甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法

甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥品技術領域，尤其涉及一種紫杉醇脂質體的合成方法。
【背景技術】
[0002]脂質體(liposome)是一種新型藥物載體，可將難溶性紫杉醇包封在脂質體磷脂雙分子層中，改善藥物的溶解性。紫杉醇是從紫杉(紅豆杉)屬植物中提取出的二萜類化合物，是近年來廣泛應用的抗腫瘤新藥。然而紫杉醇存在水溶性差的缺點，給它的使用帶來了不便，尤其靜脈給藥。而且應用脂質體作為抗腫瘤藥物的載體，可明顯地增加藥物療效、降低毒副作用。但是，作為藥物載體，脂質體也存在一些問題，如對組織器官特異性差、選擇性低等。在脂質體上連接一種識別分子(配體)，利用配體分子的特異性和專一性，通過受體介導的內吞作用主動靶向藥物至靶區釋放藥物，可增加藥物靶向的特異性和選擇性，減少對非祀組織器官損傷，進一步提高療效。甘草酸(glycyrrhizin, GL)是甘草的主要成分之一，Negishi在20世紀90年代初證實了大鼠肝細胞膜庫索細胞組分中含有大量甘草酸特異結合位點，甘草酸與該位點的結合呈受體特有的可飽和性、高度特異性，一些研究結果也表明以甘草次酸或甘草酸修飾的載體材料具有趨肝性，國內也有相關文獻報道用甘草酸作為肝靶向配體來修飾藥物載體，以提高藥物對肝臟的靶向性。由此本文擬采取甘草酸在卞基二環己基碳異脲保護其糖基上的游離羧基條件下與硬脂醇發生酯化反應，最后氫化脫保護合成甘草酸的脂肪長鏈修飾物(GL0ST)，將其作為脂質體配體，對紫杉醇脂質體進行表面修飾。
[0003]現有的甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法步驟復雜，效率低且對環境造成污染。

【發明內容】

[0004]本發明就是針對上述問題，提供一種操作簡單，效率高且環境友好的一種甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法。
[0005]為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案。
[0006]甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法，包括下步驟。
[0007](1)在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環己基異脲與DMF的混合溶液，反應液在冰水浴冷卻下攪拌過夜，生成白色沉淀，反應液過濾，濾液減壓濃縮。經硅膠柱層析，得純化產物6，6- 二卞基甘草酸。將硬脂醇與二環己基烴化二亞胺的混合物在CuCl催化下于85°C攪拌2小時，向混合物中滴加二卞基甘草酸與DMF的混合液，反應液于50°C攪拌3小時。過濾，濾餅用乙酸乙酯潤洗，濾液合并，真空干燥得粗品，經硅膠柱層析純化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，將二卞基-硬酯醇基甘草酸與異丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常壓氫解，反應完畢后，過濾，濾液真空干燥得到目標產物GLOSTo
[0008](2)稱取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65°C旋轉薄膜蒸發儀減壓蒸餾除去乙醇，在瓶壁上形成均勻的類脂薄膜。帶膜的茄形瓶減壓干燥8小時，加70mL磷酸緩沖液溶解，將GLOST適量(用無水乙醇溶解)注入其中，探頭超聲水合20min，過0.22lMn濾膜2次，高壓均質二次，即得甘草酸修飾紫杉醇脂質體。
[0009](3)精密吸取樣品液0.05mL,上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL,收集30份，加脂質體消解液4mL，搖勻、離心，吸取20μ?注入液相色譜，計算峰面積，繪制洗脫曲線。1 一 6mL是空白洗脫液，7-20mL有乳光帶的是脂質體部分，26-32mL是游離藥物，脂質體與藥物能夠完全分離，取三批樣品，上柱分離，收集前20mL洗脫液測定PTX含量，脂質體包封率=系統中包封藥量/系統中包封與未包封總藥量X 100%，測定包封率均值為
86.12%ο
[0010](4)取GL0ST-PTX脂質體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質的具塞錐形瓶中，密塞，置37 °C水浴恒溫振蕩，定時取樣，測定PTX含量，以藥物累積釋放度對時間線性擬合。
[0011 ] 作為一種優選方案，標準品溶液制備取紫杉醇標準品適量，精密稱定，加甲醇配成濃度為1.0mg.mL的溶液，即得。
[0012]本發明有益效果。
[0013]本發明本文通過采用化學法合成甘草酸修的脂肪長鏈飾物(GL0ST)，再用GL0ST的對紫杉醇脂質體進行表面修飾，制備對肝臟具有靶向效應GL0ST-PTX脂質體。用GL0ST對脂質體進行修飾，一定程度上會增加脂質體的粒徑。肝竇狀隙的平均孔徑約為106nm，最大可達200?300 nm。采用薄膜分散法制備甘草酸修飾紫杉醇脂質體，粒徑達到(105.2±23.5)nm, 90%粒子粒徑<150nm。因此，所得的GL0ST-PTX脂質體能透過肝竇狀隙，利用葡聚糖凝膠柱和高效液相色譜檢測脂質體的包封率。是一種效果好且操作簡單的甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法。
【具體實施方式】
[0014]甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法，包括下步驟。
[0015](1)在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環己基異脲與DMF的混合溶液，反應液在冰水浴冷卻下攪拌過夜，生成白色沉淀，反應液過濾，濾液減壓濃縮。經硅膠柱層析，得純化產物6，6- 二卞基甘草酸。將硬脂醇與二環己基烴化二亞胺的混合物在CuCl催化下于85°C攪拌2小時，向混合物中滴加二卞基甘草酸與DMF的混合液，反應液于50°C攪拌3小時。過濾，濾餅用乙酸乙酯潤洗，濾液合并，真空干燥得粗品，經硅膠柱層析純化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，將二卞基-硬酯醇基甘草酸與異丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常壓氫解，反應完畢后，過濾，濾液真空干燥得到目標產物GLOSTo
[0016](2)稱取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液(PH=5.6)，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65°C旋轉薄膜蒸發儀減壓蒸餾除去乙醇，在瓶壁上形成均勻的類脂薄膜。帶膜的茄形瓶減壓干燥8小時，加70mL磷酸緩沖液溶解，將GL0ST適量注入其中，探頭超聲水合20min,過0.22lMn濾膜2次，高壓均質二次，即得甘草酸修飾紫杉醇脂質體。
[0017](3)精密吸取樣品液0.05mL，上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL,收集30份，加脂質體消解液4mL，搖勻、離心，吸取20μ?注入液相色譜，計算峰面積，繪制洗脫曲線。1 一 6mL是空白洗脫液，7-20mL有乳光帶的是脂質體部分，26-32mL是游離藥物，脂質體與藥物能夠完全分離，取三批樣品，上柱分離，收集前20mL洗脫液測定PTX含量，脂質體包封率=系統中包封藥量/系統中包封與未包封總藥量X 100%，測定包封率均值為
86.12%ο
[0018](4)取GL0ST-PTX脂質體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質的具塞錐形瓶中，密塞，置37 °C水浴恒溫振蕩，定時取樣，測定PTX含量，以藥物累積釋放度對時間線性擬合。
[0019]標準品溶液制備取紫杉醇標準品適量，精密稱定，加甲醇配成濃度為1.0mg -mL的溶液，即得。
【主權項】
1.甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于，包括下步驟； (1)在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環己基異脲與DMF的混合溶液，反應液在冰水浴冷卻下攪拌過夜，生成白色沉淀，反應液過濾，濾液減壓濃縮；經硅膠柱層析，得純化產物6，6- 二卞基甘草酸；將硬脂醇與二環己基烴化二亞胺的混合物在CuCl催化下于85°C攪拌2小時，向混合物中滴加二卞基甘草酸與DMF的混合液，反應液于50°C攪拌3小時；過濾，濾餅用乙酸乙酯潤洗，濾液合并，真空干燥得粗品，經硅膠柱層析純化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，將二卞基-硬酯醇基甘草酸與異丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常壓氫解，反應完畢后，過濾，濾液真空干燥得到目標產物GLOST ； (2)稱取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65°C旋轉薄膜蒸發儀減壓蒸餾除去乙醇，在瓶壁上形成均勻的類脂薄膜；帶膜的茄形瓶減壓干燥8小時，加70mL磷酸緩沖液溶解，將GLOST適量(用無水乙醇溶解)注入其中，探頭超聲水合20min，過0.22lMn濾膜2次，高壓均質二次，即得甘草酸修飾紫杉醇脂質體； (3)精密吸取樣品液0.05mL,上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL，收集30份，加脂質體消解液4mL，搖勻、離心，吸取20μ?注入液相色譜，計算峰面積，繪制洗脫曲線；1 - 6mL是空白洗脫液，7-20mL有乳光帶的是脂質體部分，26-32mL是游離藥物，脂質體與藥物能夠完全分離，取三批樣品，上柱分離，收集前20mL洗脫液測定PTX含量，脂質體包封率=系統中包封藥量/系統中包封與未包封總藥量X 100%,測定包封率均值為86.12% ； (4)取GLOST-PTX脂質體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質的具塞錐形瓶中，密塞，置37°C水浴恒溫振蕩，定時取樣，測定PTX含量，以藥物累積釋放度對時間線性擬合。2.根據權利要求1所述甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法，其特征在于，標準品溶液制備取紫杉醇標準品適量，精密稱定，加甲醇配成濃度為1.0mg.mL的溶液，即得。
【專利摘要】甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法屬于藥品技術領域，尤其涉及一種紫杉醇脂質體的合成方法。本發明提供一種操作簡單，效率高且環境友好的一種甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法。甘草酸修飾紫杉醇脂質體的制備方法，包括下步驟。（1）在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環己基異脲與DMF的混合溶液。（2）稱取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，（3）精密吸取樣品液0.05mL，上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL，收集30份。（4）取GLOST-PTX脂質體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質的具塞錐形瓶中。
【IPC分類】A61K31/337, A61K47/48, A61K9/127, A61P35/00
【公開號】CN105311644
【申請號】CN201410376266
【發明人】孫仁
【申請人】孫仁
【公開日】2016年2月10日
【申請日】2014年8月3日