從柿子中提取總酚的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物提取技術領域，具體涉及一種從柿子中提取總酚的方法。
【背景技術】
[0002] 柿子（PersimmonDiospryroskakiL)果肉中含量豐富的單寧類物質。研究表明， 柿子總酚具有很強的抗氧化性以及和蛋白質結合能力，具有抑制人淋巴細胞白血病、降血 壓、清除體內自由基以及明顯抑制蝮蛇、眼鏡蛇、五步蛇毒液中多種酶類以及毒素的活性。 雖然也有報道稱柿子提取物，有效成分為黃酮、三萜類和可水解單寧，對枯草芽孢桿菌表現 出了一定的耐藥性，但耐藥性并不穩定。目前并未見到柿子總酚可用于抑制變形鏈球菌的 報道。
【發明內容】
[0003] 本發明要解決的技術問題是提供一種從柿子中提取總酚的方法，提取的總酚可有 效抑制變形鏈球菌，具有很好的防齲齒效果。
[0004] 本發明提供的技術方案是從柿子中提取總酚的方法，包括以下步驟：
[0005] 1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液備用；
[0006] 2)將濾液濃縮，加入95V%乙醇，放置過夜，離心，取上清液；
[0007] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0008] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過濾，取濾液通過截留分子 量為10000~15000的中空纖維膜，收集透過液備用；
[0009] 5)將上述透過液通過截留分子量為300~400的中空纖維膜，收集濃縮液，干燥， 即為柿子總酚粉末。
[0010] 步驟1)中，乙醇的體積濃度為70~80%，其加入量為柿子重量的10~20倍，在 60~80°C下提取1~3次，每次1~3h。
[0011] 步驟2)中，乙醇的加入量為濃縮液的2~4倍。
[0012] 步驟3)中，水的加入量為浸膏重量的3~5倍。
[0013] 本發明提取得到的柿子總酚具有很好的抑制變形鏈球菌的效果，可用于防齲齒。
【具體實施方式】
[0014] 以下具體實施例對本發明作進一步闡述，但不作為對本發明的限定。
[0015] 實施例1
[0016] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的10倍的70v%乙醇，在60°C下提取lh，合并 提取液，過濾，取濾液備用；
[0017] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的2倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0018] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0019] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的3 倍，過濾，取濾液通過截留分子量為10000~15000的中空纖維膜，收集透過液備用；
[0020] 5)將上述透過液通過截留分子量為300~400的中空纖維膜，收集濃縮液，真空冷 凍干燥，即為柿子總酚粉末。
[0021] 實施例2
[0022] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的20倍的80v%乙醇，在80°C下提取3次，每 次3h，合并提取液，過濾，取濾液備用；
[0023] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的4倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0024] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0025] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的5 倍，過濾，取濾液通過截留分子量為10000~15000的中空纖維膜，收集透過液備用；
[0026] 5)將上述透過液通過截留分子量為300~400的中空纖維膜，收集濃縮液，真空冷 凍干燥，即為柿子總酚粉末。
[0027] 實施例3
[0028] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次2h，合并提取液，過濾，取濾液備用；
[0029] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的3倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0030] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0031] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的4 倍，過濾，取濾液通過截留分子量為10000~15000的中空纖維膜，收集透過液備用；
[0032] 5)將上述透過液通過截留分子量為300~400的中空纖維膜，收集濃縮液，真空冷 凍干燥，即為柿子總酚粉末。
[0033] 對照實施例1
[0034] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次2h，合并提取液，過濾，取濾液備用；
[0035] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的3倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0036] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0037] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，真空冷凍干燥，即為柿子總酚粉末。
[0038] 實驗例（體外抑菌試驗）
[0039] 1、實驗方法：
[0040] 1)分別取實施例1~3以及對照實施例1的柿子總酚粉末Ig粉碎后加IOml無菌 水配成混合溶液。
[0041] 2)抑菌片的制備：取無菌并干燥的濾紙片4片，每片分別滴加實施例1~3以及 對照實施例1制成的混合溶液20 y 1，然后將濾紙片平放于清潔的無菌平面皿內，開蓋置溫 箱（37°C )中烤干，或置室溫下自然干燥后備用。陰性對照組抑菌片的制備：取無菌干燥濾 紙片，每片滴加無菌蒸餾水20 y 1，干燥后備用。
[0042] 3)接種變形鏈球菌：用無菌棉拭子蘸取濃度為5XIO5~5X10 6cfu/ml變形鏈球 菌菌懸液，在營養瓊脂培養基平板表面均勻涂抹3次，每涂抹一次，平板轉動60°，最后將 棉拭子繞平板邊緣涂抹一周，蓋好平皿，置室溫干燥5min。
[0043] 4)抑菌片貼放：每次貼放一個染菌平板，每個平板貼放實施例以及對照實施例的 4片抑菌片和1片陰性對照組抑菌片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面，各樣片中心之間 相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上。貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼 于平板表面，蓋好平皿，置于37°C溫箱內培養16~18h，用游標卡尺測量抑菌環的直徑（包 括貼片）并記錄，實驗重復三次。
[0044] 2、實驗結果
【主權項】
1. 從柿子中提取總酚的方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液備用； 2) 將濾液濃縮，加入95v%的乙醇，放置過夜，離心，取上清液； 3) 將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 4) 將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過濾，取濾液通過截留分子量為 10000~15000的中空纖維膜，收集透過液備用； 5) 將上述透過液通過截留分子量為300~400的中空纖維膜，收集濃縮液，干燥，即為 柿子總酚粉末。2. 根據權利要求1所述的從柿子中提取總酚的方法，其特征在于：步驟1)中，乙醇的 體積濃度為70~80%，其加入量為柿子重量的10~20倍，在60~80°C下提取1~3次， 每次1~3h。3. 根據權利要求1所述的從柿子中提取總酚的方法，其特征在于：步驟2)中，乙醇的 加入量為濃縮液的2~4倍。4. 根據權利要求1所述的從柿子中提取總酚的方法，其特征在于：步驟3)中，水的加 入量為浸霄重量的3~5倍。
【專利摘要】本發明公開了一種從柿子中提取總酚的方法，包括以下步驟：1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液備用；2)將濾液濃縮，加入95V％乙醇，放置過夜，離心，取上清液；3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過濾，取濾液通過截留分子量為10000～15000的中空纖維膜，收集透過液備用；5)將上述透過液通過截留分子量為300～400的中空纖維膜，收集濃縮液，干燥，即為柿子總酚粉末。本發明提取的柿子總酚具有很好的抑制變形鏈球菌的作用，可用于防齲齒。
【IPC分類】A61P31/04, A61P1/02, A61K36/44
【公開號】CN105193899
【申請號】CN201510759681
【發明人】文繼承, 蔣元勇, 朱昂輝, 雍小軍, 易華, 李麗金
【申請人】桂林茗興生物科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年11月10日