一種用于治療骨癌的藥物組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及制備治療骨癌的藥物及其應用。
【背景技術】
[0002] 骨癌(Osteosarcoma),其是一種由骨骼系統長出的惡性腫瘤，且為骨腫瘤中最常 見的一種，會侵犯鄰近的組織及器官，也可能會轉移至遠處的其它器官，好發于年紀介于十 歲至二十歲之間的小孩及青少年身上，且男性發生幾率略高于女性。骨癌的致病原因迄今 未明，由它的原發部位和多發生于快速生長的年紀，顯示其跟成骨細胞的活性增加可能有 關，而遺傳因素在骨癌似乎也扮演一個角色，此外也可能與慢性發炎、福射或病毒感染有 關。
[0003] 骨癌常發病于長骨末端，約有50%位于近膝蓋處，會引起疼痛、腫脹，甚至于病理 性骨折，并可能出現運動功能障礙、局部出現腫塊或其它非特異性癥狀如體重減輕、食欲不 振、輕度發燒或腰酸背痛等等，且其死亡率很高，因此骨癌為令人聞之色變的癌癥。在六十 年代主要是采取截肢手術(amputation)治療手術，然而病人截肢后于五年內的存活率也相 當低，隨著化學治療的長足進步，配合放射診斷學及手術技術的提升，目前骨癌的五年的存 活率已進步到70~80%之間，且可W預期達到長期的存活（long-term survival),但仍舊 無法完全控制，且治療時合并使用的多種化療藥物，均有很強的骨髓抑制效果，因此開發有 效且副作用小的治療藥物W供臨床應用是有其必要，W供于臨床治療人類骨癌上既可降低 藥物使用濃度并減少副作用，且可達較佳的治療效果。
[0004] 阿拉善碟觀草為多年生的高山植物，具有耐寒、耐旱的植物，發明人通過生物庫批 量篩選，發現阿拉善碟觀草具有較強的抗逆的能力，其中可能存在著抑制癌癥的物質。
[0005] 目前治療骨癌的藥物主要集中在中藥組合物W及T-2毒素，但是運些方法都不可 避免的對人體產生一定的副作用，并且治療效果并不是非常的理想。因此，開發一種高效 的、對人體無害的藥物顯得迫在眉睫。
【發明內容】
[0006] 針對上述現有技術，本發明提供了一種新的藥物組合物用于治療骨癌。
[0007] 本發明的一個技術方案為一種用于治療骨癌的藥物組合物，其由化GAT多膚W及 藥學上可W接受的載體構成。所述多膚的序列如ZLGAT-I~25任一所示，其序列分別對應于 沈Q ID NO :1-25所示。
[000引本發明另外提供一種多膚的制備方法，該方法包括：稱取阿拉善碟觀草整租株 100g，搗碎后配制成底物濃度為5 %的PBS水溶液，調抑至8.0，加入膜蛋白酶4000U/g葉片， 酶解溫度為50°C，酶解90min后，將酶解液迅速升溫至90°C，保持20min，進行滅酶處理。然后 迅速冷卻至室溫，在W3000r/min離屯、15min，取上清液。按照100克：100ml的比例在濕大孔 吸附樹脂DA201-C中加入膜蛋白酶解液，25°C在恒溫搖床保持ISOmin，轉速為15化/min，用 75%的乙醇溶液洗脫120min，收集不同時間段的洗脫液。回收小分子量的條帶，共得到103 個小膚的序列。經過驗證，其中有25個小膚具有抑制癌細胞增增殖并且殺死癌細胞的功能。 根據色譜柱中不同的峰值分離時間，可W批量獲得相應的小膚。常規的，所述的多膚通過人 工合成的方法可W批量的用于工業化的應用，避免了原料不足，帶來的局限性。
[0009]在其它實施方案中，協同效應允許一種或多種其它的治療劑與本發明的多膚W批 準劑量聯合給予，但是具有高于預期的效能。
[0010]在典型的實施方案中，多膚W濃度足W允許W〇.2mg/kg至20mg/kg靜脈內給藥的 藥物組合物存在。在某些實施方案中適合用于所述組合物和方法中的多膚濃度包括，但是 并不局限于此，至少約0.2mg/kg，至少約0.75mg/kg，至少約Img/kg，至少約2mg/kg，至少約 2.5mg/kg，至少約3mg/kg，至少約4mg/kg，至少約5mg/kg，至少約6mg/kg，至少約7mg/kg，至 少約8mg/kg，至少約9mg/kg，至少約1 Omg/kg，至少約1 Img/kg，至少約12mg/kg，至少約13mg/ kg，至少約14mg/kg，至少約15mg/kg，至少約16mg/kg，至少約17mg/kg，至少約18mg/kg，至少 約 19mg/kg,和至少約 20mg/kg。
[0011] 多膚可W單劑量或多劑量方案給予。通常，多膚在自約1小時至約24小時的時間段 內給予，但是典型地在約1至2小時的時間段內給予。劑量可W重復約1周至約6周或更長時 間，總共6劑或更多劑。典型地，劑量每周重復一次，每隔一周重復一次，或每月一次，最少6 劑至最多50劑。
[0012] 給藥時，可W為口服給藥、靜脈注射給藥、皮下注射給藥、肌肉注射給藥。本發明利 用多膚對癌細胞的特異性殺傷作用治療骨髓增生異常綜合征，作用于骨髓及其他造血組 織，抑制腫瘤細胞生長。對骨癌及骨髓增生異常有良好的殺傷。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，運些實施例僅用于說明本發明，而 不限制本發明范圍。
[0014] 實施例1多膚的獲得
[0015] 稱取阿拉善碟觀草整株lOOg，搗碎后配制成底物濃度為5%的PBS水溶液，調pH至 8.0，加入膜蛋白酶4000U/g葉片，酶解溫度為50°C，酶解90min后，將酶解液迅速升溫至90 °C ,保持20min,進行滅酶處理。然后迅速冷卻至室溫,在WSOOOr/min離屯、15min,取上清液。 按照100克：100mL的比例在濕大孔吸附樹脂DA201-C中加入膜蛋白酶解液，25°C在恒溫搖床 保持ISOmin，轉速為15化/min，用75 %的乙醇溶液洗脫120min，收集不同時間段的洗脫液。 回收小分子量的條帶，共得到103個小膚的序列。經過驗證，其中有25個小膚具有抑制癌細 胞增增殖并且殺死癌細胞的功能。所述多膚的序列分別如ZLGAT-I~25任一所示，其序列分 別對應于沈Q ID NO :1-25所示。
[0016] 實施例2藥物組合物的制備
[0017] 取化GAT-I多膚0.03份、淀粉1份、甜蜜素或/和薦糖適量作為甜味劑、苯甲酸0.1 份，混勻，過50目篩，滅菌后，包裝即可。
[0018] ZLGAT-2~29的多膚按照化GAT-I多膚的制備方法也都分別制備成為相應的組合 物。
[0019 ]實施例3藥物組合物與其它制劑的混合
[0020]將化GAT-I多膚與棚替佐米按照1:1的比例混合，然后W混合后的藥物重量作為基 礎份數，再加入淀粉1份、甜蜜素或/和薦糖適量作為甜味劑、苯甲酸0.1份，混勻，過50目篩， 滅菌后，包裝即可。
[0021 ] 實施例4藥物安全性檢測
[0022] 根據本領域常規的驗證方法，可W得出本發明經動物試驗證實安全無毒，實驗結 果與結論如下：
[0023] (1)急性毒性實驗表明：根據急性毒性劑量分級標準，屬于實際無毒性級；
[0024] (2)骨髓細胞微核試驗、精子崎形試驗、Ames試驗結果為陰性；
[0025] (3)30天喂養試驗:實驗動物生長情況良好，血液學檢查，生化學檢查，主要臟體比 及組織學檢查結果與對照組相比，均未見異常，證明本發明安全無毒。
[0026] 實施例5細胞學層面檢測
[0027] 骨髓瘤細胞株XG7培養在100血/L的FCS-1640完全培養液中（含肥陽S25mol/L)，隔 日換液，及時傳代。采用MT法檢測細胞生長狀況，直至細胞生長到3.0*10巧P可。
[002引取lml，3.0*108的細胞，在IOml的FCS-1640完全培養液中繼續培養，其中培養液中 分別添加了實施例2和3的藥物組合物W多膚含量添加量為0.2mg為準。培養4她后進行細胞 計數，結果如下：
[0031 ]從W上結果可W看出，本發明的藥物具有較好的抑制骨髓瘤細胞株XG7的功效。 [0032]藥物活性實驗 [00削 （1)細胞培養
[0034] 骨髓瘤細胞株XG7培養在100血/L的FCS-1640完全培養液中（含肥陽S25mol/L)，隔 日換液，及時傳代。采用MT法檢測細胞生長狀況，直至細胞生長到3.0*10巧P可。
[0035] (2)大鼠骨肉瘤模型的制備
[0036] 收集培養的骨髓瘤細胞株XG7，清洗1次，調整細胞濃度;在右后肢外側皮下對SD大 鼠接種1 OOml細胞懸液0.5mL，接種后15天，取10只合格SCID小鼠隨機分為兩組，對照組瘤內 注射2ml生理鹽水，實驗組將溶解于乙醇生理鹽水混合液的藥物之合物按照1. Omg/kg體重 的劑量瘤內注射。給藥后第1、2、3、4、5周用游標卡尺每周測量腫瘤長徑a和短徑b，并計算平 均直徑，即r=(a+b)/2。約5周后，腫瘤即可成長為合適的體積。取合格的注射了細胞的SCID 小鼠，對照組瘤內注射2ml生理鹽水，實驗組將溶解于乙醇生理鹽水混合液的藥物組合物按 照2.Omg/kg體重的劑量腹腔注射。給藥后第0、10、20天測定皮下移植瘤最長徑(a)及垂直徑 (d)，計算腫瘤相對體積，結果見表1藥物對多發性骨髓瘤體積的抑制作用(mm3)
[00；3 引
[0039]從表1可W看出，本發明的藥物具有較好的抑制腫瘤生長的功能，并且能夠顯著的 縮小腫瘤的體積。特別是與棚替佐米聯合給藥其能夠協同的抑制腫瘤的生長的功能。 化GAT-2~25的多膚與棚替佐米聯合給藥可W達到與ZLGAT-I與棚替佐米聯合給藥相同的 技術效果，具體數值在此不一一寶述。
【主權項】
1. 一種用于治療骨癌的藥物組合物，其特征是，取多肽0.01份、淀粉1份、甜蜜素或/和 蔗糖適量作為甜味劑、苯甲酸0.1份，混勻，過50目篩，滅菌后，包裝即可。2. 如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于:所述多肽為ZLGAT-1~25任一多肽，其 序列分別為SEQ ID NO: 1~25所示。3. 根據權利要求1-2所述的組合物，其特征是，還可以添加硼替佐米。4. 權利要求1-3所述的藥物組合物在制備用于特異性治療骨癌的藥物的應用。5. -種多肽，其特征是，為SEQ ID NO: 1-25任一所示的序列。
【專利摘要】本發明公開了藥物組合物在制備治療骨癌的藥物中的應用，所述藥物組合物含有ZLGAT多肽，也可以與硼替佐米聯合給藥。其有效治療量為0.1～20mg/Kg體重，給藥時，可以為口服給藥、靜脈注射給藥、皮下注射給藥、肌肉注射給藥。實驗證明：本發明的多肽可抑制腫瘤細胞生長，對骨癌有良好的抑制作用，具有廣泛的用途。
【IPC分類】C07K7/08, A61P35/00, A61K9/14, A61K38/05, A61K38/10
【公開號】CN105664134
【申請號】CN201610143651
【發明人】曹帥
【申請人】曹帥
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年3月13日