冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病治療藥物中的應用

冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病治療藥物中的應用
【專利摘要】本發明公開了冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病治療藥物中的應用。本發明研究發現，將不同抗癌機理的中草藥有效成分冬凌草甲素與姜黃素進行定量配伍的聯合用藥，會產生顯著的協同增效效果。上述配伍方式能夠以較低濃度的藥物組合殺傷更多的白血病細胞，并能有效減低藥物對白血病細胞增殖抑制率達50%時所對應的藥物總濃度，而且此種配伍方式中各藥物的使用量均不屬于能夠對機體造成傷害的范圍。因此，本發明中冬凌草甲素與姜黃素的聯合用藥方案不論是在制備白血病治療藥物還是在白血病的防治和研究方面，都具有重要的意義和廣泛的應用前景。
【專利說明】
冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病治療藥物中的應用
技術領域
[0001 ]本發明屬于生物醫藥技術領域。更具體地，涉及冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病治療藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]白血病俗稱“血癌”，是一類來源于造血干細胞的惡性血液腫瘤疾病。當前，對白血病的治療主要集中于以下方案:化療、放療、骨髓移植和免疫療法等等。其中，化療因其靶向性相對較強、治療費用相對低廉而成為白血病治療中的主流方案。
[0003]在常用的化療方案里，聯合用藥的思路得到了充分的體現。目前臨床常用的聯合用藥方式中多以西藥聯合西藥、西藥聯合中藥為主，且所用西藥大多為細胞周期的特異性或非特異性阻滯藥物，利用白血病細胞的異常增殖特性對該病進行治療。
[0004]然而，上述療法在應用中也存在很大的問題:首先，以細胞周期阻滯藥為主的化療方案雖然阻止了白血病細胞的異常增殖，但也阻礙了正常機體細胞的分裂;第二，西藥代謝過程復雜，對患者的心、肝、腎等重要器官損傷嚴重;第三，靶向化療藥物價格不菲，普通人家較難長期承受。

【發明內容】

[0005]本發明要解決的技術問題是克服現有治療白血病藥物的缺陷和不足，主要是化療方案的靶向性差(即不區分正常細胞與癌變細胞，強制性阻滯機體所有細胞的增殖)、副作用強、成本高昂等弊端，提供一種將兩種不同抗癌機理的中草藥有效成分一一冬凌草甲素(Oridonin，簡稱Ori)和姜黃素(Curcumin，簡稱Cur)進行配伍的聯合用藥方法，既可以利用兩種化合物間顯著的協同增效效果來達到低劑量高效率的殺死白血病細胞的目的。同時由于中草藥低毒且來源豐富、材料易得，能夠大大減少治療過程中藥物對機體的毒副作用并顯著降低治療成本。
[0006]本發明的目的是提供冬凌草甲素與姜黃素配伍的聯合用藥方案在制備白血病治療藥物中的應用。
[0007]本發明另一目的是提供一種白血病治療藥物。
[0008]本發明上述目的通過以下技術方案實現:
冬凌草聯合姜黃在制備白血病預防、治療、輔助治療和/或預后防復發的藥物中的應用。
[0009]冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病預防、治療、輔助治療和/或預后防復發的藥物中的應用。
[0010]具體是冬凌草甲素聯合姜黃素按一定比例配伍而成的高效低毒的藥物組合物在制備白血病預防、治療、輔助治療和/或預后防復發的藥物中的應用。
[0011]所述冬凌草甲素或姜黃素包括其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合;還包括二者的衍生物，或者二者及其衍生物在藥學上可接受的鹽或鹽的溶劑化物。
[0012]上述的藥物具有高效低毒的優點。
[0013]在上述的聯合配伍方案中起減毒增效的活性成分為冬凌草甲素和姜黃素。
[0014]優選地，在上述應用方案中，冬凌草甲素和姜黃素的摩爾濃度比為0.1?15:0.1?30 ο
[0015]優選地，冬凌草甲素和姜黃素的摩爾濃度比為10:5或5: 20。
[0016]優選地，冬凌草甲素和姜黃素聯用的濃度分別為:冬凌草甲素配伍的濃度小于15μΜ，姜黃素配伍的濃度小于30μΜ。
[0017]更優選地，冬凌草甲素配伍的濃度小于ΙΟμΜ，姜黃素配伍的濃度小于20μΜ。
[0018]最優選地:10μΜ的冬凌草甲素配伍5μΜ的姜黃素，或5μΜ的冬凌草甲素配伍20μΜ的姜黃素。
[0019]當冬凌草甲素ΙΟμΜ配伍姜黃素5μΜ或者冬凌草甲素5μΜ配伍姜黃素20μΜ時，藥物組合物對白血病細胞的增殖抑制率即可達50%;而且該兩種配伍方式的使用量均不屬于能夠對機體造成傷害的范圍。
[0020]—種治療白血病的藥物組合物，包含有效量的冬凌草和姜黃，或包含有效量的冬凌草甲素和姜黃素。
[0021]進一步地，上述藥物組合物還可以包括可接受的藥用載體制成各種藥學上可接受的制劑，包括針或凍干粉針制劑、丸劑、湯劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊、控釋、緩釋制劑、注射劑或口服制劑。
[0022]所述藥用載體包括(但并不限于):鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、低分子量右旋糖酐、聚乙二醇400、聚乙二醇6000、甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、氯化鈉以及山梨醇中的一種或幾種的組合。
[0023]本發明的冬凌草甲素和姜黃素組成的藥物的制備方法不做嚴格限制，如可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規方法進行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規方法進行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造。
[0024]更進一步地，上述的藥物組合物還可以包括一種以上的藥學上可接受的賦形劑。
[0025]另外，上述的藥物組合物還可包括其他化療藥物、抗炎類藥物、激素類藥物、小分子靶向藥物、抗體藥物、中藥復方制劑及中藥提取物和/或中藥單體及其衍生物，從而制備成不同針對性的藥物。
[0026]具體優選地，所述其他化療藥物或抗癌試劑可以為(但不限于)以下的一種或多種:足葉乙苷、5-氟尿嘧啶、環磷酰胺、阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、阿糖胞苷、靛紅、順鉑、卡鉑、依托泊苷、拓撲替康、伊立替康等等。
[0027]所述抗炎類藥物或免疫刺激劑可以為(但不限于)以下的一種或多種:阿司匹林、干擾素、c-AMP、球蛋白等等。
[0028]所述激素類藥物可以為(但不限于)以下的一種或多種:糖皮質激素、雌激素、孕激素等等。
[0029]所述小分子靶向藥物可以為(但不限于)以下的一種或多種:伊馬替尼(Imatinib)、達沙替尼(Dasat inib)、尼羅替尼(Ni 1tinib)、伯舒替尼(Bosut inib)、舒尼替尼(Sutent, Sunitinib)、索拉非尼(Nexavar，Sorafenib)、拉帕替尼(Lapatinib)、易瑞沙(Gefitinib)等等。
[0030]所述抗體類藥物可以為(但不限于)以下的一種或多種:美羅華(Rituximab，Rituxan)、賀賽汀(Trastuzumab,Herceptin)、愛必妥(Cetuximab，Erbitux)、貝伐單抗(Bevacizumab ,Avastin)、中白尼單抗(Panitumumab)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab)等等。
[0031]所述抗腫瘤中藥復方制劑及中藥提取物可以為以(但不限于)下的一種或多種:靈芝提取物、云芝提取物、茯苓提取物、薏苡仁提取物、楓苓合劑、蟾酥靈等等。
[0032]所述中藥單體及其衍生物可以為(但不限于)以下的一種或多種:紫杉醇、喜樹堿、高三尖杉酯堿、青蒿素、大豆異黃酮、人參皂苷、長春新堿、秋水仙堿、柚皮素、大黃素及其衍生物、苦參堿及其衍生物、雷公藤甲素及其衍生物等等。
[0033]另外，上述藥物組合物在制備減毒增效抗白血病的藥物、預防白血病的藥物、提高機體免疫力的藥物、保健藥品或保健食品方面的應用，以及由此制備得到的所述藥物，也在本發明的保護范圍之內。
[0034]本發明提出了將具有不同抗癌機理的中草藥有效成分冬凌草甲素與姜黃素進行配伍的聯合用藥方式，并給出了具體的配伍劑量和相應劑量下細胞增殖的抑制情況，該配伍方式能夠大大提高藥物對白血病細胞的增殖抑制效果，使藥物對白血病細胞的增殖抑制率達50%時所對應的藥物總濃度顯著下降。
[0035]本發明還確定了該藥物組合物(冬凌草甲素與姜黃素配伍)在一定劑量配伍條件下具有明顯的協同增效效果，這使它們可以以相對低的劑量應用于白血病的臨床治療、輔助治療以及預后防復發的相關治療，該配伍組合既提高了藥物的總療效也減少了副作用的發生。本發明公開了含有所述化合物的藥物組合物及其相關配比和所述藥物組合物在高效低毒地防治白血病方面的應用。
[0036]本發明具有以下有益效果:
本發明具體涉及聯用不同抗癌機理的中草藥有效成分對白血病進行高效低毒的治療，主要是將中草藥冬凌草和姜黃中的有效成分冬凌草甲素與姜黃素進行定量配伍的聯合用藥，產生協同增效的效果。
[0037]上述配伍方式(冬凌草甲素與姜黃素)中，冬凌草甲素與姜黃素的聯合使用能夠起到很好的協同增效作用，該藥物組合能夠顯著減少使白血病細胞達到半數增殖抑制率時所對應的藥物總濃度(即能有效減低藥物對白血病細胞增殖抑制率達50%時所對應的藥物總濃度)，而且此兩種配伍方式的使用量均不屬于能夠對機體造成傷害的范圍。
[0038]因此，本發明的冬凌草甲素聯合姜黃素聯合藥物方案在制備白血病治療藥物和白血病的防治和研究方面，都具有重要的意義和廣泛的應用前景。
【附圖說明】
[0039]圖1為5uM冬凌草甲素聯用不同濃度姜黃素的藥物配伍方式對慢性隨性白血病細胞株K562細胞的增殖抑制情況。
[0040]圖2為1uM冬凌草甲素聯用不同濃度姜黃素的藥物配伍方式對慢性隨性白血病細胞株K562細胞的增殖抑制情況。
【具體實施方式】
[0041]以下結合說明書附圖和具體實施例來進一步說明本發明，但實施例并不對本發明做任何形式的限定。除非特別說明，本發明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規試劑、方法和設備。
[0042]除非特別說明，以下實施例所用試劑和材料均為市購。
[0043]實施例1冬凌草甲素與姜黃素聯合用藥研究
選用一定濃度梯度的冬凌草甲素與姜黃素分別處理白血病K562細胞24小時，同時固定抗癌藥物冬凌草甲素的濃度、聯合使用不同梯度濃度的姜黃素處理白血病K562細胞24小時，用MTT比色法計算細胞在三種不同的藥物處理模式下各自的增殖抑制強度。具體研究方法如下:
1、實驗細胞株
K562慢性髓性白血病細胞取自中山大學生物工程研究中心(廣東，廣州)。
[0044]2、細胞培養:
K562細胞用完全培養基(含10% FBS和1%雙抗的RPM1-1640培養基)進行常規細胞培養，培養時采用37°C恒溫、5% CO2的條件進行。
[0045]3、藥物母液配制實驗:
取購自河南濟世制藥有限公司的冬凌草甲素粉末和購自Sigma公司的姜黃素粉末，稱重，并用DMSO溶液溶解，至終濃度為40mM。
[0046]4、細胞增殖抑制實驗:
(1)獲取細胞
取培養至對數生長期的白血病K562細胞，750rpm離心3分鐘進行收集，用含10%胎牛血清的RPIM 1640培養基重懸細胞，并將細胞懸液的濃度調至3 X 15個/ml，以98μ?7孔的量將上述細胞懸液接入96孔板內，置于37°C，5% CO2培養箱中培養24小時；
(2)加藥處理
A.取配好的40mM冬凌草甲素母液用DMSO溶液稀釋至工作濃度(5μΜ和ΙΟμΜ)的100倍，故配制濃度分別為0.5mM和ImM，吹打混勻；
B.取配好的40mM姜黃素母液用DMSO溶液稀釋至工作濃度(5μΜ，ΙΟμΜ，20μΜ和30μΜ)的100倍，故配制濃度分別為0.5mM，ImM，2mM和3mM，吹打混勻；
C.在(I)中96孔板內的每孔細胞懸液中加入稀釋好的藥物，分為姜黃素單獨用藥組、5μΜ冬凌草甲素與姜黃素聯合用藥組、ΙΟμΜ冬凌草甲素與姜黃素聯合用藥組:
姜黃素單獨用藥組:每孔加入IyL B中稀釋好的各濃度姜黃素溶液和IyL DMSO溶液，姜黃素OyM對照孔為僅加入2tiL DMSO溶液，晃動培養板以混勻，置于37°C，5% CO2培養箱中培養24小時；
5μΜ冬凌草甲素與姜黃素聯合用藥組:每孔加入I1IL A中稀釋好的0.5mM冬凌草甲素溶液和IyL B中稀釋好的各濃度姜黃素溶液，冬凌草甲素5μΜ姜黃素ΟμΜ對照孔為加入I1IL A中稀釋好的0.5 mM冬凌草甲素溶液和IyL DMSO溶液，晃動培養板以混勻，置于37°C，5% CO2培養箱中培養24小時；
ΙΟμΜ冬凌草甲素與姜黃素聯合用藥組:每孔加入I nL A中稀釋好的I mM冬凌草甲素溶液和IyL B中稀釋好的各濃度姜黃素溶液，冬凌草甲素ΙΟμΜ姜黃素ΟμΜ對照孔為加入I1IL A中稀釋好的I mM冬凌草甲素溶液和IyL DMSO溶液，晃動培養板以混勻，置于37 °C，5% CO2培養箱中培養24小時；
(3)在各孔細胞懸液內加入15仙MTT溶液(MTT試劑盒購自Promega公司，USA)，置于370C，5% CO2培養箱中培養4小時；
(4)在(3)中各孔內加入101ILSTOP溶液，置于37°C，5% CO2培養箱中培養24小時；
(5)取出96孔培養板，分別于570nm波長和630nm波長的激發光下檢測各孔的吸光值，A57o-A63Q，即為各孔真實的吸光值，反應的是各孔中細胞的存活率，據此可算出各孔細胞在藥物作用下的增殖抑制情況。
[0047]5、實驗結果
結果如附圖1和2所示，冬凌草甲素與姜黃素的聯合使用能夠起到很好的協同增效作用。
[0048]該藥物組合能夠顯著減少使白血病細胞達到半數增殖抑制率時所對應的藥物總濃度:冬凌草甲素5μΜ配伍姜黃素20μΜ(如圖1所示)或者冬凌草甲素ΙΟμΜ配伍姜黃素5μΜ(如圖2)即可，此兩種配伍方式的使用量均不屬于能夠對機體造成傷害的范圍。
【主權項】
1.冬凌草聯合姜黃在制備白血病預防、治療、輔助治療和/或預后防復發的藥物中的應用。2.冬凌草甲素聯合姜黃素在制備白血病預防、治療、輔助治療和/或預后防復發的藥物中的應用，其特征在于，所述冬凌草甲素或姜黃素包括冬凌草甲素或姜黃素，以及其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合;還包括二者的衍生物，或者二者及其衍生物在藥學上可接受的鹽或鹽的溶劑化物。3.根據權利要求2所述應用，其特征在于，冬凌草甲素和姜黃素的摩爾濃度比為0.1?15:0.1?30。4.根據權利要求3所述應用，其特征在于，冬凌草甲素和姜黃素的摩爾濃度比為10:5或5: 20ο5.根據權利要求2所述應用，其特征在于，冬凌草甲素和姜黃素聯用的濃度分別為:冬凌草甲素配伍的濃度小于15μΜ，姜黃素配伍的濃度小于30μΜ。6.一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于，包含有效量的冬凌草和姜黃，或包含有效量的冬凌草甲素和姜黃素，或包含權利要求2所述藥物成分的組合物。7.根據權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物可口服給藥或注射給藥，還包括可接受的藥用載體制成各種藥學上可接受的制劑，包括針或凍干粉針制劑、丸劑、湯劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊、控釋、緩釋制劑、注射劑或口服制劑。8.根據權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，還包括一種以上的藥學上可接受的賦形劑。9.根據權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，還可包括其他化療藥物或抗癌試劑、抗炎類藥物或免疫刺激劑、激素類藥物、小分子靶向藥物、抗體藥物、中藥復方制劑及中藥提取物和/或中藥單體及其衍生物。10.權利要求6所述的藥物組合物在制備減毒增效抗白血病的藥物、預防白血病的藥物、提高機體免疫力的藥物、保健藥品或保健食品方面的應用。
【文檔編號】A61K31/352GK105833173SQ201610238624
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月18日
【發明人】董博文, 周惠, 屈良鵠
【申請人】中山大學