一種從藤茶中制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法
【專利說明】
[0001 ] 技術領域:
本發明涉及多酚聚合物的提取方法，特別是一種從藤茶中制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法。
[0002]【背景技術】:
糖尿病是一種以代謝紊亂為特征的疾病，其不能有效地將血液中的葡萄糖運輸至細胞。它主要包括先天性的1型糖尿病和后天的2型，1型糖尿病在兒童時期就可以被診斷，其體內不分泌胰島素，2型糖尿病是胰島素抵抗引起的，主要發現于成人，糖尿病病人中90%以上屬于這種類型。哺乳動物的α-糖苷酶位于小腸絨毛細胞的表面，是一種碳水化合物消化吸收的關鍵酶，其主要作用是將寡糖或二糖水解為單糖供人體吸收。因此，α-糖苷酶抑制劑能夠延緩飲食中碳水化合物的分解產物寡糖或二糖水解為葡萄糖，從而減少人體對葡萄糖的攝入，進而達到抑制餐后血糖升高的效果。目前，α-糖苷酶抑制劑主要通過微生物發酵或人工合成獲得，如阿卡波糖(acarbose)和米格列醇(miglitol)已作為糖尿病患者的臨床用藥。但這些藥物都明顯存在腸胃脹氣、腹瀉、腹部不適等副作用。隨著“綠色藥物”概念的興起，從天然材料中獲得有效、安全的糖苷酶抑制劑已成為功能性食品和醫藥開發的熱點。
[0003]藤茶，學名為顯齒蛇葡萄，為葡萄科蛇葡萄屬的一種野生木質落葉藤本植物，屬于典型的類茶植物，俗稱山甜茶、白茶、甘露茶、白毛猴、白茶等，主要分布于我國湖南、湖北、云南、貴州、廣東、廣西、福建等地。該植物多生長在海拔400到1300m的山地，集中或散生在陽坡或陰地混雜林中或山地溝邊。自古以來，壯族和瑤族人民將其幼嫩莖葉制成保健茶，用于治療感冒發燒，咽喉腫痛等疾病，夏天泡茶數日不餿，有“神茶”之稱，頗受消費者喜愛。根據民間長期飲用實踐和現代科學研究證實，其具有清熱潤肺、平肝益血、消炎解毒、降壓減脂、消除疲勞等功效，尤其對因煙酒過度、油膩過多、肝火過旺引起的身體不適如咽喉炎、消化功能障礙等癥，具有獨特功效。此外，對于其抑菌、抗氧化效果均有報道。二氫楊梅素在藤茶中的含量可高達40%，其被認為是藤茶中的主要活性成分。而本申請人發現含有65% 二氫楊梅素的藤茶水提物抑制葡糖糖苷酶的活性遠高于二氫楊梅素單體，表明藤茶中還含有其它抑制α_葡糖糖苷酶活性更高的物質。
[0004]
【發明內容】
:
本發明的目的是提供一種工藝簡單、實用性強的從藤茶中制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法。
[0005]本發明的技術方案是，一種從藤茶中制備具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:(1)藤茶水提物制備，將藤茶置于沸水中，浸泡一段時間，紗布過濾，將濾液冷凍干燥，得藤茶水提物；(2)柱層析分離:將步驟(1)所得藤茶提取物用50%的甲醇水溶液溶解，將其導入層析柱，先用一定濃度的甲醇水溶液沖去雜質，然后用一定濃度的丙酮水溶液洗脫，并收集洗脫液；(3)膜透析，將步驟(2)所得洗脫溶液真空旋轉蒸發去除丙酮，將所得水溶液放入透析袋中，用水透析一定時間，收集袋內的樣液，冷凍干燥，得多酚聚合物。步驟(1)藤茶和沸水的重量和體積比為1:10至1:50，浸泡時間不低于0.5 h。步驟
(2)中層析柱的填料為SephadexLH-20，沖洗雜質溶液的甲醇濃度不低于50%(v/v)，沖洗液用量不低于5個柱體積。洗脫液的丙酮濃度不低于60%(v/v)，洗脫液用量2-4個柱體積。步驟
(3)中透析袋的截留分子量為1000，透析時間不低于24h，中間換水不少于3次。
[0006]本發明的有益效果是:
(1)藤茶是我國民間長期飲用的保健茶，從其水提物中制得的多酚聚合物不僅安全性高，且具有突出的α-葡萄糖苷酶抑制效果，可用于新型的針對糖尿病人的功能性食品和醫藥產品開發，本發明擴大了藤茶的應用范圍。
[0007](2)本發明的生產工藝簡單，并且提取和純化步驟中所用的有機溶劑均能有效回收，節約了生產成本，因此本發明具有廣闊的市場前景。
[0008]
【附圖說明】:
圖1為藤茶水提物、二氫楊梅素和多酚聚合物的紫外光譜；
圖2為藤茶水提物、二氫楊梅素和多酚聚合的紅外光譜；
圖3為多酚聚合物的1H-NMR圖譜；
圖4為多酚聚合物的13C-NMR圖譜；
圖5為藤茶水提物、二氫楊梅素和多酚聚合物抑制α_葡萄糖苷酶的效果圖譜。
[0009]【具體實施方式】:
實施例1，
稱取40 g藤茶，加入2000 mL沸水，浸泡0.5 h，冷凍干燥，得藤茶提取物15.12 g，將藤茶提取物溶解于100 mL 50 %甲醇水溶液中(v/v)中，上填裝有Sephadex LH-20的層析柱(柱體積約為100 mL)，先用1000 mL的50 %的甲醇水溶液(v/v)沖去雜質，然后用300 mL的70 %丙酮水溶液(v/v)洗脫，將所得洗脫液放入截留分子量為1000的透析袋中，用純水透析24h，中間換水3次，最后收集袋內的樣液，冷凍干燥，得多酸聚合物503 mg ο
[0010]實施例2，
稱取40g藤茶，加入1600ml沸水，浸泡1 h，冷凍干燥，得藤茶提取物14.75g。將藤茶提取物溶解于100 mL 50 %甲醇水溶液中(v/v)中，上填裝有Sephadex LH-20的層析柱(柱體積約為100 mL)，先用500 mL70 %甲醇水溶液(v/v)沖去雜質，然后用400 mL80 %丙酮水溶液(v/V)洗脫，將所得水溶液放入截留分子量為1000的透析袋中，用純水透析48 h，中間換水6次。最后收集袋內的樣液，冷凍干燥，得多酸聚合物485 mg。
[0011]實施例3，
稱取40 g藤茶，加入1200 mL沸水，浸泡0.5 h，冷凍干燥，得藤茶提取物12.14g。將藤茶提取物溶解于100 mL 50 %甲醇水溶液中(v/v)中，上填充有Sephadex LH-20的層析柱(柱體積約為100 mL)，先用500 mL 60 %甲醇水溶液(v/v)沖去雜質，然后用300 mL 90 %丙酮水溶液(v/V)洗脫，將所得水溶液放入截留分子量為1000透析袋中，用純水透析48 h，中間換水3次，最后收集袋內的樣液，冷凍干燥，得多酸聚合物465 mg ο
[0012]上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉，而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發明創造的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種從藤茶中制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:(1)藤茶水提物制備，將藤茶置于沸水中，浸泡一段時間，紗布過濾，將濾液冷凍干燥，得藤茶水提物；(2)柱層析分離:將步驟(1)所得藤茶提取物用50%的甲醇水溶液溶解，將其導入層析柱，先用一定濃度的甲醇水溶液沖去雜質，然后用一定濃度的丙酮水溶液洗脫，并收集洗脫液；(3)膜透析，將步驟(2)所得洗脫溶液真空旋轉蒸發去除丙酮，將所得水溶液放入透析袋中，用水透析一定時間，收集袋內的樣液，冷凍干燥，得多酚聚合物。2.如權利要求1所述的一種從藤茶中制備具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:步驟(1)藤茶和沸水的重量和體積比為1:10至1:50，浸泡時間不低于0.5ho3.如權利要求1所述的一種從藤茶中制備具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:步驟(2)中層析柱的填料為Sephadex LH-20，沖洗雜質溶液的甲醇濃度不低于50%( v/v)，沖洗液用量不低于5個柱體積，洗脫液的丙酮濃度不低于60%( v/v)，洗脫液用量2-4個柱體積。4.如權利要求1所述的一種從藤茶中制備具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:步驟(3)中透析袋的截留分子量為1000，透析時間不低于24 h，中間換水不少于3次。
【專利摘要】一種從藤茶中制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，本發明的技術方案要點是：一種從藤茶中制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，(1)藤茶水提物制備，將藤茶置于沸水中，浸泡一段時間，紗布過濾，將濾液冷凍干燥，得藤茶水提物；(2)柱層析分離：將步驟(1)所得藤茶提取物用50%的甲醇水溶液溶解，使用上層析柱，先用一定濃度的甲醇水溶液沖去雜質，然后用一定濃度的丙酮水溶液洗脫，并收集洗脫液；(3)膜透析，將步驟(2)所得洗脫溶液真空旋轉蒸發去除丙酮，將所得水溶液放入透析袋中，用水透析一定時間，收集袋內的樣液，冷凍干燥，得多酚聚合物。本發明的生產工藝簡單，成本較低。
【IPC分類】A61K36/87
【公開號】CN105456549
【申請號】CN201510921525
【發明人】劉本國, 陳玉珍, 耿升, 劉長忠, 馬漢軍
【申請人】河南科技學院
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2015年12月14日