Virosaine A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在升高白細胞的藥物中的應用
【專利摘要】本發明公開一種Virosaine A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在升高白細胞的藥物中的應用，本發明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備升高白細胞藥物上的用途。本發明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發明的組合物具有升高白細胞的作用，具有開發升高白細胞藥物的價值。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在升高 白細胞的藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 白細胞減少癥是由于原因不明和繼發于其他疾病之后而引起的疾病，分為原發性 和繼發性兩大類。原發性者原因不明；繼發性者認為其病因可由急性感染，物理、化學因素， 血液系統疾病，伴脾腫大的疾病，結締組織疾病，過敏性疾病，遺傳性疾病等，獲得性或原因 不明性粒細胞減少等。
[0003] 白細胞減少的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中 尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有 重要價值。
[0004] 本發明涉及的化合物I是一個2012年發表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物升高白細胞活性進行了評 價，其具有升高白細胞活性。
【發明內容】
[0005] 本發明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質量百分數分別為70%和30%。
[0007] 本發明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0008] 本發明的目的是提供組合物在制備升高白細胞藥物中的應用。本發明組合物可以 顯著升高失血和化學物品引起的白細胞降低。
[0009]以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物Virosaine A的制備
[0011] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發表的文獻(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B, Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法。
[0013] 實施例2 Virosaine A的ο-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(235mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（ΤΒΑΒ) (0.08 8)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏 度攪拌Shdh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后 對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0015] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s,2H),3.33(s,lH),2.26(s,lH),1.58(d,J=9.8Hz,3H),1.41(s,2H).
[0016] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s),79.95(s),74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0019] 實施例3 Virosaine A的0_(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2.5mmo 1)，碘化鉀(84mg，0.5mmo 1)和吡略燒（1420mg，20mmo 1)，混合物加熱回流lh。反應結 束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水 洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品 用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1.5，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的淡黃色膠狀固體(111.6mg，67% )。
[0021] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.92(s，lH)，4.11(s，lH)，3.66(s，lH)，3.53(s，2H)， 3.45(d,J=66.9Hz,lH),2.64(s,2H),2.52(s,4H),2.29(s,lH),1.71(s,4H),1.64(s,2H), 1.61(s,lH),1.50(s,2H).
[0022] 13C NMR( 125MHz，DMS0-d6)Sl71.83(s), 106.73(s),79.97(s),74.35(s),66.72((1, J = 9.2Hz),54.42(d ,J = 17.1Hz),44.23(s),35.58(s),25.86(s),25.23(s),21.90(s).
[0023] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci8H25N2〇4:333.1814;found:333.1811。
[0025] 實施例4 Virosaine A的0_(嗎啉基）乙基衍生物的合成
[0026] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀(84mg，0 · 5mmo 1)和嗎啉（1742mg，20mmo 1)，混合物加熱回流lh。反應結束 后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(嗎啉基）乙基衍生物的黃色固體(IV) (125.3mg，72% )。
[0027] 咕 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.95(s，lH)，4· 12(s，lH)，3.68(s，lH)，3.63((1, J = 8·4Ηζ，1Η)，3.61(s，4H)，3.57-3.26(m，3H)，2.61(s，2H)，2.56(s，2H)，2.51-2.03(m，5H)， 1.70(d ,J = 3.1Hz,lH),1.65(d ,J = 25.6Hz,lH),1.52(s,2H).
[0028] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.85(s)，106.73(s)，79.95(s)，74.34(s)，66.75(t, J=4.6Hz),54.46(s),52.93(s),44.22(s),35.55(s),25.88(s),21.89(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci8H25N2〇5:349.1763;found:349.1761。
[0031]實施例5組合物升高白細胞活性 [0032] 一、組合物對失血小鼠的治療作用
[0033] 對失血小鼠的影響ICR小鼠50只，罕d各半，均分成5組(η = 10)。除生理鹽水組外， 其它組每只小鼠從眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測全部各組白細胞指標，然后連續灌 胃給藥1周，末次給藥lh后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀測白細胞指標。 [0034] 組合物的制備：將研磨之后過200目網的70mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網的30mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0035]表1組合物對因失血所致白細胞減少的治療作用（109/L)
[0037] 與模型組比較:*ρ〈0·05
[0038] 結果表明，放血小鼠經服用組合物治療7天后，組合物給藥組與模型組比較，白細 胞顯著高于模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
[0039] 二、組合物對環磷酰胺致白細胞減少的治療作用
[0040] 對小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，??用，均分成5組(η=10)， 即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg 組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環磷酸胺 80mg/kg，然后繼續給藥3天。于末次給藥后lh，從眼眶靜脈叢取血，測白細胞。
[0041] 表2組合物對環磷酰胺所致白細胞減少的治療作用（109/L)
[0042]
[0043] 與模型組比較:*ρ〈0·05
[0044] 結果表明，與生理鹽水組比較，環磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細胞下 降，組合物組與模型組比較，均可明顯對抗環磷酸胺所致小鼠白細胞下降。而化合物III和 化合物IV不具有此活性。
[0045]三、組合物對苯所致白細胞減少的治療作用
[0046] 對再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，罕c?兼用，均分成5組(η = 10)，除 生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續12天，造模的當日，同時口服給藥，每 天1次，共18天，末次給藥后lh，眼眶靜脈叢取血，測白細胞。
[0047] 表3組合物對苯所致血細胞減少的治療作用（109/L)
[0048]
[0049] 與模型組比較:*p〈0.05
[0050] 結果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對抗苯所致再生障礙性貧血小鼠白細 胞的下降。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
[0051] 結論：組合物能夠顯著升高白細胞，可以用來制備抗白細胞降低藥物。而化合物 III和化合物IV不具有顯著升高白細胞的活性，不可以用來制備抗白細胞降低藥物。
[0052] 實施例6本發明所涉及組合物片劑的制備
[0053] 取2克組合物，加入制備片劑的常規輔料18克，混勻，常規壓片機制成100片。
[0054] 實施例7本發明所涉及組合物膠囊的制備
[0055] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質量百分數分別為70%和30%，2. 如權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質量百分數分別為70%和30%充分混合。3. -種如權利要求1所述的組合物在升高白細胞藥物中的應用。4. 如權利要求3所述的組合物在升高白細胞藥物中的應用，其特征在于所述組合物升 高失血所致白細胞的降低。5. 如權利要求3所述的組合物在升高白細胞藥物中的應用，其特征在于所述組合物升 高化學品所致白細胞的降低。6. 如權利要求5所述的組合物在升高白細胞藥物中的應用，其特征在于所述化學品為 環憐酷胺。7. 如權利要求5所述的組合物在升高白細胞藥物中的應用，其特征在于所述化學品為 苯D
【文檔編號】A61P7/00GK105832742SQ201610277881
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月28日
【發明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫藥科技有限公司