一種人工培養口腔細菌移植在口腔疾病治療中的應用
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一種人工培養口腔細菌移植在口腔疾病治療中的應用，通過以菌治菌的方法，實現口腔疾病的治療和保護。
【背景技術】
[0002]口腔微生態的變化可能導致各種口腔疾病的發生，是牙髓炎、牙尖周炎、牙齦炎、牙周炎、急性壞死性潰瘍性牙周炎、口腔炎等的主要誘因。以往，考慮到變異鏈球菌經常從齲齒病人病變部位分離得到，因而設法使用抗生素將其清除已達到預防齲病的目的，但結果收效甚微。究其原因是因為變異鏈球菌屬于口腔內的正常菌群成員之一，要想徹底清除它，一是操作難度大，二者會嚴重的破壞口腔原有的微生態平衡，從而導致菌群失調。因此，齲病和牙周病理論上來講是由于正常的、共生的口腔菌群失調引起的，因此在治療上應在保護口腔微生態生態平衡的前提下，進行治療和采取預防措施，使其恢復在生物群落中的正常地位和作用。
[0003]抗生素的濫用，有可能在殺傷變異鏈球菌的同時造成原有菌群系統的失調，從而引發更為嚴重的后果，導致耐藥菌株的出現。因此，嘗試利用益生菌制劑來恢復和調節口腔微生態平衡不失為一種良好的選擇。而要達到以菌防菌的目的，首先就要弄清楚口腔微生態系統中菌群的分布和數量變換，為后期口腔微生態制劑的開發和機會致病菌的防治提供基本的數據。
[0004]目前，活菌技術作為一種常用技術廣泛應用于食品、醫學等領域，但是該技術分辨率低、重復性差、依賴于培養，因此對一些生長要求比較苛刻的微生物難以進行監測。因此，本研究擬將活菌計數方法和高通量測序技術相結合，從菌群數量和種類上對正常人口腔和病人口腔中的微生物進行深入研究，為后期口腔類疾病的預防、治療和口腔藥物的研發提供理論依據。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種人工培養口腔細菌移植在口腔疾病治療中的應用，可以通過調節和恢復人體口腔微生態，實現多種口腔疾病的治療，并能長期有效的預防口腔疾病的發生。
[0006]本發明所述應用方法包括下列步驟:
1、口腔樣品采集及篩選條件:采用生理鹽水漱口的方式，采集健康人群的口腔內細菌樣品，離心10000 rpm/min 3 min，收集菌體并用生理鹽水懸浮；對口腔細菌采集者篩選條件為:
a、至少近3-6個月內沒有發生腹瀉且沒有使用過抗生素；
b、無口腔疾病；
c、沒有不良性生活嗜好；
d、無傳染性疾病，如HIV、乙肝、丙肝等； 2、口腔細菌的分離:取新鮮的健康人群的生理鹽水懸浮后的口腔樣品涂布于MRS平板、BHI平板、LB平板、LB+5%脫脂乳平板、血平板上，置于厭氧和需氧兩種條件下培養，挑選單菌落；
C、進行細菌鑒定后，保存分離得到的口腔益生菌；
3、凍干粉制備:將分離的得到的益生菌二次活化后，離心10000rpm/min 3 min，生理鹽水洗滌5次，米用凍干機制成凍干粉，保留備用；
4、噴劑的制備:將口腔益生菌凍干粉取適量溶解于生理鹽水中，制成噴劑，多次噴入益生菌制劑，有利于口腔益生菌的增殖，恢復口腔微生態平衡，達到治療和預防口腔疾病的效果O
[0007]本發明的有益效果:本發明采用細菌間的拮抗作用替代抗生素及其他藥物，通過恢復口腔微生態平衡來達到治療和預防口腔疾病的效果；且噴劑的治療形式簡單、安全，適用于各類口腔疾病患者，能起到預防和治療如牙髓炎、牙尖周炎、牙齦炎、牙周炎、急性壞死性潰瘍性牙周炎、口腔炎等口腔疾病的作用。
【具體實施方式】
[0008]本發明所述應用方法包括下列步驟:
1、口腔樣品采集及篩選條件:采用生理鹽水漱口的方式，采集健康人群的口腔內細菌樣品，離心10000 rpm/min 3 min，收集菌體并用生理鹽水懸浮；對口腔細菌采集者篩選條件為:
a、至少近3-6個月內沒有發生腹瀉且沒有使用過抗生素；
b、無口腔疾病；
c、沒有不良性生活嗜好；
d、無傳染性疾病，如HIV、乙肝、丙肝等；
2、口腔細菌的分離:取新鮮的健康人群的生理鹽水懸浮后的口腔樣品涂布于MRS平板、BHI平板、LB平板、LB+5%脫脂乳平板、血平板上，置于厭氧和需氧兩種條件下培養，挑選單菌落；
C、進行細菌鑒定后，保存分離得到的口腔益生菌；
3、凍干粉制備:將分離的得到的益生菌二次活化后，離心10000rpm/min 3 min，生理鹽水洗滌5次，米用凍干機制成凍干粉，保留備用；
4、噴劑的制備:將口腔益生菌凍干粉取適量溶解于生理鹽水中，制成噴劑，多次噴入益生菌制劑，有利于口腔益生菌的增殖，恢復口腔微生態平衡，達到治療和預防口腔疾病的效果O
【主權項】
1.一種人工培養口腔細菌移植在口腔疾病治療中的應用，其特征是: (1)、口腔樣品采集及篩選條件:采用生理鹽水漱口的方式，采集健康人群的口腔內細菌樣品，離心10000 rpm/min 3 min，收集菌體并用生理鹽水懸浮；對口腔細菌采集者篩選條件為: a、至少近3-6個月內沒有發生腹瀉且沒有使用過抗生素； b、無口腔疾病； c、沒有不良性生活嗜好； d、無傳染性疾病，如HIV、乙肝、丙肝； (2)、口腔細菌的分離:取新鮮的健康人群的生理鹽水懸浮后的口腔樣品涂布于MRS平板、BHI平板、LB平板、LB+5%脫脂乳平板、血平板上，置于厭氧和需氧兩種條件下培養，挑選單菌落； C、進行細菌鑒定后，保存分離得到的口腔益生菌； (3)、凍干粉制備:將分離的得到的益生菌二次活化后，離心10000rpm/min 3 min，生理鹽水洗滌5次，采用凍干機制成凍干粉，保留備用； (4 )、噴劑的制備:將口腔益生菌凍干粉取適量溶解于生理鹽水中，制成噴劑，多次噴入益生菌制劑，有利于口腔益生菌的增殖，恢復口腔微生態平衡，達到治療和預防口腔疾病的效果。
【專利摘要】一種人工培養口腔細菌移植在口腔疾病治療中的應用，其特征是通過采集經過多項條件篩選的健康人群口腔內細菌樣品，如至少近3-6個月內沒有使用過抗生素、無口腔疾病、沒有不良生活習慣等多項篩選條件；采用平板分離技術，分別在厭氧和需氧的條件下培養，挑選可培養的口腔內益生菌群；獲得的益生菌制成噴劑，用于口腔疾病的治療。該發明采用細菌間的拮抗作用替代抗生素及其他藥物，通過恢復口腔微生態平衡來達到治療和預防口腔疾病的效果；且噴劑的治療形式簡單、安全，適用于各類口腔疾病患者，能起到預防和治療如牙髓炎、牙尖周炎、牙齦炎、牙周炎、急性壞死性潰瘍性牙周炎、口腔炎等口腔疾病的作用。
【IPC分類】A61K35/741, A61P1/02
【公開號】CN105193857
【申請號】CN201510619648
【發明人】陳廷濤, 辛洪波, 王鑫, 楊少國, 莫玲
【申請人】南昌大學
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月25日