蚌肉寡糖在制備降血糖藥物中的應用及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及蚌肉寡糖的新治療用途及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 隨著經濟的高速發展和工業化進程的加速，人類健康面臨非傳染性疾病的威 脅正日益增加，糖尿病患病率和糖尿病患者數量急劇上升。糖尿病及其并發癥給人類 健康和社會發展帶來了嚴重的負擔。根據國際糖尿病聯盟（International Diabetes Federation，IDF)統計，2000年全球有糖尿病患者I. 51億，而目前糖尿病患者已達2. 85 億，按目前的增長速度，估計到2030年全球將有近5億人患糖尿病。值得注意的是，糖尿病 已不僅僅是發達國家的"富貴病"，包括中國在內的發展中國家也已成為糖尿病的重災區。 由于中國是世界上人口最多的國家，其龐大的人口基數使中國背負著極大的糖尿病負擔， 糖尿病患者人數占全球糖尿病患者總數的1/3。2008年中華醫學會糖尿病學分會（CDS) 組織的糖尿病流行病學調查結果顯示，在20歲以上的人群中，年齡標化的糖尿病患病率為 9. 7%，而糖尿病前期的比例更高達12. 8%，相當于每4個成年人中就有1個高血糖狀態者， 更為嚴重的是我國60. 7%的糖尿病患者未被診斷而無法及早進行有效的治療。糖尿病的慢 性血管并發癥對患者的生命和生活質量威脅極大，給家庭以及患者個人帶來了沉重的經濟 負擔。2010年全世界11. 6%的醫療衛生費用花費在防治糖尿病上，世界衛生組織估計2005 年至2015年中國由于糖尿病及相關心血管疾病導致的經濟損失達5577億美元。而糖尿病 復雜的發病過程使人類至今尚未找到根治的方法，這就意味著患者需要終身接受治療，但 遺憾的是，即使是在發達國家，也有約2/3的患者得不到有效管理。在發展中國家，糖尿病 控制狀況更不容樂觀，據我國2003年、2004年、2006年大中城市門診的調查表明，僅有1/4 的糖尿病患者糖化血紅蛋白（HbAlc)達標（〈6. 5% )。目前，II型糖尿病的口服降糖藥根據 作用效果的不同，可以分為促胰島素分泌劑（磺脲類、格列奈類、DPP-4抑制劑）和非促胰 島素分泌劑（雙胍類、TZDs、α-糖苷酶抑制劑）。但由于現有藥物存在不良反應多、順應 性較差等問題，因此，開發安全有效、順應性好、適合長期服用的抗糖尿病藥物或保健產品， 是全世界醫藥界研宄的重點和熱點。
[0003] 蚌肉常作為珍珠蚌取珠后的下腳料，價格十分低廉，利用途徑少，除少部分加工成 低附加值的飼料外，大部分都被丟棄，經濟利用價值極低，而且處理不及時，還會對環境造 成污染。現代科學研宄表明：蚌肉含有大量糖類成分，該糖類成分不僅具有營養價值，而且 具有某些特殊的生物活性和廣泛的應用開發前景。2012年，蚌肉多糖被衛生部批準作為新 資源食品，一具有保肝、護肝、美容、養顏、抗衰老功能，多用于保健食品和化妝品鄰域。目 前，常用提取方法所得的蚌肉多糖分子量一般比較大，不易于吸收，且生物活性較弱，限制 了蚌肉多糖在臨床藥物上的應用。
【發明內容】
[0004] 本發明公開了蚌肉寡糖在制備降血糖藥物中的應用，尤其是在制備防治糖尿病藥 物或保健食品中的應用。
[0005] 本發明優選的蚌肉寡糖是指分子量范圍為500-2000的蚌肉寡糖化合物，并要求 寡糖總含量高于50%。
[0006] 本發明通過動物實驗發現：蚌肉寡糖可顯著抑制四氧嘧啶致糖尿病模型小鼠的血 糖水平并提高葡萄糖耐量；蚌肉寡糖對高脂飲食+STZ誘導的II型糖尿病大鼠具有顯著降 血糖作用，主要表現為改善II型糖尿病大鼠的糖耐量異常，抑制血漿HbAlc的升高，顯著提 高肝糖原和肌糖原的含量，加強肝臟糖的利用及抑制肝糖產生，抑制胰高血糖素分泌，增強 糖原的儲備和降低糖的異生。提示蚌肉寡糖具有很好的抗糖尿病作用。且蚌肉寡糖降血糖 作用要明顯優于蚌肉多糖。
[0007] SD大鼠經口給予蚌肉寡糖急性毒性試驗結果表明：SD大鼠單次經口灌胃給予蚌 肉寡糖6g/kg，所有動物在給藥后14天觀察期內未見死亡，一般狀況良好，體重及攝食量正 常；給藥后14天時血液學、血凝、血生化等檢測均未見異常改變，大體解剖也未見與供試品 相關的病理改變。
[0008] 綜上所述，蚌肉寡糖具有很好的降血糖及抗糖尿病作用，未見毒副作用，可用于臨 床中糖尿病的治療。
【具體實施方式】
[0009] 下面結合實施例對本發明做進一步的說明。
[0010] 各實施例中所涉及的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的 百分比分別是以wt/wt、vol/vol、wt/vol計算，除非另有說明。
[0011] 實施例1蚌肉寡糖的制備
[0012] 將蚌肉剪切碎，加95 %乙醇回流兩次，第一次加8倍量95%乙醇，第二次加6倍 量，每次1小時，過濾，濾液棄去，將蚌肉用水煎煮提取兩次，每次加10倍量水，煎煮1小時， 濾過，收集濾液并濃縮至密度為I. 2g/ml以上，加入95%乙醇使醇濃度達到50% -60%，靜 置12小時以上，濾過，收集濾液并濃縮至密度為I. 2g/ml以上，再次加入95 %乙醇使醇濃度 達到80%以上，靜置12小時以上，濾過，收集固體，以無水乙醇洗滌，50-60°C低溫烘干沉淀 物。
[0013] 將上述沉淀物溶于適量蒸餾水，離心除去沉淀，上Sephadex G-75層析柱，以蒸餾 水洗脫，合并洗脫液，冷凍干燥，得固體。再將上述固體上S印hadex G-15柱層析分離，以 蒸餾水洗脫，收集器收集，硫酸-蒽酮法檢測洗脫液含糖量，以吸光值為縱坐標，洗脫時間 為橫坐標繪制洗脫曲線，根據洗脫快慢分得兩部分，分別合并洗脫峰，冷凍干燥。測定分子 量，首先洗脫下來分子量在2500-15000,為蚌肉多糖，采用硫酸-蒽酮法測定多糖含量為 95. 4%;后洗脫下來的分子量主要集中在500-2000之間，為蚌肉寡糖，采用硫酸-蒽酮法測 定寡糖含量為93. 5%。
[0014] 實施例2蚌肉寡糖對四氧嘧啶糖尿病小鼠的降血糖作用
[0015] 1、動物
[0016] 昆明種小鼠，SPF級，雄性，由廣東省醫學實驗動物中心提供，動物合格證號： SYXK (粵）2014-0020。
[0017] 2、實驗材料
[0018] 蚌肉寡糖：從蚌科動物三角帆蚌的肉中提取的寡糖，蚌肉寡糖的寡糖類化合物含 量高于93. 5%，分子量范圍為500-2000。
[0019] 蚌肉多糖：從蚌科動物三角帆蚌的肉中提取的多糖，蚌肉多糖的多糖類化合物含 量高于95. 4%，分子量范圍為2500-15000。
[0020] 3、實驗方法
[0021] 取90只雄性正常昆明種小鼠，禁食不禁水24h后，按體重隨機分為2組，其中一組 10只為正常對照組，其余80只按220mg/kg體重腹腔注射四氧嘧啶造模，72h后，將小鼠禁 食不禁水l〇h，然后于小鼠眼眶靜脈叢取血測血糖，選擇血糖值在8. 8~30mmol/L的60只 小鼠為造模成功小鼠，按血糖水平隨機分為四氧嘧啶模型對照組、蚌肉多糖組、鹽酸二甲雙 胍片組和蚌肉寡糖低、中、高劑量組，每組10只。除正常對照組和四氧嘧啶模型對照組灌服 等體積蒸餾水外，其余各組動物按0. 2mL/10g體重灌胃給藥，1次/d，連續8d。末次給藥 后，小鼠禁食不禁水l〇h，于眼眶靜脈叢取血，按血糖測定試劑盒操作測定血糖值。
[0022] 4、結果
[0023] 由表1、表2可見：蚌肉寡糖中、高劑量組均可顯著抑制四氧嘧啶致糖尿病模型小 鼠的血糖水平、提高葡萄糖耐量，且作用不弱于陽性對照藥鹽酸二甲雙胍；蚌肉寡糖中、高 劑量組均可顯著抑制血糖水平升高和提高葡萄糖耐量的能力均顯著強于蚌肉多糖。
[0024] 表1蚌肉寡糖對四氧嘧啶小鼠血糖的影響
[0025]
【主權項】
1. 蚌肉寡糖在制備降血糖藥物中的應用。
2. 蚌肉寡糖在制備防治糖尿病藥物或保健食品中的應用。
3. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述蚌肉寡糖中寡糖化合物的分子 量范圍為500-2000,寡糖總含量高于50%。
4. 一種蚌肉寡糖的制備方法，其特征在于包括以下步驟： 4. 1、蚌肉切碎，按質量比加6-8倍量的95%乙醇回流兩次，棄濾液留蚌肉待用； 4. 2、待用蚌肉用8-10倍量水煎煮，濾過，收集濾液并濃縮至密度I. 2g/ml以上的濃縮 液A; 4. 3、濃縮液A加入95 %乙醇使醇濃度達到50 % -60 %，靜置12小時以上，濾過，收集濾 液并濃縮至密度為I. 2g/ml以上的濃縮液B; 4. 4、濃縮液B再次加入95%乙醇使醇濃度達到80 %以上，靜置12小時以上，濾過，收 集固體，以無水乙醇洗滌，50-60°C低溫烘干得沉淀物； 4. 5、沉淀物溶于適量蒸餾水，離心除去沉淀，層析，以蒸餾水洗脫，洗脫液冷凍干燥， 得固體；固體層析分離，以蒸餾水洗脫，收集洗脫液，冷凍干燥；測定分子量，取分子量在 500-2000之間的寡糖部分，并測定寡糖含量總含量高于50%為目標產品。
【專利摘要】本發明涉及蚌肉寡糖在制備降血糖和防治糖尿病藥物或保健食品中的應及其制備方法。所述蚌肉寡糖優選分子量范圍為500-2000的蚌肉寡糖化合物，其總含量高于50％。實驗證明：蚌肉寡糖可顯著抑制四氧嘧啶致糖尿病模型小鼠的血糖水平并提高葡萄糖耐量；蚌肉寡糖對高脂飲食+STZ(鏈脲佐菌素)誘導的Ⅱ型糖尿病大鼠具有顯著降血糖作用，主要表現為改善Ⅱ型糖尿病大鼠的糖耐量異常，抑制血漿HbA1c的升高，顯著提高肝糖原和肌糖原的含量，加強肝臟糖的利用及抑制肝糖產生，抑制胰高血糖素分泌，增強糖原的儲備和降低糖的異生；急性毒性試驗研究表明，蚌肉寡糖無毒副作用，安全性高。
【IPC分類】C07H1-08, C07H3-06, C08B37-00, A61P3-10, A23L1-30, A61K31-702, A61K31-715
【公開號】CN104784192
【申請號】CN201510134784
【發明人】蘇薇薇, 李沛波, 王永剛, 彭維, 吳忠
【申請人】中山大學
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年3月25日