在耐缺氧及抗疲勞中的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明公開一種蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl在耐缺氧及抗疲勞中的用途，屬于中藥和 保健品領域。
【背景技術】
[0002] 生活在現在化都市，感受著城市的快節奏，人們都摒住呼吸，大步向前，為不落后 于他人，為有一份穩定工作，為擁有一個幸福家庭而努力著，拼搏著。而在我們努力、拼搏的 同時，疲勞也如影隨形，不斷地侵蝕著每一位"工作狂"身體，讓我們身心憔悴。在1987年美 國疾病控制中心就定義了慢性疲勞綜合征的概念，1993年英國一項大型調查顯示：約20% 的男性和25%的女性總是感到疲勞；2001~2002年的調查則顯示，10萬人中有1. 2萬人患有 至少持續6個月的慢性疲勞；日本勞工部在2000年3月公布日本全國有1/3的工齡人口患 有慢性疲勞綜合征，疲勞已經成為當今社會影響我們身體健康的一大重要因素。
[0003] 氧是人體進行新陳代謝的關鍵物質，是人體生命活動的第一需要，缺氧時一種相 當常見的病理過程，由于氧氣的攝入不足以供應機體所需，導致肺泡氧分壓和血樣飽和度 降低，組織細胞不能從血液中獲得所需氧氣，從而造成機體損傷，嚴重時可導致機體死亡， 因此，軍事、體育、航空航天、水下作業、旅游等領域越來越重視對缺氧的研宄。
[0004] 蝙蝠蛾擬青霉為天然冬蟲夏草中分離到的內寄生菌，是天然冬蟲夏草中普遍存在 的一種蟲草的無性型，其菌絲體發酵物具有廣泛的藥理活性，可以作為天然冬蟲夏草有效 成分和功效的原料，開發前景廣闊。
【發明內容】
[0005] 本發明公開一種蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl在耐缺氧及抗疲勞的用途，具有明顯的醫 療效果。
[0006] 本發明所述的水提物以可用于保健食品的蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl菌絲體為原料， 采用熱水浸提方法獲得，保證用藥的安全性。
[0007] 本發明所述的蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40以蝙蝠蛾擬青霉菌株（RCEF1429)為原始菌 株，經誘變篩選獲得，所述的菌株已于2014年12月26日保藏《中國典型培養物保藏中心》， 保藏號為：CCTCC No :M 2014670 ;命名為cAe/7 PH40 ;蝙蝠蛾擬青 霉菌株PH40。
[0008] 本發明所述的蝙蝠蛾擬青霉菌株PiVK提物，是通過以下的技術方案實現的。
[0009] 1、稱取蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl凍干干粉，按照質量體積比（g:ml)l:10~1 :50的 比例加入去離子水，50~100°C提取2~5小時，重復一次，合并兩次提取的上清液，旋轉蒸 發后凍干，得蝙蝠蛾擬青霉菌株PH 4tl水提物干粉。
[0010] 2、取蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物干粉，加入藥用輔料，制備得到蝙蝠蛾擬青霉 菌株PH4tl水提物制劑。
[0011] 采用小鼠負重游泳實驗、跑步機實驗、疲勞轉棒實驗首次證明蝙蝠蛾擬青霉菌株 PH4tl水提物抗疲勞活性，采用亞硝酸鈉中毒實驗、常壓耐缺氧實驗、急性腦缺血缺氧實驗首 次證明蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物抗缺氧活性，為蝙蝠蛾擬青霉菌株PH 4(|水提物作為抗 疲勞和耐缺氧藥物及保健品的研發提供依據。
[0012] 本發明的積極效果在于：提供了蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl制備抗疲勞和耐缺氧藥物 及保健品藥物中的用途，并具有明顯的醫療效果。
【具體實施方式】
[0013] 為了能夠更好地了解本發明的技術內容，下面通過具體實施案例對本發明進行詳 細描述。
[0014] 實施例1 取蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl菌絲體100g，按質量體積比（g :ml) 1:20的比例加入去離子 水2L，60°C提取4h，重復提取一次，合并兩次的上清液，60°C減壓濃縮后凍干得提取物干粉 1〇
[0015] 實施例2 1、取蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl菌絲體100g，按質量體積比（g :ml) 1:30的比例加入去離 子水3L，80°C提取3. 5h，重復提取一次，合并兩次的上清液，80°C減壓濃縮后凍干得提取物 干粉2。
[0016] 2、取提取物干粉2,加入淀粉、硬脂酸鎂等藥用輔料，制備得到蝙蝠蛾擬青霉菌株 PH4tl水提物制劑2。
[0017] 實施例3 1、 取蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl菌絲體1000g，按質量體積比（g :ml )1:30的比例加入去離 子水30L，60°C提取3. 5h，重復提取一次，合并兩次的上清液，80°C減壓濃縮后凍干得提取 物干粉3 ; 2、 取提取物干粉3,加入碳酸氫鈉、羧甲基纖維素鈉等藥用輔料，制備得到蝙蝠蛾擬青 霉菌株PH4tl水提物制劑3。
[0018] 以下試驗表明本發明在抗疲勞、耐缺氧保健品中的用途 1、材料和方法 I. 1受試物實施例1干粉1、實施例2干粉2、實施例3制劑3。
[0019] 1.2實驗動物 由吉林大學實驗動物中心提供健康昆明種雌性小白鼠240只，體重18-22g。隨機分為 4組，每組60只。
[0020] 1. 3動物實驗室環境 溫度22 °C，濕度52%。
[0021] 1.4劑量選擇 該保健品制劑的推薦劑量為成人(按體重60kg計算）1.2g，按人體推薦量的10倍對小 鼠進行給藥，三組受試物分別用生理鹽水配置成濃度為〇. 〇2g/ml的溶液，小鼠灌胃給藥30 天后測定各項指標，灌胃給藥體積為〇. lml/10g。同時設置一空白對照組，用生理鹽水代替 受試物進行給藥，灌胃體積與受試物相同。
[0022] 1.5實驗方法 1.5. 1小鼠疲勞轉棒實驗 小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物制劑30天后，于末次給藥后30min，將 各組小鼠分別放在有機玻璃棒上，使肌肉處于靜力緊張狀態。進行小鼠疲勞轉棒實驗，將轉 棒轉速設置為15轉/分鐘，對其進行訓練，在各小鼠在轉棒上跌落3次后，開始記錄小鼠由 于肌肉疲勞從玻璃棒上跌下的時間，平行3次。記錄小鼠疲勞轉棒時間。設置最高小鼠轉 棒時間為300秒。實驗結果如表1. 1所示。
[0023] 表1. 1小鼠疲勞轉棒時間
如上表所示，小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉PH4tl制劑后，可以顯著提高小鼠疲勞轉棒 時間，增強小鼠肢體協調能力，結果P〈〇. 005,具有顯著性差異。
[0024] 1.5.2小鼠耐力跑實驗 小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物制劑30天后，進行小鼠耐力實驗，將小 鼠置于FT-200動物跑步機中。先放置好動物，對小鼠訓練2min，使其了解逃離帶電區域后， 將轉速設為20rpm，電流調到最高，記錄5min內小鼠被電擊的次數。結果如表1. 2所示。
[0025] 表1. 2小鼠耐力跑電擊次數
結果顯示，蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物制劑可以顯著提高小鼠跑步時間，降低小鼠 電擊次數，結果P〈〇. 005,具有顯著性差異。
[0026] L 5. 3小鼠負重游泳實驗 小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物制劑30天后，進行小鼠負重游泳實驗， 將小鼠置于負重游泳測試儀中，每組鼠尾部系以體重10%的負荷，放入水溫27±1 °C，水深 為小鼠3倍體長的桶式游泳池中（d=50cm)，測定各組小鼠持續游泳時間和力竭時間。結果 如表1. 3所示。
[0027] 表1.3小鼠負重游泳時間
結果顯示，蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物制劑可以顯著提高小鼠負重游泳時間，延長 小鼠力竭時間，結果P〈〇. 005,具有顯著性差異。
[0028] 1. 5. 4小鼠耐缺氧實驗 1. 5. 4. 1小鼠常壓耐缺氧實驗 小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物制劑30天后，進行常壓耐缺氧實驗， 125ml廣口瓶中放IOg鈉石灰。小鼠放到廣口瓶中，塞上膠塞，采用凡士林封閉。測量小鼠 存活時間。結果如表1.4所示。
[0029] 表1. 4小鼠常壓耐缺氧存活時間
實驗結果顯示，蝙蝠蛾擬青霉菌株水提物制劑可以顯著提高常壓缺氧條件下小鼠死亡 時間，結果P〈〇. 005,具有統計學意義。
[0030] 1.5. 4. 2亞硝酸鈉中毒實驗 小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉菌株水提物制劑30天后，末次灌胃Ih后，各組動物腹 腔注射亞硝酸鈉240mg/kg*bw,立即記時，記錄各受試小鼠的存活時間。結果如表1.5所 不O
[0031] 表1. 5亞硝酸鈉中毒小鼠存活時間
實驗結果顯示，蝙蝠蛾擬青霉菌株水提物制劑可以顯著提高亞硝酸鈉中毒小鼠死亡時 間，結果p〈0. 005,具有統計學意義。
[0032] 1.5. 4. 3急性腦缺血缺氧實驗 小鼠經灌胃給藥蝙蝠蛾擬青霉菌株水提物制劑30天后，在末次灌胃Ih后，在乙醚淺 麻醉下，用粗剪刀自小鼠雙耳連線處快速斷頭，逐只記錄小鼠斷頭后至小鼠死亡時間。結果 如表1. 6所示。
[0033] 表1. 6急性腦缺血缺氧實驗小鼠存活時間 實驗結果顯示，蝙蝠蛾擬青霉菌株水提物制劑可以顯著提高急性腦缺血缺氧中毒小鼠 死亡時間，結果p〈0. 005,具有統計學意義。
【主權項】
1. 蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40在制備耐缺氧及抗疲勞病藥物中的用途；所述的菌株已于 2014年12月26日保藏《中國典型培養物保藏中心》，命名為cAe/? PH40 ;蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40,保藏號為：CCTCCNo:M2014670。2. -種蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40水提物，是通過以下的技術方案實現的： 利用權利要求1所述蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40制成的凍干干粉，按照質量體積比 (g:ml) 1:10~1 :50的比例加入去離子水，50~100°C提取2~5小時，重復一次，合并兩 次提取的上清液，旋轉蒸發后凍干，得蝙蝠蛾擬青霉菌株PH4tl水提物干粉。3. 以權利要求2制備的蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40菌粉為主要成分，加以多種藥用輔料， 制備得到的片劑、粉劑、膠囊劑及口服制劑。
【專利摘要】本發明公開一種蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40在制備耐缺氧及抗疲勞病藥物中的用途，具有明顯的醫療效果。以蝙蝠蛾擬青霉菌株PH40菌粉為主要成分，加以多種藥用輔料，制備得到的片劑、粉劑、膠囊劑及口服制劑。CCTCC NO： M 201467020141226
【IPC分類】A23L1/29, A61P39/00, C12N1/14, A61K36/068
【公開號】CN104922165
【申請號】CN201510280984
【發明人】滕利榮, 王娟, 劉燕隔, 李蘭洲, 胡文繼, 張洋, 孟慶繁, 王迪, 權宇彤, 逯家輝
【申請人】吉林大學
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年5月28日