免疫原性組合物及其應用
【專利說明】免疫原性組合物及其應用
[0001] 本申請要求2012年7月6日提交的美國臨時申請號61/669, 010和2012年9月 10日提交的美國臨時申請號61/698, 971的權益，上述各文獻的全部內容均通過引用納入 本文以用于所有目的。
[0002] 政府基金
[0003] 本申請是在國立衛生研宄院的獎金號5P01AI066287、國立衛生研宄院的HIV DDT ADB合同號N01-AI-50007和國立衛生研宄院的HIV DDT合同號HHSN266200500007C下完成 的。政府對本發明擁有某些權利。 技術背景
[0004] 人免疫缺陷病毒（HIV-1，也稱作HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV)是獲得 性免疫缺陷綜合征（AIDS)和相關疾病的病因（參見例如Barre-Sinoussi等（1983) Science 220:868-871 ;Gallo 等（1984)Science 224:500-503 ;Levy 等（1984) Science225:840-842 ;Siegal 等（1981) N. Engl. J. Med. 305:1439-1444)。存在數種已知的 HIV毒株，包括HIV-I (表不在歐洲或美洲分尚的數種毒株的統稱）和HIV-2 ( -種在許多 西非國家流行的毒株）。通過系統發生分析將HIV-I分為三個組:M(主要）組、0(異常） 組和命名為N組的HIV-I變體，后者已鑒定為發病中心在喀麥隆（Simon等（1998)Nat. Med. 4:1032-1037)。所有三個HIV-I組都能導致AIDS。
[0005] AIDS患者通常具有長的無癥狀期，隨后是免疫系統和中樞神經系統的進行性退 化。病毒的復制受到高度調控，且組織培養物中出現T淋巴細胞的⑶4陽性輔助細胞亞組 的潛伏性和裂解性感染（Zagury等（1986) Science 231:850-853)。HIV-I的分子研宄顯 不其編碼多個基因 （Ratner 等（1985)Nature 313:277-284 ;Sanchez_Pescador 等（1985) Science 227:484-492)，包括在所有逆轉錄病毒中均常見的三個結構基因：gag、pol和 env。其他逆轉錄病毒（特別是HIV-2和猿免疫缺陷病毒SIV(曾稱作STLV-III))的病毒 基因組的核苷酸序列也包含這些結構基因（Guyader等（1987)Nature 326:662-669)。
[0006] HIV-l、HTV-2和SIV的包膜蛋白是約160kDa的糖蛋白（gpl60)。在宿主細胞的病 毒感染期間，gpl60被宿主細胞蛋白酶切割形成gpl20和整合膜蛋白，gp41。gp41部分被銷 定在病毒顆粒的膜雙層中，而gp 120部分凸入周圍的環境中。gp 120和gp41更共價地相連 并可從病毒顆粒和感染的細胞表面釋放游離的gpl20。此外，在與其受體CD4結合后，Env 多肽經歷明顯的結構重排。在該構象變化后，暴露了 CCR5或其他趨化因子結合的共受體結 合位點。該趨化因子受體結合位點的暴露轉而介導病毒進入宿主細胞。參見例如Wyatt，R. 等（1998)Nature 393:705-711 ;Kwong，P.等（1998)Nature 393:648-659。
[0007] 用于免疫患者抵御HIV感染的疫苗已研發了 20年，但成效有限。許多免疫方法關 注HIV包膜糖蛋白，但在其他抗原（如tat或gag)中也存在興趣。
[0008] 需要一種能夠在對象中引發免疫應答（例如中和和/或保護性抗體）抵御多種 HIV毒株和亞型的組合物，例如當該組合物以疫苗或免疫原性組合物的形式給予時。還需要 改善的抵御HIV的免疫方法。
【發明內容】
[0009] 在本文第6部分中定義并解釋了用于描述本發明的某些術語。
[0010] 本發明通常涉及包含HIV RNA組分和HIV多肽組分的免疫原性組合物。與單獨使 用RNA或單獨使用多肽免疫相比，遞送兩種不同形式抗原表位（來自HIV的第一表位，以 RNA編碼的形式；以及來自HIV的第二表位，以多肽形式）的免疫原性組合物能夠增強針對 HIV的免疫應答。優選地，該第一表位和第二表位是相同的表位。
[0011] 本發明還涉及用于依序給藥的包含基于HIV RNA的初免組合物和基于HIV多肽的 加強組合物的試劑盒。該試劑盒適用于例如"RNA初免，蛋白增強"免疫方案以產生針對HIV 的免疫應答。
[0012] 本發明還涉及用于治療或預防HIV感染的方法、用于誘導免疫應答的方法（例如 體液應答，如中和抗體應答和/或細胞免疫應答）和接種對象的方法，所述方法通過共同遞 送HIV RNA分子和HIV多肽分子（共同給藥）來進行。
[0013] 本發明還涉及用于治療或預防HIV的方法、用于誘導免疫應答的方法和接種對象 的方法，所述方法通過依序給予HIV RNA分子和HIV多肽分子進行（初免-加強）。
[0014] 附圖簡要說明
[0015] 圖1顯示了用于對BALB/c小鼠給予實施例VI的HIV gpl60/gpl40制劑的免疫方 案。"PRE"指在給予蛋白加強前的時間點；"POST"指在給予蛋白加強后的時間點。
[0016] 圖2總結了實施例1的HIV gpl60/gpl40制劑對于BALB/c小鼠的不良作用。共 同遞送RNA復制子及其編碼的蛋白抗原未顯示不良作用。
[0017] 圖3A顯示了在給予實施例1的HIV gpl60/gpl40制劑的BALB/c小鼠中多個時間 點時的HIV gpl40特異性IgG抗體效價。圖表頂部一排的數字指各組中表現出可檢測IgG 應答的動物數目占受檢測動物總數的情況。圖3B比較了相同的5只小鼠在給予加強疫苗 (1〇以8蛋白/^^59，參見表1-1)之前和之后的抗8?1401 86效價。給予蛋白加強后，1^8 RNA/脂質體初免組的IgG效價與15 μ g DNA/脂質體初免組、VRP (le7)初免組或蛋白初免 組沒有顯著差別。
[0018] 圖4A-4C顯示了免疫的BALB/c小鼠的IgGl: IgG2a概況。RNA/脂質體制劑誘導 了平衡的IgGl:IgG2a亞型概況，這與VRP類似。圖4A顯示了給予實施例1的HIV gpl60/ gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl和IgG2a效價（參見表1-1)。圖4B顯示了給予實施 例I的HIV gpl60/gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl:IgG2a比率（參見表1-1)。圖4C 顯示了裸RNA初免組在蛋白/MF59加強后的IgGl和IgG2a效價以及IgGl:IgG2a比率（IgG 效價在蛋白/MF59加強前不可檢出）。
[0019] 圖5比較了進化支C(DU422. 14?160抗原和進化支8(5?162)8?160抗原的免疫原 性，兩種抗原都以脂質體配制的RNA形式給予。加強后Thl和Th2型IgG應答顯示了進化 支B和進化支C抗原的平衡概況。
[0020] 圖6A-6B顯示了實施例1的HIV gpl60/gpl40制劑所誘導的T細胞應答。圖6A顯 示了⑶4+T細胞應答，按細胞因子分泌細胞的百分比測定。圖6B顯示了⑶8+T細胞應答， 按細胞因子分泌細胞的百分比測定。
[0021] 圖7顯示了在給予實施例1的HIV gpl60/gp 140制劑的BALB/c小鼠的陰道清洗 液中gpl40特異性IgA抗體效價。
[0022] 圖8顯示了用于對BALB/c小鼠給予實施例1I的多種HIV gpl40制劑的免疫方案。
[0023] 圖9總結了實施例1I的HIV gpl40制劑對于BALB/c小鼠的不良作用。共同遞送 RNA復制子及其編碼的蛋白抗原未顯示不良作用。
[0024] 圖10顯示了在給予實施例1I的HIV gp 140制劑的BALB/c小鼠中的HIV gp 140 特異性IgG抗體效價（加強前）。與單獨給予RNA復制子相比，將RNA復制子與gpl40蛋白 混合誘導了更強的免疫應答。
[0025] 圖11顯示了給予加強疫苗（10 μ g蛋白/MF59)后的抗gpHOIgG效價。
[0026] 圖12A和12B顯示了給予實施例1的HIV gpl40制劑的BALB/c小鼠的IgGl: IgG2a 概況。RNA/脂質體和RNA/脂質體/蛋白制劑誘導了平衡的IgGl: IgG2a亞型概況，這與VRP 類似。圖12A顯示了給予實施例1I的HIV gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl和IgG2a 效價。圖12B顯示了給予實施例1I的HIV gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl:IgG2a比 率。圖12C顯示了裸RNA初免組在蛋白/MF59加強后