苯醌衍生物e3330聯合化療劑用于治療癌癥和血管生成的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請是2008年9月22日提交的優先權日為2007年11月21日的申請號為 200880117660. 0的名稱為"苯醌衍生物E3330聯合化療劑用于治療癌癥和血管生成"的發 明專利申請的分案申請。
[0002] 相關申請的交叉引用
[0003] 本申請要求于2007年11月21日提交的60/989, 566號美國臨時專利申請和于 2007年9月26日提交的美國臨時專利申請60/975, 396的優先權，其全部內容均結合于此 供參考。
技術領域
[0004] 本發明通常涉及分子生物學、生物化學和病理學領域。較具體的，在某些方面，本 發明涉及Apel/Ref-1氧化還原抑制劑在癌癥治療及血管生成抑制方面的應用。
【背景技術】
[0005] 脫嘌呤/脫嘧啶核酸內切酶（Apel)，也稱為氧化還原效應因子（Ref-1)(以下均 寫為Apel/Ref-1)，是一種具有雙重作用的酶。除了其DNA堿基切除修復（BER)活性之外， Apel/Ref-1還可作為一種氧化還原效應物保持轉錄因子呈一種活化的還原狀態而發揮作 用（見圖1)。
[0006] Apel/Ref-1已證實可刺激幾種轉錄因子如HIF-1 a、NFk0、AP-1和p53以及其 他已知和未知的與腫瘤存活和演進相關因子的DNA結合活性（Evans et al.，Mutat Res 2000, 461，83)。已證實Apel/Ref-1在多種癌癥包括乳腺癌、宮頸癌、生殖細胞瘤、成人 和兒童膠質瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、非小細胞性肺癌以及多發性硬化癥中表達發生改變 (Puglisi et al. , Oncol Rep 2002,9, 11 ；Thomson et al. , Am JPediatr Hematol Oncol 2001?23, 234 ；Roberston et al., Cancer Res 2001, 61, 2220 ；Puglisi et al., Anticancer Res 2001,21,4041 ；Koukourakis et al. ,Int J Radiat Oncol Biol Phys 2001?50? 27 ；Kakolyris et al.，Br J Cancer 1998,77,1169 ;Bobola et al.，Clin Cancer Res 2001，7, 3510)。Apel/Ref-1高表達與放化療效果差、完全應答率低、局部無復發間隔較短、 生存較差以及血管生成較多有關（Koukourakis et al.，Int J Radiat Oncol Biol Phys 2001,50,27 ；Kakolyris et al.,Br J Cancer 1998, 77, 1169 ；Bobola et al.,Clin Cancer Res 2001,7,3510).
[0007] 血管生成是癌癥生長、存活、迀移和轉移的一個重要要素。癌性腫瘤的部位形成新 血管為腫瘤加速生長和擴散提供營養源，并為腫瘤細胞進入血流并擴散至身體的其他部分 提供路徑。因此，有效抑制血管生成是一種減緩或防止癌癥生長及擴散的有效機制。Apel/ Ref-1活性的增加與血管生成有關。血管內皮生長因子（VEGF)是血管發生和血管生成中牽 涉到的重要信號傳導蛋白。Apel/Ref-1是在血管內皮生長因子（VEGF)基因的缺氧反應元 件上形成的低氧誘導性轉錄復合體的一個組分（Ziel et al.，Faseb J2004，18,986)。
[0008] 除了癌癥，血管生成改變促進了與心血管疾病、慢性感染性疾病、風濕性關節炎、 糖尿病性視網膜病、退行性黃斑病變、視網膜后纖維增生、特發性肺纖維變性、急性成人呼 吸窘迫綜合征、哮喘、子宮內膜異位癥、銀肩病、瘢痕瘤以及全身性硬化癥相關的病理學癥 狀。對于減緩或預防涉及過量血管生成的疾病，抑制血管生成是一種理想的臨床結局。
【發明內容】
[0009] 靶向抑制Apel/Ref-1的氧化還原功能是一種治療癌癥和血管生成的新途徑。在 一個實施方式中，本發明涉及到應用抑制Apel/Ref-1氧化還原功能的抗癌治療劑。在另一 個實施方式中，本發明涉及Apel/Ref-1氧化還原功能的抗血管生成試劑。
【附圖說明】
[0010] 圖1 :Apel/Ref-l在調節腫瘤存活中非常重要的轉錄因子方面的氧化還原功能。
[0011] 圖2 :VEGF的酶聯免疫吸附試驗（ELISA)。
[0012] 圖 3 :VEGF ELISA 檢測。
[0013] 圖 4 :VEGF ELISA 檢測。
[0014]圖 5 :VEGF ELISA 檢測。
[0015]圖 6 :VEGF ELISA 檢測。
[0016]圖 7 :VEGF ELISA 檢測。
[0017] 圖8 :利用鋪種于基質膠上的CB-ECFC細胞實施的毛細管形成試驗。
[0018] 圖9:限制性稀釋試驗（LDA)。
[0019] 圖10 :在用或不用堿性纖維母細胞生長因子（bFGF)處理的細胞中對視網膜內皮 細胞增殖進行MTS增殖檢測。
[0020] 圖11 :E3330(RN-3)對視網膜血管內皮細胞（RVEC)-野生型/sv40細胞的作用。
[0021] 圖12 :利用源自人乳腺癌的MCF-7腫瘤細胞進行MTS檢測。四甲基偶氮唑鹽（MTS) 試驗用于細胞存活/生長分析。
[0022] 圖13 :利用源自人卵巢腺癌的OVCAR-3腫瘤細胞進行MTS檢測。
[0023] 圖14 :E3330 (RN-3)和化療藥物美法侖聯合應用對多發性骨髓瘤細胞的作用。
[0024] 圖15 :MTS檢測中，72小時后E3330(RN-3)和化療藥物美法侖聯合應用對多發性 骨髓瘤細胞的作用。
[0025] 圖16:在24和48小時，E3330 (RN-3)和吉西他濱（0. . 25 y M)對胰腺腫瘤細胞的 作用。
[0026] 圖17 :MTS細胞活性檢測。
[0027] 圖18:MTS細胞活性檢測。
[0028] 圖 19 :給藥 E3330(RN-3) (0-50mg/kg)的雄性小鼠體重。
[0029] 圖20:以不同量RN-3(E3330)處理的小鼠在處理后第2、3、4或5天觀察到的存活 數據。
[0030] 圖21 :E3330(RN-3)在24hr時程的實驗過程中的藥物動力學數據。
[0031] 圖22 :E3330(RN3-3)的藥物動力學數據。
[0032] 圖23 :E3330 (RN-3)和視黃酸對促進細胞分化的作用。
[0033] 圖24:如圖23所述利用Annexin/PI試驗進行HL-60細胞的凋亡分析。
[0034] 圖25 :RN-3(E3330)和不同劑量RA的作用。
[0035] 圖26 :E3330 (RN-3)和RA對正發生凋亡（Annexin/PI試驗）的HL-60細胞的作 用。
[0036] 圖27 :E3330(RN-3)和小分子甲氧胺聯合應用對多發性骨髓瘤細胞的作用。
【具體實施方式】
[0037] 本發明涉及到應用選擇性抑制Apel/Ref-1氧化還原功能的抗癌和抗血管生成試 劑。這種選擇性抑制包括特異性抑制，或者，換句話說，對Apel/Ref-1的BER功能無影響或 者無可估計到的影響，且相對于BER功能而言，主要對氧化還原功能產生影響。本發明還涵 蓋了這些試劑與其他化療/治療性試劑的聯合應用。最好所述其他試劑以與那些選擇性抑 制Apel/Ref-1氧化還原功能的試劑不同的方式作用于患者。
[0038] 與血管生成發生改變相關的生理性疾病涵蓋那些與血管生成不當（其直接或間 接有害于患者）相關的疾病。除了其他疾病，血管生成改變促進與癌癥（包括生長、存活、迀 移、微環境和轉移）以及心血管疾病、慢性感染性疾病、風濕性關節炎、糖尿病性視網膜病、 退行性黃斑病變、視網膜后纖維增生、特發性肺纖維變性、急性成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、 子宮內膜異位癥、銀肩病、瘢痕瘤和全身性硬化癥相關的病理學癥狀。
[0039] 術語患者包括脊椎動物，優選人類患者。術語抑制及其衍生語，包括其通常公認的 含義，其包括阻止、防止、遏制和減慢、中斷或逆轉進程或嚴重程度。因此，本發明所述方法 既包括內科治療性給藥又包括預防性給藥，視情況而定。就其本身而言，當涉及到本文所述 的治療性應用時，需要該治療的患者是經鑒定需要或希望醫學干預的個體。有效量是抑制 本文所述病理性疾病和病癥所需試劑的量。當給藥患者至少一種其他治療劑時，這些試劑 可依次、并列（concurrently)或同時（simultaneously)給藥，以實現這些試劑的優勢。 [0040]人們已發現Apel/Ref-1的氧化還原功能可被3-[(5_(2, 3-二甲氧基-6-甲基 1，4-苯并喹啉基）]-2_壬基-2-丙烯酸選擇性抑制，見下圖（下文的"E3330"，本申請中也 稱為"RN3-3"）。
【主權項】
1. 一種選擇性抑制Apel/Ref-1的氧化還原功能的試劑在制備用于抑制與改變的血管 生成相關的生理疾病的藥物中的用途，其中，所述疾病為癌癥。
2. 根據權利要求1所述的用途，其中所述試劑是E3330,或其藥用鹽。
3. 根據權利要求1所述的用途，其中所述癌癥選自乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、結腸癌、 宮頸癌、生殖細胞腫瘤、成人和兒童膠質瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、非小細胞肺癌、白血病和 多發性骨髓瘤。
4. 根據權利要求3所述的用途，其中所述疾病是胰腺癌。
5. 根據權利要求4所述的用途，其中所述試劑是E3330或其藥學可接受的鹽或溶劑化 物。
6. 根據權利要求5所述的用途，其中所述試劑與至少一種其他的治療劑組合使用。
7. 根據權利要求6述的用途，其中所述其他的治療劑選自美法侖、吉西他濱、順鉬、甲 氧胺、沙利度胺及其衍生物，以及視黃酸。
8. -種選擇性地抑制Apel/Ref-Ι的氧化還原功能的試劑在制備用于抑制胰腺癌的藥 物中的用途。
9. 根據權利要求8所述的用途，其中所述試劑是E3330或其藥學可接受的鹽或溶劑化 物。
10. 根據權利要求9所述的用途，其中所述試劑與至少一種其他的治療劑組合使用。
11. 根據權利要求10所述的用途，其中所述其他的治療劑選自美法侖、吉西他濱、順 鉑、沙利度胺及其衍生物，以及視黃酸。
【專利摘要】本發明披露了用于治療癌癥和血管生成的新方法。酶Ape Ⅰ/Aef-1通過其氧化還原功能，增強與癌癥演進相關的轉錄因子的DNA結合活性。本發明闡述了應用這些試劑來選擇性抑制Ape Ⅰ/Aef-1的氧化還原功能從而減弱腫瘤細胞的生長、存活、遷移和轉移。Ape Ⅰ/Aef-1的抑制活性已證實可增強其他治療劑的療效并保護正常細胞免遭毒性。此外，Ape Ⅰ/Aef-1抑制已證實可減少血管生成，可用于治療癌癥以及其他那些血管生成改變是組分之一的病理學癥狀。
【IPC分類】A61P35-00, A61K45-06, A61P35-02, A61K31-192
【公開號】CN104666286
【申請號】CN201410499746
【發明人】馬克·R·凱利
【申請人】印第安納大學研究及科技有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2008年9月22日
【公告號】CN102215833A, CN102215833B