增加驢受胎率的冷凍精人工授精方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及牲畜人工授精方法。 技術背景
[0002] 驢屬于馬屬動物，為了增加繁育量，一般采取人工授精方法。由于馬屬動物的卵巢 結構的特殊性，在出現發情表現后發情持續期變化較大，一般會持續3~14天，驢的排卵 時間也會因卵巢上卵泡生長位置的差異，排卵時間也會出現較大差異，排卵時間多在發情 的第7~10天，在發情停止前的12~24小時內排卵不等，這就造成了驢輸精時間難以確 定。傳統技術是通過對卵巢的直腸觸診，在感覺到卵泡發育到卵泡柔軟有彈性，具波動以后 時實施輸精，即直腸檢查的第3期和第4期，但直腸觸診技術需要技術人員很長時間的經驗 積累，不同人對卵泡發育階段的判斷也存在差異，即使準確判定卵泡發育的階段，也難以準 確的確定排卵時間，3期的卵泡會維持1~3天，4期的卵泡也會持續1-3天，也難以確定 排卵時間，這就造成了情期排卵難以控制，再加上驢冷凍精的處理過程不當，冷凍精的活率 低，一次人工輸冷凍精后受胎率不足25%，需要對驢多次人工輸精才能提高受胎率，費時費 力。
【發明內容】
[0003] 為了提高驢人工授精的受胎率，本發明的目的是提出一種增加驢受胎率的冷凍精 人工授精方法。
[0004] 本發明的目的是這樣達到的：
[0005] -種增加驢受胎率的冷凍精人工授精方法，其特征在于，它包括鮮精的冷凍處理 過程、冷凍精的解凍處理過程和誘導排卵定時輸精過程，具體是：
[0006] 鮮精的冷凍處理過程如下：
[0007]1、采用假陰道采集公驢的精液，精液經滅菌的4層消毒紗布過濾，除去膠凍，用肉 眼觀察原精液的顏色，正常精液色澤呈乳白、灰白色或淡黃色，取正常精液并記錄原精液 量，在配有38°C恒溫裝置的相差顯微鏡上評定活率，取活率多70 %的原精進行稀釋；稀釋 按原精與稀釋液1 :1的比例等溫稀釋；稀釋液按以下成分配比：Tris33- 34g、檸檬酸8- 9g、葡萄糖15 -16.g、甘油70 - 71mL、青霉素5萬單位、鏈霉素5萬單位：
[0008] 2、稀釋后的鮮精裝入離心管中，在22°C恒溫放置10分鐘，在離心機上按每分鐘 1850轉離心15每分鐘，去掉離心管中的上清液，將粥狀精液用冷凍稀釋液按1 :1的比例 進行稀釋；稀釋時先加入冷凍稀釋液稀釋量的1/4,經初步稀釋的精液在22°C下放置10分 鐘，然后，加入剩余的稀釋液完全稀釋；完全稀釋的用0. 5mL細管進行分裝，然后超聲波封 口；把分裝封口后的細管精液放入不透明的塑料盒內，再把塑料盒放入4°C的冷藏柜中平 衡3~4小時；同時開啟液氮罐閥門把全自動冷凍儀降溫至4°C備用；把平衡后的細管精液 迅速放入全自動冷凍儀，按照最佳冷凍曲線程序自動完成冷凍過程；凍冷凍過程后放入液 氮罐中保存；所述的冷凍稀釋液制作方法如下：
[0009] 取以下成分：三羥基三甲基甲烷33- 34g、檸檬酸8 - 9g、葡萄糖15 - 16g、甘油 70 - 71mL、青霉素5萬單位、鏈霉素5萬單位配制成稀釋液，將適量稀釋液裝入量筒，量筒 中再加入20%體積份的卵黃，用封口膜封口后，上下顛倒混勻，置于4°C冰箱中過夜分層； 之后，去除上層泡沫，取稀釋液中層倒入燒杯中沉淀，棄去下層沉淀物；經4000轉/分離心 3次，每次30分鐘，離心后棄去表層雜質及底層沉淀物，倒入瓶中，加入適量甘油，用磁力攪 拌器充分攪拌均勻，置于4°C冰箱中存放備用，存放時間不宜超過24小時。
[0010] 冷凍精的解凍處理過程為：給待孕母驢人工授精前，從液氮罐內取出精液細管，迅 速置于38°C水浴瞬時解凍，解凍后用吸水紙擦干細管，剪去細管無棉塞一端的封口，安裝在 輸精槍上，然后予以保溫，并在1小時之內完成輸精過程；
[0011] 誘導排卵定時輸精過程為：在驢出現發情表現后的第7~10天內，人工將直腸B超探頭經驢直腸送至卵巢部位，通過調整直腸探頭在卵巢部位的掃描面，檢測卵巢上卵泡 發育的大小尺寸，當發現卵泡直徑達到3. 4-3. 5cm時，給驢注射300單位的促黃體素或絨毛 膜促性腺素，使驢集中時間進行排卵，降低卵泡發育中閉鎖的幾率，并在排卵前10小時至 排卵后6小時內、用輸精槍實施兩次人工輸精，每次輸精劑量5mL，確保驢精子與驢卵子在 具有受精能力的時間內相遇完成受精過程，使驢受胎。
[0012] 本發明采用誘導排卵定時輸精的技術措施，積極效果如下：
[0013] 1、利用B超技術檢測卵巢，可清晰見到卵泡的大小，與傳統直腸觸診技術相比，便 于技術人員掌握和技術推廣，不需要長時間的經驗積累和長時間培訓，同時避免檢測人員 對卵泡發育階段的誤判，減少對傳統直腸觸診技術的依賴。
[0014] 2、在卵泡達到特定大小后利用激素處理，可以降低卵泡發育中閉鎖的幾率，同時 卵泡發生排卵的時間相對比較集中，可以實現排卵后6小時內或排卵前10小時定時進行輸 精，減少了傳統直腸觸診技術難以確定排卵時間的問題。
[0015] 3、保證了冷凍精液的活性；通過在規定時間內兩次輸精，保障驢精子與驢卵子均 在具有受精能力的時間內相遇完成受精，同時由于輸精次數少，減少了母驢子宮的排異反 應，可以在一定程度上提尚受胎率，特別是冷凍精液受胎率。
[0016] 下面是本發明與傳統直腸觸診的方法實驗效果對比：
[0017]
[0018] 從表中看出，采用本發明采用誘導排卵定時輸精的技術措施情期受胎率可達 70%〇
【具體實施方式】
[0019] 本領域技術人員根據
【發明內容】
描述的鮮精采集、消毒稀釋處理過程和誘導排卵定 時輸精過程即可實施，在此不再詳細描述。
【主權項】
1. 一種增加驢受胎率的冷凍精人工授精方法，其特征在于，它包括鮮精的冷凍處理過 程、冷凍精的解凍處理過程和誘導排卵定時輸精過程，其中： 鮮精的冷凍處理過程如下： (1) 采用假陰道采集公驢的精液，精液經滅菌的4層消毒紗布過濾，除去膠凍，用肉眼 觀察原精液的顏色，正常精液色澤呈乳白、灰白色或淡黃色，取正常精液并記錄原精液量， 在配有38°C恒溫裝置的相差顯微鏡上評定活率，取活率多70%的原精進行稀釋；稀釋按原 精與稀釋液1 :1的比例等溫稀釋；稀釋液按以下成分配比：Tris33- 34g、檸檬酸8-9g、葡 萄糖15 - 16g、甘油70 - 71mL、青霉素5萬單位、鏈霉素5萬單位： (2) 稀釋后的鮮精裝入離心管中，在22°C恒溫放置10分鐘，在離心機上按每分鐘1850 轉離心15每分鐘，去掉離心管中的上清液，將粥狀精液用冷凍稀釋液按1 :1的比例進行稀 釋；稀釋時先加入冷凍稀釋液稀釋量的1/4,經初步稀釋的精液在22°C下放置10分鐘，然 后，加入剩余的稀釋液完全稀釋；完全稀釋的用0. 5mL細管進行分裝，然后超聲波封口；把 分裝封口后的細管精液放入不透明的塑料盒內，再把塑料盒放入4°C的冷藏柜中平衡3~ 4小時；同時開啟液氮罐閥門把全自動冷凍儀降溫至4°C備用；把平衡后的細管精液迅速放 入全自動冷凍儀，按照最佳冷凍曲線程序自動完成冷凍過程；凍冷凍過程后放入液氮罐中 保存；所述的冷凍稀釋液制作方法如下： 取以下成分：三羥基三甲基甲烷33- 34g、檸檬酸8 - 9g、葡萄糖15 - 16g、甘油70- 71mL、青霉素5萬單位、鏈霉素5萬單位配制成稀釋液，將適量稀釋液裝入量筒，量筒中再加 入20%體積份的卵黃，用封□膜封□后，上下顛倒混勾，置于4°C冰箱中過夜分層；之后，去 除上層泡沫，取稀釋液中層倒入燒杯中沉淀，棄去下層沉淀物；經4000轉/分離心3次，每 次30分鐘，離心后棄去表層雜質及底層沉淀物，倒入瓶中，加入適量甘油，用磁力攪拌器充 分攪拌均勻，置于4°C冰箱中存放備用，存放時間不宜超過24小時； 冷凍精的解凍處理過程是：給待孕母驢人工授精前，從液氮罐內取出精液細管，迅速置 于38°C水浴瞬時解凍，解凍后用吸水紙擦干細管，剪去細管無棉塞一端的封口，安裝在輸精 槍上，然后予以保溫，并在1小時之內完成輸精過程； 誘導排卵定時輸精過程是：在驢出現發情表現后的第7~10天內，人工將直腸B超探 頭經驢直腸送至卵巢部位，通過調整直腸探頭在卵巢部位的掃描面，檢測卵巢上卵泡發育 的大小尺寸，當發現卵泡直徑達到3. 4-3. 5cm時，給驢注射300單位的促黃體素或絨毛膜促 性腺素，使驢集中時間進行排卵，降低卵泡發育中閉鎖的幾率，并在排卵前10小時至排卵 后6小時內、用輸精槍實施兩次人工輸精，每次輸精劑量5mL，確保驢精子與驢卵子在具有 受精能力的時間內相遇完成受精過程，使驢受胎。
【專利摘要】本發明公開了一種增加驢受胎率的冷凍精人工授精方法，它包括鮮精的冷凍處理過程、冷凍精的解凍處理過程和誘導排卵定時輸精過程。實施時，首先將采集到取活率≥70％的公驢的精液進行稀釋放入全自動冷凍儀自動完成冷凍過程；給待孕母驢人工授精前，迅速置于38℃水浴瞬時解凍，并在1小時之內完成誘導排卵定時輸精過程。采用本發明采用誘導排卵定時輸精的技術措施情期受胎率可達70％。<!-- 2 -->
【IPC分類】A61D19/02, A01N1/02
【公開號】CN105055045
【申請號】CN201510553525
【發明人】常仲樂, 譚景和, 羅明久, 劉冰
【申請人】山東農業大學
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年9月2日