一種抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物以及檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物以及肺癌細 胞增殖的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 肺癌是一種常見的肺部惡性腫瘤，近年來的發病率和死亡率增長最快，對人類健 康安全的威脅也越來越大。惡性腫瘤是危害人類生命健康的細胞性疾病，腫瘤細胞從生物 體內正常細胞轉化為惡性細胞，其形態、功能、代謝和增殖等都會發生變化，可以看作是細 胞的異常分化導致其具有永生性。
[0003] 水飛薊賓（Silybin)是從菊科藥用植物水飛薊種子的種皮中提取所得的一種天 然黃酮木脂素類化合物。水飛薊賓呈黃色粉末，味苦，可溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇， 微溶于氯仿，幾乎不溶于水。其分子式為C25H22Oltl，摩爾質量為482. 12。水飛薊賓臨床上主 要用于治療中毒性及酒精相關性肝病的治療，還可作為抗氧化食品添加劑。藥理學研宄表 明，水飛薊賓能夠清除機體內自由基，延緩衰老，對抗脂質過氧化，抑制一氧化氮的產生，減 輕對組織細胞的毒素，保護肝細胞膜、改善肝功能，降血脂和保護心肌等作用。孫羿等在《水 飛薊賓對人膀胱癌細胞株5637增殖的抑制作用及其機制》一文中指出水飛薊賓可抑制人 膀胱癌細胞株5637的增殖，并能降低凋亡抑制因子Survivin的mRNA表達。中國專利申請 201010238453. X公開了水飛薊賓在治療神經受損方面的用途。
[0004] 替加氟是氟尿嘧啶的衍生物，在體內經肝臟活化轉變為氟尿嘧啶而起抗腫瘤作 用，能干擾和阻斷DNA、RNA及蛋白質合成，主要作用于S期，是抗嘧啶類的細胞周期特異性 藥物。藥理學研宄表明，替加氟對胃癌、結腸癌、直腸癌、胰腺癌、乳腺癌和肝癌具有一定的 療效。
[0005] 紫杉烷類藥物通過促進微管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白穩定，抑制細胞有 絲分裂，進而起到抗癌作用。紫杉醇是紫杉烷類藥物中的明星藥物，主要適用于卵巢癌和乳 腺癌，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。
[0006] 目前，市場上仍缺少可以顯著抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物。
【發明內容】
[0007] 為解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種抑制肺癌細胞增殖的藥物組合 物，并提供了相應的肺癌細胞增殖的檢測方法。
[0008] -種抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，包括水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物；所 述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549。
[0009] 發明人對現有的具有抗癌效果的藥物進行了大量篩選和復配，預料不到地發現： 通過水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物以一定重量比組合得到的藥物組合物具有良好的肺 癌細胞抑制效果，且可顯著抑制肺癌細胞的增殖。
[0010] 通常情況下，水飛薊賓主要用于肝臟疾病的治療，替加氟主要用于治療消化系癌。 紫杉烷類藥物雖然具有較廣泛的抗癌作用，但尚無文獻報道紫杉烷類藥物可與水飛薊賓、 替加氟聯合作為組合物聯合使用。替加氟即1-(四氫-2-呋喃基）-5-氟-2, 4 (1H，3H)-嘧 啶二酮。
[0011] 優選地，所述藥物組合物中，水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物的質量比為（1~2): (1~2) : (0· 3~0· 8)。
[0012] 優選地，所述藥物組合物中，水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物的質量比為2 :2 : 0. 6〇
[0013] 優選地，所述紫杉烷類藥物選自紫杉醇或多西他賽。
[0014] 優選地，所述藥物組合物由水飛薊賓、替加氟、紫杉烷類藥物和藥學上可接受的載 體制得。
[0015] 優選地，所述藥物組合物為注射劑。
[0016] 相應地，本發明還提供一種肺癌細胞增殖的檢測方法，包括如下步驟： A)培養肺癌細胞，收集對數生長期細胞，調整細胞濃度，接種于96孔板中培養，所述 肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549 ;調整細胞濃度至5 X IO4個/mL左右，每孔加入 100 μ Lo
[0017] Β)采用所述的藥物組合物對所述肺癌細胞進行處理； C) 加入染料溶液，放置在培養箱孵育得到藍紫色結晶甲瓚，棄去上清液； D) 加入二甲基亞砜溶解藍紫色結晶甲瓚，并用酶標儀在490nm波長下檢測OD值。通過 檢測得到的OD值，對應標準曲線，可計算得到細胞增殖的抑制率。
[0018] 優選地，所述染料溶液為MTT (3- (4, 5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽） 溶液。MTT法是一種檢測細胞存活和增殖的方法，檢測原理是：活細胞線粒體中的琥珀酸脫 氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan)并沉積在細胞中，而死 細胞無此功能；在加入染料溶液后，放置在培養箱孵育后，會形成藍紫色結晶甲瓚；二甲 基亞砜（DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值， 可間接反映活細胞數量，在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。因此， 通過MTT法檢測OD值，OD值可以反映細胞增殖情況。
[0019] 與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明提供藥物組合物包括水飛薊賓、替 加氟和紫杉烷類藥物，具有良好的肺癌細胞抑制效果，且可顯著抑制肺癌細胞的增殖，對肺 癌細胞的增殖能力有顯著的協同抑制作用，尤其對非小細胞肺癌細胞株A549具有非常好 的抑制效果。
【附圖說明】
[0020] 圖1是不同實驗組對A549細胞增殖的抑制率結果圖。
【具體實施方式】
[0021] 下面通過具體實施例對本發明作進一步詳細的說明。
[0022] 癌細胞是一種變異的細胞，是產生癌癥的病源。癌細胞與正常細胞不同，有無限生 長、轉化和轉移三大特點，能夠無限增殖并破壞正常的細胞組織，也因此難以消滅。在治療 肺癌的方向上，如何抑制肺癌細胞的增殖，成為肺癌治療中一個關鍵問題。
[0023] 本發明中，肺癌細胞株A549細胞株購自武漢大學中國典型培養物保藏中心，SPF 級BALB/c-nu小鼠購自廣東省醫學實驗動物中心，所使用的試劑均為常規市售試劑。
[0024] 實施例一抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物
【主權項】
1. 一種抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，其特征在于：包括水飛薊賓、替加氟和紫杉 燒類藥物；所述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549。
2. 根據權利要求1所述的抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組 合物中，水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物的質量比為（1~2) :(1~2) :(0.3~0.8)。
3. 根據權利要求2所述的抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組 合物中，水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物的質量比為2 :2 :0. 6。
4. 根據權利要求1至3中任一項所述的抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，其特征在于： 所述紫杉烷類藥物選自紫杉醇或多西他賽。
5. 根據權利要求1至3中任一項所述的抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，其特征在于： 由水飛薊賓、替加氟、紫杉烷類藥物和藥學上可接受的載體制得。
6. 根據權利要求1至3中任一項所述的抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，其特征在于： 所述藥物組合物為注射劑。
7. -種肺癌細胞增殖的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟:A)培養肺癌細胞，收集 對數生長期細胞，調整細胞濃度，接種于96孔板中培養，所述肺癌細胞選自非小細胞肺癌 細胞株A549 ;B)采用權利要求1至6中任一項所述的藥物組合物對所述肺癌細胞進行處 理；C)加入染料溶液，放置在培養箱孵育得到藍紫色結晶甲瓚，棄去上清液；D)加入二甲基 亞砜溶解藍紫色結晶甲瓚，并用酶標儀在490nm波長下檢測OD值。
8. 根據權利要求7所述的肺癌細胞增殖的檢測方法，其特征在于：所述染料溶液為MTT 溶液。
【專利摘要】本發明提供一種抑制肺癌細胞增殖的藥物組合物，包括水飛薊賓、替加氟和紫杉烷類藥物；所述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549。本發明屬于醫藥技術領域，本發明提供的藥物組合物具有良好的肺癌細胞抑制效果，且可顯著抑制肺癌細胞的增殖。
【IPC分類】A61K31-337, A61P35-00, A61K31-357, A61K31-513, G01N33-52
【公開號】CN104873514
【申請號】CN201510240024
【發明人】燕啟江
【申請人】廣州金域醫學檢驗中心有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月13日