苦荬菜乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種苦荬菜乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其 組合物的醫藥用途和制備方法以及它在治療阿爾茨海默病（AD)等方面的醫藥用途。
【背景技術】
[0002] 苦荬菜Zreri1S ofefliicw/aia 為菊科植物苦荬菜的全草。分布于 中國東北、華北，華東和華南等省區。苦荬菜別名：苦荬、盤兒草、鴨舌草、苦球菜、土蒲公英、 黃花菜、苦丁菜、墓頭回。春季采收常，鮮用或陰干。苦荬菜為多年生草，高30-80cm。全株 無毛。莖直立，多分枝，紫紅色。基生葉叢生，花期枯萎，卵形、長圓形或披針形、長圓形或披 針形，長5-lOcm，寬2-4cm，先端急尖，基部漸窄成柄，邊緣波狀齒裂或羽狀分裂，裂片邊緣 具細鋸齒；莖生葉互生，舌狀卵形，無柄，長4-8cm，寬l-4cm，先端急尖，基部微抱莖，耳狀， 邊緣具不規則鋸齒。頭狀花序排成傘房狀，具細梗；總苞長約7_，外層總苞片小，長約1_， 內層總荀片5,條狀披針形；花全為舌狀花，黃色，長6-9_，舌片長4-6_，先端5齒裂。瘦 果黑褐色，紡錘形，稍扁平，長l_2mm，喙長約0. 8mm，冠毛白以。花期4-6月，果期7-10月。
[0003] 苦荬菜味苦，性寒。具有清熱解毒、消腫止痛的功效。主癰癤親毒；乳癰、咽喉腫 痛、黃疸、痢疾、淋證、帶下、跌打損傷等。現代藥理學研宄表明，苦荬菜總生物堿皮下注射， 可抑制小鼠自發活動，并且對閾下催眠劑量的戊巴比妥鈉和水合氯醛有協同催眠作用。
[0004] 本發明通過大規模、系統地活性篩選，意外地發現維吾爾藥苦荬菜提取物及其部 分化學組分，具有顯著地乙酰膽堿酯酶抑制活性，該活性提取物及其組合物有望應用于治 療阿爾茨海默病（AD)等方面的醫藥用途。
【發明內容】
[0005] 本發明所解決的技術問題是提供一種苦荬菜提取物。
[0006] 本發明還提供了以苦荬菜提取物為主要活性成分的組合物。
[0007] 本發明同時提供了苦荬菜提取物及其組合物的制備和在制備乙酰膽堿酯酶抑制 活性藥物中的應用。
[0008] 本發明是通過如下技術方案實現的： 維吾爾藥苦荬菜經水超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO2)柱分離，上樣后的硅膠 柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫(二氯甲烷-甲醇，比例見表1)，各二氯甲烷-甲醇 比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其乙酰膽堿酯酶抑制活性，意 外地發現先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:20,體積比）洗脫，繼用二氯 甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:100,體積比）洗脫得到的二氯甲烷-甲醇混合 溶劑(二氯甲烷-甲醇，100:100,體積比）洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為乙酰膽堿酯酶 抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有乙酰膽堿酯酶抑制活性的作用。優為先用 二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇，100:20,體積比)洗脫10倍柱體積，繼用二氯甲 烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:100,體積比）洗脫30倍柱體積，洗液干燥后為本 發明乙酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。乙酰膽堿酯酶抑制活性的提取物可以通過以上方法 得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該苦荬菜乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見 文獻報道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖1，TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：二 氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0009] 具體，發現過程如下： 1、苦荬菜經水超聲提取物的制備 取維吾爾藥苦荬菜20 g，經100 mL水超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 SN0233B，留樣0. 0456g，上樣量0. 6344g，拌樣硅膠1.0 g，空白硅膠5 g，二氯甲烷-甲醇系 統洗脫。
[0010] 2、二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果 取維吾爾藥苦荬菜20 g，經100 mL水超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 SN0233B，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠1.0 g，空白硅膠5 g， 玻璃柱內徑1.5 cm，二氯甲烷-甲醇系統梯度洗脫(條件見表1)，柱體積11 mL，每個梯度洗 脫100mL，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 提取物，TLC分析結果見圖2,圖3, TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸 乙酯：甲醇（6:1:1)，二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0011] 表 1
【主權項】
1. 一種苦荬菜提取物，其特征為苦荬菜經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:20的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫，繼用體積比 100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫，用體積比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗 脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該提取物。
2. 如權利要求1所述苦荬菜提取物，其特征為，該提取物的提取用溶劑可以為甲醇、石 油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，最優條件為甲醇和95% 乙醇；提取物提取用溶劑用量為藥材重量的2-50倍(重量/體積比)。
3. 如權利要求1所述苦荬菜提取物，其特征為苦荬菜經溶劑超聲提取，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:20， 體積比）洗脫，洗脫2-50倍柱體積，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇， 100:100,體積比)洗脫，洗脫2-50倍柱體積，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇， 100:100,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。
4.如權利要求1所述的維吾爾藥苦荬菜提取物，其特征為，先用體積比100:20的二氯 甲烷-甲醇混合溶劑2-50倍洗脫，繼用體積比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶劑2-50 倍洗脫，優選先用100:20二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用100:100二氯甲 烷-甲醇混合溶劑洗脫30倍柱體積。
5. 權利要求1所述提取物的制備方法，其特征為：苦荬菜經溶劑超聲提取，提取液濃 縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇， 100:20,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇， 100:100,體積比）洗脫2-50倍柱體積，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇， 100:100,體積比）洗脫的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為該提取物；以上條件最優為先 用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇，100:20,體積比)洗脫10倍柱體積，繼用二氯 甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇，100:100,體積比）洗脫30倍柱體積。
6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的提取物和藥學上 可接受的載體。
7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的提取物或權利要求6 所述的藥物組合物。
8. 權利要求1-5任何一項所述的苦荬菜提取物或權利要求6所述的組合物或權利要求 7所述的藥物制劑在制備乙酰膽堿酯酶抑制活性藥物中的應用。
9. 如權利要求8所述維吾爾藥苦荬菜提取物，其特征為，所述乙酰膽堿酯酶抑制活性， 可用于治療阿爾茨海默病（AD)等方面的醫藥用途。
10. 如權利要求1-5任何一項所述的維吾爾藥苦荬菜提取物，其特征在于，用TLC法檢 測，其色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=3:1:1，顯色方法： 香草醛濃硫酸顯色。
【專利摘要】本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種苦荬菜乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫藥用途。所述的提取物通過如下方法獲得：先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:20，體積比）洗脫，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:100，體積比）洗脫，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:100，體積比）洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥，即為該乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物。
【IPC分類】G01N30-90, A61K36-28, A61P25-28
【公開號】CN104857048
【申請號】CN201510058783
【發明人】熱娜·卡斯木, 王金輝, 黃健, 李國玉, 王桂花, 李敏, 馬慶東, 張珂
【申請人】新疆醫科大學
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年2月4日