩釋微粒的制備方法，其特征在于:包括以下步驟： 1) 制備水溶性藥物與可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物的固體分散體； 2) 將步驟1)制備的固體分散體溶于有機溶劑C中，形成固體分散體乳液，所述有機溶劑 C為不能溶解所述水溶性藥物但可以溶解所述水難溶性聚合物、沸點低于水且不溶于或難 溶于水的有機溶劑； 3) 將步驟2)得到的固體分散體乳液注入含有表面活性劑的油溶液中形成均勻的乳液； 4) 通過溶劑揮發或溶劑提取使乳液中的微粒固化，收集微粒，用有機溶劑D洗滌數次， 再以超純水洗滌數次，以除去附著于微粒表面的表面活性劑，然后進行干燥，獲得所述緩釋 微粒;其中，所述有機溶劑D不能溶解水溶性藥物和水難溶性聚合物，其能與所述油溶液混 溶，同時對所述表面活性劑有良好的溶解性。2. 根據權利要求1所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述水溶性藥物為蛋白、 核酸和具有不多于30個氨基酸殘基的肽及其衍生物、類似物中的至少一種。3. 根據權利要求1所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述步驟1)通過以下步驟 實施： 11) 將可生物降解和生物相容的水難溶性聚合物與水溶性藥物完全溶解于有機溶劑A 中，形成藥物和聚合物的混合溶液； 12) 將所述混合溶液注入有機溶劑B中或將有機溶液B注入所述混合溶液中，產生均勻 的細微沉淀物，收集沉淀物，并用有機溶劑B洗滌數次，去除有機溶劑B，獲得水溶性藥物和 水難溶性聚合物的固體分散體;其中，有機溶劑B不能溶解所述水難溶性聚合物和所述水溶 性藥物。4. 根據權利要求3所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述有機溶劑A選自冰醋 酸、乙腈、三氟乙酸、二甲基亞砜中的至少一種； 所述有機溶劑B選自無水乙醚、己烷、正庚烷中的至少一種。5. 根據權利要求1所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述固體分散體中，水溶 性藥物與水難溶性聚合物的質量比為1:1~1:99。6. 根據權利要求1所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述有機溶劑C選自脂肪 烴、鹵代烴、脂肪酸酯、芳香烴、醚中的至少一種； 所述有機溶劑D選自無水乙醚、環己烷、正己烷、正庚烷、石油醚中的至少一種。7. 根據權利要求1所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述步驟1)中的水難溶性 聚合物為聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯-乙交酯共聚物及它們與聚己內酯或聚乙二醇的共聚 物、聚己內酯及其與聚乙二醇的共聚物、聚羥基丁酸、聚羥基戊酸、聚對二氧環己酮、殼聚 糖、海藻酸及其鹽、聚氰基丙烯酸酯、纖維蛋白、聚酸酐、聚原酸酯、聚酰胺、聚磷腈、聚磷酸 酯、以及它們的共聚物和/或混合物中的至少一種。8. 根據權利要求1所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述方法還包括加入助劑 的步驟，助劑在所述步驟1)制備固體分散體的過程中加入，或在所述步驟2)制備固體分散 體乳液時加入;所述助劑為所述水溶性藥物與所述水難溶性聚合物的質量之和的0.01-10%〇9. 根據權利要求8所述的緩釋微粒的制備方法，其特征在于:所述助劑為氨基酸、抗氧 化劑、緩沖劑、糖類、脂肪酸、醇類中的至少一種。10.根據權利要求1~9中任一項所述的緩釋微粒的制備方法制得的緩釋微粒。
【文檔編號】A61K9/16GK105878190SQ201610268762
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月26日
【發明人】劉鋒, 賴樹挺, 鄭陽, 曹付春, 連遠發
【申請人】廣州帝奇醫藥技術有限公司