一種雞氣分證模型的構建方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種雞疾病模型的構建方法，具體地說是一種雞氣分證模型的構建方 法。
【背景技術】
[0002] 隨著集約化養雞業的發展，養殖規模不斷擴大，飼養密度逐漸提高，料肉比不斷降 低，雞群發病率逐年提高，用于疾病防控的化學藥物不斷增加，食品藥物殘留和微生物耐藥 性有逐年增加的趨勢。中藥在預防和治療雞病方面具有靈活配伍、隨癥加減、標本兼治、低 毒、高效等特點，是預防和治療雞病的首選藥物，是減少藥物殘留，提高禽產品質量，保證人 類健康的綠色、高效的新獸藥。中藥是祖國醫學的重要組成部分，對證下藥是保證藥效的首 要前提。因此構建科學合理的病證模型是中藥研究的重要任務，否則一切均無從談起。
[0003] 由于雞呼吸系統特有的氣囊結構，外界空氣可直接進入體內，病原菌極易感染呼 吸系統，而出現以甩鼻、流鼻液、眼淚、呼嚕、氣喘等為主要癥狀的外感溫熱病的初期和中期 癥狀。外感溫熱病是雞常見的疾病，衛分證是外感溫熱病的初期癥狀，若衛分證不解，即可 以發展為氣分證。由于雞氣囊分布全身，雞舍內空氣質量較差，病情如不能及時控制，極易 轉為營血證，出現高熱、拉稀、組織器官嚴重出血、神經癥狀，甚至導致嚴重死亡，因此雞衛 分證階段和氣分證階段的治療非常重要，中藥研制尤為迫切。同時由于雞衛分證階段持續 時間較短，治療時一般處在氣分證階段或者是從衛分證到氣分證的轉化階段，因此，建立氣 分證模型更為重要。
[0004] 構建雞氣分證模型首先想到的是雞傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis of Chickems, IBV)，但單純感染病毒雞群不發病，無衛分證特征。用新城疫病 毒構建模型，弱毒株不發病，無臨床癥狀；中等毒力和強毒株，由于毒力較強，衛、氣分證時 間持續較短，很快轉入營血證，死亡率極高，不適于氣分證階段的治療。構建雞氣分證的模 型已成為制約相關中藥研究的瓶頸。
【發明內容】
[0005] 本發明克服了上述現有技術的不足，提供了一種雞氣分證模型的構建方法。本發 明采用20_23°C的飼養溫度（正常飼養溫度為30°C左右）可造成冷應激，降低雛雞機體的 抵抗力，再通過滴鼻方式（外感）感染以呼吸道癥狀為主的傳染性支氣管炎病毒M41株，成 功構建穩定的氣分證模型，為預防和治療雞氣分證中藥的研究提供可靠的疾病模型。
[0006] 本發明的技術方案是：一種雞氣分證模型的構建方法，其特征是，以飼養于SPF雞 隔離器中的海蘭褐雛公雞或SPF雛雞為樣本；將雞隔離器溫度控制在20_23°C (冷應激）， 再采用雞傳染性支氣管炎病毒M41株兩側鼻孔滴鼻的方式進行病毒感染；病毒感染后凡出 現流鼻液或鼻孔黏液堵塞的均判為發病；病毒感染后雛雞100%發病，病程持續6天以上， 以后逐漸好轉直至自然痊愈的判定為雞氣分證模型構建成功。
[0007] 優選的，所述雞傳染性支氣管炎病毒M41株病毒液的EID50為I X 10-6. 5/0. lmL， 用量為0. 2~0. 4mL/只，更優選的用量為0. 3mL/只。
[0008] 優選的，選用7~11日齡的海蘭褐雛公雞或SPF雛雞為樣本的，更優選的選用11 日齡的海蘭褐雛公雞或SPF雛雞為樣本。
[0009] 構建成功的模型雞表現出：精神沉郁一一甩鼻一一噴嚏一一流鼻液（如圖1所 不） 鼻孔黏液堵塞（如圖2所不） 自然疫愈（一般10天左右）的疾病進程。
[0010] 本發明所選雞傳染性支氣管炎病毒M41株的病原學特性如下：雞傳染性支氣管 炎病毒（IBV)至少有14個血清型，M41是引起呼吸性傳染性支氣管炎的美國標準株之一。 可通過呼吸、直接接觸感染家禽及污染的墊料、設備或其他污染物傳播，主要侵害雞呼吸系 統，出現打噴嚏、流鼻液、咳嗽、呼吸困難、氣管啰音、鼻孔黏液堵塞等癥狀。
[0011] 本發明的有益效果是：
[0012] (1)雛雞正常飼養溫度為30°C左右，而本發明20-23°C的飼養溫度可造成冷應激， 降低機體的抵抗力，通過滴鼻方式（外感）感染以呼吸道癥狀為主的傳染性支氣管炎病毒 M41株，成功構建穩定的氣分證模型；
[0013] (2)本發明的雞氣分證模型構建方法簡單、易操作，構建的模型臨床癥狀明顯、發 病迅速、發病率高（100%)、病程長（氣分證維持時間6天以上），模型穩定、可靠（氣分證 后逐漸好轉直至自然痊愈，不會出現進一步惡化，如營血證、死亡等），適合于雞氣分證防治 用中藥的研究。
【附圖說明】
[0014] 圖1為感染雞鼻流黏液圖；其中A圖自然狀態下雞鼻流黏液圖，B圖為經擠壓后黏 液大量流出圖。
[0015] 圖2為感染雞黏液堵塞鼻孔圖。
【具體實施方式】
[0016] 實施例1海蘭褐雛雞氣分證模型的構建
[0017] 1材料和方法
[0018] I. 1雛雞，飼養于SPF雞隔離器中的7日齡、11日齡海蘭褐公雞；SPF雞隔離器，江 蘇常熟生產。
[0019] I. 2 IBV :M41 株尿囊液，EID50 為 I X 10 6.5/0. lmL。
[0020] 1. 3分組：雛雞隨機分為病毒液0. 2mL組/只和0. 3mL組/只，每組30只。
[0021] 1. 4接種方法：雙側滴鼻。
[0022] 1. 5溫度控制：通過控制舍內溫度或雞群噴冷水將SPF雞隔離器內溫度控制在 20-23。。。
[0023] 1. 6判斷標準：感染后凡出現流鼻液或鼻孔黏液堵塞者均判為發病。
[0024] 2 結果
[0025] 2. 1臨床癥狀：維雞感染表現精神沉郁一甩鼻一噴嚏一流鼻液一鼻孔黏液堵塞一 噴嚏一自然痊愈的疾病進程。
[0026] 2. 2從表1中可見，0. 2mL組發病率均低于0. 3ml組，同等感染劑量11日齡組發病 率均高于7日齡組。以11日齡雛雞攻毒0. 3mL/只所構建模型最理想。
[0027] 表1不同日齡、不同感染量對發病率的影響（％ )
[0028]
[0029] 3 結論
[0030] 選用EID50為1X10 6'5/0.1 mL的IBV M41病毒，0. 3ml/只側鼻孔滴鼻感染11日 齡海蘭褐公雛雞，能成功構建雞氣分證模型。
[0031] 實施例2 :SPF雞氣分證模型的構建
[0032] 1試驗材料與方法
[0033] I. I SPF雛雞，飼養于SPF雞隔離器的11日齡SPF雛雞，由山東省昊泰實驗動物中 心提供；SPF雞隔離器，江蘇常熟生產。
[0034] I. 2 IBV :IBV-M41，EID50 為 1 X 10 6 5/0. lmL。
[0035] 1. 3 方法
[0036] 1. 3. 1感染劑量與途徑：每只雞兩側鼻孔滴IBV-M41尿囊液0. 3mL。
[0037] 1. 3. 2溫度控制：通過控制舍內溫度或雞群噴冷水將SPF雞隔離器內溫度控制在 20-23。。。
[0038] 1. 3. 3判斷標準：凡出現流鼻液、氣喘或氣管羅音、鼻孔黏液堵塞均判為發病。
[0039] 2試驗結果
[0040] 2. 1臨床癥狀：雛雞攻毒后表現精神沉郁一甩鼻一噴嚏一流鼻液一鼻孔黏液堵 塞一噴嚏一自然痊愈的臨床癥狀和疾病進程。
[0041] 2. 2從表2可以看出：攻毒24h發病率至73. 3%，72h可達100%，93. 3%以上發 病率可持續至192h。
[0042] 表2攻毒模型發病率
[0044] 3 結論
[0045]選用EID50為1X10 6'5/0.1 mL IBV M41病毒，0. 3ml/只側鼻孔滴鼻感染11日齡 SPF雛雞，能成功構建雞氣分證模型。
【主權項】
1. 一種雞氣分證模型的構建方法，其特征是，以飼養于SPF雞隔離器中的海蘭褐雛公 雞或SPF雛雞為樣本；將雞隔離器溫度控制在20-23°C，再采用雞傳染性支氣管炎病毒M41 株病毒液，兩側鼻孔滴鼻的方式進行病毒感染；病毒感染后凡出現流鼻液或鼻孔黏液堵塞 的均判為發病；病毒感染后雛雞100%發病，病程持續6天以上，以后逐漸好轉直至自然痊 愈的判定為雞氣分證模型構建成功。2. 如權利要求1所述的一種雞氣分證模型的構建方法，其特征是，所述雞傳染性支氣 管炎病毒M41株病毒液的EID50為I X 10 6'5/0. lmL，用量為0. 2~0. 4mL/只。3. 如權利要求2所述的一種雞氣分證模型的構建方法，其特征是，所述雞傳染性支氣 管炎病毒M41株病毒液的用量為0. 3mL/只。4. 如權利要求2或3所述的一種雞氣分證模型的構建方法，其特征是，選用7~11日 齡的海蘭褐雛公雞或SPF雛雞為樣本。5. 如權利要求4所述的一種雞氣分證模型的構建方法，其特征是，選用11日齡的海蘭 褐雛公雞或SPF雛雞為樣本。
【專利摘要】本發明公開了一種雞氣分證模型的構建方法。它是以飼養于SPF雞隔離器中的海蘭褐雛公雞或SPF雛雞為樣本；將SPF雞隔離器中的溫度控制在20-23℃，再采用雞傳染性支氣管炎病毒M41株病毒液兩側鼻孔滴鼻的方式進行病毒感染；感染后凡出現流鼻液或鼻孔黏液堵塞的均判為發病；感染后雛雞100％發病，病程持續6天以上，以后逐漸好轉直至自然痊愈的判定為模型構建成功。模型雞表現出：精神沉郁——甩鼻——噴嚏——流鼻液——鼻孔黏液堵塞——自然痊愈的疾病進程。本發明的模型構建方法簡單、易操作，構建的模型臨床癥狀明顯、發病迅速、發病率高、病程長，模型穩定、可靠，適合于雞氣分證防治用中藥的研究。
【IPC分類】A61K35/76, A61K49/00, A01K31/18
【公開號】CN105031667
【申請號】CN201510481690
【發明人】林樹乾, 黃中利, 宋敏訓, 趙增成, 傅劍, 李桂明, 馮敏燕
【申請人】山東省農業科學院家禽研究所
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年8月3日