一種中藥蟾酥提取物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種中藥蟾酥提取物及其制備方法，屬于藥品技術領域。
【背景技術】
[0002] 蟾酥是常用中藥，早在漢代已有應用，《神農本草經》中記載為"味辛寒主那氣，破 疙堅血，癰腫，陰瘡，服之不患熱病。"中醫認為蟾酥性味為辛，溫；有毒，歸心經，具有解毒， 止痛，開竅醒神之功效。現代研宄表明蟾酥具有抗腫瘤、強心、升壓等多種藥理作用。特 別是對心血管領域及抗腫瘤領域的顯著療效，使得近年來中藥蟾酥得到了廣泛研宄和應 用，蟾酥化學成份主要有：①蟾蜍毒素類（bufotoxins)，包括蟾毒、蟾毒配基脂肪酸酯和蟾 毒配基硫酸酯等；②蟾毒配基類（bufogenins)，是蟾蜍毒素在加工炮制過程中的分解產 物，如脂蟾毒配基（resibufogenin)、華蟾毒精（cinobufagin)和蟾毒靈（bufalin)為蟾 酥的3種主要活性單體，并且在抗腫瘤及強心作用上以均以此類活性最強；③蟾毒色胺類 (bufotenines)，該類化合物均含有吲哚環，屬蟾蜍加工炮制過程中分解產物的水溶性部 分，是具有一定生物活性的吲哚類生物堿；④其他化合物，蟾酥還含有氨基酸、有機酸、腎上 腺素、嗎啡、多肽及多糖等。
[0003] 目前蟾酥提取物的常見提取方法：1、用一定濃度的乙醇加熱回流提取、濃縮、干 燥；2、用一定濃度的乙醇加熱回流提取后上硅膠柱，用有不同比例的機溶劑洗脫、收集洗脫 液、濃縮、干燥。按第1種方法回流提取，雖然操作簡單，所得提取物的雜質多，有效成份（以 脂蟾毒配基、華蟾酥毒基和蟾毒靈計）含量較低，很難滿足載藥量小的劑型的制劑要求；第 2中方法雖然能夠得到含量較高成份或單體，可操作過程復雜，有機溶劑可能對環境產生污 染，所得到的各個單體中不可避免會存在有機溶劑的殘留，制備成單體投料很難保證中藥 各成份的協同作用。鑒于以上問題，本發明提出了一種蟾酥提取的新方法，應用低溫提取降 低有效成份的降解和轉化，在保留蟾酥原有有效成份基礎上，盡量去除蛋白質及多糖等雜 質，能夠較大限度的保留了蟾酥各成份間的協同作用，此法具有操作簡單，所得提取物能保 留蟾酥的多種有效成份，且含量較高，不含有機溶劑殘留等優點。用此方法提取的蟾酥提取 物保留原有功效的同時突破載藥量的限制，適合制備成多種劑型，可較為廣泛的應用。
【發明內容】
[0004] 本發明是提供一種操作簡單，保留原有有效成份，轉移率高，不含有機溶劑的蟾酥 提取物的制備方法，按此方法操作可直接干燥得到含蟾酥配基含量較高的提取物，以脂蟾 毒配基、華蟾酥毒基和蟾毒靈總含量計可達35%以上。
[0005] 1.本發明所述的蟾酥提取物的制備方法包括以下步驟：
[0006] (1)蟾酥藥材粉碎成中粉，加水研磨分散使過100目。
[0007] (2)將步驟（1)所得的含蟾酥的混懸液加乙醇至含醇量為60% -80%，藥液在 2-10°C條件下低溫冷藏提取；
[0008] (3)抽取步驟⑵的上清液加氯化鈉鹽析，在2-10°C條件下低溫鹽析12小時；
[0009] (4)吸取步驟（3)的上清液，減壓濃縮至塊狀蟾酥提取物析出，50_75°C減壓干燥； 或將步驟（3)的上清液減壓濃縮至近干后真空干燥，再加入3-6倍量的乙醇重結晶。
[0010] 2、本發明的創新點
[0011] 2. 1蟾酥的提取方式：傳統的用一定濃度的乙醇加熱回流提取，提取藥材的細度 要求為中粉或細粉，本發明改變為最細粉的冷藏提取，減少蟾酥各成份間的轉化，減少提取 物中的雜質，同時降低能耗。
[0012] 2. 2蟾酥藥材的粉碎方式：蟾酥粉碎過60目后加水4-10倍的水研磨分散，本發明 的蟾酥粉碎方法即非傳統的直接粉碎也有別于通常的水飛操作，蟾酥加水研磨分散是蟾酥 提取的關鍵步驟，分散細度均對蟾酥的提取影響較大，本發明對分散細度進行了對比研宄。
[0013] 2. 3蟾酥提取物從濃縮液中的分離方式：蟾酥提取物在濃縮過程中能夠聚集析 出，通過過篩的方式與濃縮液分離。蟾酥提取液中加入氯化鈉后，除使蛋白質進一步沉淀除 去外，也增大了提取液的極性，通過濃縮回收乙醇使蟾酥提取物在濃縮過程中能夠聚集析 出；對于由于藥材研磨過細的提取物可干燥后加入3-6倍量的乙醇重結晶，也可得到含量 較高的提取物。
[0014] 3.本發明方法制備蟾酥提取物的試驗摸索
[0015] 3. 1試驗材料
[0016] 蟾酥：由臨沂康宇中藥飲片有限公司提供，產地山東。華蟾酥毒基對照品（批號： 110803-200605)，脂蟾毒配基（批號：110718-201108)均由中國藥品生物制品檢定所提供， 蟾毒靈（批號：131213)由成都普菲德生物技術有限公司提供。所用試劑中乙腈為色譜純， 水為超純水，其他為分析純。
[0017] 3. 2試驗儀器：
[0018] Agilent 1260高效液相色譜系統；色譜柱：ZORBAX SB-C18色譜柱 (4.6111111\25〇111111，54111)(48；[16111:公司）；1311011旋轉蒸發儀（德國）；島津詹1 20電子分析天 平（日本）。
[0019] 3. 3檢驗方法：
[0020] 藥材檢驗：蟾毒靈對照品加甲醇配制成Iml中含蟾毒靈20 μ g的溶液，其它依照 《中國藥典》2010年版蟾酥含量測定項下的方法檢測。本發明提取物檢驗：樣品制備：精密 稱取25mg至25ml容量瓶中加甲醇適量超聲處理30min，補足損失的重量，過濾，吸取續濾液 5ml至50ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得；其它同藥材檢測方法。
[0021] 3. 4提取條件的研宄：
[0022] 3. 4. 1原藥材含量測定：蟾酥原藥材經上述方法測定三種指標性成份的質量百分 含量（w/w):脂蟾毒配基2. 73%、華蟾酥毒基4. 87%、蟾毒靈2. 32%，
[0023] 3. 4. 2提取條件的單因素考察
[0024] 3. 4. 2. 1蟾酥加水研磨分散細度考察：蟾酥藥材粉碎過60,取4份，每份IOg加水 5倍量用研缽研磨分散，分別使分散在60-80目；80-100目；100-200目以及200目以上， 得的不同粒度的蟾酥粉懸濁液，加乙醇至含醇量為70%，在2°C條件下冷藏24小時，取上 清液，加入1 %氯化鈉，繼續在上述溫度下冷藏12小時，取上清液濃縮至固體析出物或濃縮 膏，干燥，得蟾酥提取物，按3. 3項下的方法測定各蟾酥提取物中脂蟾毒配基、華蟾酥毒基 和蟾毒靈的含量見下表1 :
[0025] 表1 :不同粒度提取轉移率考察表
【主權項】
1. 一種中藥蟾酥提取物的制備方法，包括以下步驟： (1) 蟾酥藥材粉碎成中粉，加水研磨分散使過100目； (2) 將步驟（1)所得的含蟾酥的混懸液加乙醇至含醇量為60% -80%，藥液在2-10°C 條件下低溫冷藏提取； (3) 抽取步驟（2)的上清液加氯化鈉鹽析，在2-10°C條件下低溫鹽析12小時； (4) 吸取步驟（3)的上清液，減壓濃縮至塊狀蟾酥提取物析出，50-75°C減壓干燥；或將 步驟（3)的上清液減壓濃縮至近干后真空干燥，再加入3-6倍量的乙醇重結晶。
2. 根據權利要求1所述的蟾酥提取物的制備方法，其特征在于步驟（1)中蟾酥分散后 的細度應為100目以上。
3. 根據權利要求1所述的蟾酥提取物的制備方法，其特征在于步驟（2)中醇沉提取的 最佳時間為18-30小時，最長不可超過48小時；溫度為2-10°C。
4. 根據權利要求1所述的蟾酥提取物的制備方法，其特征在于步驟（2)中，乙醇的濃度 控制在70% -80%，最低不得低于60%。
5. 根據權利要求1所述的蟾酥提取物的制備方法，其特征在于步驟（4)，所得提取物有 效成份較低時可重結晶提高有效成份的含量。
6. 根據權利要求1所述的蟾酥提取物的制備方法，其特征在于步驟（3)所得上清液也 可經硅膠柱分離，得到純度更高的提取物或單體。
【專利摘要】本發明為一種中藥蟾酥提取物及其制備方法，屬藥品技術領域。該提取物制備方法為：蟾酥藥材粉碎成中粉，加4-10倍水研磨分散；加乙醇醇沉，低溫冷藏；上清液加氯化鈉低溫鹽析；減壓濃縮至塊狀蟾酥提取物析出，減壓干燥或濃縮至近干后真空干燥，加入乙醇重結晶，得到的蟾酥提取物含酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物的轉移率約為80％，且三種蟾毒配基的重量百分比之和≥35％。該方法提取蟾酥轉移率及有效成份含量高，無有機溶劑殘留，操作簡便，能耗低，產品質量易于控制，適合工業化生產。
【IPC分類】A61P9-04, A61K35-65, A61P35-00, A61P9-00, A61P9-02
【公開號】CN104840488
【申請號】CN201510242294
【發明人】周定君, 劉曉燕, 郭冠男, 趙文軍
【申請人】內蒙古康恩貝藥業有限公司
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年5月13日