一種南瓜花水提物在治療糖尿病方面的新用圖
【技術領域】
[0001] 本發明具體涉及一種南瓜花水提物在治療糖尿病方面的新用途，屬于生物技術領 域。
【背景技術】
[0002] 南瓜 Cucurbita moschata (Duch. ex Lam. ) Duch. ex Poiret 為萌蘆科南瓜屬草本 植物，世界各地普遍栽培。南瓜是我國夏秋季的主要蔬菜之一，隨著人民生活水平的提高以 及對營養和健康食品的日益關注，發現南瓜不僅營養豐富，長期食用還具有食療保健和藥 用功能。資料顯示，南瓜產品的綜合開發與利用已日益受到國內外學者的重視，被認為是特 效保健食品。
[0003] 現代藥理學研宄證實，南瓜具有降血糖、調血脂、降血壓等功效，已公開的專利 CN201210466672. 2、CN201210180114. X、CN201110423905. 6 均指出南瓜作為其中主要原料 之一的組合物對糖尿病具有預防、治療作用；截止目前，對南瓜中的化學活性物質基礎研宄 相對較少，其中的南瓜多糖被認為是預防糖尿病的活性成分之一，它直接參與了降血糖、調 血脂等有關活動，對大鼠、家兔、人等有非常顯著的降血糖作用（彭紅，歐陽友生，黃小茉， 等.南瓜多糖的生物活性及其開發前景，中草藥，2002 :33(7):附5-7)
[0004] 南瓜花是南瓜的花，一般為杏黃色，雌雄同株，6-7月南瓜開花時采收，新鮮或曬 干可作藥用，具有清濕熱，消腫毒之功效；南瓜花化學成分及其應用于糖尿病治療的報道極 少，已公開的專利CN200910221844. 8提出了一種能防治糖尿病的養生茶，其制備方法包含 有南瓜花等五種植物組合而成的組合物。單用南瓜花用于糖尿病的治療，目前未見研宄報 道。
[0005] 糖尿病（Diabetes mellituS，DM)是一種多病因的代謝性疾病，其特點是慢性高血 糖，伴隨因胰島素（Insulin)分泌及/或作用缺陷所引起的糖、脂肪和蛋白質代謝紊亂。糖 尿病主要分為1型、2型及妊娠期糖尿病，其中2型糖尿病占患者群體的90%以上。目前， 糖尿病已經成為嚴重威脅人類健康與生命的主要疾病，世界衛生組織報告2014年全球糖 尿病患者人數已達3. 87億，而到2035年將增至5. 92億，增幅將達53%。此外，中國成為全 球糖尿病患者最多的國家，目前病人數已超過9600萬，2014年80周歲以下死亡的中國人數 中，源于糖尿病相關的疾病約占44%。
[0006] 糖尿病分為1型和2型，2型糖尿病的主要特征是胰島素抵抗，肝臟、骨骼肌、月旨 肪等靶組織對葡萄糖的攝取減少，造成血液中葡萄糖水平升高，形成高血糖。因此，提高胰 島素效能，包括促進器官組織對葡萄糖的攝取成為2型糖尿病藥物研宄重要的研宄課題。 HepG2細胞源于人肝胚胎瘤細胞，是分化較好的人肝癌細胞，仍有肝細胞的形態和功能。 HepG2細胞可以表達胰島素受體和胰島素樣生長因子的代謝反應，能全面模擬肝細胞對周 圍環境中葡萄糖的攝入和消耗，因此檢測南瓜花水提物干預下H印G2細胞的葡萄糖消耗， 探討其對糖代謝的影響，可以評價南瓜花的降血糖作用，對防治糖尿病及其并發癥有積極 意義。
[0007] 本發明以羅格列酮為陽性對照藥，研宄南瓜花水提物的抗糖尿病功能，所得提取 物可作為輔助治療糖尿病的藥物或保健品進一步研宄開發。
【發明內容】
[0008] 本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺陷，提供一種具有顯著促進人肝癌 細胞（HepG2)的葡萄糖消耗活性從而達到降血糖效果的南瓜花提取物及其制備方法，為南 瓜花在藥物制備或保健品方面的研宄開發提供新的用途。
[0009] 為了達到上述目的，本發明提供了一種南瓜花水提取物，以萌蘆科南瓜的干燥花 為原料，通過加熱回流提取方法制備得到。
[0010] 所述加熱回流提取方法為采用蒸餾水作為溶劑進行提取，用量為6-10倍藥材質 量體積，提取次數為1-3次，提取時間為1-3小時；提取液過濾，經減壓濃縮、干燥，得到該水 提物。
[0011] 上述南瓜花水提物在一定濃度下可以顯著促進人肝癌細胞（HepG2)的葡萄糖消 耗，在高糖狀態下可促進細胞對葡萄糖的消耗量，在胰島素刺激下對葡萄糖消耗量增加有 協同作用，提示南瓜花水提物具有降低血糖的活性，可以應用于制備抗糖尿病藥物或保健 品。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。
[0013] 實施例1 :南瓜花水提物A的制備
[0014] 南瓜花干燥樣品100g，置于三角玻璃瓶中，加入10倍質量體積蒸餾水，水浴100°C 回流提取2次，每次2小時；提取液合并過濾，經旋轉蒸發儀減壓濃縮、回收溶劑，再經真空 干燥，得到南瓜花水提物粉末A。
[0015] 實施例2 :南瓜花水提物B的制備
[0016] 南瓜花干燥樣品100g，置于三角玻璃瓶中，加入8倍質量體積蒸餾水，水浴100°C 回流提取3次，每次3小時；提取液合并過濾，經旋轉蒸發儀減壓濃縮、回收溶劑，再經真空 干燥，得到南瓜花水提物粉末B。
[0017] 實施例3 :南瓜花水提物C的制備
[0018] 南瓜花干燥樣品100g，置于三角玻璃瓶中，加入6倍質量體積蒸餾水，水浴100°C 回流提取1次，提取1小時；提取液過濾，經旋轉蒸發儀減壓濃縮、回收溶劑，再經真空干燥， 得到南瓜花水提物粉末C。
[0019] 實施例4 :南瓜花水提物A、B、C的體外降血糖活性測定-HepG2葡萄糖消耗實驗
[0020] 細胞株及培養：人肝癌細胞株H印G2購于中科院上海細胞所，接種于含10%小牛 血清的中高糖DMEM培養基中（含葡萄糖11. lmmol/L，補充青霉素、鏈霉素各100U/L)，置于 37°C含5%的細胞培養箱中培養。！fepG2細胞呈貼壁生長，0. 25%胰酶消化，每3天按1 :3 的比例傳代1次，取對數生長期的細胞用于實驗。試驗時將細胞懸液以0. 5X IO4的密度接 種于96孔培養板中，置培養箱中培養使之形成單層貼壁細胞。
[0021] 實驗方法：接種24h后細胞已完全貼壁形成單層細胞層，將細胞分為對照組（加或 不加胰島素）、實施例1~3中的南瓜花水提物A，B和C組（0. 01mg/mL、0. lmg/mL)和陽性 藥物組（羅格列酮，4Μ/πιυ，其中胰島素濃度為lOyg/mL。在培養箱中孵育24h，將培養 液移出，用葡萄糖試劑盒測葡萄糖含量。用各組空白孔含糖量的平均值減去其余各孔的含 糖量，即是24h各孔細胞的葡萄糖消耗量。
[0022] 表1南瓜花水提物對H印G2細胞葡萄糖消耗的影響
[0023]
【主權項】
1. 一種南瓜花水提物，以藥食兩用植物南瓜的干燥花為原料，通過水加熱回流提取方 法制備得到。
2. 根據權利要求1所述的南瓜花水提物，其特征在于：所述水加熱回流提取方法為采 用蒸餾水作為溶劑進行提取，用量為6-10倍藥材質量體積，提取次數為1-3次，提取時間為 1-3小時；提取液過濾，經減壓濃縮、干燥，得到該南瓜花水提物。
3. 權利要求1所述的南瓜花水提物在治療糖尿病方面的新用途在于：該提取物在一定 濃度下具有促進高糖狀態下H印G2細胞葡萄糖消耗作用，對胰島素刺激的H印G2細胞的葡 萄糖消耗量增加有協同作用，可以應用于制備抗糖尿病藥物或保健品。
【專利摘要】本發明公開了一種南瓜花水提物在治療糖尿病方面的新用途。該南瓜花水提物以藥食兩用植物南瓜的干燥花為原料，通過水加熱回流提取方法制備得到。本發明制備的南瓜花水提物在一定濃度下具有促進高糖狀態下HepG2細胞葡萄糖消耗作用，對胰島素刺激的HepG2細胞的葡萄糖消耗量增加有協同作用，可作為輔助治療糖尿病的藥物或保健品進一步研究開發。
【IPC分類】A61K36-42, A61K133-00, A61P3-10
【公開號】CN104814993
【申請號】CN201510245611
【發明人】趙建斌, 周如初, 李仁明, 趙燕梅, 趙正竹, 王年鶴, 張寒, 陳劍
【申請人】蘇州神良生物科技有限公司
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月13日