一種含升麻的植物組合物提取方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及中藥制劑技術領域，具體涉及一種含升麻的植物組合物提取方法及應 用。
【背景技術】
[0002] 含升麻的植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子蘭 40份作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時，合并煎液，濾過，濃 縮成稠膏，制粒，干燥，包糖衣，即得。
[0003] 現有技術中，尚未有含升麻的植物組合物在提取制備方面采用微波技術的報道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響 了本品在臨床上應用。
【發明內容】
[0004] 發明目的：為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種含升麻的植物組合物 提取方法。
[0005] 本發明的另一個目的在于提供一種含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺 嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用。
[0006] 技術方案：本發明的目的是通過如下的方案實現的：
[0007] -種含升麻的植物組合物提取方法，植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、 毛葉輪環藤50份、蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥， 粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取 2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成片劑、膠 囊或顆粒劑。
[0008] 上述一種含升麻的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] -種含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥 物中的應用，含升麻的植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子 蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘， 合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液， 減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增 殖藥物中的應用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011] 現有技術中，含升麻的植物組合物每片0. 4g，每次4片，一日3次，采用本發明制備 成的含升麻的植物組合物每片〇. 4g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0012] 以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此 理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上述內容所實現的技術均 屬于本發明的范圍。
[0013] 實施例1
[0014] 取升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成片劑，每片〇. 4g。
[0015] 實施例2
[0016] 取升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成膠囊。
[0017] 實施例3
[0018] 取升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成顆粒劑。
[0019] 牛耳巖白菜為苦苣苔科唇柱苣苔屬植物牛耳朵Chirita eburnea Hance，以根或 全草入藥。四季可采。補虛，止咳，止血，除濕。用于陰虛咳嗽，肺結核咳血，紅崩，白帶。外 用治外傷出血，癰瘡。本發明以根入藥。
[0020]毛葉輪環藤，拉丁名為Cycleabarbata(Wall. )Miers，毛茛目，防已科，散熱解毒， 散淤止痛。用于急性扁桃體炎，咽喉炎，牙痛，胃痛，腹痛，胃腸炎，瘧疾，跌打損傷。本發明 以全草入藥。
[0021] 蘆子蘭，胡椒科胡椒屬植物蕁麻葉胡椒，以全株入藥。全年可采，切片曬干。理氣 止痛。用于感冒，胃痛，痛經，跌打損傷，風濕骨痛。
[0022] 實施例4 :含升麻的植物組合物抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖的實 驗研究資料
[0023] 1實驗材料
[0024] I. 1實驗用細胞株
[0025] 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞，南京醫科大學實驗動物中心實驗室細胞庫， DMEM+10% FBS常規培養。
[0026] 1. 2實驗藥物
[0027] 研究藥物：本發明含升麻的植物組合物：按實施例1方法制備。
[0028]藥液儲液：稱取IOOmg含升麻的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0. 2ym濾器過 濾，500yIdoff管分裝，-20°C存儲，同時0.2ym濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0029] I. 3實驗試劑
[0030] DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批號：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號：2009/10) !Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號：2010242); Str印tomycin Sulfate (AMRESC0公司批號：2010382);無水乙醇（南京化學試劑有限公司 批號：080310182) ;MTT(Biosharp 批號：0793) ;PBS(實驗室自配）；
[0031] 1.4實驗器材
[0032] 萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號：DMlL);可見-紫外光微孔板檢測儀（美國MD 公司型號：SPECTRA MAX 190) ;C02培養箱（FORMA型號：3111);超凈臺（蘇凈集團安泰公 司制造型號：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國Spring公司型號：S/N 020579);精密移液器（法 國吉爾森公司型號：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號：BT323S);全自動高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號：MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱（上海精密實驗設備公司型 號：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號：2001);低速離心 機（上海安亭科學儀器廠型號：KA-1000) ;0? 2ym濾器（MILLIP0RE型號：SLGP033RB) ;10cm 培養皿（NEST公司）、96孔培養板（NEST公司）；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。
[0033] 2實驗方法
[0034] 1)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02進行常 規培養（10cm培養皿），當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入 3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養基中和反 應，吹打細胞后將其轉入離心管中，1000 rpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X IO4個/ml。
[0035]2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 y 1，培養板放入細胞培養箱 中（37°C，5% C02)常規培養。
[0036] 3)根據細胞生長情況，一般長至50 % -70 %，加入含升麻的植物組合物溶液，繼續 培養24h。
[0037]4) 24h 后加入 20 y I MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，繼續培養 4h。
[0038] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 y 1二甲基亞砜，置搖 床上低速振蕩l〇min，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0039] 6)同時設置本底（不加細胞，只加培養液），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解 介質、培養液、MTT、二甲基亞砜），每組設定6個復孔。
[0040] 7)結果以藥物對細胞的抑制率表示：
[0041] 細胞增值抑制率（％ )=(對照孔OD值-給藥孔OD值）/對照孔OD值X 100 %。 實驗重復3次。
[0042] 3統計處理
[0043] 采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以 mean iS. D.表不。
[0044] 4實驗結果
[0045] MTT法實驗后統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對大鼠腎上腺 嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖抑制有差異（P〈0. 05)，劑量在lOmg/ml時該差異具有顯著性 (P〈0. 01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異（P〈0. 001)。
[0046] 表1含升麻的植物組合物對大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖抑制影響研究 這土SD)
[0047]
[0048] 注：與對照組比較，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0049] 5實驗結論
[0050] 含升麻的植物組合物可以抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖，減少大鼠 腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞的細胞生長數目，該作用呈劑量依賴性。
【主權項】
1. 一種含升麻的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由升麻100份，牛耳巖 白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取 上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為 400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 % 乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔 料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。2. 根據權利要求1所述一種含升麻的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含升麻的植物組合物在抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的 應用，其特征在于含升麻的植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、 蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的 70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分 鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫 液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據權利要求3所述一種含升麻的植物組合物在抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12 細胞增殖藥物中的應用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分 鐘。
【專利摘要】本發明提供一種含升麻的植物組合物提取方法，由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環藤50份、蘆子蘭40作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發明還提供了含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞增殖藥物中的應用。
【IPC分類】A61P35/00, A61K36/71
【公開號】CN105193967
【申請號】CN201510580453
【發明人】趙明亮
【申請人】南京正亮醫藥科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月12日