一種萜類復合酯的用圖

一種萜類復合酯的用圖
【專利摘要】一種萜類復合酯的用途，涉及萜類復合酯。所述萜類復合酯為Feroline。所述Feroline在制備預防或治療肝損傷、治療炎癥、治療肝炎、治療腫瘤、治療急性單核細胞白血病、用于抗氧化與防衰老、治療糖尿病、治療肥胖癥、治療代謝相關疾病等藥物的用途。所述Feroline可作為活性成份與其它藥物組成Feroline藥物組合物，所述其它藥物包括與制藥中可以接受的輔助和/或添加成份混合后，按常規的制藥方法和工藝要求。所述Feroline或Feroline藥物組合物可制成口服型制劑或注射型制劑藥物。所述口服型制劑可為片劑、丸劑、膠囊、沖劑或糖漿等；所述注射型制劑可為注射液或凍干粉針劑型等。
【專利說明】
一種萜類復合酯的用途
技術領域
[0001 ] 本發明涉及萜類復合酯，尤其是涉及一種萜類復合酯的用途。
【背景技術】
[0002] Feroline (非洛林），CAS號為39380-12-6,分子式C22H3Q04,是從傘形科阿魏屬植 物（Ferula genus)中提取出來的一種萜類復合酯，具有雌激素活性，迄今為止未有任何報 道其藥用功能，結構式如下：
[0003]
[0004] 糖尿病、肥胖癥等代謝性疾病、肝損傷、炎癥、腫瘤等疾病嚴重危害人類的健康和 生命，抗氧化和防衰老也是人們非常關切的問題，發現治療這些疾病的新藥將具有重要的 社會價值和巨大的經濟價值。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的在于提供一種萜類復合酯的用途。
[0006] 所述砲類復合酯為Feroline (非洛林），CAS號為39380-12-6,分子式C22H3Q04,結 構式如下：
[0007]
[0008] 1、所述Feroline在制備預防或治療肝損傷的藥物中的用途。
[0009] 所述治療肝損傷的藥物是對乙酰氨基酚為主要活性成分的藥物。
[0010] 所述肝損傷包括但不限于由于服用有肝損傷副作用的藥物引起的肝損傷、由于酒 精引起的急性肝損傷、酒精性脂肪肝引起的肝損傷、免疫性或化學性因素引起的肝損傷、病 毒感染引起的肝損傷等。
[0011] 2、所述Feroline在制備保護肝臟功能藥物中的用途。
[0012] 3、所述Feroline在制備保護肝臟功能保健品中的用途。
[0013] 4、所述Feroline在制備治療炎癥的藥物中的用途。
[0014] 所述治療炎癥的藥物是對乙酰氨基酚為主要活性成分的藥物。
[0015] 所述炎癥包括但不限于由于服用有炎癥反應副作用的藥物引起的炎癥。
[0016] 5、所述Feroline在制備治療肝炎的用途。
[0017] 所述肝炎包括但不限于保護肝臟抵抗由于酒精引起的急性肝炎、修復酒精性脂肪 肝引起的肝炎、修復非酒精性脂肪肝引起的肝炎、病毒性肝炎。
[0018] 6、所述Feroline在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
[0019] 所述腫瘤包括但不限于宮頸癌、直結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌等。
[0020] 7、所述Feroline在制備治療急性單核細胞白血病的藥物中的用途。
[0021] 8、所述Feroline在制備用于抗氧化、防衰老的藥物中的用途。
[0022] 9、所述Feroline在制備用于抗氧化、防衰老的保健品中的用途。
[0023] 10、所述Feroline在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
[0024] 11、所述Feroline在制備治療肥胖癥的藥物中的用途。
[0025] 12、所述Feroline在制備治療代謝相關疾病的藥物的用途。
[0026] 所述代謝相關疾病包括但不限于高血糖癥、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥等。
[0027] 所述Feroline的使用劑量為1~100mg(藥物）/kg(體重），優選10~40mg(藥 物）/kg(體重）。
[0028] 所述Feroline可作為活性成份與其它藥物組成Feroline藥物組合物，所述其它 藥物包括與制藥中可以接受的輔助和/或添加成份混合后，按常規的制藥方法和工藝要 求。
[0029] 所述Feroline或Feroline藥物組合物可制成口服型制劑或注射型制劑藥物。
[0030] 所述口服型制劑可為片劑、丸劑、膠囊、沖劑或糖漿等；所述注射型制劑可為注射 液或凍干粉針劑型等。
[0031] 本發明利用肝損傷模型小鼠證明Feroline的肝臟保護和修復功 能。本發明給C57B6/J小鼠腹腔注射Feroline，然后注射過量對乙酰氨基酚 (N-acetyl-para-aminophenol，縮寫為APAP)引起肝損傷，24h后檢測結果。結果表明，在對 照組表現出嚴重肝損傷的情況下，注射了 Feroline的小鼠肝臟形態和肝功能基本恢復正 常。表明Feroline在肝損傷方面具有優秀的保護和修復功能。
[0032] 本發明在小鼠模型上證明Feroline在炎癥方面的治療作用。利用不同模型小鼠， 檢測Feroline處理后小鼠肝臟組織中炎癥因子的水平，結果表明，在db/db小鼠、KK-Ay 小鼠和野生型C57B6/J小鼠中，相比空白對照處理的小鼠，腹腔注射了 Feroline的小鼠 肝臟組織中炎癥因子的基因表達水平顯著降低。在APAP誘導的肝損傷試驗結果也表明 Feroline能抑制由化學藥物引起的炎癥。表明Feroline在炎癥治療方面具有很好的功能。
[0033] 本發明證明Feroline在抑制腫瘤細胞生長的作用。用Feroline處理腫瘤細胞后， 檢測腫瘤細胞的存活率。結果表明，用Feroline處理過的多種腫瘤細胞在48h和96h的存 活率明顯低于空白對照處理的細胞。并且隨著時間越長，抑制腫瘤細胞生長的效果越顯著。 對Feroline處理24h的細胞中檢測抑癌基因的表達，也發現Feroline處理的細胞中抑癌 基因的表達水平相比空白對照組有顯著上調，與細胞存活率結果一致。表明Feroline在治 療腫瘤方面的功效。
[0034] 本發明證明Feroline在治療糖尿病、肥胖癥等代謝性疾病方面的作用。利用高脂 飼料喂養的糖尿病、肥胖癥模型小鼠KK-Ay，腹腔注射Feroline兩周后，檢測糖脂代謝的指 標。結果表明，相比空白對照，Feroline處理的KK-Ay小鼠血清中葡萄糖、膽固醇、甘油三 酯和自由脂肪酸的水平明顯降低，Feroline處理的KK-Ay小鼠肝臟組織中與這些代謝相關 的基因表達水平表明Feroline是通過調節這些代謝相關基因來調節這些代謝指標的。表 明Feroline在治療糖尿病、肥胖癥等代謝性疾病方面具有良好療效。
[0035] 本發明證明Feroline的抗氧化和防衰老功能。小鼠 MEF細胞實驗表明，Feroline 處理后的細胞中還原性物質如GSH水平明顯高于空白對照組，而且Feroline處理能顯著提 高抗氧化和防衰老的基因如S0D2和SESN2的表達水平，也能顯著下調促進氧化和衰老的 AC5基因和Igf-lr基因的表達水平。表明Feroline具有抗氧化和防衰老功能。
[0036] 本發明的Feroline是一種天然產物，迄今為止沒有任何有關其在制藥方面的報 道。因此本發明提供的Feroline在肝損傷、炎癥、腫瘤、糖尿病、肥胖癥等代謝性疾病方面 具有治療功能，以及Feroline在抗氧化和防衰老方面的功能，都是關于Feroline在制備治 療這些疾病的藥物制劑中的新功能。
[0037] 本發明的實用性在于，Feroline是從傘形科阿魏屬植物（Ferula genus)中提取 出來的天然產物，已經是商業化的產品，容易獲得藥物原材料。肝損傷、炎癥、腫瘤、糖尿病、 肥胖癥等代謝性疾病是影響人類健康和生命的重大疾病，抗氧化和防衰老也是人們非常關 切的問題，因此，本發明發現這種已經商業化的化合物Feroline在制備治療這些重大疾病 的藥物制劑方面的實用功能，具有重要的社會價值和巨大的經濟價值。
【附圖說明】
[0038] 圖1、小鼠肝臟切片HE染色表明Feroline能修復APAP誘導的肝損傷。
[0039] 圖2、Feroline處理能降低APAP誘導肝損傷的小鼠肝臟中的AST和ALT活性。
[0040] 圖3、Feroline處理能降低APAP誘導肝損傷的小鼠血清中LDH水平。
[0041] 圖4、Feroline處理能提高APAP誘導肝損傷的小鼠肝臟中GSH水平。
[0042] 圖5、Fer〇line處理能調節APAP誘導肝損傷的小鼠中與肝修復相關的基因表達水 平。
[0043] 圖6、Feroline處理能抑制db/db小鼠肝臟中炎癥因子的水平。
[0044] 圖7、Feroline處理能抑制KK-Ay小鼠肝臟中炎癥因子的水平。
[0045] 圖8、Feroline處理能抑制C57B6/J小鼠肝臟中炎癥因子的水平。
[0046] 圖9、Feroline能抑制由于APAP引起的炎癥反應。
[0047] 圖10、20yM Feroline處理能降低人宮頸癌細胞Hela細胞的存活率。
[0048] 圖11、Feroline處理能上調Hela細胞中抑癌基因的表達水平。
[0049] 圖12、Feroline處理能降低人結腸癌細胞HCT116細胞的存活率。
[0050] 圖13、Feroline處理能降低人結直腸腺癌細胞HCT15細胞的存活率。
[0051] 圖14、Feroline處理能降低人乳腺癌細胞MCF7細胞的存活率。
[0052] 圖15、Feroline處理能降低人前列腺癌細胞LNCaP細胞的存活率。
[0053] 圖16、Feroline處理能降低人急性單核細胞白血病細胞THP-1細胞的存活率。
[0054] 圖17、Feroline處理能降低KK-Ay小鼠血清葡萄糖水平。
[0055] 圖18、Feroline處理能降低KK-Ay小鼠血清膽固醇水平。
[0056] 圖19、Feroline處理能降低KK-Ay小鼠血清自由脂肪酸水平。
[0057] 圖20、Feroline處理能降低KK-Ay小鼠血清甘油三酯水平。
[0058] 圖21、Feroline處理能調節KK-Ay小鼠肝臟中糖脂代謝相關基因的表達水平。
[0059] 圖22、Feroline處理能提高MEF細胞GSH水平。
[0060] 圖23、Feroline處理能調節MEF細胞中與抗氧化防衰老相關基因的表達水平。
【具體實施方式】
[0061] 實施例一、Feroline對APAP誘導形成肝損傷的保護和修復
[0062] 試驗方法：過量服用APAP致小鼠急性藥物性肝損傷模型是研究保肝藥物常用的 模型之一，是通過活性氧或活性氮引起藥物性肝損傷的典型代表物。APAP過量使用會引起 肝臟活性氧增多，過量消耗體內還原態物質如GSH導致體內GSH水平下降，谷草轉氨酶AST、 谷丙轉氨酶ALT和乳酸脫氫酶LDH活性等活性上升，導致肝臟組織炎癥或壞死。本實施例 即采用該模型檢測Feroline對APAP誘導形成肝損傷的保護和修復功能。
[0063] 用一年大的C57B6/J野生型小鼠，在廈門大學實驗動物中心SPF級別動物房，用常 規飼料喂養，自由飲水。Feroline用DMS0高濃度溶解，再用40% HBC(2-hydroxypropyl-0 -cyclodextrin)配置成工作濃度，使DMS0濃度為10%，并且使腹腔注射100 y 1 Feroline 溶液最終工作濃度分別為l〇mg/kg(Feroline/小鼠體重）和40mg/kg。空白對照組直接用 等量的DMS0稀釋在40 % HBC溶液。每天上午9點注射，每日一次，注射5天后，在第五天 下午3點給小鼠注射500mg/kg用PBS新鮮溶解配制的APAP。24h后處死小鼠，取部分肝臟 組織用多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色。部分肝臟組織液氮凍存，Trizol試劑提取 RNA，反轉錄成cDNA后，用天根生化科技有限公司的RealMasterMix(SYBR Green I)試劑盒 進行實時熒光定量PCR反應，檢測肝臟組織中相關基因的表達。部分肝臟組織液氮凍存，用 于檢測組織中還原型谷胱甘肽GSH水平。取血清，用于檢測血清中谷草轉氨酶AST、谷丙轉 氨酶ALT和乳酸脫氫酶LDH活性。
[0064] 試驗結果：肝臟切片HE染色結果如圖1，空白對照組病理切片可見肝小葉內細胞 浸潤明顯，呈空泡狀和壞死灶，小葉內和匯管區有大量炎性細胞浸潤，細胞渾濁，核固縮或 已溶解破碎，肝細胞索模糊。與空白對照組明顯嚴重的肝損傷相比，注射了兩個不同濃度 Feroline的小鼠肝臟形態基本恢復正常。使用了 Feroline的小鼠血清中AST和ALT活性 (如圖2)和LDH活性（圖3)顯著低于空白對照組中APAP引起的高活性。Feroline處理 組小鼠的肝臟組織中還原性物質GSH水平也顯著高于空白對照組（圖4)。肝臟組織中與肝 損傷相關的基因表達水平結果也表明，Feroline能上調與外源毒性物質代謝密切相關的功 能基因的表達水平（如圖5)，表明Feroline能通過外源性藥物代謝相關基因的表達調控從 而調節保護和修復肝臟功能。
[0065] 結論：本實施例表明Feroline在肝損傷方面具有很好的保護和修復功能。
[0066] 實施例二、Feroline在炎癥方面的作用
[0067] 試驗方法：
[0068] 炎癥因子是在炎癥過程中由細胞產生和分泌參與炎癥反應的物質，是反應炎癥 的標志物。本實施例利用db/db小鼠、KK-Ay小鼠和野生型C57B6/J小鼠，用高脂飼料 (Research Diets，D12492)喂養，自由飲水。按實施例一中的藥物配置方式，腹腔注射空白 對照和20mg/kg的Feroline，每天注射一次，14天后取小鼠肝臟組織，用Trizol試劑提取 RNA，反轉錄成cDNA后，用天根生化科技有限公司的RealMasterMix(SYBR Green I)試劑盒 進行實時熒光定量PCR反應，檢測肝臟組織中炎癥因子的表達水平。
[0069] 試驗結果：
[0070] 在db/db小鼠（圖6)、KK-Ay小鼠（圖7)和野生型C57B6/J小鼠（圖8)中，腹腔 注射了 Feroline的小鼠肝臟組織中炎癥因子的基因表達水平顯著低于空白對照組，表明 Feroline可以抑制炎癥反應。
[0071] 在實施例一中，APAP誘導的肝損傷試驗結果也表明Feroline能抑制由化學藥物 引起的炎癥（圖9)。
[0072] 結論：Feroline在炎癥治療方面具有很好的功能。
[0073] 實施例三、Feroline在抑制腫瘤細胞生長的作用
[0074] 試驗方法：MTT法是一種檢測細胞存活和生長的方法。該方法已廣泛用于大規模 的抗腫瘤藥物篩選。它的特點是靈敏度高、經濟。本實施例利用MTT法，用含10%胎牛血清 的DMEM培養基培養各種人的腫瘤細胞，包括人宮頸癌細胞Hela細胞、人結腸癌細胞HCT116 細胞、人結直腸腺癌細胞HCT15細胞、人乳腺癌細胞MCF7細胞、人前列腺癌細胞LNCaP細胞 和人急性單核細胞白血病細胞THP-1細胞，用工作濃度為20 y M或40 y M的Feroline分別 處理細胞48h和96h后，用MTT法檢測細胞存活率。
[0075] 用含10 %胎牛血清的DMEM培養基培養宮頸癌細胞Hela細胞，用工作濃度為 20 y M的Feroline處理細胞24h后，用Trizol試劑提取細胞RNA，反轉錄成cDNA后，天根 生化科技有限公司的RealMasterMix(SYBR Green I)試劑盒進行實時熒光定量PCR檢測細 胞中抑癌基因的mRNA表達水平。
[0076] 試驗結果：結果如圖10、圖12至16,在人宮頸癌細胞Hela細胞、人結腸癌細胞 HCT116細胞、人結直腸腺癌細胞HCT15細胞、人乳腺癌細胞MCF7細胞、人前列腺癌細胞 LNCaP細胞和人急性單核細胞白血病細胞THP-1細胞中，用Feroline處理過的腫瘤細胞在 48h和/或96h的存活率明顯低于空白對照處理的細胞。并且隨著時間越長，抑制腫瘤細 胞生長的效果越顯著。對Feroline處理24h的Hela細胞中檢測抑癌基因的表達，也發現 Feroline處理的細胞中抑癌基因的表達水平相比空白對照組有顯著上調（圖11)，與細胞 存活率結果一致。
[0077] 結論：Feroline在人宮頸癌細胞Hela細胞、人結腸癌細胞HCT116細胞、人結直腸 腺癌細胞HCT15細胞、人乳腺癌細胞MCF7細胞、人前列腺癌細胞LNCaP細胞和人急性單核 細胞白血病細胞THP-1細胞等多種腫瘤細胞都有抑制效果，表明了 Feroline在人宮頸癌細 胞、直結腸癌、乳腺癌、前列腺癌和急性單核細胞白血病治療方面具有功效。
[0078] 實施例四、Feroline在治療糖尿病、肥胖癥等代謝性疾病方面的作用
[0079] 試驗方法：利用高脂飼料（Research Diets, D12492)喂養的糖尿病、肥胖癥模型 小鼠KK-Ay，腹腔注射20mg/kg的Feroline兩周，每日一次，第14天注射后空腹6h，收集 小鼠肝組織，液氮凍存，用于檢測肝臟基因表達，檢測方法如實施例一。收集小鼠血清，用 于檢測血清中糖脂代謝的相關指標，包括血清葡萄糖、膽固醇、自由脂肪酸和甘油三酯的 水平，分別按照以下試劑盒方法檢測：糖-氧化酶法（北京普利萊）、膽固醇（Bioassay Systems，美國）、自由脂肪酸（Bioassay Systems，美國）、甘油三酯（北京普利萊和日本 WAKO Chemicals Inc.)〇
[0080] 試驗結果：相比空白對照，Feroline處理的KK-Ay小鼠血清中葡萄糖（圖17)、膽 固醇（圖18)、自由脂肪酸（圖19)和甘油三酯（圖20)的水平明顯降低，Feroline處理的 KK-Ay小鼠肝臟組織中與這些代謝相關的基因表達水平（圖21)表明Feroline是通過下調 糖脂合成相關基因的表達來調節這些代謝指標的。
[0081] 結論：Feroline在治療糖尿病、肥胖癥等代謝性疾病方面具有良好療效。
[0082] 實施例五、Feroline的抗氧化和防衰老功能
[0083] 試驗方法：還原型谷胱甘肽（GSH)的重要功能之一是作為細胞內的自然抗氧化劑 發揮作用。人體衰老、感染、中毒、外源性毒素、氧化應激等都可以使細胞內GSH生物合成能 力降低、含量下降，或者使GSH轉變為雙硫氧化型（GSSG)。
[0084] 本實施例利用培養的小鼠胚胎成纖維細胞（MEF)，用工作濃度為20 yM的 Feroline處理細胞24h后，用還原型谷胱甘肽（GSH)測定試劑盒（南京建成）檢測MEF細 胞中GSH水平。
[0085] 同樣處理的細胞用Trizol試劑提取細胞RNA，反轉錄成cDNA后，用實時熒光定量 PCR法檢測細胞中與抗氧化和衰老相關基因的mRNA表達水平。
[0086] 試驗結果：小鼠MEF細胞實驗中，Feroline處理后的細胞中還原性物質GSH水平 明顯高于空白對照組（圖22)，表明Feroline能促進細胞產生抗氧化功能的還原性物質。 而且Feroline處理能顯著提高抗氧化和防衰老的基因如S0D2和SESN2的表達水平，也能 顯著下調促進氧化和衰老的AC5基因和IGF-1R基因的表達水平（圖23)。
[0087] 另外，如實施例一，Feroline能顯著增高小鼠肝臟內GSH水平，也表明了 Feroline 的抗氧化功能。
[0088] 結論：Feroline具有抗氧化和防衰老功能。
【主權項】
1. Feroline在制備預防或治療肝損傷的藥物中的用途；所述治療肝損傷的藥物是對 乙酰氨基酚為主要活性成分的藥物；所述肝損傷包括但不限于由于服用有肝損傷副作用的 藥物引起的肝損傷、由于酒精引起的急性肝損傷、酒精性脂肪肝引起的肝損傷、免疫性或化 學性因素引起的肝損傷、病毒感染引起的肝損傷。 2. Feroline在制備保護肝臟功能藥物或保健品中的用途。 3. Feroline在制備治療炎癥的藥物中的用途；所述治療炎癥的藥物是對乙酰氨基酚 為主要活性成分的藥物；所述炎癥包括但不限于由于服用有炎癥反應副作用的藥物引起的 炎癥。4. 所述Feroline在制備治療肝炎的用途；所述肝炎包括但不限于保護肝臟抵抗由于 酒精引起的急性肝炎、修復酒精性脂肪肝引起的肝炎、修復非酒精性脂肪肝引起的肝炎、病 毒性肝炎。 5. Feroline在制備治療腫瘤的藥物中的用途；所述腫瘤包括但不限于宮頸癌、直結腸 癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、急性單核細胞白血病。 6. Feroline在制備用于抗氧化、防衰老的藥物或保健品中的用途。 7. Feroline在制備治療糖尿病、肥胖癥、代謝相關疾病的藥物的用途；所述代謝相關 疾病包括但不限于高血糖癥、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥。 8. Feroline作為活性成份與其它藥物組成Feroline藥物組合物，所述其它藥物包括 與制藥中可以接受的輔助和/或添加成份混合后，按常規的制藥方法和工藝要求。 9. Feroline或Feroline藥物組合物制成口服型制劑或注射型制劑藥物；所述口服型 制劑可為片劑、丸劑、膠囊、沖劑或糖漿；所述注射型制劑可為注射液或凍干粉針劑型。10. 如權利要求1~9中任一 Feroline，其CAS號為39380-12-6,分子式為C 22H3(]04，結 構式如下：
【文檔編號】A61P29/00GK105853402SQ201510031454
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年1月22日
【發明人】李勇, 金利華, 朱雁林, 鄭偉莉
【申請人】廈門大學