一種四烯雌酮納米乳液及其制備方法

一種四烯雌酮納米乳液及其制備方法
【專利摘要】本發明提供了一種四烯雌酮納米乳液及其制備方法，所述乳液由包括質量份數分別為四烯雌酮0.1?1份、表面活性劑15?35份、助表面活性劑1.5?20份、油2?30份、注射用水26?45份的原料制備而成，所述四烯雌酮納米乳液熱力學穩定性好，在加熱至80℃后放置充分振蕩完全可以恢復穩定的乳劑狀態，貯存穩定性好，久置不分層，既可口服飲水給藥又可拌料給藥，口服給藥納米乳基質能很好地保護四烯雌酮不受到胃酸的破壞且能夠克服肝臟首過效應；其制備方法簡單，適合規模化工業生產的需要。
【專利說明】
-種四稀雌酬納米乳液及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明設及一種四締雌酬藥物制劑及其制備方法，尤其是一種四締雌酬納米乳液 及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 四締雌酬(又稱締丙孕素)是一種孕激素，結構上與獸用藥類固醇群勃龍有關，是 一種合成的化ienic C21醬類孕激素，屬于19-去甲睪丸素類。它是具有口服活性的促孕激 素。與所有類固醇一樣，四締雌酬通過自身脂溶性可W滲透入祀細胞中然后與特定受體結 合來發揮作用，其類似于天然孕酬的作用模式來抑制促性腺激素的釋放，可作為家畜同期 發情的藥物。
[0003] 在獸醫領域，四締雌酬用來是母馬和母豬同步發情。四締雌酬可使母豬同期發情， 還能增加仔豬的初生體重、仔豬數量，減少木乃伊胎的產生，提高母豬的分娩率，及防止母 豬早產、斷奶后背腰過厚，但不能提高早期斷奶母豬的繁殖率。研究表明，通過給后備母豬 飼喂適量的四締雌酬可使大量的后備母豬達到同期發情。同期發情可使母豬分娩時間集 中，便于母豬集中斷奶、全進全出、進入下一個繁殖周期，有效地提高母豬的繁殖率，減少病 原的傳播，利于規模化豬場實行嚴格的防疫制度和保證生物安全體系。本試驗研究了四締 雌酬對后備母豬同期發情影響，W確定后備母豬的同期發情程度、發情高峰期。
[0004] 目前在我國獸醫臨床上尚無四締雌酬制劑，歐洲EMEA和美國FDA已批準了四締雌 酬溶液(油溶液)用于誘導母馬和母豬的同步發情。由于四締雌酬為類固醇類物質且水溶性 很差(微溶于水），其在植物油中有較大溶解度。但傳統的油溶液制劑并不能改善類固醇藥 物四締雌酬口服給藥后在酸性（胃酸)條件下受到破壞、穩定性較差等缺陷，進而造成其生 物利用度低、用藥量加大、提高用藥成本等，大大限制其在獸醫臨床的應用。

【發明內容】

[0005] 本發明所要解決的技術問題在于提供一種穩定性好的四締雌酬納米乳液。
[0006] 本發明所要解決的另一技術問題在于提供上述四締雌酬納米乳液的制備方法。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：
[000引一種四締雌酬納米乳液，由包括如下質量份數的原料制成： 四締雌醒： 0.1-1份 表面活性劑： 15-35份
[0009] 助表面活性劑：1.5-20份 嫩； 2-30份 注射用水; 26-似份。
[0010] 其中，所述表面活性劑是泊洛沙姆、司盤-80、單硬脂酸甘油醋或聚氧乙締酸氨化 藍麻油(畑50)中的任一種或任兩種的混合物;所述助表面活性劑是陽G-400、陽G-600、1,2- 丙二醇、丙Ξ醇或乙二醇中的任一種或任兩種的混合物;所述油為肉豆違異丙醋、橄攬油、 油酸乙醋、花生油、霍霍己油或棉巧油中的任一種或任兩種的混合物。
[0011]優選地，所述的四締雌酬納米乳液，由包括如下質量份數的原料制成： 四婦雌醒： 0.1-1份 表面活性劑： 15-30份
[001^ 助表面祗性劑：10-20份 紳;： 20-30 份 注射用氷； 32-45份。
[001引更優選的，上述四締雌酬納米乳液，由下列質量份數的原料組成： 四締雌酬： 0.4份 表面活性劑；20份
[0014] 助表面活性劑：11份 油； 2S份 注射用水： 43.6份。
[001引優選地，上述四締雌酬納米乳液，所述表面活性劑是泊洛沙姆、單硬脂酸甘油醋或 聚氧乙締酸氨化藍麻油(RH-40);所述助表面活性劑是乙二醇、PEG-600或1,2-丙二醇;所述 油為油酸乙醋、花生油或棉巧油。
[0016] 優選地，上述四締雌酬納米乳液，所述表面活性劑是泊洛沙姆;所述助表面活性劑 是乙二醇;所述油為花生油。
[0017] 優選地，上述四締雌酬納米乳液，是由包括如下步驟的方法制備得到的：
[0018] (1)按質量份數分別稱取四締雌酬、表面活性劑、助表面活性劑、油、注射用水，備 用；
[0019] (2)將配方量的四締雌酬作為原料藥先溶于助表面活性劑中，并加入配方量的表 面活性劑和油，混勻備用；
[0020] (3)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得四締雌酬納米乳液。
[0021] 優選地，上述四締雌酬納米乳液，所述乳液為納米乳藥液，其乳滴粒徑為10-100納 米。
[0022] 優選地，上述四締雌酬納米乳液，所述乳液為納米乳藥液，其乳滴粒徑為40-60納 米。
[0023] 優選地，上述四締雌酬納米乳液，所述納米乳藥物加雙蒸水大量稀釋制成不同濃 度的注射液或口服液。
[0024] 本發明還提供了上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[0025] (1)按質量份數分別稱取四締雌酬、表面活性劑、助表面活性劑、油、注射用水，備 用；
[0026] (2)將配方量的四締雌酬作為原料藥先溶于助表面活性劑中，并加入配方量的表 面活性劑和油，混勻備用；
[0027] (3)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得四締雌酬納米乳液。
[0028] 優選的，上述四締雌酬納米乳液的制備方法，所得四締雌酬納米乳液為水包油型 (0/W)乳劑，粒徑在10-1 OOnm。
[0029] 優選的，上述四締雌酬納米乳液的制備方法，所得四締雌酬納米乳液加雙蒸水大 量稀釋成不同濃度的口服液。
[0030] 本發明的有益效果是：
[0031 ]本發明四締雌酬納米乳液，熱力學穩定性好，在加熱至8(TC后放置充分振蕩完全 可W恢復穩定的乳劑狀態，膽存穩定性好，久置不分層，甚至在離屯、加速試驗中，12000rpm 離屯、30min也不會分層;防腐性能良好，保質期時間長，便于保存;所述四締雌酬納米乳液， 既可口服飲水給藥又可拌料給藥，尤其口服給藥納米乳基質能很好地保護四締雌酬不受到 胃酸的破壞且能夠克服肝臟首過效應;具有一定的緩釋作用，可減少給藥次數，給藥方便， 能誘導母畜(母豬)的同期發情，大大提高勞動效率、降低人工和管理成本。
[0032]所述四締雌酬納米乳液經過反向HPLC含量檢測，重現性好，含量穩定，主藥四締雌 酬無變性、分解等，含量滿足臨床用藥需求;所述四締雌酬納米乳液可W過濾滅菌，制備工 藝簡單，便于操作，且所需原料價格適中，能夠被廣大消費者所接受。
【附圖說明】
[00削圖1是0.4%四締雌酬納米乳透射電鏡照片；
[0034] 圖2是0.4%四締雌酬納米乳粒徑分析圖。
【具體實施方式】
[0035] 下面結合具體實施例對本發明所述技術方案作進一步的說明。
[0036] 實施例1
[0037] -種四締雌酬納米乳液，由下列原料制備而成： 四締雌醒原料藥 2疫 花生油 250g 泊洛沙姆 200g
[00；3 引 己·.醇 llOg 注射用氷 43雖 總苗 lOOOg
[0039] 上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[0040] (1)在室溫條件下，按照配方比例稱量四締雌酬原料藥先溶于乙二醇中，并加入配 方量的泊洛沙姆和花生油，混勻備用；
[0041] (2)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入注射用水到體系中， 一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得粒徑10-100納米、外觀澄明均一的四締雌 酬納米乳液。
[0042] 實施例2
[0043] -種四締雌酬納米乳液，由下列原料組成： 四締雌酬原料藥 4g 油酸乙醋 220g 單硬脂酸甘油醋 i60g
[0044] PEG-600 180g 注射用水 436g 總 Μ: lOOOg
[0045] 上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[0046] (1)在室溫條件下，按照配方比例稱量四締雌酬原料藥先溶于陽G-600中，并加入 配方量的單硬脂酸甘油醋和油酸乙醋，混勻備用；
[0047] (2)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得粒徑10-100納米、外觀澄明均一的四 締雌酬納米乳液。
[004引實施例3
[0049] -種四締雌酬納米乳液，由下列原料組成： 四婦帷醒原料藥 踞 棉巧油 280g 聚氧乙嫌醒氨化蔑麻油CRH-30) 240g
[(Κ)加 ] - 1，2 丙二醇 130g 注射巧化 342g 息量 lOOOg
[0051] 上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[0052] (1)在室溫條件下，按照配方比例稱量四締雌酬原料藥先溶于1，2丙二醇中，并加 入配方量的聚氧乙締酸氨化藍麻油(RH-50)和棉巧油，混勻備用；
[0053] (2)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得粒徑10-100納米、外觀澄明均一的四 締雌酬納米乳液。
[0054] 實施例4
[0055] -種四締雌酬納米乳液，由下列原料組成： 四締雌酬原料戴 Ig 橄攬油 茲雄 司盤-80 260g
[0化6] 丙S醇 160g 注射用水 354g 總量' lOOOg
[0057] 上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[005引（1)在室溫條件下，按照配方比例稱量四締雌酬原料藥先溶于丙Ξ醇中，并加入配 方量的司盤-80和橄攬油，混勻備用；
[0059] (2)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得粒徑10-100納米、外觀澄明均一的四 締雌酬納米乳液。
[0060] 實施例5
[0061] -種四締雌酬納米乳液，由下列原料組成： 四婦雌酬原料藥 i〇_g 霍霍巴油 T15運 泊洛沙姆 170g
[0062] PEG-400 200g 注射用水 345g 總量 1㈱Og
[0063] 上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[0064] (1)在室溫條件下，按照配方比例稱量四締雌酬原料藥先溶于陽G-400中，并加入 配方量的泊洛沙姆和霍霍己油，混勻備用；
[0065] (2)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得粒徑10-100納米、外觀澄明均一的四 締雌酬納米乳液。
[0066] 實施例6
[0067] -種四締雌酬納米乳液，由下列原料組成： 四締雌醒原料藥 4g 花生油 250g 泊洛妙'姆 200g
[006引 己·.配 llOg 注射用水 4：36g 總量 ：1000g
[0069] 上述四締雌酬納米乳液的制備方法，包括如下步驟：
[0070] (1)在室溫條件下，按照配方比例稱量四締雌酬原料藥先溶于乙二醇中，并加入配 方量的泊洛沙姆和花生油，混勻備用；
[0071] (2)將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系 中，一邊不斷攬拌，直至形成澄清透明的液體，即制得粒徑10-100納米、外觀澄明均一的四 締雌酬納米乳液。
[0072] 將實施例1-6之一所述各組分用量按照相同比例增加或減少，所得各組分的用量 關系均屬于本發明的保護范圍。
[0073] 實施例1-6制備的四締雌酬納米乳液在加熱至80°C后放置充分振蕩完全可W恢復 穩定的乳劑狀態，膽存穩定性好，久置不分層，在離屯、加速試驗中，1200化pm離屯、30min也不 會分層。
[0074] 粒度分析結果
[0075] 本發明經透射電鏡(JEM 1200EX)及激光粒度分析儀檢測，實施例2所述0.4%四締 雌酬納米乳外觀為淡黃色澄清透明液體，乳滴粒徑分布在10-100納米之間，平均粒徑為40 納米。檢測相關結果見圖1(0.4%四締雌酬納米乳透射電鏡照片)和圖2(0.4%四締雌酬納 米乳粒徑分析圖）。
[0076] 含量測定
[0077] 將制備好的四締雌酬納米乳采用高效液相色譜法進行含量測定，日本島津LC- lOADvp高效液相色譜儀，SPD-lOAvp二極管陣列檢測器，Class-vp工作站;色譜柱:Eel ipse XDB-C18 (150mm X 4.6mm，5μπι);流動相：乙臘：水（60 :40);流速：1. OmL/min;檢測波長： 240nm;進樣量:2化L。理論塔板數按四締雌酬計算不低于2000。
[0078] 對照品溶液的制備取四締雌酬對照品精密稱定，加流動相制成每mL含lOmg的溶 液，作為對照品儲備液。精密吸取上述儲備液適量加流動相制成每My#四締雌酬0.5mg的溶 液，作為對照品溶液。
[0079] 供試品溶液制備精密稱取實施例2所述0.4%四締雌酬納米乳適量，置lOOmL量瓶 中，加流動相適量，超聲使溶解；取適量加入流動相稀釋至0.5mg/ml，搖勻，用微孔濾膜 (0.45皿)濾過，即得，作為供試品溶液。
[0080] 標準曲線和線性范圍精密量取對照品儲備液，加流動相分別制成每mL含四締雌酬 0.10、0.25、0.5、0.75、1.00和2. OOmg的標準溶液，經0.45皿濾膜過濾后，依次進樣，測定色 譜峰面積，W峰面積(Y)對其質量濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程。
[0081 ] ￥ = 49232.21X-3.77，r = 0.9999。結果表明，四締雌酬濃度為0.10-2. OOmg/mL時 有良好的線性關系。
[0082] 含量測定精密量取已知含量的四締雌酬納米乳2.5mL，置于100ml的容量瓶中，用 流動相稀釋至刻度，超聲使溶解;精密量取5ml上述溶液置于100ml的容量瓶中，用流動相稀 釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45皿)濾過，進樣20化，記錄色譜圖，計算峰面積，由標準曲 線計算藥物含量，結果，其含量為標示量的97-103%，RSD小于1.5%。
[0083] 安全性評價采用豚鼠和家兔分別進行四締雌酬納米乳的全身用藥過敏性、肌肉局 部刺激性及家兔紅細胞體外溶血性試驗研究，用改良寇氏法對小鼠的LDso進行了測定。結果 顯示本品臨床給藥劑量對豚鼠無全身過敏性、對家兔肌肉注射給藥無明顯局部刺激性、對 家兔紅細胞無體外溶血性，表明四締雌酬納米乳劑的各項安全性均良好，為實際應用提供 了有力的證據。
[0084] 應用試驗例：
[0085] 四締雌酬納米乳液對斷奶初產母豬生產性能的療效觀察
[0086] 1藥物實施例2所述0.4%四締雌酬納米乳液和實施例6所述0.4%四締雌酬納米乳 液。
[0087] 2試驗動物
[008引選自2013年5月至2015年10月期間在河北、山東兩省多個大型養豬場中的斷奶初 產母豬，合計985頭。母豬場常見的情況是母豬第二胎繁殖性能差，運種情況通常是由于在 第一次斷奶時體況差等各種因素造成。
[0089] 3試驗方法
[0090] 將某一養豬場階段時間內（約7天左右)收集到的斷奶初產母豬隨機分為Ξ組，一 組按照常規飼養管理方式進行，作為對照組;試驗組1在出產母豬斷奶后(第0天)開始計算， 連續14天每天口服實施例2制備的0.4%四締雌酬納米乳液5ml;試驗組2在出產母豬斷奶后 (第0天)開始計算，連續14天每天口服實施例6制備的0.4%四締雌酬納米乳液5ml。試驗期 間，所有試驗母豬自由采食和飲水。試驗結束后W分娩率、總產子數、斷奶到第一次配種的 飼料消耗量、非生產天數等為研究考察指標，用SPSS軟件分析結果。
[0091] 4試驗結果見表1
[0092] 表 1
[0093]
[0094]
[0095] 綜上，本發明所述四締雌酬納米乳液是一種溶解性好、穩定性高、生物利用度高、 具有緩釋作用、且不受胃酸破壞的四締雌酬制劑，解決了現有技術水平下四締雌酬微溶于 水、穩定性差、易受胃酸破壞的技術難題，為獸醫臨床提供了新型的用于誘導家畜同期發情 的藥物制劑，起到了提高母豬分娩率、產子數，縮短非生產天數等作用。
[0096]上述參照實施例對該一種四締雌酬納米乳液及其制備方法進行的詳細描述，是說 明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發明總 體構思下的變化和修改，應屬本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種四烯雌酮納米乳液，其特征在于：由包括如下質量份數的原料制成： 四烯雌酮： 0.1-1份 表面活性劑: 15-35份 助表面活性劑：1.5-20份 油： 2-30份 注射用水： 26-45份 其中，所述表面活性劑是泊洛沙姆、司盤-80、單硬脂酸甘油酯或聚氧乙烯醚氫化蓖麻 油(RH50)中的任一種或任兩種的混合物;所述助表面活性劑是PEG-400、PEG-600、1，2-丙二 醇、丙三醇或乙二醇中的任一種或任兩種的混合物;所述油為肉豆蔻異丙酯、橄欖油、油酸 乙酯、花生油、霍霍巴油或棉籽油中的任一種或任兩種的混合物。2. 根據權利要求1所述的一種四烯雌酮納米乳液，其特征在于：所述原料的質量份數 為： 四烯雌酮0.1-1份 表面活性劑： 15-30份 助表面活性劑：10-20份 油： 20-30份 注射用水: 32-45份。3. 根據權利要求2所述的一種四烯雌酮納米乳液，其特征在于：所述原料的質量份數 為： 四烯雌酮： 0.4份 表面活性劑： 20份 助表面活性劑：11份 油： 25份 注射用水： 43,6汾。4. 根據權利要求1所述的四烯雌酮納米乳液，其特征在于：所述表面活性劑是泊洛沙 姆、單硬脂酸甘油酯或聚氧乙烯醚氫化蓖麻油（RH50);所述助表面活性劑是乙二醇、PEG-600或 1 ， 2-丙二醇; 所述油為油酸乙酯 、花生油或棉籽油。5. 根據權利要求4所述的四烯雌酮納米乳液，其特征在于：所述表面活性劑是泊洛沙 姆;所述助表面活性劑是乙二醇;所述油為花生油。6. 根據權利要求1-5任一項所述的四烯雌酮納米乳液，其特征在于:是由包括如下步驟 的方法制備得到的： ⑴按質量份數分別稱取四烯雌酮、表面活性劑、助表面活性劑、油、注射用水，備用； (2) 將配方量的四烯雌酮作為原料藥先溶于助表面活性劑中，并加入配方量的表面活 性劑和油，混勻備用； (3) 將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系中， 一邊不斷攪拌，直至形成澄清透明的液體，即制得四烯雌酮納米乳液。7. 根據權利要求1-6任一項所述的四烯雌酮納米乳液，其特征在于:所述乳液為納米乳 藥液，其乳滴粒徑為10-100納米。8. 根據權利要求7所述的四烯雌酮納米乳液，其特征在于:所述納米乳藥液的乳滴粒徑 為40-60納米。9. 權利要求1-8任一項所述的四烯雌酮納米乳液的制備方法，其特征在于:包括如下步 驟： ⑴按質量份數分別稱取四烯雌酮、表面活性劑、助表面活性劑、油、注射用水，備用； (2) 將配方量的四烯雌酮作為原料藥先溶于助表面活性劑中，并加入配方量的表面活 性劑和油，混勻備用； (3) 將配方量的注射用水作為水相，在室溫下，一邊緩慢加入上述注射用水到體系中， 一邊不斷攪拌，直至形成澄清透明的液體，即制得四烯雌酮納米乳液。10. 根據權利要求9所述的四烯雌酮納米乳液的制備方法，其特征在于:所得四烯雌酮 納米乳液加雙蒸水大量稀釋成不同濃度的口服液。
【文檔編號】A61K31/567GK105878184SQ201610269070
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月26日
【發明人】焦曉軍, 龔偉勤, 韓貞珍, 程雪嬌, 王建, 朱士江, 季昆, 王勇, 王猛, 余貴菊, 甄盼盼, 楊雪, 崔志剛, 張立會, 姜淋潔, 于小婷, 李麗琴, 王宇鵬, 李玲, 范慶增
【申請人】天津市中升挑戰生物科技有限公司